校准品溯源及不确定度共60页
体外诊断试剂 校准品量值溯源报告 赋值及不确定度 企业参考品赋值 25-羟基维生素D测定试剂盒(免疫荧光法)
25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）校准品溯源报告1.目的制备性能稳定的工作校准品，用作25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）的质控控制。
2.范围适用于25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）校准品的溯源、制备、赋值。
3.制备过程3.1材料（1）高纯度的25-羟基维生素D抗原（纯度≥99%）。
（2）采用标准小牛血清作为基质。
3.2制备方法取适量高纯度的25-羟基维生素D抗原（纯度≥99%），用标准小牛血清将其稀释成约6.5、20、30、50、100ng/mL。
4.浓度测定、赋值过程4.1试剂参考测量程序：Immunodiagnostic Systems Limited生产的25羟基维生素D检测试剂盒（酶联免疫法），注册证号：国械注进20172402311。
常规测量程序：****生物25羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）、干式免疫荧光分析仪；有证参考物质：NIST SRM1950。
4.2赋值流程按下图的溯源流程对制备的工作校准品进行赋值。
校准物质程序实施4.2.1操作步骤4.2.1.1制造商选定测量程序（参考测量程序）的校准按《GB/T21415-2008/ISO17511:2003体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》4.2.2f 要求:制造商选定测量程序应是一个或多个现有一级或二级校准品校准的测量系统。
用参考测量程序重复测量NIST SRM1950，对测量结果进行Z 检验，验证测量值是否与参考物质的理论值存在显著差异。
Z 检验一般用于大样本(即样本容量大于30)平均值差异性检验的方法。
它是用标准正态分布的理论来推断差异发生的概率，从而比较两个平均数的差异是否显著。
另外，对于Z 检验我国的统计学教材大多采用U 检验的说法。
而国外英文统计学书籍，大多采用Z 检验。
在δ已知的情况下，单个平均数的显著性检验—u 检验（u-test）统计量计算公式如下：计量学溯源国际公认参考测量程序NIST SRM1950制造商工作校准品IVD 制造商内部参考测量程序：ImmunodiagnosticSystems Limited 生产的25羟基维生素D 检测试剂盒（酶联免疫法）IVD 常设测量程序本公司产品多次测量制造商产品校准品IVD 制造商常规测量程序临床样本临床检测结果中检所或相关组织****IVD 制造商终端用户n0δu x u -=参考测量程序校准结果如下：NIST SRM1950（24.78±0.77ng/ml,k=2）参考测量程序测量值24.7626.0825.5825.7623.1223.1823.1224.8226.2224.1623.0424.7623.0026.6425.5026.3025.1422.8425.1026.2023.2824.7826.1624.3422.8424.4024.6225.1226.2223.8625.5626.4223.0825.5026.7625.2424.6823.1224.9426.1025.6825.54NIST SRM1950的理论值u 0=24.78ng/mL，包含因子k 取2，则不确定度（δ）取值为0.385ng/mL，经计算，统计量u=1.122<u （0.05，双侧）=1.96，参考测量程序检测结果与理论值差异不明显。
量值溯源、误差和不确定度-医学检验
第二节 量值溯源、误差及不确定度
室 认可；推荐参考测量服务。
怎样溯源
国内溯源组织
全国医学计量技术委员会、卫生部临床检验中心
• 2010年，国家质量监督检验检疫总局批准中国计量科学研 究院（National Institute of Metrology）成立“全国医 学计量技术委员会”
• 2005年起，卫生部临床检验中心每年举行酶学参考实验室 会议 • 组织参考实验室基础能力测试； • 组织参考实验室能力测试；
参考物质
一级参考物质：稳定、均一，采用高度准确可靠 的若干方法定值
二级参考物质：用一级参考物质校准，由二级参 考方法定值
校准物：用二级参考物质校准，由常规方法定值
决定性方法 评价参考方法； 为一级参考物定值
一级参考物 校正决定性方法；为二级参考物定值
；发展及评价参考方法；
参考方法 评价常规方法；为二级参考物及质控
第三章 方法学选择与评价
第一节 实验方法的评价与选择 第二节 量值溯源、误差及不确定度 第三节 方法学的评价
第一节 实验方法的评价与选择
方法学评价(evaluation of methodology) 是通过实验途径测定分析方法的技术性
能,并评价其是否可接受，其目的在于明 确该方法是否具有足够的方法性能来说 明检测系统的可靠性及可以满足临床需 求。
The same reference intervals were used
校准品溯源PPT演示幻灯片
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校准品的均一性
通常取同批号 的一定数量最小包 装单元的校准品、 15
校准品的稳定性
同试剂盒的稳定性。
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定值不确定度
不确定度用U表示（极差——偏离平均值的正负差值， 或者SD）
