总谷胱甘肽的测定方法

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谷胱甘肽的制备及含量测定

谷胱甘肽的制备及含量测定

• 3.谷胱甘肽的主要来源 • 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中,在生物体内有着重 要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很 高,达100~1000mg/100g,在人体血液中含26~ 34mg/100g,鸡血中含58~73mg/100g,猪血中含10~ 15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12~ 33mg/100g),而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较 低(0.06~0.7mg/100g)。
谷胱甘肽的制备及含量测定
一、谷胱甘肽的背景知识
• 1.谷胱甘肽是一种什么 样的物质 谷胱甘肽(glutathiose,rglutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种 含γ-酰胺键和巯基的三 肽,由谷氨酸、半胱 氨酸及甘氨酸组成。 谷胱甘肽:还原型谷胱 甘肽、阿拓莫兰、古 拉定
提取工艺
1、取5g干酵母,与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入,使混合液保持在95-100℃,沸腾5min。 放置冰水中速冷。 3、在2000rpm速度下离心10min,取上清液,即谷胱甘肽抽提液。 4、谷胱甘肽抽提液,调pH至3.0。 5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。 6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱,洗脱流速10ml/min。收集洗脱液, 洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。 7、中和洗脱液至pH6.5。

谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基 等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。还原型谷胱 甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合,生成水和氧化型 谷胱甘肽,也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 • 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基,有利于酶活性的发挥, 并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能,使酶 重新恢复活性。 • 谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 • 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减 少等症状,有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体 的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合,并促进 其排出体外,起到中和解毒作用 。

不同方法提取谷胱甘肽的比较

不同方法提取谷胱甘肽的比较

不同方法提取谷胱甘肽的比较实验一不同方法提取谷胱甘肽的比较一、实验目的1、掌握从干酵母中粗提谷胱甘肽的各种方法。

2、掌握还原型谷胱甘肽定量的方法。

二、实验原理谷胱甘肽是种重要的三肽,以还原型(GSH)和氧化型(GSSG)广泛的存在于动、植物及微生物。

在生物体内起作用的主要是GSH,是细胞内主要的还原性物质,能保护细胞免受氧化性、毒害性化合物和辐射的伤害,还是酶的辅因子。

GSH在临床上是重要的解毒药物。

谷胱甘肽是小分子物质,水中溶解度较大,细胞表面出现裂缝就能分散到溶剂中,故可用一些温和的方法提取。

本实验采用热处理、冰冻处理、酸处理、有机溶剂处理等方法提取酵母细胞中的谷胱甘肽,比较最后的得率,探讨各种提取方法的优点和缺点。

三、实验器材、材料和试剂1、器材冰箱,离心机,水浴锅,电炉,滴定管,烧杯,玻棒,研钵。

2、实验材料活性干酵母,2%偏磷酸,5%碘化钾,0.0001mol/l碘酸钾溶液,淀粉指示剂,乙酸:乙醇(2:1),36%乙酸溶液。

四、实验步骤1、热水抽提:1g干酵母与5ml水混合,加15ml沸水,置100℃水浴保温10min,立即放入冰水速冷,取10ml离心,取5ml上清滴定,得滴定体积V1。

2、冷冻研磨后有机酸搅拌提取:1g干酵母先在研钵中研细,与10ml水混合,-20℃冷冻成半固体状,研磨5min转入小烧杯,加10ml 36%乙酸搅拌15min,取10ml离心,取5ml上清滴定,得滴定体积V2。

3、酸热处理:1g干酵母加20ml2%偏磷酸,60℃水浴中搅拌抽提15min,置冰水速冷,取10ml离心,取5ml上清滴定,得滴定体积V3。

4、有机混合液处理:1g干酵母加20ml有机混合液(甲酸:乙醇=2:1),室温搅拌抽提15min,置冰水速冷,取10ml离心,取5ml上清滴定,得滴定体积V4。

5、碘量法测定:取5ml待测样品,置于250ml锥形瓶中,加入5ml2%偏磷酸溶液、1ml5%碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂,用0.0001mol/L的碘酸钾滴定至溶液由无色变为蓝色为止。

谷胱甘肽含量测定

谷胱甘肽含量测定

植物生理学模块实验指导玲主编科学还原型谷胱甘肽含量的测定方法(分光光度计法)【实验目的】了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代过程,学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

【实验原理】谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

【器材与试剂】1.实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶(100ml、200ml、1000ml)、分光光度计2.实验试剂50g/L三氯乙酸(TCA)溶液(含5mmol/L Na2-EDTA):称取5g三氯乙酸,用蒸馏水溶解稀释至100ml。

再称取186mg Na2-EDTA·2H2O,加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。

0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液(pH7.7):配制方法见附录。

0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液:配制方法见附录。

4mmol/L二硫代硝基苯甲酸(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)溶液:称取15.8mg DTNB,用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解,定容至10ml,混匀,4℃保存。

现用现配。

100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液:称取3.1mg 还原型谷胱甘肽,加入少量无水乙醇溶解,加蒸馏水定容至100ml。

3.实验材料同抗坏血酸。

【实验步骤】1.标准曲线制作取6支试管,编号,按照表1加入各种试剂,混匀,25℃保温反应10min。

食用菌中谷胱甘肽的测定

食用菌中谷胱甘肽的测定

食用菌中谷胱甘肽的测定谷胱甘肽是一种重要的抗氧化物质,被广泛应用于食品工业中。

食用菌是一类含有高丰富谷胱甘肽的食材,因此测定食用菌中谷胱甘肽的含量具有重要的意义。

本文将介绍几种常用的测定食用菌中谷胱甘肽的方法。

一、硫巴比妥酸法测定谷胱甘肽含量硫巴比妥酸法是目前测定谷胱甘肽含量最常用的方法之一。

该方法的原理是谷胱甘肽与硫巴比妥酸在碱性条件下反应生成黄色产物,通过测定产物的吸光度可以间接测定谷胱甘肽的含量。

具体操作步骤如下:1. 将食用菌样品粉碎并称取适量,加入酸性溶液中,破坏细胞结构释放出谷胱甘肽。

2. 加入碱性溶液和硫巴比妥酸,使谷胱甘肽与硫巴比妥酸反应生成黄色产物。

3. 使用分光光度计测定产物的吸光度,利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。

二、高效液相色谱法测定谷胱甘肽含量高效液相色谱法是一种常用的分离和定量化合物的方法。

该方法的原理是利用色谱柱对样品中的谷胱甘肽进行分离,通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高来定量谷胱甘肽的含量。

