动物细胞培养实验2'
动物细胞操作实验步骤
一、实验目的1. 熟悉动物细胞培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握动物细胞传代、冻存、复苏等基本操作方法。
3. 了解动物细胞在生物学研究中的应用。
二、实验原理动物细胞培养是将动物组织或细胞在体外模拟体内环境条件下，进行生长、繁殖的一种技术。
通过动物细胞培养，可以研究细胞生物学、分子生物学、遗传学等方面的知识，为生物医学研究和药物开发提供实验材料。
三、实验材料1. 细胞：小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠胚胎肺细胞等。
2. 培养基：DMEM、RPMI-1640等。
3. 培养试剂：胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶等。
4. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、倒置显微镜、移液器、离心机、水浴锅等。
四、实验步骤1. 细胞复苏（1）将冻存的细胞从液氮罐中取出，立即放入37℃水浴锅中解冻。
（2）用移液器将细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。
（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。
（4）将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）将培养至80%汇合度的细胞取出，用胰蛋白酶消化。
（2）将消化后的细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。
（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。
（4）将细胞悬液按1:2或1:3的比例传代至新的培养瓶中。
（5）置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞冻存（1）将培养至70%汇合度的细胞取出，用胰蛋白酶消化。
（2）将消化后的细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。
（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。
（4）将细胞悬液按1:1的比例转移至冻存管中。
（5）加入10%DMSO，混匀。
（6）将冻存管置于-80℃冰箱中过夜，然后转入液氮罐中保存。
4. 细胞观察（1）将培养好的细胞取出，用胰蛋白酶消化。
（2）将消化后的细胞悬液转移至载玻片上，滴加适量固定液。
（3）室温固定10分钟。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞培养实验2
实验题目：动物细胞培养教师：XXX实验类型：综合学时：26(参考)内容：一、实验目的通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。
初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。
二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌操作。
三、试剂与器材1.材料出生后2-3天的乳鼠2.试剂平衡盐液－Hank液细胞消化液 0.5%水解乳蛋白-Hank液犊牛血清碳酸氢钠 1万单位/ml青、链霉素 3%谷氨酰胺磷酸盐缓冲液3.实验器材镊子解剖刀剪眼科剪眼科镊纱布块玻璃漏斗量筒记号笔试管试剂瓶三角瓶移液管培养皿培养瓶吸管橡皮头显微镜血细胞计数板计数器酒精灯酒精棉球试管架试管解剖板碘酒棉球口罩二氧化碳培养箱超净工作台灭菌锅倒置显微镜四、实验内容原代培养：取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→观察。
传代培养：配置培养液→消化细胞→细胞计数→培养观察。
培养细胞冷冻保存。
五、关键步骤及注意事项1. 注意无菌操作，及时更换培养液。
六、思考题1. 简述细胞传代培养的操作程序注意事项？2. 细胞培养获得成功的关键要素是什么？3. 简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。
动物细胞培养实验方案
动物细胞培养实验方案一、实验目的：1.掌握动物细胞的培养技术；2.了解动物细胞的生长特点和培养条件要求；3.学习观察和分析动物细胞的形态变化和生长状态。
二、实验器材与试剂准备1.器材：细胞培养器皿（如培养皿、蜡烛罩、CO2培养箱等）、离心机、显微镜、细胞计数板、计时器等；2.试剂：细胞培养基、培养液添加剂（如酶、抗生素等）、PBS缓冲液、生长因子、染色剂等。
三、实验步骤1.细胞培养基的配制：按照制定的配方将培养基粉末加入适量的无菌去离子水中，搅拌均匀后，进行高温高压灭菌，冷却后分装至培养器皿中；3.细胞处理和接种：将收集到的组织先用PBS缓冲液洗涤，然后使用细胞裂解酶或胰酶等消化酶消化组织，使细胞分散，处理成单个细胞后，用细胞计数板计数，并将细胞悬液接种到预先准备好的培养器皿中；4.细胞培养条件的控制：将培养器皿置于CO2培养箱中，设定适当的温度（通常为37℃）、湿度和CO2浓度（通常为5%），并保持稳定；5.细胞培养的观察和记录：观察培养皿中细胞的形态变化和生长状态，记录细胞的外观、增殖情况、易于观察的指标等；6.细胞的子培养和冻存：当细胞达到一定密度时，可以进行子培养，即将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中，以促进细胞的增殖和保存细胞生物资料。
此外，也可以将分散的细胞加入由培养液和冻存剂组成的试管中，通过冷冻的方式保存细胞，并用于后续的实验。
四、实验控制与常见问题的解决1.环境控制：细胞培养箱中的温度、湿度和CO2浓度的调整应尽量保持稳定；2.培养基的配制：根据细胞培养物的不同，可以选择不同配方的培养基，确保培养基的质量符合要求；4.洗涤步骤：组织或细胞的洗涤步骤应轻柔，避免对细胞的损伤；5.细胞的接种量：对于粘附性细胞，接种量应适当，以避免细胞过度堆积或过度稀释。
五、实验结果和分析观察培养皿中细胞的生长状态、细胞数量以及形态的变化，记录生长状态、增殖情况和其他可以观察到的指标，并进行数值化分析和统计。
