GSTT1基因多态性及吸烟与胃癌的关系

GSTT1基因多态性及吸烟与胃癌的关系
目的研究谷胱甘肽转硫酶GSTT1基因缺失多态性及吸烟情况与胃癌易感性的关系。

方法研究对象为2005年5月～2006年3月在包头地区确诊的胃癌病例（60例）；以同期该地的排除肿瘤病史的一般人群（83例）为对照。

采用病例-对照研究的方法，调查研究对象的吸烟情况，以聚合酶链反应（PCR）的技术方法分析GSTT1的基因型。

用SPSS 13.0软件分析研究结果。

结果①GSTT1（-）基因型的频率在胃癌组和对照组分别为56.7%和39.8%，差异有统计学意义（P 0.05），具有可比性。

1.2 流行病学调查
由经过培训的医护人员，对所有研究对象（胃癌组和对照组）进行包括性别、年龄、吸烟情况的流行病学调查。

对吸烟情况分为“不吸烟”和“吸烟”两种。

其中，“吸烟”规定为每天至少吸1支烟，持续1年以上者，达不到这一标准者规定为“不吸烟”。

1.3 主要试剂
①Taq DNA聚和酶，dNTPs，DNA Marker，无菌去离子水均购于加拿大上海Songon生物工程技术服务有限公司。

②琼脂糖、EB、Tris、EDTA、硼酸、溴酚兰均购于北京鼎国生物技术有限公司。

③DNA提取液：由内蒙古基因诊断研究所提供。

1.4 GSTT1基因型的检测
1.4.1 DNA的提取取胃癌组患者及对照组的人外周血2 mL，置入加有EDTA 的抗凝试管中，于半小时内置于-20℃低温冰箱中冷冻保存或立即进行基因组DNA的提取（提取方法由内蒙古基因诊断中心提供）。

1.4.2 PCR扩增应用聚合酶链反应PCR方法扩增基因组DNA，参照文献[5]，构建GSTT1和β-珠蛋白基因的引物（表1），其中，β-珠蛋白（268 bp）作为内对照。

所有的引物序列均经美国生物信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）的序列比对工具（basic local alignment search tool，BLAST）的验证，并由加拿大上海Songon生物技术有限公司合成（PAGE纯化）。

GSTT1基因引物序列为正义链5’-TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC-3’，反义链5’-TCACCGGATCATGGCCAGCA-3’。

β-珠蛋白基因引物序列为正义链5’-GAAGAGCCAAGGACAGGTAC-3’，反义链5’-CAACTTCATCCACGTTCACC-3’。

PCR 反应体系15 μL，其中包括模板DNA 3 μL，GSTT1和β-珠蛋白的上下游引物（浓度为25 μmol/L）各0.3 μL、dNTP （浓度为25 mM）0.3 μL、10×buffer 1.5 μL、Tag酶（浓度5 U/μL）为0.35 μL、MgCl2（浓度为25 mM）1.3 μL、无菌去离子水7.35 μL。

上PCR仪，PCR反应循环参数：95℃预变性5 min，94℃变性45 s，60e退火45 s，73℃延伸45 s，共
36个循环，最后再73℃延伸10 min后终止扩增。

1.4.3 电泳取PCR产物15 μL，加2 μL TEB缓冲液，3%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察结果。

1.5 统计学方法
所有的统计分析以及统计图的绘制均采用SPSS 13.0软件包。

①计量资料的组间比较采用t检验，计数资料的组间比较采用χ2检验，双侧检验，以P 0.05），GSTT1（-）基因型未显著增加不吸烟者患胃癌的风险。

吸烟人群中，胃癌组和对照组的GSTT1基因型分布差异有统计学意义（P 0.05），吸烟未明显增加GSTT1（+）人群患胃癌的风险。

GSTT1（-）人群中，吸烟者在胃癌组和对照组中的分布差异有统计学意义（P 0.05）；但GSTT1（-）基因型会显著增加吸烟人群患胃癌的风险（OR = 4.75，95%CI：1.68～13.41）。

②吸烟未明显增加GSTT1（+）人群患胃癌的风险性（P > 0.05）；但吸烟会显著增加GSTT1（-）人群发生胃癌的风险（OR = 11.6，95%CI：3.516～28.266）。

GSTT1（-）基因型且吸烟的人，患胃癌的风险明显提高。

GSTT1缺失基因型和吸烟协同作用，共同增加发生胃癌的风险。

总之，本研究认为，胃癌的发生涉及到多种环境因素及遗传因素长期的相互作用。

在内蒙古地区，GSTT1缺失基因型是胃癌的易感基因型，吸烟是胃癌的危险因素之一，吸烟和GSTT1（-）基因在胃癌的发生中有协同作用。

对于GSTT1基因缺失的这类胃癌的高危人群，应特别加强教育，使其改善生活习惯，尽量杜绝主动吸烟和被动吸烟，定期体检，预防胃癌的发生。

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