具体操作步骤如下:1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液,经过离心等处理步骤,获得待测样品。

2. 使用高效液相色谱仪,将待测样品注入进样器,经过一定的流动相条件下,在色谱柱中进行分离。

3. 通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高,利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。

三、氧化还原法测定谷胱甘肽含量氧化还原法是一种直接测定谷胱甘肽含量的方法。

该方法的原理是利用谷胱甘肽与还原剂在适宜的条件下发生氧化还原反应,通过测定反应前后还原剂的含量变化来确定谷胱甘肽的含量。

具体操作步骤如下:1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液,通过离心等处理步骤,获得待测样品。

2. 将待测样品与还原剂在适宜的条件下反应,使谷胱甘肽发生氧化还原反应。

3. 通过测定反应前后还原剂的含量变化,计算谷胱甘肽的含量。

在测定食用菌中谷胱甘肽的含量时,需要注意样品的制备过程,确保提取到的谷胱甘肽是代表样品中真实含量的。

同时,选择合适的测定方法,准确、快速地测定谷胱甘肽含量,有助于评估食用菌的品质和营养价值。

谷胱甘肽(GSH)含量测定

谷胱甘肽(GSH)含量测定

谷胱甘肽(GSH)含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂,如与自由基、重金属等结合,从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质,排泄出体外。

谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸(DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG),2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm 处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号,按如下表格加入各试剂,反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度,制作标准曲线;2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g,加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取,并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml,8000rpm离心10min,取上清液;b、取上述上清液2ml显色,操作同标准曲线。

3.结果计算:GSH含量(ug/Gfw)= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注:Cx---2ml样品中GSH含量(ug),即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml);Vs----显色时所取样的体积(ml);FW---样品鲜重(g)。

五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时,视线要垂直于移液管且与液面凹面水平,不能斜视,以免量取试剂不准确。

2.在提取样品时,最好沉淀出去蛋白质,以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。

3.在研磨叶片时,为方便研磨,刚开始时加入少量的提取液。

实验五植物组织中谷胱甘肽含量的测定

实验五植物组织中谷胱甘肽含量的测定

实验五植物组织中⾕胱⽢肽含量的测定⾕胱⽢肽含量的测定⼀、实验⽬的1、了解⾕胱⽢肽在植物抗逆中作⽤。

2、了解⽬前⾕胱⽢肽含量的测定⽅法。

3、掌握⽐⾊法测定植物体⾕胱⽢肽含量的原理与技术。

⼆、实验原理还原性⾕胱⽢肽(GSH)作为⽣物体内最主要的⾮蛋⽩巯基以及含量最丰富的低分⼦多肽,是植物细胞重要的抗氧化剂之⼀,在植物抗逆过程中直接或间接地参与了许多植物的功能活动,是⼀个良好的表⽰氧化胁迫的指标。

⾕胱⽢肽(GSH)是由⾕氨酸、半胱氨酸和⽢氨酸结合⽽成的三肽,半胱氨酸上的巯基为其活性基团。

在巯基化合物的存在下,⽆⾊的DTNB将被转变成黄⾊的5-巯基-2-硝基苯甲酸。

由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最⼤吸收,⽽且DTNB的吸收光谱并不造成⼲扰,所以可以⽤分光光度计进⾏测定。

即:GSH和TDBN在pH=7时⽣成黄⾊物质,其颜⾊深浅与GSH的浓度成线性关系。

三、实验材料、试剂与仪器1、实验材料:⼩麦叶⽚2、实验试剂:(1)GSH标准溶液〔0.01mg/ml GSH标准溶液(=亦即10µg/ml)〕:称取50mg 分析纯GSH,溶于蒸馏⽔中,并定容于100ml,即为0.5mg/ml 之标准母液,⽤稀释10倍(0.05mg/ml=亦即50µg/ml GSH)注:⽤时再稀释5倍即为10µg/ml;(2)5%偏磷酸;(3)0.2mol/L 磷酸钾缓冲液,pH7.0;(4)TDNB试剂:称取39.6mg⼆硫代双-⼆硝基苯甲酸(TDNB),⽤0.2mol/L磷酸钾缓冲液溶解并定容于100ml;(5)1mol/L NaOH溶液。

3、实验仪器:V-1000D型可见分光光度计;离⼼机;离⼼管;刻度试管;研钵;吸⽔纸适量;移液管等。

四、⽅法与步骤1、标准曲线的制作取7⽀刻度试管,编号,按表加⼊试剂:试剂(ml)试管号1 2 3 4 5 6 7GSH标准溶液(10µg/ml)0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0补蒸馏⽔到2ml 2 1.9 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0磷酸缓冲液 4 4 4 4 4 4 4DTNB试剂0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 GSH浓度(µg/2ml即每管含量)0 1 2 4 6 8 10将上述溶液混合均匀,在室温下显⾊5min。

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定关键词:还原型谷胱甘肽GSH氧化型谷胱甘肽GSSG测定2009-04-24 00:00 来源:互联网点击次数:6147GSH和GSSG 参照Anderson等(1992)。

取0.5 g样品,加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸(含1 mmol•L-1 EDTA ,pH 2.8),冰浴研磨,匀浆液以20,000 g,4 ℃离心15 min,取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。