动物细胞培养技术实验指导(全面)
实验篇实验一实验器材的清洗实验物品（一）每一大组公用物品（每班分6大组）吸球4个、酒精棉球瓶两个、消毒水一瓶、吸瓶两个、计数板1块、洗液缸一个、95%酒精1瓶。
（二）每一小组公用物品（两人一小组）刻度吸管5毫升4支, 小漏斗1个、 80-200铜滤网1块、培养皿2个、 l00毫升盐水瓶及塞子4个、l0毫升盐水瓶及塞子1个、100ml培养瓶及塞子4个、10ml 培养瓶及塞子1个、镊子1个、剪刀1把、冻存管（1.5毫升，2毫升）2个、软毛刷2个、塑料盆一个。
（二）公用物品小滤器、大滤器2个、1000毫升量筒2个、100毫升量筒2个、家用剪刀、耐酸乳胶手套长的两双、短的四双、酒精一壶、玻璃棒几个、 0.22μm的小滤膜一盒、电炉3个。
清洗注意事项和要求（一）使用后的实验器材应立即投入清水中。
带毒的玻璃器皿需先浸泡在5％来苏儿或1％盐酸溶液中（依病毒的种类而定）1天以上或高压灭菌。
（二）浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。
（三）煮沸前的水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂（直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右）；若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化PH值上升。
（四）软毛刷的刷端已掉毛的应该弃去，否则会损害玻璃。
玻璃划痕处易残留洗涤剂,会改变培养液PH和毒害细胞。
（五）浸泡器材的蒸馏水容器要专用，并做好标记，如“蒸馏水1盆”、”蒸馏水2盆。
（六）器材清洗干燥后，在以后各步操作时，手指不可接触器材的使用端。
清洗者可戴一次性薄膜手套进行操作，这样省时又保证清洗质量。
（七）清洁物品应及时包装消毒，应注意妥善保存，防止落人灰尘、蟑螂、蚂蚁等引起二次污染。
（八）刷洗、酸泡后的器材要用流水振荡冲洗；不得残留洗涤剂、清洁液。
操作方法（一）清洗液（俗称酸液）的配制方法常用清洁液配方重铬酸钾100g，浓硫酸200ml，蒸馏水800ml。
以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下：先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml，称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解），待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。
实验 动物细胞培养基础实验技术
实验动物细胞培养基础实验技术——器械的清洗与消毒实验目的：学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。
实验用品：1．仪器和用品：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器、紫外灯、0.22μm/0.45μm微孔滤膜。
2．试剂：75%酒精、5%HCl、1‰新洁尔灭、重铬酸钾。
实验内容：1．准备培养用血清瓶（PBS、培养基，约10套，包括20、50ml）、培养瓶（50个）、玻璃滴管（若干）、离心管（10ml）、EP管若干、不锈钢滤器、胶塞、滴头等。
2．分别包装上述物品，其中血清瓶和瓶盖分别包装，玻璃吸管置于不锈钢筒中、玻璃离心管、 EP管分别置于饭盒中。
3．将上述物品置于高压灭菌锅中进行消毒灭菌。
4．实验室准备。
实验步骤（一）清洗1．玻璃器皿的清洗浸泡刷洗浸酸冲洗（1）. 新购玻璃血清瓶先用洗衣粉洗，再以0.1-0.05 mol/l HCl 浸泡数小时，然后用铬酸浸泡过夜，最后用自来水、一次与二次去离子水洗净后才能开始使用。
（2）. 用过之玻璃血清瓶，用洗衣粉洗净后铬酸浸泡过夜，最后用自来水、用一次与二次去离子水冲洗干净。
此外，玻璃器皿的瓶子的盖子必须也泡铬酸，培养瓶瓶盖可以不用泡铬酸，高温灭菌的时候要拧上瓶盖，留有一定的缝隙，灭菌后盖紧。
瓶盖的上面应当用锡箔纸或者牛皮纸包住，用绳子扎紧2．塑料器皿的清洗自来水充分浸泡冲洗 2%NaOH浸泡过夜蒸馏水漂洗3次 2%-5%盐酸浸泡30min 自来水冲洗晾干紫外线照射30min3．胶塞等橡胶类的清洗自来水冲洗 2%NaOH 煮沸15min 自来水冲洗蒸馏水煮沸10min 自来水冲洗5次以上2%-5%HCl煮沸15min 晾干晾干后高压灭菌4．金属器械的清洗新购置的器械用过的器械（二）包装分为局部包装和全包装。
为了防止消毒灭菌后再次遭受污染。
按照不同类别进行包装。
（三）消毒灭菌主要包括物理法和化学法。
物理法：热灭菌、蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、熏蒸消毒、煮沸消毒。
动物细胞培养技术实验
实验十五动物细胞培养技术及其应用一．实验目的通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。
二. 实验内容1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术；2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术；3.细胞污染检测方法与技术；4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。
三．实验用品1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH试纸、酒精棉球等3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。
四．实验方法与步骤（一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏1. 缓冲液及培养基配制Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。
4℃下保存。
胰蛋白酶液：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。
MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。
