肠杆菌科的分类与鉴定
肠杆菌科鉴定(全)(精品)
多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌
与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属， 其中临床标本中常见的菌属有15种
克雷伯菌属
爱德华菌属
邻单胞菌属
变形杆菌属
普罗威登斯菌属 沙门菌属
伯
臭鼻亚种
菌 ➢ 肺炎克雷伯菌（K. pneumonia鼻e）硬结亚种
属 ➢ 产酸克雷伯菌（K. oxytoca）
➢ 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornitThhiisnporloyptoiscaal ）is base on
➢ 植生克雷伯菌（K. planticola1s6）eSqurDeNncAinagndanrpdocBargbeonne
试验
摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)
赖氨酸
-
+
动力
+
-
4.塔特姆菌属的鉴定
苯丙氨酸
H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸 靛基质
+
-
-
-
-
5 .苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图
苯丙氨酸+
+
H2S
－
靛基质
+
－
枸橼酸盐
+
－
普 通 变 形 杆 菌
鸟氨酸 侧金盏花醇 靛基质
+
－+
－+
－
奇 异 变 形 杆 菌
潘 氏 变 形 杆 菌
➢ 河生肠杆菌生物群1
3.肠杆菌属各种的鉴别
试 验 坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌 格高菲杆菌
赖氨酸
－
－
+
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
肠杆菌科细菌归纳总结
肠杆菌科细菌归纳总结肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，它包括了许多与人类和动物相关的致病菌，同时也包括了许多与环境和食品卫生相关的菌株。
肠杆菌科细菌的特点是在普通培养基上能够产生气体，并且在革兰染色中呈现棒状。
1. 肠杆菌属（Enterobacter）肠杆菌属是肠杆菌科中的一个重要属，常见的菌株包括粪肠杆菌（Enterobacter cloacae）和黄色肠杆菌（Enterobacter aerogenes）等。
这些菌株广泛存在于土壤、水体以及人及动物的肠道中，有些种类具备耐药性，并且可能引发医院感染。
2. 大肠杆菌属（Escherichia）大肠杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属，其中最著名的是大肠杆菌（Escherichia coli），它一般存在于人和动物的肠道中。
大肠杆菌是一种常见的致病菌，可以引起腹泻、尿路感染等疾病。
此外，某些大肠杆菌菌株还产生毒素，如致命的肠毒性大肠杆菌产生的毒素可以引起严重的食物中毒。
3. 鲍曼不动杆菌属（Klebsiella）鲍曼不动杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属，常见的菌株包括肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）等。
这类菌株是常见的医院感染病原菌，可以引起肺炎、尿路感染以及败血症等严重疾病。
而产超强粘多糖的黏质性肺炎克雷伯菌更是具有高度的传染性和致病性，是医疗环境中的重要威胁之一。
4. 沙门氏菌属（Salmonella）沙门氏菌属是肠杆菌科中的一类重要致病菌，它包括众多血清型，其中一些血清型可以引起食物中毒和沙门氏菌感染。
这些菌株主要存在于动物及其产品中，比如家禽、牛奶和蛋等。
如果不注意食品的卫生状况，摄入被污染的食物可能导致人体感染引起胃肠炎等症状。
5. 艰难梭菌属（Clostridium）虽然肠杆菌科主要是指肠道相关的菌属，但在其中也包括一些与人体肠道无关或者少数与肠道关联不紧密的菌株。
艰难梭菌属是其中之一，该属的细菌广泛存在于土壤和水体中。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，可以通过一系列
生化鉴定实验来进行鉴定。
以下是一些常用的肠杆菌科生
化鉴定实验：
1. 硫代硫酸亚铁（TSI）琼脂糖培养基实验：在TSI琼脂
