肠杆菌科鉴定
肠杆菌科鉴定(全)(精品)
多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌
与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属， 其中临床标本中常见的菌属有15种
克雷伯菌属
爱德华菌属
邻单胞菌属
变形杆菌属
普罗威登斯菌属 沙门菌属
伯
臭鼻亚种
菌 ➢ 肺炎克雷伯菌（K. pneumonia鼻e）硬结亚种
属 ➢ 产酸克雷伯菌（K. oxytoca）
➢ 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornitThhiisnporloyptoiscaal ）is base on
➢ 植生克雷伯菌（K. planticola1s6）eSqurDeNncAinagndanrpdocBargbeonne
试验
摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)
赖氨酸
-
+
动力
+
-
4.塔特姆菌属的鉴定
苯丙氨酸
H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸 靛基质
+
-
-
-
-
5 .苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图
苯丙氨酸+
+
H2S
－
靛基质
+
－
枸橼酸盐
+
－
普 通 变 形 杆 菌
鸟氨酸 侧金盏花醇 靛基质
+
－+
－+
－
奇 异 变 形 杆 菌
潘 氏 变 形 杆 菌
➢ 河生肠杆菌生物群1
3.肠杆菌属各种的鉴别
试 验 坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌 格高菲杆菌
赖氨酸
－
－
+
肠杆菌科鉴定报告模板
肠杆菌科鉴定报告模板1. 引言肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，广泛存在于土壤、水体、动植物体内以及人体肠道等环境中。
由于肠杆菌科中存在大量的致病菌和污染指示菌，对其进行准确鉴定十分重要。
本报告对所鉴定菌株进行了详细的特征描述和分析，以期为疾病防控和食品安全提供科学依据。
2. 材料与方法本次实验使用的样本为来自XX地区的食品样品，性状检测采用以下常规方法：1. 培养基选择：用花红素琼脂糖平板培养基(XLD) 和大肠杆菌培养基(EC) 进行肠杆菌属的培养。
2. 培养条件：接种菌株后，在37恒温培养箱中培养24-48小时。
3. 病原细菌鉴定：通过病原细菌常见特征进行初步鉴定，包括菌落形态观察、革兰染色、氧需求情况、氧化酶试验、产气试验等。
4. 进一步确认：通过生化试验和分子生物学方法进一步确认菌株种属，包括典型的碳水化合物利用试验、酸碱产物检测、16S rRNA序列测定等。
3. 结果及讨论经过上述步骤，我们成功鉴定出了本次食品样品中的菌株，并对其进行了分析和评估。
菌落特征描述观察菌落形态，本菌株与典型的肠杆菌科细菌相似，呈圆形、灰白色、整齐的菌落，直径约为2-3毫米。
在花红素琼脂糖平板上，菌落中心呈深红色，周围部分为透明带，边缘锐利，与大肠杆菌相符合。
生理生化特征首先，我们对菌株的革兰染色结果进行了观察，显示菌株呈现典型的革兰氏阴性菌形态，即细胞不保持染色，但在碘溶液中可保持染色。
进一步进行了氧需求试验，结果显示该菌株为好氧菌，即需氧生长。
另外，通过进行氧化酶试验，观察到菌株中有明显的氧化酶酶活性表现。
在加入氧化酶试剂后，观察到菌株变色，出现深紫色反应，符合肠杆菌科细菌的特征。
分子生物学鉴定利用PCR技术对该菌株进行了16S rRNA序列测定，得到了一段约1500碱基的序列。
通过序列比对和系统发育树构建，与肠杆菌科细菌高度同源，与典型的大肠杆菌(Escherichia coli) 的相似度在99%以上。
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法
长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类革兰氏阴性菌，广泛存在于土壤、水体和动植物体内，包括一些重要的致病菌。
长春阴沟是一个具有特殊环境的地方，肠杆菌科的检测和鉴定成为了评估环境污染和食品安全的重要手段。
以下是长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法。
1. 样品采集与处理：从长春阴沟中采集水样、土壤样或者其他可能存在肠杆菌科的样品。
样品应当采集之后立即送往实验室进行处理，以避免结果的误差。
2. 培养基选择：选择适合肠杆菌科生长的培养基，例如大肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey Agar）、肠球菌选择性琼脂培养基（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）等。
3. 接种与培养：取样品进行接种，可以通过涂布法、点刺法或浸渍法进行。
接种后，将培养基置于适宜温度（通常为37摄氏度）下培养一定时间（通常为24-48小时）。
4. 形态观察：观察培养物的形态特征，肠杆菌科菌落常常呈现出光滑且圆形的形态。
5. 肽聚糖酶试验：常用的肠杆菌科鉴定方法之一是进行肽聚糖酶试验。
该试验通过检测菌落中的特定酶活性来判断是否属于肠杆菌科。
如甲基红-VP试验、氧化/发酵糖试验等。
6. 生化特性鉴定：可以通过测定菌株的生化特性，如产气性、产酸性、利用特定碳源等来鉴定肠杆菌科细菌。
常用方法包括三糖铁琼脂（TSI）培养基试验、尿素氨酶试验、甲基红-VP试验等。