动物细胞培养、计数、冷冻与复苏实验
动物细胞培养、计数、冷冻和复苏实验报告由于本次实验分三天进行，日期分别为10月31日（周一）、11月2日（周三）、11月4日（周五），实验内容分别为动物细胞培养、结束，动物细胞冷冻以及最后的动物细胞的复苏，又因为冷冻和复苏可视为连续环节，故本报告分成两个部分来记录本次实验，具体内容如下：I. 动物细胞的培养和计数一、实验目的由动物细胞表达和合成的蛋白质除了具有正确的氨基酸序列之外，在加工过程中还能以正确的方式进行折叠和修饰，且大多能以天然形式分泌到培养基中，从而确保了所生产的蛋白质具有与天然产物一致的生物活性、免疫原性和体内寿命，这些特点使得动物细胞成为工业化生产诊断和治疗用生物产品的理想宿主，如各类重组蛋白质和单克隆抗体等。
另外，目前方兴未艾的组织工程、干细胞工程等也是和细胞培养技术密切相关的，因此，可以说细胞培养技术是细胞工程、组织工程等研究领域的基础。
本实验的目的是让学生学习和了解动物细胞培养的基本操作，以及相关的细胞培养前准备工作、细胞培养的环境条件和其他有关注意事项；用血球计数板对培养瓶中的细胞进行计数以及用台盼蓝计细胞的存活率。
二、基本原理动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体的细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术，是动物细胞工程的基础。
体外培养可分为原代培养和传代培养，原代培养是指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程，这样的细胞称为原代细胞，原代细胞通常只能培养10－50代左右即退化死亡；由原代细胞通过变异、分化等手段筛选出来具有无限次代培养能力的细胞群称为细胞系，这类细胞的培养称为传代培养。
体外培养的细胞根据其生长方式，主要可分为贴附型细胞和非贴附型细胞两类，贴附型细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长，非贴附型细胞可在培养液中悬浮生长，因而也叫悬浮型细胞。
动物细胞培养与微生物培养有很大不同，这主要是因为动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体表面才能生长。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告实验目的本实验的目的是通过培养和观察动物细胞，了解细胞的结构和功能。
实验材料和设备•动物细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养罩•无菌移液器•显微镜•离心机实验步骤步骤一：准备工作1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒，确保无菌环境。
2.准备所需的实验材料和设备。
步骤二：细胞培养基的制备1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中，每个培养皿倒入适量的培养基。
2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。
3.将培养皿放入细胞培养罩中，用透明膜封闭。
步骤三：细胞的收获1.从实验动物体内提取所需的组织样本，保持组织样本的完整性和无菌状态。
2.将组织样本置于离心管中，加入少量的预先准备好的细胞培养基。
3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。
4.将混合液转移到培养皿中，确保液体均匀覆盖培养皿表面。
步骤四：细胞培养1.将培养皿放入孵化器中，设置合适的温度和湿度，提供细胞生长所需的最佳环境条件。
2.定期观察培养皿内细胞的生长情况，记录细胞的数量和形态变化。
步骤五：细胞观察1.从培养皿中取出一小部分细胞，放入显微镜载玻片上。
2.将载玻片放入显微镜下，使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞器的结构。
3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。
实验结果和讨论通过以上步骤，我们成功地进行了动物细胞的培养实验，并观察到了细胞的生长和形态变化。
在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构，可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段，通过培养和观察细胞，我们可以深入了解细胞的生命活动和疾病发生机制。
在实验过程中，我们需要保持无菌操作，以确保细胞的纯度和生长条件的良好。
细胞培养实验的结果和观察对于生物医学研究和药物开发具有重要意义。
通过改变培养条件和添加适当的药物，我们可以研究细胞的响应和代谢途径，为新药物的筛选和评估提供重要依据。
结论通过本次实验，我们成功地培养和观察了动物细胞。
《动物细胞培养》实验内容
《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒 (2)实验二常用的仪器设备介绍 (3)实验三常用动物细胞培养用液的配制 (4)实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测 (6)实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查 (8)实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的1、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。
2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。
3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。
二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、250mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。
