实验四-肠杆菌科细菌鉴定(一)..
肠杆菌科鉴定报告模板
肠杆菌科鉴定报告模板1. 引言肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，广泛存在于土壤、水体、动植物体内以及人体肠道等环境中。
由于肠杆菌科中存在大量的致病菌和污染指示菌，对其进行准确鉴定十分重要。
本报告对所鉴定菌株进行了详细的特征描述和分析，以期为疾病防控和食品安全提供科学依据。
2. 材料与方法本次实验使用的样本为来自XX地区的食品样品，性状检测采用以下常规方法：1. 培养基选择：用花红素琼脂糖平板培养基(XLD) 和大肠杆菌培养基(EC) 进行肠杆菌属的培养。
2. 培养条件：接种菌株后，在37恒温培养箱中培养24-48小时。
3. 病原细菌鉴定：通过病原细菌常见特征进行初步鉴定，包括菌落形态观察、革兰染色、氧需求情况、氧化酶试验、产气试验等。
4. 进一步确认：通过生化试验和分子生物学方法进一步确认菌株种属，包括典型的碳水化合物利用试验、酸碱产物检测、16S rRNA序列测定等。
3. 结果及讨论经过上述步骤，我们成功鉴定出了本次食品样品中的菌株，并对其进行了分析和评估。
菌落特征描述观察菌落形态，本菌株与典型的肠杆菌科细菌相似，呈圆形、灰白色、整齐的菌落，直径约为2-3毫米。
在花红素琼脂糖平板上，菌落中心呈深红色，周围部分为透明带，边缘锐利，与大肠杆菌相符合。
生理生化特征首先，我们对菌株的革兰染色结果进行了观察，显示菌株呈现典型的革兰氏阴性菌形态，即细胞不保持染色，但在碘溶液中可保持染色。
进一步进行了氧需求试验，结果显示该菌株为好氧菌，即需氧生长。
另外，通过进行氧化酶试验，观察到菌株中有明显的氧化酶酶活性表现。
在加入氧化酶试剂后，观察到菌株变色，出现深紫色反应，符合肠杆菌科细菌的特征。
分子生物学鉴定利用PCR技术对该菌株进行了16S rRNA序列测定，得到了一段约1500碱基的序列。
通过序列比对和系统发育树构建，与肠杆菌科细菌高度同源，与典型的大肠杆菌(Escherichia coli) 的相似度在99%以上。
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
治疗用药：碳青酶烯、抑制剂复合类或头霉 素
AmpC -内酰胺酶：
肠杆菌属，枸橼酸杆菌属，
特点：染色体、质粒编码，诱导酶，非边界 耐药（青霉素类，头孢菌素1，2，3代，头霉素） 对抑制剂不敏感。
治疗用药：碳青酶烯，头孢4代
埃希氏菌属（Escherichia）
• 分类
肠杆菌科，埃希氏菌属，5个种，大肠埃希氏 （E.coli）最为常见，以下主要叙述。
• 重要性：
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠杆菌科实验报告
一、实验目的1. 掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。
2. 掌握肠道杆菌的主要生化反应。
3. 掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。
4. 掌握粪便标本细菌学检测流程。
二、实验原理肠道杆菌科细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。
少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。
这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。
有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。
三、实验材料与仪器材料：1. 粪便标本2. CB培养基3. SS培养基4. 基础培养基5. 双糖铁发酵培养管6. 鉴别培养基7. 血清学反应试剂8. 药敏试剂仪器：1. 高压灭菌锅2. 试管3. 锥形瓶4. 接种环5. 酒精灯6. 无菌玻片7. 显微镜、载玻片8. 镊子四、实验步骤1. 粪便标本的处理- 将粪便标本用无菌生理盐水进行稀释，制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4四个浓度的悬液。
- 取各浓度悬液适量，分别接种于CB培养基、SS培养基、基础培养基和双糖铁发酵培养管。
2. 培养与观察- 将接种后的培养基放入37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 观察并记录各培养基上的菌落特征，包括菌落大小、形状、颜色、边缘、表面等。
3. 生化反应- 取纯培养的菌落，进行糖发酵试验、氧化酶试验、触酶试验、硝酸盐还原试验等。
- 根据试验结果，初步鉴定菌种。
4. 血清学反应- 取纯培养的菌落，进行血清学反应，进一步鉴定菌种。
5. 药敏试验- 取纯培养的菌落，进行药敏试验，了解菌株的耐药性。
五、实验结果与分析1. 菌落特征- 在CB培养基上，观察到典型的肠道杆菌菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、乳白色。
- 在SS培养基上，观察到菌落呈红色，并有金属光泽。
- 在基础培养基上，观察到菌落呈黄色。
- 在双糖铁发酵培养管中，观察到斜面和底层均呈红色，并产生气泡。
肠杆菌科细菌检验课件
12 0.5