7. 分子生物学方法：近年来，利用PCR、基因测序等分子生物学技术也被广泛应用于肠杆菌科的鉴定。
通过检测菌株的DNA序列可以更加准确地确认肠杆菌科的种类。
总之，通过样品的采集、培养、形态观察、生化特性鉴定和分子生物学方法，可以对长春阴沟中的肠杆菌科进行鉴定。
这些基本方法在评估环境污染和食品安全方面起到了重要作用。
肠杆菌科鉴定(全)
主讲人：王曦晖
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一.分布
9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属， 108个种 现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80% 3.占败血症50% 4.占尿路感染70
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二.临床意义
有些菌属对人类有明显的致病作用 1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性传染病 2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、
法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri）
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1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别
➢注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料
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2.爱德华菌属各种的鉴别
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3.埃希菌属种的鉴别
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临床意义 (Clinical Significance)
赖氨酸
鸟氨酸 －
－
+
－
菌 产 靛基质
菌 阴 丙二酸盐 枸橼酸盐
山梨醇 菌 多
Байду номын сангаас
气+
－ 沟 + －－
+
－
+源
肠菌 产 山梨醇 肠 菌 鼻 菌 臭菌 哈 山梨醇 菌 贩 菌 阴 肠
杆酸 + － 杆 硬 鼻 夫 －
+崎
沟杆
克 菌肺菌红
雷 炎色 伯 克沙
雷雷 伯
结 克 尼菌 格 阿拉伯糖 肠
肠
克 雷 亚 高－
苯丙，葡盐, 枸, 硝, 赖, 鸟, 氨对, 山, 肌,
侧, 吲哚
硝酸盐还原
+
嗜麦芽
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－ 不动
概 述
科的特征
种属鉴定
硝酸盐还原＋ 葡萄糖发酵 氧化酶 －
肠杆菌科鉴定全
V + + +
V + + V V
+ + + -
+ + V V
+ + + -
+ V + + +
+ V V + +
+ + V V V + -
+ + + + + +
+ + + -
2.爱德华菌属各种的鉴别
试 验 迟缓爱 德华菌 保科爱 德华菌 鲶鱼爱 德华菌
H2S
+
－
－
甲基红
+
+
－
3.埃希菌属种的鉴别
试 验 大肠埃希菌 大肠埃希菌（不 活泼株）
蔗糖
精氨酸脱 氢酶 鸟氨酸脱 羧酶 核糖醇 鼠李糖 α-甲基D-葡萄糖 苷 黄色素
+
+ +
+
+ -
+
+ +
V
V
+
V +
+ + +
+
+ + +
+
V + +
+
+ + V +
+
+
V
V +
+
+ + +
+
V + -
V + +
+
+ + +
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
治疗用药：碳青酶烯、抑制剂复合类或头霉 素
AmpC -内酰胺酶：
肠杆菌属，枸橼酸杆菌属，
特点：染色体、质粒编码，诱导酶，非边界 耐药（青霉素类，头孢菌素1，2，3代，头霉素） 对抑制剂不敏感。
治疗用药：碳青酶烯，头孢4代
埃希氏菌属（Escherichia）
• 分类
肠杆菌科，埃希氏菌属，5个种，大肠埃希氏 （E.coli）最为常见，以下主要叙述。
• 重要性：
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠杆菌科鉴定(全)
主讲人：王曦晖
精品课件
一.分布
9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属， 108个种 现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80% 3.占败血症50% 4.占尿路感染70
精品课件
二.临床意义
有些菌属对人类有明显的致病作用 1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性传染病 2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、
属 koseri）
布拉吉枸橼酸杆菌
（C. braakii）
雷登枸橼酸杆菌
（C. rodentium）
塞拉克枸橼酸杆菌
（C. sedlakii）
魏克曼枸橼酸杆菌
（C. werkmanii）
扬哥枸橼酸杆菌
（C. youngae）
吉乐枸橼酸杆菌
（C. gillenii）
穆利枸橼酸杆菌
（C. murliniae）
2. 如阴性：应考虑是否有Vi抗原?