糖培养基上培养菌株，观察菌落的颜色和气体产生情况。
肠杆菌科细菌在该培养基上产生酸和气体，导致培养基中
的pH下降，产生黄色酸性反应。
2. 尿素水解试验：将菌株接种到尿素水解培养基上，观察
培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生
尿素酶，将尿素水解为氨和二氧化碳，导致培养基变为粉
红色。
3. 大肠杆菌甲醛试验：将菌株接种到含有甲醛的培养基上，观察培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的大肠杆菌能够
利用甲醛作为唯一的碳源，产生酸和气体，导致培养基变
为黄色。
4. 气体产生试验：将菌株接种到气体产生管中，观察管内
气体的产生情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生气体，如氢气和二氧化碳。
5. 青霉素酶试验：将菌株接种到含有青霉素的培养基上，
观察菌落的形成情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产
生青霉素酶，使得培养基中的青霉素失活，导致菌落形成。
需要注意的是，肠杆菌科细菌的鉴定通常需要结合多个实验结果进行综合判断，单一实验结果可能不足以确定菌株的分类。
此外，不同的肠杆菌科细菌种类可能在生化反应上有差异，因此具体的实验步骤和判断标准可能会有所不同。
医学微生物学第10章肠杆菌科
引起腹泻的大肠埃希菌
菌株 ETEC
作用 部位 小肠
EIEC EPEC EHEC
大肠 小肠 大肠
EAggEC 小肠
疾病与症状
致病机制
旅行者腹泻，婴幼儿腹泻， LT 和（或）ST 肠毒素，大
水样便，恶心，呕吐，腹 量分泌液体和电解质
痛，低热
水样便，少量血便，腹痛， 质粒介导侵袭和破坏结肠粘
发热
膜上皮细胞
婴儿腹泻，水样便，恶心， 质粒介导粘附和破坏上皮细
呕吐，发热
胞
水样便，大量出血，剧烈 SLT-I 或 SLT-II，中断蛋白质
腹痛，低热或无，可并发 合成
HUS、血小板减少性紫癜
婴儿持续性腹泻，呕吐， 集聚性粘附上皮细胞，阻止
脱水，低热
液体吸收
二、微生物检查
1.标本： 肠外感染 : 尿、血等 肠内感染（腹泻）: 粪便
切断：粪—口途径传播 加强卫生管理 注意饮食卫生
治疗病人、发现带菌者 药物治疗
第三节 沙门菌属（Salmonella）
寄生人或动物肠道中 少数仅对人致病：
伤寒、副伤寒甲等沙门菌,引起肠热症 多数对动物致病,偶可传染给人:
鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、猪霍乱沙门菌, 引起食物中毒
Vi抗原：
（4）无症状带菌者 细菌贮留在胆囊内
3、免疫性
可获特异性细胞免疫
伤寒或副伤寒病后有牢固免疫， 很少再感染。
三、微生物学检查
1、沙门菌的分离鉴定
（1）标本 第1周 ： 血液 第2周 ： 粪便或尿液 第3周： 尿液 1-3周全程 ： 骨髓
SS培养基
生化反应及玻片凝集鉴定
2.血清学诊断 肥达试验
河生肠杆菌科菌种鉴定
河生肠杆菌科菌种鉴定一、背景介绍河生肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，包括多种与人和动物健康相关的致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌等。
这些细菌不仅会引起人类和动物的感染，还会对水质和食品安全造成威胁。
因此，对这些细菌进行鉴定非常重要。
二、鉴定方法1. 生化鉴定法：通过观察细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来进行鉴定。
2. 分子生物学鉴定法：利用PCR技术或基因测序分析目标细菌的DNA序列来确定其种属和亚属分类。
三、生化鉴定法1. 常用培养基：(1) MacConkey琼脂培养基：用于筛选革兰氏阴性肠道杆菌，能够区分乳糖发酵阳性和阴性细菌。
(2) Eosin Methylene Blue琼脂培养基：适合于检测大肠杆菌等肠道杆菌，能够区分乳糖发酵强度。
(3) Triple Sugar Iron琼脂培养基：可用于区分肠道杆菌的糖代谢类型，如葡萄糖、乳糖和蔗糖。
2. 常用生化测试：(1) 氧化/发酵试验：通过观察细菌在含糖和底物的培养基上产生气体或酸碱变化来判断其代谢类型。
(2) 非葡萄糖发酵试验：检测细菌对非葡萄糖类底物的代谢能力，如甘油、琼脂和麦芽糖等。
(3) 酶反应试验：检测细菌对不同酶的产生情况，如氧化酶、羟丁酸氧化酶和尿素酶等。