25 0.33 22.5 1000
配方二
配方三
1000
850
7.5（胨）
15
10
10 （ 透 析 ） 150（ml）（牛
胆汁）
5
11
15
11
1
4
5
4
18
20
0.33
1.0
37
70
配方四 5
5 10
8.5（混合）
8.5
8.5 1
13.5 0.33
25
1000
MACC SS
大肠埃希杆菌呈典型粉红色，乳糖发酵菌落。福氏 痢疾杆菌 菌落小，无色透明，非乳糖发酵菌。 （18hr,37℃)
双糖铁培养基(KIA)
蛋白胨 氯化钠 牛肉膏 琼脂 水
10g 5g 3g 16g 1000ml
葡 萄 糖 1g 乳 糖 10g 硫代硫酸钠 0.2g 硫酸亚铁 0.2g 0.4%酚红 6ml
细菌在KIA中的生长现象
• 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
肠杆菌科细菌检验课件
目的要求
• 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 • 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 • 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 • 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术
实验材料
一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、 MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人） 三、诊断血清： 沙门菌多价 四、其他： 玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、 液体石蜡
肠杆菌科细菌的鉴定、小结
肠杆菌科细菌的鉴定小结
●肠杆菌科细菌的生化反应及结果分析●玻片凝集的操作及注意事项
●G染色法操作方法及注意点
观察记录生化反应
●IMViC、KIA、U，所有菌种已接种37℃培养24h以上。
●观察生化反应、作出记录及分析
血清学鉴定－直接玻片凝集
●沙门菌：
用A～F多价O抗确定沙门菌属 用O因子血清分群
用H因子I相血清型定型
伤寒沙门菌：O9Hd
乙型副伤寒沙门菌：O4Hb
●福氏志贺菌：
A、B、C、D多价血清定志贺菌属
按流程分型
不同肠道菌在SS与CB的菌落特征
SS CB
大肠红色中心混浊S型菌落大而混浊蓝色S型菌落产气红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落肺炎红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落伤寒透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
副乙透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
福氏透明微黄S型菌落透明红色S型菌落
变形透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
不同肠道菌的生化特征
I M V C动力U产气乳糖硫化氢
大肠杆菌++--+-++-产气肠杆菌--+++-++-肺炎克雷伯菌--++-+++-伤寒沙门菌-+--+---+乙型副伤寒-+-++-+-+福氏志贺菌-+-------变形杆菌
+/-+-/V-/++++-+（普通/奇异）。
医学微生物学实验四 综合实验
血
清
学
试
验
原
理
沙门氏菌的主要抗原组成
O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙 门菌大多数在A~F组。
血 清
H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3 等表示。
学 试 验
Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反 应。
原 理
弃掉
1
23
4
5
肠杆菌科细菌鉴定程序
（二）肠杆菌科细菌鉴定程序
血液标本
增菌培养
粪便标本
分离培养
SS/EMB
鉴 定 程
序
纯培养 KIA
生化试验
血清学试验
药敏试验
（一）肠杆菌科细菌分离鉴定常用培养基 1. 分离培养——选择性培养基
鉴
定
程
SS
EMB
序
❖ SS:
分解乳糖——菌落呈粉红色 不分解乳糖——菌落呈无色半透明
福氏志贺菌SS
鉴 别
培
伤寒沙门菌SS
大肠杆菌SS
养 基
• SS:
• 分解乳糖——菌落呈粉红色 • 不分解乳糖——菌落呈无色半透明
鉴 别 培 养 基 大肠杆菌EMB平板
• EMB:
• 分解乳糖——菌落呈深紫色并有金属光泽 • 不分解乳糖——菌落呈无色或淡黄色半透明
（一）肠杆菌科细菌分离鉴定常用培养基
对照 + -
序
结果：蓝色——阳性 不变色——阴性
玻
试
片
鉴
凝
定
集
菌
血清学鉴定 血清学诊断
诊管 断凝 疾集
血 清 学
反
种
肠杆菌科鉴定(全)课件
代
2. 加
如阴性：应考虑是否凝有集V：i抗做原O多? 价和单价凝集
热 去除Vi抗原 或
不凝集：可能为A～F以外
传
PPT学习交流
54
THANK YOU !