加 热 或 去除Vi抗原 传 代
凝集：做O多价和单价凝集 不凝集：可能为A～F以外
精品课件
精品课件
精品课件
沙门菌属的特点
肥达反应
O
H
A
B
C
>1:80 >1:160 >1:80 >1:80 >1:80
精品课件
十二.志贺菌属的特点
急性菌痢---发烧,腹痛,脓血便,痢 疾志贺菌引起的菌痢死亡率高达
20% 慢性菌痢----反复发作二个月
精品课件
志贺菌属的特点
志贺菌属与大肠埃希菌区别:动力阴性, 赖氨酸阴性,分解葡萄糖不分解乳糖
枸橼酸盐 +/－ － － + － －
赖氨酸
+ － + －－ +
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菌1
样品1、样品2的黑色菌落纯化培养后均呈现“A/A” （上下层呈现黄色），可初步确定为大肠杆菌。 样品1中的接种三支红色菌落的双糖铁培养基中出现黑 色物质，初步确定为乙型副伤寒杆菌。样品2中的接种的 三支红色呈现“K/A”，推断是痢疾或伤寒杆菌。
生化反应鉴定
推断：根据样品 1、样品2的黑色 菌落的糖发酵试 验和动力学反应 情况，进一步确 定了黑色菌落属 大肠杆菌 根据糖发酵试验 和动力学反应， 也进一步确定样 品1的红1、2、3 都是乙型副伤寒 杆菌，样品2红1 红2是伤寒杆菌或 痢疾杆菌。
注：R1-1表示菌1红色1管
药敏试验：
根据药敏试验现象可见，痢疾杆菌和伤寒杆菌对一些 药物具有耐受性，而一些药物也能抑制其生长。
• 第五小组的鉴定实验结论：
• 从上的一系列实验鉴定出样品1、样品2的 黑色菌落是大肠杆菌，样品1的单一红色菌 落均为乙型副伤寒杆菌，样品2的红1和红2 为痢疾杆菌。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
+
+ -
-
-
生化反应鉴定（观察现象）：
血清学鉴定
观察结果： 在血清学鉴定中可见样品1的R1-1、 R1-2、R1-3四张滴加了伤寒杆菌 血清的玻片出现凝集现象，同时我 们发现在一张滴加了痢疾血清的玻 片也出现了R2-2，R2-1的凝集现 象，从而否定了上面生化反应鉴定 的R2-1、R2-2可能为伤寒杆菌的 推断，所以R2-1、R2-2为痢疾杆 菌。
肠杆菌科细菌鉴定
临医13（2）班第八小组
组员：张艺 1304505212 古仲嘉 1304505214
植瑞恩
1304505215
游裕婷
1304505216
EMB
1、初步推测平板上的黑色 （带金属感）菌落为大肠杆 菌，红色的单个菌落为痢疾 或伤寒杆菌
2、接种黑红两种菌 于双糖铁的培养基
可疑菌落的纯化培养（双糖铁琼脂培养）
(+)
+ + —
(+)
— — —
(+)
+ + —
(+)
+ + —
(+)
— — —
+
+ +
—
注：+只产酸阳性 — 阴性（+）产酸产气阳性
细菌编号 样1黑 样1红1 样1红2 样1红3 样2黑
吲哚试剂 + + + +
甲基红 + + + +
VP试验 -
枸橼酸盐 + + + -
样2红1
样2红2 样2红3
-
表1.糖发酵试验结果
细菌编 号 样1黑 样1红1 样1红2 样1红3 葡 (+) (+) (+) (+) 葡 乳 (+) — — — 乳 麦 (+) (+) (+) (+) 麦 甘 (+) (+) (+) (+) 甘 蔗 (+) — — — 蔗 动力 +
+
+ + 动力
菌落编 号
样2黑
样2红1 样2红2 样2红3