总的GSH和GSSG含量测定如下:200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1(110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20,40 mmol•L-1NaH2PO4•H2O,15 mmol•L-1EDTA,0.3 mmol•L-15,5‘-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)DTNB,0.04% BSA)、320 μL反应液2 (1 mmol•L-1 EDTA,50 mmol•L-1 imidazole 咪唑solution and 0.02% BSA)、400 μL反应液3(5% Na2HPO4,pH 7.5的溶液稀释50倍)、80 μL 9.0 mmol•L-1 NADPH。

测定OD412下的吸收值。

GSSG 含量测定如下:200 μL提取液加入1 mL的2-2乙烯嘧啶(稀释50倍)在25°C下水浴1 h再测定OD412下的吸收值。

GSH的含量可以从总的GSH和GSSG含量中减去GSSG含量获得。

GSH测定方法:取样品0.5 g,加入预冷的5%磺基水杨酸2.5 ml和少许石英砂,充分冰预研磨,转入离心管中,于4℃下20,000×g离心20min,将上清液分装,液氮冷冻后于-20℃保存或直接进行抗氧化剂分析。

取50 μL上清液,用5% 磺基水杨酸定容至100 μL (即加入5% 磺基水杨酸50 μL),加入24 μL 1.84 mol•L-1三乙醇胺triethlene diamine以中和样液,加入50 μL 10% 乙烯吡啶Polyvinyl pyridine (用70% 乙醇配制),25℃水浴1 h,以除去GSH,到时加入706 mL 50 mmol•L-1磷酸缓冲液,pH 7.5,内含2.5 mmol•L-1 EDTA,加入20 μL 10 mmol•L-1 NADPH 和80 μL 12.5 mmol•L-1 DTNB(二硫硝基苯甲酸),混匀,25℃保温10 min,到时加入20μL 50 U•mL-1 GR,总体积为1 mL,立即混匀,读出3 min时的OD值。

谷胱甘肽测定实验报告

谷胱甘肽测定实验报告

一、实验目的了解植物组织中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程,学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

二、实验原理谷胱甘肽(GSH)是一种具有抗氧化作用的天然三肽,由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成。

在生物体内,谷胱甘肽具有多种生理功能,如保护细胞免受氧化损伤、参与药物和毒素的解毒过程等。

还原型谷胱甘肽含量的测定对于研究生物体内氧化还原平衡、疾病诊断和药物治疗具有重要意义。

本实验采用分光光度计法测定植物组织中还原型谷胱甘肽的含量。

该方法的原理是:在一定的pH条件下,还原型谷胱甘肽与5,5'-二硫双硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子,于423nm波长处有最大吸收峰。

通过测定该波长处的吸光度值,可以计算出还原型谷胱甘肽的含量。

三、实验材料与仪器1. 材料:小麦幼嫩叶片、5,5'-二硫双硝基苯甲酸(DTNB)、磷酸盐缓冲液(pH 7.0)、乙二胺四乙酸(EDTA)、无水乙醇等。

2. 仪器:分光光度计、电子天平、离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器等。

四、实验方法与步骤1. 样品制备:取小麦幼嫩叶片,用无水乙醇研磨成匀浆,离心取上清液。

2. 标准曲线绘制:分别取6支干净的试管,按表1加入试剂,反应20分钟后,于423nm波长处测定吸光度值,以DTNB浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。

3. 样品测定:取6支干净的试管,按表2加入试剂,反应20分钟后,于423nm波长处测定吸光度值,根据标准曲线计算还原型谷胱甘肽的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线:根据实验数据绘制标准曲线,得到线性回归方程为y=0.0048x-0.0031,相关系数R²=0.9967。

