肠杆菌科细菌鉴定
肠杆菌科鉴定(全)(精品)
多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌
与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属， 其中临床标本中常见的菌属有15种
克雷伯菌属
爱德华菌属
邻单胞菌属
变形杆菌属
普罗威登斯菌属 沙门菌属
伯
臭鼻亚种
菌 ➢ 肺炎克雷伯菌（K. pneumonia鼻e）硬结亚种
属 ➢ 产酸克雷伯菌（K. oxytoca）
➢ 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornitThhiisnporloyptoiscaal ）is base on
➢ 植生克雷伯菌（K. planticola1s6）eSqurDeNncAinagndanrpdocBargbeonne
试验
摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)
赖氨酸
-
+
动力
+
-
4.塔特姆菌属的鉴定
苯丙氨酸
H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸 靛基质
+
-
-
-
-
5 .苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图
苯丙氨酸+
+
H2S
－
靛基质
+
－
枸橼酸盐
+
－
普 通 变 形 杆 菌
鸟氨酸 侧金盏花醇 靛基质
+
－+
－+
－
奇 异 变 形 杆 菌
潘 氏 变 形 杆 菌
➢ 河生肠杆菌生物群1
3.肠杆菌属各种的鉴别
试 验 坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌 格高菲杆菌
赖氨酸
－
－
+
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，可以通过一系列
生化鉴定实验来进行鉴定。
以下是一些常用的肠杆菌科生
化鉴定实验：
1. 硫代硫酸亚铁（TSI）琼脂糖培养基实验：在TSI琼脂
糖培养基上培养菌株，观察菌落的颜色和气体产生情况。
肠杆菌科细菌在该培养基上产生酸和气体，导致培养基中
的pH下降，产生黄色酸性反应。
2. 尿素水解试验：将菌株接种到尿素水解培养基上，观察
培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生
尿素酶，将尿素水解为氨和二氧化碳，导致培养基变为粉
红色。
3. 大肠杆菌甲醛试验：将菌株接种到含有甲醛的培养基上，观察培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的大肠杆菌能够
利用甲醛作为唯一的碳源，产生酸和气体，导致培养基变
为黄色。
4. 气体产生试验：将菌株接种到气体产生管中，观察管内
气体的产生情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生气体，如氢气和二氧化碳。
5. 青霉素酶试验：将菌株接种到含有青霉素的培养基上，
观察菌落的形成情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产
生青霉素酶，使得培养基中的青霉素失活，导致菌落形成。
需要注意的是，肠杆菌科细菌的鉴定通常需要结合多个实验结果进行综合判断，单一实验结果可能不足以确定菌株的分类。
此外，不同的肠杆菌科细菌种类可能在生化反应上有差异，因此具体的实验步骤和判断标准可能会有所不同。
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
治疗用药：碳青酶烯、抑制剂复合类或头霉 素
AmpC -内酰胺酶：
肠杆菌属，枸橼酸杆菌属，
特点：染色体、质粒编码，诱导酶，非边界 耐药（青霉素类，头孢菌素1，2，3代，头霉素） 对抑制剂不敏感。
治疗用药：碳青酶烯，头孢4代
埃希氏菌属（Escherichia）
• 分类
肠杆菌科，埃希氏菌属，5个种，大肠埃希氏 （E.coli）最为常见，以下主要叙述。
• 重要性：
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠杆菌科鉴定(全)
－
-
甘露醇
+ +
ONPG + －
枸橼酸盐
+
－
动力
+
－
侧金盏花醇
+
－
异 鸟氨酸
型 枸
+
－
橼丙 费
酸二 劳
杆酸 地
菌盐 枸
阴橼
性酸
枸杆
橼菌
酸
杆
赖氨酸
沙
志
+
－
门 菌
贺 菌
葡萄糖产气 耶 属
属
+
－
尔 森
大大 菌
肠肠 属
埃埃
希希
菌菌
（
不
活
泼
株.
－ －
H2S
+
－
迟 甲基红
缓 爱
+
－
德保 鲶
华科 鱼
菌爱 爱
德德
华华
斯 图 普 鲁 维 登 斯 菌
摩 根 菌
塔 特 姆 菌
斯斯
菌菌
.
七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别
.