四、分子生物学鉴定法1. PCR技术：(1) 16S rRNA基因PCR：利用通用引物扩增16S rRNA基因片段，进行序列比对来确定目标细菌种属和亚属分类。
(2) 特异性PCR：利用特异性引物扩增目标细菌的DNA片段，进行电泳分离和检测来确定其存在与否。
2. 基因测序：(1) 16S rRNA基因测序：通过对PCR扩增的16S rRNA基因片段进行测序，进行比对和分类鉴定。
(2) 多基因组合测序：通过同时对多个基因进行测序，提高鉴定准确性和可靠性。
五、鉴定结果的判断1. 生化鉴定法：根据细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来判断其种属和亚属分类。
肠杆菌科概述、分类与特性
3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对 人致病性较强。此外，许多细菌既 是正常菌群，也是条件致病菌。在 机体抵抗力下降，寄居部位的改变 或菌群失调时能引起机会感染。
肠杆菌科概述、分类和特性
二、临床意义
占临床分离菌总数的50％和Ｇ-总数的 80％, 将近50％的败血症70％以上的泌尿 道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科 细菌引起的。 1. 人类肠道外感染 除志贺菌较少引起肠外 感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产 酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆 菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引 起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系 统的感染;
⑵ 内毒素 具有发热、休克、DIC等病理作用。
⑶ 肠毒素 产生不耐热和耐热肠毒素两种肠 毒素：均可使肠道细胞中cAMP 的水平升高，引起肠液大量分泌 而导致腹泻。
肠杆菌科概述、分类和特性
二、临床意义 ⑵ 2. 所致疾病 ⑴ 肠道外感染 是临床分离的G-杆菌中最常见的 菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。 引起泌尿系感染的菌株以血清型01、 2、6为多见，本菌还可引起菌血症、 胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。 常 见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、 肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面 感染。
肠杆菌科概述、分类和特性
4. 培养和生化特性 营养要求不高，在普通培养基上生长
良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发 酵葡萄糖(产酸或产酸产气)，触酶阳性, 氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸 盐。 5. 抵抗力
抵抗力不强，加热60℃30min即被杀 死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏 感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵 抗染料的抑菌作用。
毛，能运动。致病性菌株有菌毛。 2. 抗原成分
⑴Ｏ抗原是细胞壁成分脂多糖。以核 心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类 A, 为内毒素的毒性成分。外侧是由重复 的特异多糖，决定Ｏ抗原的特异性。
肠杆菌科鉴定(全)
主讲人：王曦晖
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一.分布
9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属， 108个种 现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80% 3.占败血症50% 4.占尿路感染70
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二.临床意义