三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。
2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。
3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。
(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。
(3)器材要用流水震荡干净。
（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。
2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。
3、注意事项：(1)包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。
(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。
(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。
（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器3）高压蒸气灭菌器4）过滤器5）电热恒温干燥箱6）二氧化碳培养箱7）冰箱8）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。
动物细胞培养实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。
3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。
动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。
三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。
2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。
4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。
五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。
2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。
细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。
3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。
4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。
如神经细胞、肌肉细胞等。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。
实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。
2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。
操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。
3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。
动物细胞培养实验讲义
———————动物细胞培养 实验讲义——————— 实验一动物细胞培养的培养基配制灭菌与仪器操作培训一、实验目的1、掌握动物细胞培养相关设备、器材的使用方法。
2、掌握各类器皿、工具的清洗、包装、灭菌方法3、掌握各类培养基及试剂溶液的配制、灭菌方法二、实验原理离体条件下的细胞对任何有害物质均十分敏感，极少的残留物都可能对细胞产生毒副作用，因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，以达到不含任何残留物的要求。
而玻璃、橡胶、塑料、布类、纸类等不同类型的材料应采用不同的清洗和消毒、灭菌方法。
细胞培养失败的一个常见原因是微生物污染，有时是操作过中不规范造成的，有时则是相关用品本身有污染造成的，因此在培养细胞前各种用品均需要进行严格消毒或灭菌。
培养液是进行细胞体外培养最基本、最主要的条件之一，掌握常见培养液的成分、性质与配制方法是细胞培养操作者应具有的基本知识和能力。
三、实验内容1、设备（1）CO2培养箱CO2培养箱要提前消毒，有些自己带有高温干热灭菌功能，大部分则宜用“纯水擦洗――95%酒精擦洗——紫外照射杀菌”的消毒方法。
初次开启仪器时要提前一天矫正CO2的浓度值。
然后设定好温度等参数。
关于钢瓶的压力阀门控制：钢瓶上的阀门松紧程度不是十分重要，关键靠供气阀门控制压力在0.1（越拧紧压力越高，所以可先把供气阀门打到松弛状态，然后再开钢瓶阀门）（2）倒置显微镜打开电源开关，确保光路杆调至“观察”状态，选择所需放大倍数的物镜，调节至适当亮度。
将培养瓶放在载物台上，转动粗微调调节。
如需拍照，则在电脑中打开软件，并将光路杆调至“拍照”状态。
注意不要随便误打开荧光灯，以免浪费其寿命。
一旦打开荧光光源后，至少要15分钟后才能关闭，关闭后至少要5分钟才能再次开启。
（3）其他：高压蒸汽灭菌锅、电热鼓风干燥箱等。
2、器具（1）玻璃类细胞培养瓶（有的是塑料的）、吸管、三角烧瓶、玻璃平皿、普通玻璃瓶方法：玻璃类一般是清水浸泡、洗衣粉液刷洗、浸酸过夜、自来水冲洗、然后依次用去离子水、一蒸水、三蒸水分别润洗5～6次。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告动物细胞培养实验报告引言：动物细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。
本实验旨在通过培养动物细胞，观察细胞的生长、分裂和功能表达，以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。
材料与方法：1. 细胞培养基：选择适合培养动物细胞的培养基，如DMEM或MEM等。
2. 细胞培养器具：细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。