合成不确定度=√定值不确定度2+均一不确定度2+运输不 确定度2+长期储存不确定度2
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校准品的互换性
互换性（可替换性）： 通常以两个测量程序对校准品指定的量进行测量所得的
测量结果的数学关系与对该量的其他特定样品所得的数学关 系之间的一致程度来表示。 前提条件：
首先确定参考方法（对比方法）和公司方法，测量的是 相同的量（相同的物质，单位相同）。 试验：
1、企业用校准品互换性评估 11
2
内容
校准品定值（赋值） 确认校准品的互换性 检验校准品的均一性、稳定性 测定赋值不确定度
3
概念
标准品/参考品（当参考品的值绝对可靠时，为标准品） 校准品（企业用校准品、产品校准品） 质控品 人体样品
参考方法（一级参考方法、二级参考方法） 对比方法 常备方法/常备系统（制造商方法）
4
一级参考方法 能直接追溯到国际基本单位或基本常数，有坚实的理论
1、企业用校准品的互换性评估 参考方法（对比方法）和公司方法，测量企业用校准品
和一组人体样品， 统计两种方法之间的数学关系（线性回归）。 评估该数学关系，如表现无明显差别，则可互换。
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2、产品校准品的互换性评估 参考方法（对比方法）和校准后的公司方法，测量一组
人体样品， 对参考方法检测值和公司方法检测值，统计两种方法之
校准品值=y±U
（产品校准品的不确定度、定值质控品的不确定度。）
校准品溯源及不确定度
概念：
SI:国际标准单位
参考方法 ( 参考测量程序）：经过详尽的研究，表明仅具
有可以忽略不计的不准确度的方法。
一级参考方法（参考测量程序）
参考方法（参考测量程序）
国际约定参考方法（非一级）（参考 测量程序）
二级参考方法（参考测量程序）
一级参考方法： 能直接追溯到国际基本单位或基本常数，有坚实的 理论基础和严格的数学表达的方法。它的精密度、准确度、 测量范围和稳定性已经过严谨地研究与验证，具有最高水 平。目前国际公认的化学测量权威方法有精密库仑法、同
国际约定定值方法(非参 考测量程序 国际约定参考物质
第一条虚线以上：由 国际计量局、认可的 参考实验室、国家计 量机构等权威机构操 作完成
-----------------------------------------------------------------------------------------厂商选定测量程序
果与被测量的真值愈接近，质量越高，水平越高，其使用
价值越高；不确定度越大，测量结果的质量越低，水平越 低，其使用价值也越低
定义：
一、溯源性：通过一条不间断的比较链，使测量结果或测量标
准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准
联系起来的特性。
二、标准化：标准化是为了所有有关方面的利益，特别是为了 促进最佳的、全面的经济并适当考虑到产品使用条件与安全要 求，在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定 并实施各项规则的过程（为了实现临床检验结果的溯源性，检
虚线以下：由终端客 户操作完成
具有制造商选定测量程序、但既无国际约定参考测量程序、 也无国际约定校准品，不能在计量上可追溯至SI的情况
校准品溯源 ppt
适用于如B型肝炎表面抗原（ab亚型）和绒毛膜促性腺激素及其抗体这类组分的
量
-
8
校准品定值实用方案二
具有参考方法（非一级），无参考品，不能在计量上溯源至SI的情况。
适用于如HDL-胆固醇、血细胞和某些凝血因子这类组分的量
举例：21三体检测试剂盒
参考方法：胰酶法G显带；公司方法：荧光PCR毛细管电泳法
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2
内容
校准品定值（赋值） 确认校准品的互换性 检验校准品的均一性、稳定性 测定赋值不确定度
-பைடு நூலகம்
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概念
标准品/参考品（当参考品的值绝对可靠时，为标准品） 校准品（企业用校准品、产品校准品） 质控品 人体样品
参考方法（一级参考方法、二级参考方法）
对比方法
常备方法/常备系统（制造商方法）
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一级参考方法 能直接追溯到国际基本单位或基本常数，有坚实的理论
别进行重复测量，得出两组数据。 统计两种方法之间的数学关系（线性回归），如：一定
概率下线性回归的斜率为1、截距为零，有时候偏离可以接 受。
用以上方法，评估多个样品的测量结果。
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校准品的均一性
通常取同批号 的一定数量最小包 装单元的校- 准品、 15
校准品的稳定性
同试剂盒的稳定性。
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定值不确定度
基础和严格的数学表达的方法。它的精密度、准确度、测量 范围和稳定性已经过严谨地研究与验证，具有最高水平。目 前国际公认的化学测量权威方法有精密库仑法、同位素稀释 质谱法、重量法、容量法、凝固点下降法
-
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二级参考方法 指具有较高的精密度和稳定性的方法，其准确度已用权
威方法或不同原理的其它方法核验，证明不存在可察觉的方 向性系统误差，可估计出其测量结果的总不确定度
校准品的溯源问题综述.
