8_纸层析

A
B
实验步骤
3、展开 将已点样的滤纸垂直挂于带有小钩的层析缸盖 上，使滤纸下端浸入展开剂中。注意：展开剂 不要淹没滤纸上起点线，在起点线下1cm左右 ；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层 析缸玻璃壁接触；展开时层析缸封闭。当展开 剂的前沿位置达到距滤纸上端约34cm处时， 小心取出滤纸趁湿用铅笔划出展开剂前沿位置 ，然后用电吹风吹干。
实验原理
结果，分配比较大的物质移动速度较快 ，移动的距离较远；分配比较小的物质 移动速度慢，移动的距离较近。这样， 便把试样中各组分分开聚集在滤纸的不 同位置上。这种分离过程叫展开。因此 ，流动相溶剂又叫做展开剂。 当分离的物质是有色的，如甲基橙，层 析后在滤纸上可以直接看出它的色斑。 当分离的是无色的物质，如氨基酸，就 必须用显色剂使之显色。无色的氨基酸 可以用茚三酮使之显红色，所用的茚三 酮就是显色剂。
实验步骤
1、准备 在距滤纸一端约2cm处用铅笔 轻轻划一横线作起点线，并在 横线上标上A、B两点。注意： A、B两点不要太靠近滤纸边缘 ，以免产生边缘效应。在准备 过程中（以及以后实验过程中 ）手不要接触滤纸中部。
A
B
实验步骤
2、点样 用毛细管吸取已准备好的样品 ，毛细管垂直于纸面在标有A 、B记号处，分别点两个样品 ，其中一个是丙氨酸样品，另 一个是丙氨酸和亮氨酸的混合 液。风干，按上述方法重复一 次。注意：实验成败决定于点 样的好坏，要求点的样直径不 超过3mm，动作要轻，点验原理
样品经层析展开后，被分离的各化合物可通过它的Rf 值（比移值）来鉴定。
原点至层析斑点中心的距离 Rf 原点至展开剂前沿的距离
Rf ,A
l m
n l
R f ,B
m l
n
A A+B B
Rf值随各化合物的结构、滤纸 的种类、展开剂、温度的不同 而异。但在上述条件固定的情 况下，对于某一化合物来说， Rf值是一个常数。故Rf值可作 为定性鉴定的依据。
实验步骤
4、显色 用装有显色剂溶液的喷雾器，在滤纸已展开部分 均匀喷上茚三酮溶液，然后用电吹风吹干溶剂， 再用热风吹滤纸条，直至滤纸条上有紫红色斑点 出现。
O O O O O N O O-
2
+ H3N
+
CH COO R
-
（-H3O+）
+ RCHO + CO2
紫红色 5、结果处理 找出滤纸条上有几个斑点，并能辨认出各个斑点 是由哪一个氨基酸显现的。用铅笔划出斑点的轮 廓，标出斑点的中心，最后分别计算丙氨酸和亮 氨酸的Rf值。
注意事项
实验过程中手不要接触滤纸中部。
实验成败决定于点样的好坏，要求点的样直径不超 过3mm。
展开剂不要淹没滤纸上起点线；起点线应与展开剂 液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时 层析缸封闭。
分别计算丙氨酸和亮氨酸的Rf值
每人单独操作，样品层析滤纸附在实验报告上。
思考题
1、Rf值的意义是什么？哪些因素会影响Rf值？ 2、在纸层析时，层析缸为什么要求尽量封闭？
实验八 纸层析
实验目的
1、了解纸上层析的基本原理。
2、掌握用纸上层析分离氨基酸混合物 的方法。
实验原理
纸上层析是用滤纸作为载体的一种色层 分析法，其基本原理一般认为是利用混 和物中各组分在流动相和固定相间的分 配比的不同而使之分离。 在本实验中，以滤纸上吸附的水为固定 相（滤纸纤维常能吸附20％左右的水） ，有机溶剂如正丁醇或乙醇（都含有一 定比例的水）等为流动相。把试样点在 滤纸的原点位置上，当流动相溶剂在滤 纸的毛细管作用下，连续不断地沿着滤 A A+B B 纸前进通过原点时，试样中各组分便随 着流动相溶剂向前移动，并在流动相和 固定相溶剂之间连续发生一次又一次的分配。
实验仪器与试剂
仪器：
层析缸 层析滤纸 直尺 铅笔 毛细管 电吹风
试剂：
展开剂： 正丁醇:醋酸:乙醇:水 = 4:1:1:2 显色剂: 1%茚三酮丙酮溶液 样品: 丙氨酸(2%)乙醇溶液 丙氨酸(2%)和亮氨酸(2%)混合溶液
H
H H2N COOH CH3
丙氨酸：
亮氨酸：
H2N
COOH CH2 CH H3C CH3