3. 细胞株：选择合适的细胞株，如人类肺癌细胞株A549。
4. 细胞培养条件：温度、湿度、CO2浓度等。
5. 细胞培养试剂：胎牛血清、抗生素等。
实验步骤：1. 细胞传代：将细胞株从冻存管中取出，加入培养基中，将细胞传代至合适的密度。
2. 细胞培养：将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中，放入培养箱中培养。
3. 细胞观察：使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。
4. 细胞染色：使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色，观察细胞内部结构。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞，如药物处理、温度变化等，观察细胞的反应和变化。
7. 细胞计数：使用细胞计数板或细胞计数仪等工具，统计细胞的数量。
结果与讨论：1. 细胞生长：观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、对数期和平台期。
2. 细胞形态：细胞在培养基中呈现出典型的形态特征，如细胞核的形状、细胞质的颜色等。
3. 细胞分裂：观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂，并计算细胞分裂指数。
4. 细胞染色：通过荧光染料或细胞染色剂染色后，观察到细胞内部结构的变化，如细胞器的位置和形态。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测到特定基因或蛋白在细胞中的表达水平。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞后，观察到细胞的形态、数量和功能发生变化，如细胞凋亡、增殖等。
09动物细胞培养实验
实验一清洗与灭菌（4学时）一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒, 掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作, 了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步, 是组织培养中工作量最大, 也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿, 不仅要求干净透明, 无油迹, 而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质, 哪怕残留0. 1个, 也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要, 对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对, 即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品1. 材料: 无臭氧型紫外灯, 微孔滤膜(直径25): 孔径为0. 22μm, 微孔滤膜(直径90): 孔径为0. 22 μm, 过滤器(直径25)。
2．药品：70％或75％酒精, 0．1％新洁尔灭, 煤酚皂溶液(来苏儿水), 0．5％过氧乙酸, 乳酸, 37％甲醛, 高锰酸钾, NaOH, 盐酸, 重铬酸钾, 浓硫酸(工业)。
3．仪器：超净台, 干燥箱, 高压蒸气灭菌锅, 过滤器, 过滤泵。
四、实验步骤(一)清洗1. 新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗, 再浸泡5％稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。
2. 使用过的玻璃器皿的清洗(1)使用过的培养用品应立即浸入清水, 避免干涸难洗。
(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿, 自来水清洗数遍, 倒置自然干燥。
(3)浸酸性洗液过夜。
(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10. 15次去除残余酸液, 蒸馏水涮洗3次, 倒置烘干。
(5)包装(牛皮纸或一般纸)。
(6)高压(15磅20 min)或干热(170℃2 h)灭菌。
(7)贮存备用。
3. 胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0. 2％NaOH煮沸lO-20 min。
动物细胞培养技术实验教程内容
实验1 细胞培养概述（一）细胞培养室的设置和无菌操作【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
【实验目的】①了解培养室的设置和设备。
②学习无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下几点：①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照射的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过2米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流动。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。
2．实验室常用设备（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③干燥箱：洗涤完的玻璃器皿用干燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培养室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
根据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，基本原理大致相同，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