试剂
分析仪
检测系统的分析性能
衡量一个检测系统（检验方法）的 基本分析性能有4点： 不精密度、 不准确度、 病人结果可报告范围、 分析灵敏度。
校准品
按指导和规范校准
试剂 仪器 按检测程序 检测
病人标本检验结果 具溯源性和可比性
病人标本结果的溯源性
使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得 到了显著的提高 优良试剂盒的病人结果的可报告范围也可以 满足临床要求 大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要 求 结果的可靠性的关键是准确度，即对校准品 值的调节。因此，实现新鲜病人标本结果的 溯源性，成为使校准品值实现溯源性。
检验结果的溯源性与标准化
检测方法的分类
分类有不同观点,大致上可分三类： 确认方法（Definitive method）； 参考方法（Reference method）； 常规方法（Routine method）。
Definitive Method
能直接追溯到国际基本单位或基本常数， 有坚实的理论基础和严格的数学表达的 方法。它的精密度、准确度、测量范围 和稳定性已经过严谨地研究与验证，具 有最高水平。目前国际公认的化学测量 权威方法有精密库仑法、同位素稀释质 谱法、重量法、容量法、凝固点下降法
临床检验的目的与传统
目的：对病人新鲜标本检验报告可靠的 结果。 传统：对收集的患者标本只做一次检验， 就发出报告。 两个基本要求: 精密度：重复性好； 准确度：和参考方法具有可比性。
溯源性（Traceability）
通过一条具有规定不确定度的不间断的比 较链，使测量结果或测量标准的值能够与 规定的参考标准，通常是与国家标准或国 际标准联系起来的特性。［ VIM：1993， 定义6.10］
量值溯源和不确定度
第二节量值溯源临床实验室通过校准为其检测系统确定标准值。
为保证检测结果的准确性和一致性，必须保证参考物设定值可溯源到可能的参考方法和/或可能的高一级参考物质，以使常规的检测系统对患者样本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参考系列相同的检测量值。
一、量值溯源的概念通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测定结果或标准值能够与规定的参考标准（通常是国家标准或国际标准）联系起来的特性，称为量值的溯源性（traceability）。
溯源顺序通常采用溯源等级图来描述。
要求校正常规方法的参考物必须溯源到国家或国际规定的参考方法上，最好是溯源到SI（国际单位制），SI单位表示了该物质量值的准确性达到计量基准，它具有非常小的不确定度。
除了保证参考物的溯源性外，临床实验室和生产厂商必须对检测系统各组分（仪器、试剂、参考物、和操作程序）实行严格的标准化程序，才能实现患者检验结果的溯源性。
二、量值溯源的意义临床医生通常将实验室检验结果与参考区间和医学决定水平进行比较，结合患者其它医学信息做出临床判断。
但如果实验室间的检验结果一致性不好，使参考区间和医学决定水平有差异，将混淆临床医生的医学判断，并可能导致错误的医学决策。
特别对于由科学家或专业协会建议和提倡运用共同判断标准对治疗进行干预，例如在高胆固醇血症和糖尿病的治疗指南中，提出根据检验结果的临床诊断值、干预值和目标值等。
实验室间的检验结果一致性不好，可能导致对检验结果的错误解释和对疾病的错误干预。
因此，有必要开展量值溯源和检测系统的标准化，以实现各实验室测定结果的一致性或不同医院的实验室检验结果的互认性，也即改进试验结果在空间和时间上的可比性。
三、参考物的量值溯源在临床实验室的定量分析中，通过不同级别的测量程序、参考物和校正物，实现连续测量。
用一个测量程序为某种物质定值，该物质用作下一级测量程序的校正物。
依此类推，形成了一条不间断的比较链，也称溯源链。
（一）参考物量值溯源的意义使用公认的参考方法来标化测定参考物，通过严密的测定程序，所得到的参考物的测定值是可靠的，该参考物的量值可溯源到上级参考方法和/或参考物质。
校准品溯源及不确定度
厂商产品校准品：厂商产品校准物可以是具有基质的物质， 使相似于最终用户常规测量程序所测量的人来源样品。
精品课件
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用户常规测量程序：应由一个或多个厂商的产品校准品进 行校准确定的测量系统，常由厂商提供。
精品课件
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SI国际基本单位 一级参考物质
一级参考测量程序 二级参考测量程序
第一条虚线以上：由 国际计量局、认可的 参考实验室、国家计 量机构等权威机构操 作完成
工作校准品
厂商常规测量程序
两条虚线之间：由厂 家操作完成
产品校准品
用户常规测量程序
第二条虚线以下：由 终端客户操作完成