有些菌属对人类有明显的致病作用 1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性传染病 2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、
法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri）
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1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别
➢注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料
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2.爱德华菌属各种的鉴别
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3.埃希菌属种的鉴别
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临床意义 (Clinical Significance)
赖氨酸
鸟氨酸 －
－
+
－
菌 产 靛基质
菌 阴 丙二酸盐 枸橼酸盐
山梨醇 菌 多
Байду номын сангаас
气+
－ 沟 + －－
+
－
+源
肠菌 产 山梨醇 肠 菌 鼻 菌 臭菌 哈 山梨醇 菌 贩 菌 阴 肠
杆酸 + － 杆 硬 鼻 夫 －
+崎
沟杆
克 菌肺菌红
雷 炎色 伯 克沙
雷雷 伯
结 克 尼菌 格 阿拉伯糖 肠
肠
克 雷 亚 高－
苯丙，葡盐, 枸, 硝, 赖, 鸟, 氨对, 山, 肌,
侧, 吲哚
硝酸盐还原
+
嗜麦芽
整理ppt
－ 不动
概 述
科的特征
种属鉴定
硝酸盐还原＋ 葡萄糖发酵 氧化酶 －
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠凝集性大肠杆菌（EaggEC）：无LT，ST，不 能用血清分型。
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型，
选择培养基：无色，透明或半透明（宋内 氏可迟缓发酵乳糖）
• 实验室鉴定(laboratory identification)：
初步鉴定(preliminary identification)： ✓ 选择培养基上可疑菌落 ✓ KIA：K/A - -，动力-
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
肠杆菌科及检验
肠杆菌科及检验肠杆菌科及检验（一）●考点﹥概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。
﹥埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。
生物学性状；微生物学检验；临床意义。
[讲义编号NODE70103300140100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。
大多数肠道杆菌属于正常菌群。
当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。
部分为致病性细菌。
[讲义编号NODE70103300140100000102：针对本讲义提问]（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。
主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。
根据《伯杰系统细菌学手属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威属等。
[讲义编号NODE70103300140100000103：针对本讲义提问]（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。
多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。
[讲义编号NODE70103300140100000104：针对本讲义提问]2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。
3.生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。