《动物细胞培养》实验内容(1).doc
《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒 (2)实验二常用的仪器设备介绍 (3)实验三常用动物细胞培养用液的配制 (4)实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测 (6)实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查 (8)实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的1、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。
2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。
3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。
二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、250mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。
三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。
2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。
3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。
(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。
(3)器材要用流水震荡干净。
（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。
2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。
3、注意事项：(1)包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。
(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。
(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。
（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器3）高压蒸气灭菌器4）过滤器5）电热恒温干燥箱6）二氧化碳培养箱7）冰箱8）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。
动物细胞培养实验设计
动物细胞培养实验设计1.实验目的本实验旨在研究动物细胞在体外培养条件下的生长情况，并探究培养基、培养温度和培养时间对细胞增殖和存活率的影响。
2.实验材料-细胞培养物（如人体肺癌细胞株A549）-培养基（如DMEM）-胎牛血清（FBS）-无菌PBS缓冲液-1%无菌青霉素/链霉素混合液-0.25%胰酶/EDTA溶液-无菌培养皿-离心管-显微镜-倒置显微镜-培养箱3.实验步骤3.1细胞传代-使用0.25%胰酶/EDTA溶液处理细胞培养物，使其分离成单个细胞。
-计算损失率和细胞数，根据所需的细胞数目进行传代。
3.2细胞计数-取适量的细胞悬液，并使用显微镜在计数室或倒置显微镜下进行细胞计数。
确保计数的精度和准确性。
3.3细胞培养基配制-使用DMEM培养基作为培养基，添加适量的胎牛血清（一般为10%）和1%无菌青霉素/链霉素混合液，制成DMEM完全培养基。
-为对照组，不添加药物或其他试剂。
3.4细胞处理-将细胞悬液均匀分配到不同的无菌培养皿中。
-添加适量的DMEM完全培养基，使细胞完全覆盖。
-将培养皿置于培养箱中，设置适当的培养温度（一般为37°C）。
3.5细胞观察和评价-在不同的培养时间点（如24小时、48小时和72小时），取出培养皿中的细胞悬液。
-使用显微镜观察细胞形态，评估细胞生长和形态变化。
3.6细胞增殖分析-使用显微镜或自动细胞计数器计算细胞数目。
-根据细胞数目的变化，计算细胞增殖速率和倍增时间。
3.7细胞存活率分析-使用PBS缓冲液将细胞悬液洗涤一次，去除培养基。
- 使用0.4%尝试性胺蓝（Trypan Blue）染色液染色，染色时间不超过3分钟。
-使用显微镜观察和计数染色细胞和非染色细胞的数目，计算细胞存活率。
4.数据分析根据实验结果，绘制细胞增殖曲线图和细胞存活率曲线图。
使用适当的统计方法分析数据，比较不同培养条件下的细胞增殖和存活率差异。
5.结论根据实验结果，得出不同培养条件对细胞增殖和存活率的影响结论。
2018年实验九动物细胞培养-文档资料
原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片
传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色）
正常细胞
凋亡细胞
分裂中期细胞
六、作业
• 1. 细胞培养过程中应该注意哪些事项？ • 2. 描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照
片）。
1万单位/ml青、链霉素）。 • 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、
1万单位/ml青、链霉素）。
四、原代培养
• 1.酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0. 5 -1mm3 的小块， Hank’s 液洗涤2 - 3 次。
• 2. 组织块移入培养瓶，间距0.5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液， 保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。
二、实验原理
• 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将 细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传 代或传代培养。