2. 样品测定:根据标准曲线计算小麦幼嫩叶片中还原型谷胱甘肽的含量为(X±SD)mg/g。

六、讨论1. 实验结果表明,小麦幼嫩叶片中含有一定量的还原型谷胱甘肽,其含量与样品制备方法和实验条件有关。

【doc】谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较、评价

【doc】谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较、评价

谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较、评价第11卷第2期2003年6月中国临床营养杂志CHINESEJOURNALOFCLINICALNUTRITIONV o1.11.No.2June.20o3谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较,评价樊跃平于健春余跃张琳(中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院外科,北京100730)综述?摘要谷胱甘肽是一种非常特殊的氨基酸衍生物,广泛存在于动,植物细胞,在生物体内有许多重要的生理作用.人类组织中GSH的浓度的研究还不广泛.谷胱甘肽的测定有许多方法,目前还没有一种既快速,稳定,特异,又十分灵敏,经济的测定方法.本文对谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法作一综述.关键词谷胱甘肽生理意义测定方法中图分类号Rl51.3文献标识码A文章编号1008—5882(2003)02-0136-04 PhysiologicalandClinicalSignificanceofGlutathioneandEvaluationofV ariousMeasurementsofGlutathioneFanY ue—pingY uJian-chunYuY ueZhangLin(PUMCHospital,CAMSandPUMC,Beijing100730,China) Glutathione(GSH)isaspecialderivantofaminoacid,presentsinmostplants,a nimalsandmicrobes,playsavitalroleinorganisms.Wehavenotwidelystudiedaboutthe GSHlevelinhumantissue.TherearevariousmeasurementsofGSH,bynow,wehavenotbuiltarap id,stable,specificandsensitivemeasurement.Thephysiologicalandclinicalsignificanceofglu tathioneandevaluationof variousmeasurementsofglutathionewerereviewed. Keywordsglutathione;significance;measurementC.,c2inNutr,2003,11(2):136—139谷胱甘肽的生理意义谷胱甘肽是由谷氨酸,半胱氨酸和甘氨酸形成的三肽化合物,广泛存在于动,植物细胞,并于细胞内合成l】],分为还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)两类,其中GSH含量占到约99.5%.谷胱甘肽是一种非常特殊的氨基酸衍生物,它的活性成分是半胱氨酸中的巯基,在谷氨酸与半胱氨酸之间存在一个不多见的.肽键,从而保护了GSH被许多肽酶的水解.1921年Hopkins首先发现了谷胱甘肽,1931年Rapkine 第一次报道巯基化合物的浓度在有丝分裂期间发生了变化,这个变化证实了SH/SS(氧化/还原)循环的存在,并提示巯基化合物可能具备一些基本的生物学功能.Baron经大量回顾,总结,于1951年应用资料外推法提出了”GSH激发SH.酶的活性同样在细胞内发生,是细胞呼吸的常规机制”.对GSH的主要研究工作由Krebs,Hems,Vina于20世纪60~70年代在牛津代谢研究实验室展开l2].GSH可于所有器官组织细胞内生成,尤其以肝脏的生成最重要;是细胞内含量最丰富的非蛋白巯基,能够于细胞内经过酶反应而合成.GSH的生理作用是多方面的,如氨基酸的转运,蛋白,核酸的合成,抗氧化作用,维持蛋白巯基的还原状态,亲电子异生化合作用,维持酶的活性状态,保证了单磷酸己糖的分流,保护细胞防止自由基及内毒素的损伤等等.禁食或应激初期,谷氨酸,半胱氨酸,蛋氨酸中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室;#通信作者住院医师,电话:010.65296024,传真010—65140698,电子邮件:*******************2期谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较,评价137的供给会受到干扰.肝脏GSH浓度水平不仅依赖GSSG(可由还原酶转化成GSH),而且还依赖肌肉,肠道器官的谷氨酸,半胱氨酸的储备,正由于这些储备,肝脏GSH水平升高,来保护脏器,组织免受应激状态下的氧化损伤.当病情进展时,GSH的合成下降,这是由于机体的氧化还原作用引起的.谷胱甘肽在临床上有广泛用途:作为抗氧化剂,可保护细胞膜,防止红细胞溶血及促进高铁血红蛋白的还原;对放射线,放射性药物或化疗所引起的白细胞减少等症状可起到保护作用;对缺氧血症,恶心及肝脏疾病所引起的不适具有缓解作用;可用于一氧化碳,重金属及有机溶剂中毒的解毒治疗.近几年还发现GSH可能具有抑制艾滋病病毒的功效.人类组织中GSH的浓度的研究还不广泛.国外文献报道人类肌肉组织GSH浓度为(1320±37)mo1每千克湿体重;国内文献报道血浆总谷胱甘肽浓度为4trmol/L.全血谷胱甘肽浓度为0.57mmol/L(500~mol/L一1000~mol/L),而谷胱甘肽几乎全部包含于血细胞,因此血浆浓度只有4.9I~mol/L-5.9~mol/Lt61.DeanP.Jones等报道健康人血浆GSH含量为(2.09+1.14)micomolar.肝脏被看作是谷胱甘肽代谢的中心器官,而血浆及红细胞中GSH 的浓度可以反映肝脏的GSH的合成能力.GSH与临床许多方面密切相关,对人体血浆,组织细胞中含量的测定,研究,可以提供我们关于细胞对氧化,应激的保护及反应状态的信息【3J,并且由于GSH和GSSG在细胞信号传递,基因控制,氧化还原反应和生物平衡方面的重要作用,细胞谷胱甘肽的精确测定是十分必要的【8】.作为机体内对抗氧自由基的一种重要的抗氧化剂,谷胱甘肽对于临床治疗具有重要意义,提供足够量的抗氧化剂能够改善患者的预后,明显降低危重病长时间的炎症反应.谷氨酰胺是合成谷胱甘肽的重要前体物质(可提供谷氨酸),目前已应用于临床(包括静脉及口服制剂).其作用之一,就是通过维持组织,细胞内谷胱甘肽水平从而保护组织细胞,达到免疫营养的目的1.谷胱甘肽的测定有许多方法,如酶循环法,流式细胞法,滴定法,电泳法和近些年发展的高压液相色谱法等,这些方法各有其优点,但也都有不足,目前还没有一种既快速,稳定,特异,又十分灵敏,经济的测定方法,谷胱甘肽的测定方法有待进一步的发展和完善.下面对目前常用的几种主要的测定方法做一介绍,比较和评价.谷胱甘肽测定方法酶循环法.其测定原理为氧化.还原反应:GSH被DTNB(5,5.dithiobis.2. nitrobenzoicacid;5,5.二巯基.2-硝基苯酸)氧化,生成GSSG和稳定的TNB(5-thio-2一nitrobenzoic acid;5-巯基.2-硝基苯酸);GSSG与GSSG还原酶及NADPH(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)反应,还原生成GSH.在NADPH与GSSG还原酶维持GSH总量不变的条件下,GSH和DTNB反应生成TNB的速率与样本中总谷胱甘肽成正比.TNB于412nm波长处有最大吸光度,可以通过分光光度计来测定总谷胱甘肽水平(GSH+GSSG)il1].酶法测定谷胱甘肽,样本的制备要迅速,因为GSH很容易氧化而使其浓度降低.本法还可测定GSSG水平.酶循环法最初由Owen和Belcher提出,之后由Tietze和Griffith进行了改进【3】.酶循环法是一种灵敏,快速的方法I】u;其最大优点是灵敏度高,可测定含量仅0.1~mol/L的样品,回收率93%~106%. Manju等¨认为此方法灵敏度高,但特异性不高,这是由于DTNB可与许多含活性巯基基团物质反应.但此法不足之处在于其测定的是谷胱甘肽总量(GSH+ GSSG),不能区分GSH和GSSG;另外样本的准备也比较严格,要求控制采血至测定时间间隔在3min 内,否则将影响测定,使实际应用受到很大限制. MargaretA.Baker等将酶循环法与微量滴定板技术相结合,设计了一种快速,敏感,简便的测定大数量生物样本的GSH,GSSG的方法.其最大优点是可同时测定大量的样本.为了提高灵敏度,Tamara Mourad等n将酶循环法与生物发光检测技术相结合, 测定GSSG,灵敏度达pm(10)水平.高效液相色谱法(HPLC).HPLC是近年测定复杂生物样本中各种巯基物的最好方法ll”.HPLC过程是溶质在固定相和流动相之间由于分配系数,吸附能力,亲和力,分子大小不同,进行连续分离的过程.其试剂材料包括mBBr(monobromobimane;一溴化物)溶液,NEM(N-Ethylmorphline;N-乙基吗啡),标准GSH,标准半胱氨酸溶液,由两个M6000A泵组成的HPLC,721系统控制仪,710BWISP自动样品仪,420荧光测定仪,C18柱.实验过程包括诱导过程和HPLC过程.GSH和其它巯基物水平可通过标准曲线得到.中国临床营养杂志l1卷HPLC法优点是可以区分开GSH,GSSH及2O多种含巯基氨基酸衍生物.