触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。
[讲义编号NODE70103300140100000105：针对本讲义提问]4.抗原构造﹥﹥表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处5.变异﹥菌落S～R变异﹥鞭毛H～O变异﹥耐药性变异﹥生化反应性质的改变6.抵抗力不强。
肠杆菌科的细菌
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第五节 耶尔森菌属
一、分类 二、鼠疫耶尔森菌 二、鼠疫耶尔森菌 三、小肠结肠炎耶尔森菌 三、小肠结肠炎耶尔森菌 四、其他耶尔森菌
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其他尚有： 假结核耶尔森菌（Y.pseudotuberculosis） 假结核耶尔森菌（Y.pseudotuberculosis） 奥氏耶尔森菌（Y.aldouae） 奥氏耶尔森菌（Y.aldouae） 伯氏耶尔森菌（Y.bercovieri） 伯氏耶尔森菌（Y.bercovieri） 弗氏耶尔森菌（Y.frederiksenii） 弗氏耶尔森菌（Y.frederiksenii） 中间耶尔森菌（Y.intermedia）等9 中间耶尔森菌（Y.intermedia）等9种耶尔森菌。 均可从临床标本中分离得到，其相互之间的生 化性状相似，均能在4 以及在CIN上生长，可 化性状相似，均能在4℃以及在CIN上生长，可 在冷冻食品中增殖，并具有潜在的致病性。
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肠杆菌科的共同特性
1. 形态染色相似 革兰阴性杆菌 2. 培养特性相同 普通培养基上生长良好 3. 生化反应活泼 发酵葡萄糖，氧化酶阴性， 发酵葡萄糖，氧化酶阴性， 触酶阳性，还原硝酸盐为亚硝酸盐，O/F试 触酶阳性，还原硝酸盐为亚硝酸盐，O/F试 验为发酵型。 4. 抗原构造复杂 5. 抵抗力弱 6. 易变异
O157:H7菌落特征（山梨醇麦康凯琼脂平板） O157:H7菌落特征（山梨醇麦康凯琼脂平板） 菌落特征
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第三节 沙门菌属
一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验
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细菌特性
形态特征 培养特性 生化反应 抗原结构
伤寒沙门菌革兰染色
伤寒沙门菌菌落特征（MAC） 伤寒沙门菌菌落特征（MAC）
沙门菌血清学鉴定
肠杆菌科细菌鉴定
肠杆菌科细菌鉴定1. 引言肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性杆状细菌，广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、动物和人体内。
肠杆菌科细菌对人类和动物的健康具有重要影响，它们可以引起多种疾病，包括胃肠道感染、尿路感染、呼吸道感染等。
因此，准确鉴定肠杆菌科细菌对于预防和治疗相关疾病具有重要意义。
本文将介绍肠杆菌科细菌的鉴定方法、常见的鉴定技术以及其在临床和环境领域中的应用。
2. 肠杆菌科细菌的鉴定方法2.1 形态学特征肠杆菌科细菌通常为革兰氏阴性，呈杆状或梭形，并且具有运动性。
它们在营养琼脂平板上形成灰白色至粉红色的圆形或不规则形状的菌落。
2.2 生理生化特性肠杆菌科细菌具有一系列特殊的生理生化特性，可以通过对其代谢产物和酶活性的检测来进行鉴定。
常见的生理生化特性检测包括氧需求、产气、发酵糖类、蛋白质分解等。
2.3 分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，PCR和DNA测序等方法在肠杆菌科细菌鉴定中得到了广泛应用。
通过特定基因序列的扩增和比对，可以快速准确地确定细菌的种属和亚种。
3. 肠杆菌科细菌鉴定技术3.1 常规培养法常规培养法是最常用的肠杆菌科细菌鉴定技术之一。
它包括对细菌进行纯培养、观察形态学特征和进行一系列生理生化试验。
这些试验可以通过使用不同培养基和指示剂来检测氧需求、发酵糖类、产气等特征。
3.2 快速鉴定方法为了提高肠杆菌科细菌的鉴定速度和准确性，快速鉴定方法逐渐得到广泛应用。