PPT学习交流
55
赖氨酸
属沙 属志 菌迟 甲基红
+
－
杆异 鸟氨酸
菌型 +
－
枸 酸丙 杆费 橼 杆二 菌劳 酸 菌酸 地
盐枸
+
－门
葡萄糖产气 属耶 菌
+
－
尔
菌大 泼大 森
肠 株肠
菌
埃 ）埃
希希
贺 缓+
－
菌
爱 菌保 菌鲶 德科 鱼
华爱 爱
德德
华华
阴橼
菌
性酸
（
枸
PPT不学习交流
40
肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好
苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟 氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸 盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、 ONPG、靛基质、双糖（H2S）
魏克曼枸橼酸杆菌 （C. werkmanii）
扬哥枸橼酸杆菌
（C. youngae）
吉乐枸橼酸杆菌
（C. gillenii）
穆利枸橼酸杆菌
（C. murliniae）
法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri）
PPT学习交流
27
1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别
➢注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料
PPT学习交流
19
沙雷菌属（普通营养平板）
PPT学习交流
20
2.沙雷菌属各种的鉴别
PPT学习交流
肠杆菌科的检验 微生物实验
实验三：肠杆菌科的检验一、接种细菌：MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。
二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。
1、SS平板：1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板：1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。
中等大小。
2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。
三、涂片、革兰染色将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示：福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。
四、生化试验：1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。
2、接种KIA、MIU上。
五、2、微量生化：六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定：1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。
2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。
七、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。
肠杆菌的鉴定t
实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为： 可疑大肠杆菌（-）、可疑沙 门菌（-）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
B3
B4 B5
+ +
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
实验结论
根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。 经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌 属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。 根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌 的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。 经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以 断定B5确实为大肠杆菌。
有白色凝集
无凝集现象
实验结果
动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙 门菌均有运动趋势， 琼脂显浑浊。 可疑志贺菌则紧沿 穿刺路线生长。
大 肠 杆 菌
可 疑 沙 门 菌
可 疑 志 贺 菌
实验结果
生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）
肠杆菌科及检验
肠杆菌科及检验肠杆菌科及检验（一）●考点﹥概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。
﹥埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。
生物学性状；微生物学检验；临床意义。
[讲义编号NODE70103300140100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。
大多数肠道杆菌属于正常菌群。
当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。
部分为致病性细菌。
[讲义编号NODE70103300140100000102：针对本讲义提问]（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。
主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。
根据《伯杰系统细菌学手属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威属等。
[讲义编号NODE70103300140100000103：针对本讲义提问]（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。
多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。
[讲义编号NODE70103300140100000104：针对本讲义提问]2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。
3.生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。
触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。
[讲义编号NODE70103300140100000105：针对本讲义提问]4.抗原构造﹥﹥表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处5.变异﹥菌落S～R变异﹥鞭毛H～O变异﹥耐药性变异﹥生化反应性质的改变6.抵抗力不强。
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是谁在作祟？
实验目的
1、初步掌握细菌接种技术 2、熟悉肠杆菌主要的鉴定方法 3、掌握细菌基本形态及特殊结构 4、树立无菌观念
实验内容及安排
一、细菌接种培养与鉴定 二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察 三、实验结果观察及分析
一、细菌接种培养与鉴定（1套/组）
1、肉汤培养基1管
分区划线法
固体培养基接种
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 第四区划线 灭菌接种环
菌
苔
液体
细菌扩散至培养基中
培养基
液体培养基接种
二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察
淋病奈瑟菌 中性粒细胞
观察细菌形态、颜色、排列方式
二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察
葡萄球菌
链球菌
二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察
菌名 项目名称
三、实验结果观察及分析
菌名 项目名称
2、蛋白胨水1管 3、乳糖发酵管1支
液体培养基接种
4、葡萄糖发酵管1支
5、普通琼脂平板1块
6、MAC培养基1块 固体培养基接种
7、SS培养基1块
思考：接种以上7种培养基的目的分别是什么？
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 防止接种环原有的细菌污染标本 沾取标本 接种
灭菌接种环 防止接种环沾染的细菌污染环境
弧菌
大肠杆菌
二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察
肺炎双球菌 中性粒细胞 荚膜（空白区）
观察荚膜位置、颜色
二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察
破伤风梭菌菌体 破伤风梭菌芽胞
观察芽胞形态、大小、位置ห้องสมุดไป่ตู้
二、细菌基本形态和特殊结构镜下观察
伤寒杆菌周鞭毛 伤寒杆菌菌体
观察鞭毛数量、分布、形态、粗细、长 短
三、实验结果观察及分析