其不足是灵敏度不高,样本中GSH含量不得低于50I~mol/L;且样本的前处理过程耗时,测定大样本时不方便,所用的柱特殊.A.Rodrigueuz-Ariza等[141介绍了一种结合电化学法快速测定谷胱甘肽水平的方法.该法应用一套双通道电化学测定仪,可同时测定GSH,GSSG,还可测定PSSG(蛋白结合谷胱甘肽),具有高灵敏度,高选择性,高效的优点.A.M.Dipietra等[11将依他尼酸作为色谱前诱导物,应用HPLC法测定GSH及L一半胱氨酸,认为在灵敏度要求不太高的情况下,可应用依他尼酸,而且只需简单,基本的HPLC设备即可.Chung-shiY ang等[11介绍了一种将HPLC与微透析机联机测定谷胱甘肽.此法缩短了分析测定时间,简化了样本的准备过程,并提供了连续的监测.流式细胞仪法.应用染色剂标记GSH,形成GSH的荧光化合,同时使染色剂尽量对其他巯基物产生最小影响,以便判断染色背景的程度及其线形关系,根据GSH含量与荧光强度的一定的比例关系,从而得到GSH的值.试剂材料包括染色剂(monobromobimane4mmol/L,monoch]orobimane一氯化物4mmol/L,OPT O-酞基二醛100lxmol/L,mercuryorange汞橙100I~mol/L),流式细胞仪.其方法通过化学处理来标记,耗尽GSH,以产生染色背景;应用流式细胞仪,通过不同染色剂的不同波长范围来测定荧光度, 根据染色背景的程度,得到GSH的值.对GSH进行标记的最理想染色剂应具有很好的专一性,另外,要求能够进行定量分析测定.而这些染色剂的专一性是相对的,一个常见问题是它们还可标志细胞内的其他巯基物,尤其是蛋白巯基. Durand和Olive通过对流式细胞仪巯基染色探针的早期研究,表明monobromobimane对GSH具有合理的专一性.TreumerV alet研究了0-phthaldialdehyde (OPT),表明OPT同时与GSH与蛋白巯基结合形成荧光化合物.Rice介绍了monochlorobimane,目前来讲,这是一个最专一的GSH探针.OConnor介绍了mercuryorange,这个染色剂最初用于组织化学巯基染色,后来发现其与GSH反应快于与蛋白巯基反应,在控制的染色条件下具有一定的专一性.另一种染色剂是甲基氯荧光素酯和甲基氯伊红,在细胞内被酯酶水解,产生高分子荧光,在GSH-S转移酶作用下与GSH结合1.流式细胞仪的特点是在短时间内可获得大量数据,统计学意义明显,能进行多参数相关测定.另外,Manju等[121介绍了一种测定谷胱甘肽的特异,灵敏,快速的方法.其原理是GSH-S转移酶(GST)可使GSH与CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenz- ene)结合形成Dnp-SG(S-dinitrophenylglutathione), 而Dnp-SG于340nm处有最大吸光度.此法不需要酸化提取步骤,并且GSH可特异测定,而不受蛋白巯基或其他巯基的影响.综上所述,谷胱甘肽作为一种广泛存在于生物细胞,组织,机体中的特殊氨基酸,有着许多重要的生理作用,作为机体内重要的氧化物质,受到大家的普遍重视.目前对于谷胱甘肽的测定还没建立一个既十分灵敏,特异,又十分快速,稳定,经济的方法.谷胱甘肽的各种测定方法各有其优点,有的灵敏度高,有的快速可靠,有的可区分开各种成分;同时也存在各自的不足,有的样本准备过程复杂,有的测定各成分分离不佳,有的需要昂贵设备.一个快速,稳定,特异,灵敏,经济的测定方法,有待进一步建立.参考文献[1】AndersonME.Glutathione:anovervievofbiosynthesisand modulation[J】.Chemico-BiologicalInteractions,1998,111—112:1-14[2】V alenciaE,MD,MarinA,eto1.Glutathione-nutritional andpharmacologicviewpoints:PartI[J】_Nutrition,2001, 17:428.429[3】BakerMA,CemigliaGJ,ZamanA.Microtiterplateassay forthemeasurementofglutathioneandglutathionedisulfide inlargenumbersofbiologicalsamples[J1.AnalyticalBioch—emistry,1990,190:360—365[4】Jia-LiLuo,HammarqvistE,CotgreaveIA,eto1.Deter- minationofintracellularglutathioneinhumanskeletal musclebyreversed-phasehigh??performanceliquidchromato—graphy[J】.JournalofChromatographyB,1995,670:29—36[5】MeisterA,AndersonME.Glutathione[J】.Ann.Rev. Biochem,1983,52:711—760[6】LyonsJ,PfeifferAR,Y uYM,eto1.Bloodglutathione synthesisratesinhealthyadultsreceivingasulfuraminoacid-freediet[J】.ProcNatlAcadSciUSA,2000,97:5o71-5076[7】JonesDP,CarlsonJL,SamiecPS,eto1.Glutathione2期谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较,评价139 measurementinhumanplasmaevaluationofsample collection,storageandderivatizationconditionsforanalysis ofdansylderivativesbyHPLC[J】.ClinicaChimicaActa, 1998,275:175-184[8]SeAP,DaltonTP,ShertzerHG.Determiningglutathione andglutathionedisulfideusingthefluorescenceprobe0-phthalaldehyde….ArlyticalBiochemistry,2000,280:80.86[9]WilmoreDW.Nutritionandmetabolicsupportinthe21 stcentury[J].ChineseJoumalofClinicalNutrition,2001,9(1):4-6[10]WilmoreDW.Metabolicsupportofthegastrointe—stinal tract-poteTialgutprotectionduringintensivecytotoxic therapyJ】.ChineseJournalofClinicalNutrition,2001,9(3”39-146[11]AndersonME.Determinationofglutathioneandglutathione disulfideinbiologicalsamples[J】.Methodsinenzymology, 1985,113:548-555[12]SaxenaM,SinghalSSandA wasthiYC.Aspecific,sensitive andrapidmethodforthedeterminationofglutathioneand itsapplicationinoculartissues.Exp[J].EyeRes,1992,55:46】一468[13][14][15]【16】[17]MouradT,MinKL,SteghensJP.Measurementofoxidized glutathionebyenzymaticrecyclingcoupledtoioluminescent detection[J].AnalyticalBiochemistry,2000,283:146-152 ArizaAR,ToribioF,BareaJL.Rapiddeterminationof glutathionestatusinfishliverusinghigh-performance liquidchromatographyandelectrochemicaldedection【J]. JoumalofChromatographyB,1994,656:311-318 PietraAMD,GottiR,BonazziD,eta1.HPLCdeter- minationofglutathioneandL-cysteineinpharmace- uticalsafterderivatizationwithethacrynicacid[J].Jour—nalofPharmaceutical&BiomedicalAnalysis,1994,12 (1):91-98Y angGS,TsaiPJ,ChenWY,eta1.Determinationof extracellularglutathioneinlivesofanaesthetizedratsby microdialysiswithon-?linehigh?-perfo?-rlnanceliquidchrom?- atography[J].JoumalofChromatographyB,1995,667:41.48HedleyDW,ChowS.Evaluationofmethodsformeasuring cellularglutathionecontentusingflowcytometry[J].Cyto- metry,1994,15:349-358(2002-09-23收稿)。

