纯化蛋白,实验总结

实验汇总
实验内容
1近两周主要做了肿瘤多肽疫苗Vbp3的诱导表达和纯化以及鉴定实验。

2学习培养细胞一些技能，给细胞换液并传代，自己培养了一瓶E3细胞，并学习处理细胞，传代，计数。

学习使用倒置显微镜观察细胞，以及细胞实验室的一些注意事项。

3 取得杂交瘤细胞，然后我给小鼠注射，每只0.5ml制备抗体用。

实验结果
1先培养了菌株进行原核表达多肽，经过表达后SDS-PAGE电泳鉴定可以得出目的蛋白得到了表达。

通过与Maker对比可以看出有目的蛋白表达。

2然后进行超声破碎菌体，使表达的蛋白裂解，然后进行洗脱纯化。

洗脱液的浓度梯度分别为5mM 咪唑，20 mM 咪唑，80mM 咪唑，250 mM 咪唑，500mM 咪唑。

通过SDS-PAGE电泳鉴定出，在250 mM 咪唑处有目的蛋白被洗脱出。

如下图所示：
Maker 样品PBS洗脱5Mm 20 mM 80 mM 250 mM 500mM 250Mm
图中开始加的为maker，然后为裂解后未洗脱的样品，然后pbs,接着是不同浓度的咪唑洗脱下来的蛋白。

在不同浓度洗脱液的紫外峰值分别为：
3以bFGF 为抗原包板做ELISA实验，以鼠单抗和人源化抗体为一抗，以羊抗鼠酶
标抗体为二抗，进行检测鼠单抗的效价。

结果如下表所示：
Measurement count: 1 Filter:
450
1 2 3 4
20000 0.121 0.121 2.563 2.733 0.121 2.648 0 0.120208 40000 0.105 0.116 2.52 2.533 0.1105 2.5265 0.007778 0.009192 80000 0.11 0.131 2.15 1.93 0.1205 2.04 0.014849 0.155563 160000 0.084 0.084 1.361 1.654 0.084 1.5075 0 0.207182 320000 0.109 0.131 0.824 1.082 0.12 0.953 0.015556 0.182434 640000 0.112 0.113 0.578 0.632 0.1125 0.605 0.000707 0.038184 1280000 0.115 0.126 0.429 0.423 0.1205 0.426 0.007778 0.004243 2560000 0.111 0.12 0.112 0.082 0.1155 0.097 0.006364 0.021213
ELISA 结果
结果分析图
标准误差图
图中1，2中一抗为人源化抗体，3，4中一抗为鼠单抗。

通过图中可以看出人源化抗体使用鼠二抗基本没什么反映，而鼠单抗作为一抗则有反映。

原因：1 可能以人源化抗体作为一抗与鼠二抗没有适合的表位结合。

结果：鼠单抗的效价测的大约是32万倍。