其中包括基于生化反应的API系统、基于荧光的VITEK 2系统和基于质谱的MALDI-TOF技术。
这些方法可以在短时间内对大量样品进行鉴定，并且具有较高的准确性和可靠性。
3.3 分子生物学方法分子生物学方法在肠杆菌科细菌鉴定中发挥着越来越重要的作用。
通过PCR扩增特定基因序列，如16S rRNA基因，可以快速确定菌株的种属和亚种。
此外，DNA测序技术可以提供更详细的遗传信息，帮助进一步确定细菌的亲缘关系和种类。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类革兰氏阴性杆菌，包括许
多人类和动物肠道中常见的细菌。
肠杆菌科的生化鉴定实验是通过
一系列生化反应来确定细菌属的方法。
以下是肠杆菌科生化鉴定实
验的详细步骤：
1. 外观观察：观察菌落形态和颜色，以及菌液的浑浊度和颜色。
2. 革兰染色：将细菌制备的涂片进行革兰染色，观察细菌的形态和
染色反应。
3. 氧需求：通过培养细菌在氧气条件下的生长来确定其氧需求。
肠
杆菌科中的许多细菌是好氧菌，可以在氧气存在下生长。
4. 糖发酵：使用糖盐培养基，如肉汤糖盐琼脂培养基（TSI）或亚
硝酸盐葡萄糖琼脂培养基（GNB）等，观察细菌对不同糖类的发酵情况。
常用的糖类包括葡萄糖、乳糖、蔗糖等。
5. 气体产生：观察细菌在糖盐培养基中是否产生气体，如二氧化碳
和氢气等。
6. 硫代硫酸盐还原：使用含有硫代硫酸盐的培养基，观察细菌是否
能够还原硫代硫酸盐，产生黑色沉淀。
7. 非糖类物质利用：观察细菌对非糖类物质的利用情况，如酪蛋白、尿素等。
8. 酸碱产生：使用酸碱指示剂，观察细菌在糖盐培养基中是否产生
酸碱。
9. 氧化还原酶：使用氧化还原酶试剂，观察细菌是否具有氧化还原
酶的活性。
通过以上步骤，可以根据细菌的生化反应特点来确定其属于肠杆菌科中的哪个属。
需要注意的是，这只是一种初步的鉴定方法，最终的确定还需要进一步的分子生物学鉴定。
第七章 肠杆菌科
二、临床意义 ⑵ 2. 所致疾病 ⑴ 肠道外感染 是临床分离的G-杆菌中最常见的 菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。 引起泌尿系感染的菌株以血清型01、 2、6为多见，本菌还可引起菌血症、 胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。 常 见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、 肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面 感染。
随血流播散至肝、脾等器官中继续繁 殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症， 出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中 毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排 出。 潜伏期7—20天，典型病程3-4周，发病 2周后机体出现免疫反应，使疾病好转， 但同时也引起迟发性变态反应，导致肠壁 淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生 命。 4. 携带者 约3％患者成为携带者，粪便持续排菌达 1年以上。
3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对 人致病性较强。此外，许多细菌既 是正常菌群，也是条件致病菌。在 机体抵抗力下降，寄居部位的改变 或菌群失调时能引起机会感染。
且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可 引起烈性传染病鼠疫。 2. 人类肠道感染 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶 尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠 道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠 热症等。