(整理)谷胱甘肽中文概述

(整理)谷胱甘肽中文概述

谷胱甘肽1谷胱甘肽(GSH)结构与功能1.1 GSH 的结构特征1.2 GSH的生理功能和应用1.3 总谷胱甘肽测定方法2几种谷胱甘肽的检测方法2.1 比色法2.2 荧光法2.3 高效液相色谱法(HPLC )2.4DTNB法2.5 碘量法3几种谷胱甘肽的制备方法3 . 1溶剂提取法3 . 1 . 1谷胱甘肽的提取3 . 1 . 2谷胱甘肽的分离纯化3 . 2化学合成法3 . 3酶合成法3 . 4发酵法谷胱甘肽(Glutathione)1谷胱甘肽(GSH)结构与功能1.1GSH 的结构特征GSH 由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通过肽键形成,分子中有一特殊的γ-肽键,即由谷氨酸的γ-COOH 与半胱氨酸的α-NH2缩合成的肽键,它不同于蛋白质分子中的普通肽键。

GSH 为白色晶体,易溶于水、低浓度乙醇水溶液、液氨和二甲基甲酰胺。

2分子GSH脱氢后以二硫键相连形成氧化型谷胱甘肽(GSSG),又称谷胱甘肽二硫化物,多以水合物形式存在,是溶于水的白色晶体。

胱甘肽的相对分子质量为307 . 33;熔点为189~193 ℃(分解) ;溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酰胺,不溶于醇、醚和丙酮;谷胱甘肽固体较为稳定,水溶液在空气中则易被氧化[ 5 ]。

两分子GSH的活泼巯基氧化脱氢转变为一分子GSSG,但只有GSH才具有生理活性。

1.2 GSH的生理功能和应用GSH分子含有γ-谷氨酰基和活性巯基,是GSH许多重要生理功能的结构基础。

GSH在红细胞中作为巯基缓冲剂存在,维持血红蛋白和其它红细胞蛋白质的半胱氨酸残基处于还原状态。

GSH 还广泛存在于其它正常细胞中,有很强的亲和力,能与多种化学物质及其代谢物结合,清除体内氧自由基及其它自由基,具有保护肝细胞膜、促进肝酶活性、抗氧化、解毒等作用,是人体细胞内的主要代谢调节物质。

GSH 还在蛋白质和DNA 合成、物质运输、酶活性、新陈代谢及细胞保护等生物学功能中起着直接或间接的作用。

谷胱甘肽标准测定方法

谷胱甘肽标准测定方法

谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种:
1. 埃尔曼(Ellman)法:这是最常用的谷胱甘肽测定方法,其原理是谷胱甘肽在DTNB(二硝基苯磺酸)的作用下,生成具有黄色的DTNB-SH,通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

2. 弗斯特(Foster)法:这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力,即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力,通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

3. 比色法:这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力,即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力,通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

4. 高效液相色谱法(HPLC):这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽,通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。

5. 荧光光谱法:这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱,通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。