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常规样本
精品课件
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国际约定参考物质（非一级）：
量值不能可追溯至SI，由国际约定参考测量程序予以 定值的校准品。
精品课件
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二级参考物质：
是用与一级参考品进行比较测量的方法或一级参考品 的定值方法定值，其不稳定度和均匀性未达到一级参考品 水平，但能满足一般测量的需要。其定值通常采用相对测 量法，即用相应的一级参考品来校准仪器，采用多种不同 的分析方法（如标准曲线法、标准加入法、内标法）进行 比较测量而确定其量值不确定度的水平。
常规样本
虚线以下：由终端客 户操作完成
具有制造商选定测量程序、但既无国际约定参考测量程序、 也无国际约定校准品，不能在计量上可追溯至SI的情况
精品课件
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精品课件
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参考实验室必须得到医学会的认可并接受其监督
体外诊断试剂校准品溯源质控品定值及不确定度研究
黄杰 非传染病诊断试剂室 中国食品药品检定研究院
PPT大量采用了ISO17511（2015草案）和Miller教授培训PPT，也是学习体会
报告内容
标准物质基本概述 溯源 赋值、不确定度研究
互通性、一致化研究
题目5
中检院已发布标准物质
2016年11月7日 61个品种
每L含量
蔗糖 海藻糖
乳糖
50g
100g
50g
/
/
50g
/
/
/
激素类国家标准品赋形剂配方
成分
配方9（原配方） 配方2（10） 配方3（11） 每L含量
人血清白蛋白
乳糖 甲酸铵
1g
10g 0.63g
5g
10g 0.63g
1g
20g 0.63g
配方4
50g /
50g
配方4（12） 1g 50g
0.63g
C-P冻干赋形剂的选择
4211756
4310620 198200689 202061484 143631775 145411185 78030032 76742254 33281636 33128166 11829746 11587350
3931971 3763507
浓度值
39.82 43.42 16.57 16.15 7.66 7.63 3.76 3.76 1.95 2.00 1.06
• 5.4 有符合ISO15194国际约定校准物,它定义被 测量;无国际约定参考测量程序和原级校准品, 未计量学溯源到SI的情况
• 5.5 有国际约定校准物（非一级），但无国际 约定参考测量程序，未计量学溯源到SI的情况
8.量值溯源和测量不确定度详解
量值溯源和测量不确定度一、计量学溯源【计量学定义】•metrology•测量及其应用的科学。
•注：计量学涵盖测量的所有理论与实践的方面，包括其测量不确定度和应用领域。
计量学工作特点是：–准确性：测量结果和真值一致性。
–一致性：在一定不确定度、误差极限、允许误差范围内的准确性。
–溯源性：是准确性和一致性的来源。
–法制性：是社会发展的需要。
例：测量仪器检定表【测量定义】•测量（measurement）：通过实验获得，并可合理赋予某量一个或多个量值的过程。
•注1：不适用于标称特性。
•注2：意味着量的比较并包括实体的计数。
•注3：测量先决条件是对测量结果预期用途相适应的量的描述、测量程序、根据规定测量程序（包括测量条件）进行操作的经校准的测量系统。
【量定义】•量（quantity）：现象、物体或物质的特性，其大小可用一个数和一个参照对象表示。
•注1：量的属概念可分为几个层次的种概念。
•注3：量的符号见国家标准“量和单位”。
一个给定符号可表示不同的量。
•注4：医学实验室中量的名称首选国际理论与应用物理联合会/国际临床化学联合会规定的格式，即系统-成分：量的类型。
如血浆（血液）-钠离子：特定人在特定时间内物质的量浓度等于143mmol/L。
•注5：量从概念上一般可分为物理量、化学量、生物量，或基本量和导出量。
•注6：这里定义的量是标量。
然而，各分量是标量的向量或张量也可认为是量。
【测量程序定义】•测量程序（measurement procedure）：根据一种或多种测量原理及给定的测量方法，在测量模型和获得测量结果所需计算的基础上，对测量所做的详细描述。
•注1：通常要写成充分而详尽的文件，以便操作者能进行测量。
•注2：可包括有关目标测量不确定度声明。
•注3：有时被称作标准操作程序/SOP。
【测量系统定义】•测量系统（measurement system）：一套组装的并适用于特定类型量在规定区间内给出测得值信息的一台或多台测量仪器，通常还包括其他装置，诸如试剂和电源。