3)EIEC 生化反应、血清分型加肠毒素测定：用O：H 血清分型，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，常见的血 清型0152和0124，与志贺菌相似，主要的鉴别试验 是醋酸钠、葡萄糖铵利用试验和粘质酸盐产酸试验， 大肠埃希菌三者均阳性，而志贺菌三者均阴性。 4)EHEC 血清分型加生化反应：应常规作0157：H7的 培养，必须经生化反应证实为大肠埃希菌。凡山梨 醇阴性的大肠埃希菌0157：H7分离株无须再做毒素 的检测，因为均产生Vero毒素。 5)EaggEC 用液体培养-凝集试验，检测细菌对细胞的 粘附性或用DNA探针技术。
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志贺氏 菌属
— — —/+ — — — — —
沙门氏 菌属
+ + — +/— +/— —
+ +/—
枸橼酸 杆菌属
+ + —/+
+ +/— +/— —
+
爱德华 氏菌属
+/—
+ + —
+ —
+ —
小肠结肠炎 耶尔森氏菌
—
+ +/— +/— —
+ — +/—
苯丙氨酸脱氨酶试验阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴性菌群
四、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性 菌群的分类鉴定
苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群共包括三 个菌属，即：变形杆菌属、摩尔根氏菌 属、普罗维登斯菌属。
生化反应 H2S 鸟氨酸脱羧酶 枸橼酸盐利用 尿素酶 迁徙生长
变形杆菌属 摩尔根氏菌属 普罗维登斯菌属
+
—
—
+/—
+
—
+
—
+
+
—
+/—
+
—
—
苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群
4、 生物拮抗作用：
肠杆菌科的生物拮抗作用主要靠与病原菌争夺 营养和占据空间位置来实现。此外，大肠埃希 氏菌还产生大肠菌素和酸性物质，抑制志贺氏 菌和金葡菌的生长。
由此可见，肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的情况下，不仅对人体无害，并且有益， 但如果其寄生部位和寄生数量发生变化，同样 可引起机体的各类病变。因此，肠杆菌科的多 数细菌又被称为“条件致病菌”。
勒米诺菌属 Leminorella 默勒氏菌属 Moellerella 肥大杆菌属 Obesumbacterium 布拉格菌属 Pragia 光杆菌属 Photorhabdus 邻单孢菌属 Plesiomonas 拉恩氏菌属 Rahnella 塔特姆氏菌属 Tatumella 特布尔西菌属 Trabulsiella 致病杆菌属 Xenorhabdus
动力 37℃
+
—
埃希氏菌属 沙门氏菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华氏菌属
C
+
—
志贺氏菌属 鲶鱼爱德华氏菌
小肠结肠炎耶尔森氏菌
动力 25℃
—
+
沙门氏菌属 埃希氏菌属 沙门氏菌属
枸橼酸杆菌属
爱德华氏菌属
赖氨酸
+
—
Indol
约克纳菌属 Yokenella 肠道菌 58 群 Enteric group 58 肠道菌 59 群 Enteric group 98 肠道菌 60 群 Enteric group 60 肠道菌 63 群 Enteric group 63 肠道菌 64 群 Enteric group 64 肠道菌 68 群 Enteric group 68 肠道菌 69 群 Enteric group 69 肠道菌 137 群 Enteric group 137
3、 沙雷氏菌属的分类鉴定
沙雷氏菌属包括8个种：粘质沙雷氏菌、液化沙 雷氏菌、深红色沙雷氏菌、臭味(气味）沙雷氏 菌、虫媒（嗜虫）沙雷氏菌、普城（普利矛斯） 沙雷氏菌、无花果沙雷氏菌。另有一个分类地 位尚未确定的泉居沙雷氏菌。其中从粘质沙雷 氏菌中又分出一个生物1群；臭味(气味）沙雷 氏菌又分为生物1群和生物2群。
生化反应
Indol 鸟氨酸脱羧酶 木糖发酵 七叶苷水解
普通 变形杆菌
+ — + +
豪萨 变形杆菌
+ —
+ —
奇异 变形杆菌
—
+ + —
潘尼氏 变形杆菌
— —
+ —
产粘液 变形杆菌
— — — —
变形杆菌属
I
+
— 鸟氨酸
—
—
+
—
普通变形杆菌 豪萨变形杆菌
奇异变形杆菌
潘尼氏变形杆菌 产粘液变形杆菌
七叶苷
二、肠杆菌科的初步识别
肠杆菌科 弧菌科 非发酵菌群 巴氏菌科
形 态 短杆状 弧状或逗点状 球杆状 球杆状
鞭毛及位置 周毛或无 氧化酶 — O/F 试 验 F
端毛 周、端毛或无 无
+
+/— +
F