以上方法都有其优点和缺点,选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。

谷胱甘肽含量实验报告结果

谷胱甘肽含量实验报告结果

谷胱甘肽含量实验报告结果1. 实验目的本实验旨在测定不同样本中谷胱甘肽的含量,探究谷胱甘肽在不同条件下的生成和消耗情况。

2. 实验方法2.1 实验材料- 谷胱甘肽标准品- 待测样本- 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=6.8)- 10%三氯乙酸- 1%二硫苏糖- 75mmol/L硝酸钠- 50mmol/L亚硫酸钠2.2 实验步骤1. 取不同浓度的谷胱甘肽标准品,分别加入磷酸缓冲液。

2. 将标准品和待测样本加入10%三氯乙酸中,振荡离心。

3. 取上清液稀释一半,加入1%二硫苏糖,室温放置15分钟。

4. 加入75mmol/L硝酸钠,室温放置5分钟。

5. 加入1ml 50mmol/L亚硫酸钠。

6. 在紫外-可见分光光度计上读取吸光度,得到吸光度与浓度的标准曲线。

7. 测定待测样本的吸光度,并根据标准曲线计算谷胱甘肽的含量。

3. 实验结果3.1 谷胱甘肽标准曲线谷胱甘肽浓度(µmol/L)吸光度:: ::0 0.00010 0.25020 0.48030 0.72040 0.9603.2 待测样本的吸光度和含量计算结果样本编号吸光度谷胱甘肽浓度(µmol/L):: :: ::1 0.380 15.22 0.630 25.23 0.285 11.44 0.520 20.85 0.740 29.64. 结果分析根据谷胱甘肽标准曲线,可以计算出待测样本中谷胱甘肽的含量。

根据实验结果可知,样本1中谷胱甘肽的含量为15.2µmol/L,样本2为25.2µmol/L,样本3为11.4µmol/L,样本4为20.8µmol/L,样本5为29.6µmol/L。

从结果可以看出,不同样本中谷胱甘肽含量有所差异。

这可能是因为样本来源的不同,谷胱甘肽生成和消耗速率的差异等原因导致的。

5. 实验总结本实验通过测定不同样本中谷胱甘肽的含量,初步了解了谷胱甘肽的生成和消耗情况。

谷胱甘肽检测方法

谷胱甘肽检测方法

谷胱甘肽定义描述L-r谷氨酰基-L-半胱氨酰基甘氨酸含量:按干燥品计算,98.0%-101.0%性状外观性状:白色或几乎白色结晶性粉末或无色的结晶。

溶解度:易溶于水,微溶于96%乙醇及二氯甲烷。

鉴别A 比旋度符合特定的光学旋转测定(见测定项)。

B 红外吸收光谱检测(2.2.24)对比:谷胱甘肽CRS.测定溶液S:取该品5.0g,蒸馏水R溶解并稀释至50ml。

溶液澄清度溶液S澄清(2.2.1),无色(2.2.2,Method II) 比旋度(2.2.7)-15.5~-17.5(干品物质)取该品1.0g,蒸馏水R溶解并稀释至25.0ml。

有关物质采用毛细管电泳法(2.2.47)溶液应临用前新鲜配制毛细管-材料:石英(未涂层)-尺寸:有效长度0.5m,总长:0.6m,内径75 μm温度:25℃电解质溶液:取无水磷酸二氢钠R1.50g,加水R230.0ml,用磷酸R调节PH值为1.80。

加水R稀释至150.0ml,检测PH值,如有必要,用磷酸R或氢氧化钠溶液R调节PH值。

检测:采用分光光度计在200 nm处检测新毛细管的预处理:在首次进样前在压力138Kpa下用0.1mol/L盐酸溶液前冲洗毛细管20min,138Kpa压力下用水R冲洗10分钟已达到全平衡状态,用电解质溶液在350kpa 条件下冲洗40min,在电压20kv条件下保持60min。

预处理的毛细管:138 kPa压力下,用电解质溶液冲洗毛细管40min;批间冲洗:138 kPa压力下,依次用水R冲洗毛细管1min,0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗2min;水R冲洗1min,0.1mol/L盐酸溶液冲洗3min,最后用电解质溶液冲洗10min;进样:3.45 kPa压力下维持5s;注入电解质溶液(空白溶液),对照溶液(b)、(c)和供试溶液a、b迁移:电压为20KV运行时间:45min相对迁移率:相对于内标物质(约14min)杂质A=约0.77杂质B=约1.04;杂质E=约1.2杂质C=约1.26;杂质D=约1.3系统适用性分辨率:内标物质产生的峰与对照溶液C中那个杂质B产生的峰之间最低为1.5,如有必要,使用稀氢氧化钠溶液上调PH值峰-谷比:最低位2.5.其中:HP=杂质D产生的基线峰以上的高度HV=对照溶液中谷胱甘肽产生的峰的分离曲线的最低点以上的高度如有必要采用磷酸下调PH。

谷胱甘肽的测定实验报告

谷胱甘肽的测定实验报告

一、实验目的1. 了解谷胱甘肽在生物体内的作用和重要性。

2. 掌握谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

3. 通过实验,提高实验室操作技能和数据分析能力。

二、实验原理谷胱甘肽(GSH)是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的天然三肽,具有强大的抗氧化作用。

在生物体内,谷胱甘肽参与多种生物化学反应,包括抗氧化、解毒、细胞信号传导等。

本实验采用比色法测定植物组织中谷胱甘肽的含量。

比色法测定谷胱甘肽含量的原理如下:1. 在一定条件下,还原型谷胱甘肽(GSH)与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反应,生成黄色的2-硝基5-巯基苯甲酸(TNB)。

2. 通过测定TNB在特定波长下的吸光度,可以计算出样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验材料与仪器1. 材料:植物组织(如芦笋、花椰菜等)、DTNB溶液、EDTA-Na2溶液、Na2HPO4溶液、NaH2PO4溶液、蒸馏水等。

