肠杆菌科细菌检验课件
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10g
1%中性红水溶液
胆盐
5ml
5g
SS琼脂
牛肉膏 牛心浸液 肉膏液
胨 乳糖 配方一 5
(四种配方 )
配方二 配方三 配方四 5
1000
850 5 7.5（胨） 5 10
8.5（混合）
10
10 （ 粗 制 ）
15
10 （ 透 析 ）
10
150 （ ml ）（牛 胆汁）
胆盐
硫代硫酸钠
12
12 0.5
观察指标：葡萄糖、乳糖发酵、H2S
细菌在半固体培养基中的生长现象
• 观察穿刺线边缘是否清晰及培养基混浊度 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺
线边缘模糊。培养基混浊。
无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。培养基
透明度无变化。
无动力 现象
有动力 现象
1. 肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别
2. 初步分三组
苯丙氨酸（－） 苯丙氨酸（＋） 苯丙氨酸（－） VP（－） VP（－） VP（＋） 埃希菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 沙门菌属 普罗威登斯菌属 肠杆菌属
志贺菌属
枸橼酸菌属 爱德华菌属
摩根菌属
沙雷菌属
哈夫尼亚菌属 耶尔森菌属
3. 肠道杆菌属间鉴定
枸橼酸钠 枸橼酸铁
枸橼酸铁铵 磷酸氢二钠 琼脂
5 15
1
11
11 4
8.5
8.5 1
5
25 0.33 22.5 1000 18 0.33
4
20 1.0 70 13.5 0.33 25
1000
煌绿
中性红 水
37
wk.baidu.com
MACC
SS
大肠埃希杆菌呈典型粉红色，乳糖发酵菌落。福氏 痢疾杆菌 菌落小，无色透明，非乳糖发酵菌。 （18hr,37℃)
实验三 肠杆菌科细菌检验
目的要求
• 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 • 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 • 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 • 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术
实验材料
一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、 MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人）
双糖铁培养基(KIA)
蛋白胨 氯化钠 10g 5 g 葡 萄 糖 乳 糖 1g 10g
牛肉膏
琼 脂 水
3 g
16g 1000ml
硫代硫酸钠
硫酸亚铁 0.4%酚红
0.2g
0.2g 6ml
细菌在KIA中的生长现象
• 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑
上层固体斜面：乳糖+指示剂
下层固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
实验内容（2人/组）
三、生化实验：
1. 触酶试验：
2. 氧化酶试验： 3. KIA试验（1支）： 4.半固体试验（1支）：
5. 肠杆菌科微量生化编码管（1支）
6.沙门菌血清学玻片凝集试验
检验程序
粪便
肠道外标本
肠道选择培养基
血平板、弱选择平板
可疑菌落
血清学实验
生化反应
药敏试验
结果报告
肠道杆菌的生化反应鉴定
KIA 菌属 埃希菌属
志贺菌属 沙门菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 斜面 底层 气体 H2S 动力
MIU
吲 哚 + +/ /+ d 脲酶
A
K K K A
A
A A A A
＋
+ + +
－
－ D/+ +/ － －
+/+ + -
+ +
麦康凯琼脂（MACC）
蛋白胨 20g
氯化钠
琼脂
5g
20-25g
蒸馏水
乳糖
1000ml
三、诊断血清：
沙门菌多价 四、其他：
玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、
液体石蜡
实验内容
一、菌落观察：
大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌 （BAP、MAC、SS）
菌落形态、颜色、溶血现象、迁徙生长现象观察与描述
二、形态观察：
所有细菌革兰染色 显微镜下细菌形态、染色性观察与描述
1%中性红水溶液
胆盐
5ml
5g
SS琼脂
牛肉膏 牛心浸液 肉膏液
胨 乳糖 配方一 5
(四种配方 )
配方二 配方三 配方四 5
1000
850 5 7.5（胨） 5 10
8.5（混合）
10
10 （ 粗 制 ）
15
10 （ 透 析 ）
10
150 （ ml ）（牛 胆汁）
胆盐
硫代硫酸钠
12
12 0.5
观察指标：葡萄糖、乳糖发酵、H2S
细菌在半固体培养基中的生长现象
• 观察穿刺线边缘是否清晰及培养基混浊度 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺
线边缘模糊。培养基混浊。
无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。培养基
透明度无变化。
无动力 现象
有动力 现象
1. 肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别
2. 初步分三组
苯丙氨酸（－） 苯丙氨酸（＋） 苯丙氨酸（－） VP（－） VP（－） VP（＋） 埃希菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 沙门菌属 普罗威登斯菌属 肠杆菌属
志贺菌属
枸橼酸菌属 爱德华菌属
摩根菌属
沙雷菌属
哈夫尼亚菌属 耶尔森菌属
3. 肠道杆菌属间鉴定
枸橼酸钠 枸橼酸铁
枸橼酸铁铵 磷酸氢二钠 琼脂
5 15
1
11
11 4
8.5
8.5 1
5
25 0.33 22.5 1000 18 0.33
4
20 1.0 70 13.5 0.33 25
1000
煌绿
中性红 水
37
wk.baidu.com
MACC
SS
大肠埃希杆菌呈典型粉红色，乳糖发酵菌落。福氏 痢疾杆菌 菌落小，无色透明，非乳糖发酵菌。 （18hr,37℃)
实验三 肠杆菌科细菌检验
目的要求
• 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 • 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 • 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 • 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术
实验材料
一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、 MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人）
双糖铁培养基(KIA)
蛋白胨 氯化钠 10g 5 g 葡 萄 糖 乳 糖 1g 10g
牛肉膏
琼 脂 水
3 g
16g 1000ml
硫代硫酸钠
硫酸亚铁 0.4%酚红
0.2g
0.2g 6ml
细菌在KIA中的生长现象
• 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑
上层固体斜面：乳糖+指示剂
下层固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
实验内容（2人/组）
三、生化实验：
1. 触酶试验：
2. 氧化酶试验： 3. KIA试验（1支）： 4.半固体试验（1支）：
5. 肠杆菌科微量生化编码管（1支）
6.沙门菌血清学玻片凝集试验
检验程序
粪便
肠道外标本
肠道选择培养基
血平板、弱选择平板
可疑菌落
血清学实验
生化反应
药敏试验
结果报告
肠道杆菌的生化反应鉴定
KIA 菌属 埃希菌属
志贺菌属 沙门菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 斜面 底层 气体 H2S 动力
MIU
吲 哚 + +/ /+ d 脲酶
A
K K K A
A
A A A A
＋
+ + +
－
－ D/+ +/ － －
+/+ + -
+ +
麦康凯琼脂（MACC）
蛋白胨 20g
氯化钠
琼脂
5g
20-25g
蒸馏水
乳糖
1000ml
三、诊断血清：
沙门菌多价 四、其他：
玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、
液体石蜡
实验内容
一、菌落观察：
大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌 （BAP、MAC、SS）
菌落形态、颜色、溶血现象、迁徙生长现象观察与描述
二、形态观察：
所有细菌革兰染色 显微镜下细菌形态、染色性观察与描述