O/— F
三、肠杆菌科的初步分群
肠杆菌科现有31个属和8个未分类的生化群
肠杆菌科的 31 个菌属和 8 个未分类的生化群（《全国临床检验操作规程》第三版）
肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄生数量的条 件下对人体具有以下重要的生理作用：
1、 自然菌膜的保护作用： 肠杆菌科作为一种正常菌群，在肠道粘膜上生
长繁殖形成一层自然菌膜。他们是非特异性的 局部保护膜，可使机体抵抗病原微生物的侵袭 和群集。Andreyeva等在两组HEP—2细胞上作 了如下试验：
HEP—2 细胞（试验组）
接种大肠埃希氏菌 M17 株
+
6 个半小时后接种宋内志贺氏菌 +
细胞感染率
低
HEP—2 细胞（对照组） —
+ 高
2、 非特异性免疫作用：
正常菌群对人体是一种抗原刺激，可使机 体产生免疫反应，从而限制了病原菌的危 害性。如大肠埃希氏菌的生理作用之一就 是广谱的免疫原性。有人作了如下试验：
肠杆菌科的分类与鉴定
肠杆菌科是临床上最常见的一类革兰氏 阴性杆菌，它主要存在于人或动物的肠 道以及自然界的水源、土壤中。在正常 情况下，多数肠杆菌科细菌对人是无害 的，有些菌种还是人体所必需的，这是 因为肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的条件下对人体具有重要的生理 作用：
第一节、 肠杆菌科的生理作用
性菌群的分类鉴定
临床上可以见到的苯丙氨酸脱氨酶试验 阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴性菌群包 括埃希氏菌属、志贺氏菌属、沙门氏菌 属、枸橼酸杆菌属和爱德华氏菌属五个 属，以及耶尔森氏菌属中的小肠结肠炎 耶尔森氏菌。
生化反应
动力 37℃ 25℃
I C H2S 尿素酶 赖氨酸 D—木糖
埃希氏 菌属
+ + + — — — +/— +
+
—
木糖
+
—
普通变形杆菌 豪萨变形杆菌 潘尼氏变形杆菌
产粘液变形杆菌
2、摩尔根氏菌属的分类鉴定
摩尔根氏菌属只有一个种，即摩尔根摩 尔根氏菌。它又包括两个亚种即：摩尔 根摩尔根氏亚种和摩尔根西伯尼亚种。 两者的主要区别在于：后者能分解海藻 糖而前者不能。
3、 普罗维登斯菌属的分类鉴定
普罗维登斯菌属包括5个种即：产碱普罗 维登斯菌、雷极普罗维登斯菌、斯图氏 普罗维登斯菌、拉氏普罗维登斯菌和海 氏普罗维登斯菌。其中拉氏普罗维登斯 菌和海氏普罗维登斯菌主要存在于动物 体内，一般不能从人体分离出，故不具 有临床意义。
4、 哈夫尼亚菌属的分类鉴定
该菌属只有一个种，即：蜂房哈夫尼亚菌。 其特点是；不分解乳糖；发酵葡萄糖产酸 产气；动力“+”；I “—” ；V-P “+”； C “+”；赖氨酸“+” ；鸟氨酸“+” ； H2S “—” ;山梨醇“—” ；棉籽糖“— ”。
（六）、苯丙氨酸脱氨酶试验 阴性；葡萄糖酸盐利用试验阴
阴沟 生化反应
肠杆菌
赖氨酸 —
鸟氨酸
+
精氨酸
+
黄色素 —
山梨醇
+
坂崎 肠杆菌
—
+ + + —
聚团 泛杆菌
— — —
+ +/—
产气 肠杆菌
+ + — — +
格高菲 肠杆菌
+ + — — —
阪崎阪肠崎杆肠菌杆在菌血在琼血脂琼平脂平板板上上的的菌菌落落特特征征（（188——2244hh））
阪崎阪肠崎杆肠菌杆菌在在营血养琼琼脂脂平平板板上上的菌的落菌特落征特（征18（—1284—h）24h）
沙雷氏菌属中具有临床意义的有三个种，即： 粘质沙雷氏菌、液化沙雷氏菌、深红色沙雷氏 菌。
生化反应 山梨醇 阿拉伯糖
粘质沙雷氏菌 + —
液化沙雷氏菌 + +
深红色沙雷氏菌 — +
+ —
粘质沙雷氏菌
沙雷氏菌属
山梨醇
+ 阿拉伯糖
—
+
+
液化沙雷氏菌
深红色沙雷氏菌
粘质沙雷菌在营养琼脂平板上的菌落特征（18—24h）
聚团泛杆菌在营养琼脂上的菌落特征（18—24h）
肠杆菌属 泛杆菌属
黄色素
+
—
坂崎肠杆菌
聚团泛杆菌
鸟氨酸
+
—
阴沟肠杆菌 产气肠杆菌
格高菲肠杆菌
山梨醇
（聚团多源菌， 聚团肠杆菌）
+
阴沟肠杆菌 产气肠杆菌
赖氨酸 —
格高菲肠杆菌
产气肠杆菌
阴沟肠杆菌
2、 克雷伯氏菌属的分类鉴定
克雷伯氏菌属 Klebsiella
布丘杆菌属 Buttiauxella
沙雷氏菌属 Serratia
西地西氏菌属 Cedecea
哈夫尼亚菌属 Hafnia
爱文氏菌属 Ewingella
埃希氏菌属 Escherichia
克吕沃氏菌属 Kluyvera
志贺氏菌属 shigella
莱克勒菌属 Leclercia
生化反应
I MR 丙二酸盐
催产（产酸）