2. 仪器:可见光分光光度计、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器等。

四、实验步骤1. 样品制备:取一定量的植物组织,加入适量的蒸馏水,用匀浆器充分匀浆,制成匀浆液。

在低温高速离心机中以3000 r/min离心10分钟,取上清液作为待测样品。

2. 标准曲线绘制:分别配制不同浓度的GSH标准溶液,按照实验方法测定其吸光度。

以GSH浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

3. 样品测定:取一定量的待测样品,按照实验方法测定其吸光度。

根据标准曲线,计算出样品中谷胱甘肽的含量。

4. 数据处理:将实验数据输入计算机,进行统计分析,得出实验结果。

五、实验结果与分析1. 标准曲线:根据实验数据绘制标准曲线,得到线性方程:y = 0.046x + 0.0058,相关系数R2 = 0.9986。

2. 样品测定:取一定量的芦笋匀浆液,按照实验方法测定其吸光度,计算得到谷胱甘肽含量为0.023 mg/g。

3. 数据分析:通过实验结果可以看出,植物组织中谷胱甘肽含量较高,说明植物具有较好的抗氧化能力。

谷胱甘肽含量测定

谷胱甘肽含量测定

谷胱甘肽含量测定谷胱甘肽含量测定植物生理学模块实验指导李玲主编科学出版社还原型谷胱甘肽含量的测定方法(分光光度计法)【实验目的】了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程,学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

【实验原理】谷胱甘肽是有谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Gly)组成的天然三肽,是一种含巯基(—SH)的化合物,广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物,在波长412nm处具有最大光吸收。

因此,利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

【器材与试剂】1.实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶(100ml、200ml、1000ml)、分光光度计2.实验试剂50g/L三氯乙酸(TCA)溶液(含5mmol/L Na2-EDTA):称取5g三氯乙酸,用蒸馏水溶解稀释至100ml。

再称取186mg Na2-EDTA·2H2O,加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。

0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液(pH7.7):配制方法见附录。

0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液:配制方法见附录。

4mmol/L二硫代硝基苯甲酸(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)溶液:称取15.8mg DTNB,用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解,定容至10ml,混匀,4℃保存。

现用现配。

100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液:称取3.1mg 还原型谷胱甘肽,加入少量无水乙醇溶解,加蒸馏水定容至100ml。

3.实验材料同抗坏血酸。

【实验步骤】1.标准曲线制作取6支试管,编号,按照表1加入各种试剂,混匀,25℃保温反应10min。

紫外分光光度法测定保健食品中谷胱甘肽

紫外分光光度法测定保健食品中谷胱甘肽

紫外分光光度法测定保健食品中谷胱甘肽
翟文慧;王爱月
【期刊名称】《预防医学论坛》
【年(卷),期】2005(11)5
【摘要】[目的]探讨用紫外分光度法测保健食品中谷胱甘肽。

[方法]2004年8月采用谷胱甘肽原料药作对照品,样品于碱性条件下超声波提取,在230nm处测吸光度。

[结果]本法标准曲线相关系数r=0.9992;精密度良好,相对标准偏差<5%;加标回收率在98%~104%之间。

[结论]该方法操作简单,灵敏度高,准确度好。

【总页数】2页(P560-561)
【关键词】紫外分光度法;谷胱甘肽;保健食品
【作者】翟文慧;王爱月
【作者单位】河南省疾病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R155.5
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谷胱甘肽还原酶检测说明书

谷胱甘肽还原酶检测说明书

谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)检测是一种用于测定谷胱甘肽还原酶活性的实验方法。

谷胱甘肽还原酶是一种关键的抗氧化酶,参与谷胱甘肽(glutathione,GSH)的再生过程,从而保护细胞免受氧化损伤。

以下是一种简化的谷胱甘肽还原酶检测说明:
1.实验原理:谷胱甘肽还原酶检测主要依赖于酶促
反应的光度测定。

在此反应中,谷胱甘肽还原酶将氧化型谷胱甘肽(glutathione disulfide,GSSG)还原为还原型谷胱甘肽(GSH),同时将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADP+)。

反应过程中,NADPH的消耗可以通过其吸光度的变化来监测。

2.实验试剂:主要试剂包括缓冲液、还原型谷胱甘
肽、氧化型谷胱甘肽、NADPH、谷胱甘肽还原酶标准品等。

3.实验步骤:
a.样品处理:收集需要测定谷胱甘肽还原酶活
性的样品(如血清、组织或细胞提取物等),
并进行适当的处理和稀释。

b.反应体系建立:在96孔板中,分别加入缓冲
液、样品、GSSG和NADPH,然后添加谷胱
甘肽还原酶标准品。

c.光度测定:在340nm波长下,定时测定各孔
的吸光度变化,记录吸光度值。

d.计算结果:根据吸光度变化值,计算样品中
谷胱甘肽还原酶的活性。

4.注意事项:
a.在操作过程中,请遵循实验室安全规程,佩
戴必要的防护装备。

b.实验过程中,请保持试剂的纯净和稳定。

c.光度测定时,请确保仪器的准确性和稳定性。

紫外分光光度法测定谷胱甘肽片的含量

紫外分光光度法测定谷胱甘肽片的含量

紫外分光光度法测定谷胱甘肽片的含量
尹翠娟;李显林;徐敬华;高书文
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2004(5)6
【摘要】目的:建立紫外分光光度法测定谷胱甘肽片的含量.方法:紫外分光光度法,检测波长:230nm.结果:平均回收率为100.5%,n=5,RSD为1.18%.结论:方法可靠,操作简便,可用于谷胱甘肽片的质量控制.
【总页数】2页(P50-51)
【作者】尹翠娟;李显林;徐敬华;高书文
【作者单位】沈阳第一制药厂,沈阳,110023;沈阳第一制药厂,沈阳,110023;沈阳第一制药厂,沈阳,110023;沈阳第一制药厂,沈阳,110023
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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