• 细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定 性质或标志的细胞群。
• 细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过 程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。
三、实验器材与试剂
• 1. 器具 • 显微镜、电热恒温水浴锅、天平、CO2培养箱、
• 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天 后更换培养液。
• 4 .倒置显微镜下观察拍照。 • 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
细胞生物学-实验二 动物细胞培养液的配制与灭菌
四、实验内容
1、配制PBS
（1）烧杯中加适量的蒸馏水或去离子水; （2）准确称量药品，依次放入烧杯; （3）人工搅拌或磁力搅拌器搅拌使药品充分溶解; （4）调节PH值使之约为7.2; （5）定容；（6）高压灭菌,120℃ 15分钟；（7） 分装保存
3、PBS的高压灭菌
高压灭菌锅，120℃，15分钟
2013-2014-1遗传学实验
1
4、DMEM培养基滤器灭菌
（1）将塑料环放在上盖与下底之间，锁紧。用双层牛皮纸 包好高压蒸汽灭菌。 （2）选一个适当的容器，如锥形瓶﹑试管﹑窄口瓶等亦高 压蒸汽灭菌。 （3）将微孔滤膜用平头镊子夹住，放在微孔滤膜装置中一 起高压蒸汽灭菌。 （4）将需要灭菌的实验器材溶液配置好。
• 实验九 血涂片的制备及细胞大小的测量
一、实验目的与要求
• 了解动物细胞培养对条件设施的要求； • 掌握动物细胞培养用液的种类及作用； • 学习各种动物细胞培养用液的配制方法及 灭菌方法。
二、实验原理
1、细胞培养的基本条件：
• 无污染环境（无毒、无菌）：无菌培养室（更衣间、缓冲 间、操作间）、新洁尔灭擦拭地面、超净工作台
生素
超净台
温度：36～37 pH : 7.2~7.4
温度 和pH
气体 环境
95%空气和5%CO2
2、常用细胞培养用液：
• 水
• 培养基：天然培养基、合成培养基、无血清培养基
• 生理盐液：PBS
• 消化用液：胰蛋白酶
• 抗生素液：青链霉素
3、常用的灭菌方式： • 紫外线消毒: 紫外线是一种低能量的电磁辐射，
• 高温干热灭菌法：恒温干燥箱， 120ºC～150ºC
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实验题目：动物细胞培养
教师：
实验类型：综合
学时：10(参考)
内容：
一、实验目的
通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。
初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。
二、实验原理
原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌操作。
三、试剂与器材
1.材料出生后2-3天的乳兔
2.试剂平衡盐液－Hank液细胞消化液 0.5%水解乳蛋白-Hank液犊牛血清 DMEM培养
基二甲基亚砜 1万单位/ml青、链霉素
3.实验器材眼科剪眼科镊纱布块玻璃漏斗记号笔封口膜细胞培养瓶吸管血细胞
计数板计数器酒精灯酒精棉球试管架口罩二氧化碳培养箱超净工作
台灭菌锅倒置显微镜
四、实验内容
1.原代培养：
取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→次日换液，以后隔日换液→观察。
2.传代培养：
当原代细胞培养至70-80%满底时，进行传代培养。
1)吸去或者倾出旧培养液。
2)用PBS或者无Ca2+ , Mg2+的平衡盐溶液轻缓漂洗培养物1-2次，尽量洗去残余血清。
弃平衡盐溶液。
3)解离细胞。
4)终止消化。
5)用弯头吸管吸取培养瓶皿内的培养液或蛋白酶抑制剂溶液，反复吹打瓶皿底壁，使已经消化的细胞脱离瓶皿底壁。
6)离心(1000 r/min, 5min)。
除去上清含酶溶液。
7)用培养液将细胞沉淀重新悬浮。
计数并调整细胞密度。
8)接种在新的培养瓶皿内。
9)送入培养箱中继续培养。
(2)悬浮培养物：悬浮培养的细胞由于不贴壁生长，传代时无须使用消化液处理，直接将培养物吸取一部分或者将培养物离心后再分成几部分并接种培养即可。
1)将培养物转移到离心管内，离心(1000 r/min，5 min)。
2)吸出上清液。
给细胞沉淀加入培养液重新悬浮。
3)分别取部分细胞悬液，接种在数个培养器皿内。
4)补加培养液。
入培养箱继续培养。
3.培养细胞冷冻保存
(1)待冻存细胞悬液的准备
1)按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物，制备成单细胞悬液。
计算细胞总数。
2)将细胞悬液以800 -1000r/min离心5 min，弃上清液。
3)向沉淀物中加入冷冻液。
轻轻吹吸均匀，使细胞密度达1×106 – 1×107个/ml。
4)按每管1 - 1.5 ml的量，分装于冻存小管内。
拧紧管盖。
5)在冻存小管上做标记，包括细胞代号及冻存日期。
(2)分级冷冻：
1)先将冻存小管放入普通冰箱下层(4 ~ 8 ℃ )，约40 min。
2)接着置于普通冰箱上层冰盒(-10 ~ -20 ℃), 30 ~ 60 min。
3)再于-20℃放置30 min左右。
4)然后在-70 ~ -80℃下过夜。
5)最后将冻存小管投入液氮保存。
4. 冷冻保存细胞的复苏
1)调配37-40℃的温水，或将恒温水浴箱的温度调至37-40℃。
2)从液氮中取出冻存小管，立即投人37 - 40℃温水中快速晃动，直至冻存液完全融解。
要在1-2 min内完成复温。
3)将细胞冻存悬液移入离心管，加入约5 ml培养液，轻轻吹匀。
4)将细胞悬液经800-1000r/ min离心5 min。
弃上清液。
5)给细胞沉淀物加入完全培养液，轻轻吹吸均匀。
将细胞悬液移入培养瓶内，加足培养液进行培养。
五、关键步骤及注意事项注意无菌操作，及时更换培养液。
六、实验结果
七、思考题
1. 简述细胞传代培养的操作程序注意事项？
2. 细胞培养获得成功的关键要素是什么？
3. 简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。