克 分类
雷 原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种
伯 菌
➢肺炎克雷伯菌 臭鼻亚种
鼻硬结亚种
属 ➢产酸克雷伯菌
➢解鸟氨酸克雷伯菌
.
克
雷 伯
培养特征
菌 ➢ 血琼脂上菌落较大，呈 属 黏液状，以接种环挑取
靛基质 +
-
-
-
鸟基酸 -
+
-
-
木糖 +
+
+
-
.
2.普鲁维登菌属各种的鉴别
肠杆菌科鉴定全
V + + +
V + + V V
+ + + -
+ + V V
+ + + -
+ V + + +
+ V V + +
+ + V V V + -
+ + + + + +
+ + + -
2.爱德华菌属各种的鉴别
试 验 迟缓爱 德华菌 保科爱 德华菌 鲶鱼爱 德华菌
H2S
+
－
－
甲基红
+
+
－
3.埃希菌属种的鉴别
试 验 大肠埃希菌 大肠埃希菌（不 活泼株）
蔗糖
精氨酸脱 氢酶 鸟氨酸脱 羧酶 核糖醇 鼠李糖 α-甲基D-葡萄糖 苷 黄色素
+
+ +
+
+ -
+
+ +
V
V
+
V +
+ + +
+
+ + +
+
V + +
+
+ + V +
+
+
V
V +
+
+ + +
+
V + -
V + +
+
+ + +
肠杆菌科的鉴定流程
肠杆菌科的鉴定流程嘿，咱今儿就来讲讲肠杆菌科的鉴定流程这档子事儿！你想想啊，肠杆菌科那可是个大家族，里面成员众多。
要把它们准确鉴定出来，那可得有点真本事呢！咱先从观察开始。
就像认识一个新朋友，咱得先瞅瞅他长啥样不是？看看这些细菌的形态呀，是圆圆的，还是长长的，有没有啥特别的形状。
这就好比区分苹果和梨，总得先看看外观嘛。
然后呢，咱得研究研究它们的生化特性。
这就像是了解一个人的性格和爱好一样。
看看它们对不同的物质有啥反应，能不能分解这个，能不能利用那个。
这一步可重要啦，就像判断一个人爱不爱吃甜食，能不能喝酒一样关键。
还有啊，它们的培养特性也不能忽视。
不同的肠杆菌在不同的培养基上会有不同的表现呢。
就好像不同的花在不同的土壤里生长情况不一样。
有些可能长得特别旺盛，有些可能就不太起眼。
再说说抗原特性吧。
这就像是每个人都有自己独特的标志一样，肠杆菌也有它们的“身份证”呢。
通过检测这些抗原，咱就能更准确地知道它们是谁啦。
咱做这些鉴定可不能马虎呀，就跟警察破案似的，得仔细再仔细。
要是弄错了，那可就麻烦啦！你说要是把一个“好人”当成“坏人”给抓了，那多冤枉呀！说到这儿，你是不是觉得挺有意思的？其实呀，鉴定肠杆菌科就像是一场有趣的探秘之旅。
每一个步骤都像是解开一个小谜团，最后把所有的谜团都解开，就能准确地知道这些小家伙们的真面目啦！所以呀，大家可别小瞧了这肠杆菌科的鉴定流程哦。
这可是个技术活，需要我们有耐心，有细心，还要有一双善于发现的眼睛。
只有这样，我们才能在这个细菌的世界里游刃有余，准确地找到我们想要找的那个“它”！这不就是我们搞科研、做实验的乐趣所在嘛！。
河生肠杆菌科菌种鉴定
河生肠杆菌科菌种鉴定一、背景介绍河生肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，包括多种与人和动物健康相关的致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌等。
这些细菌不仅会引起人类和动物的感染，还会对水质和食品安全造成威胁。
因此，对这些细菌进行鉴定非常重要。
二、鉴定方法1. 生化鉴定法：通过观察细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来进行鉴定。
2. 分子生物学鉴定法：利用PCR技术或基因测序分析目标细菌的DNA序列来确定其种属和亚属分类。
三、生化鉴定法1. 常用培养基：(1) MacConkey琼脂培养基：用于筛选革兰氏阴性肠道杆菌，能够区分乳糖发酵阳性和阴性细菌。
(2) Eosin Methylene Blue琼脂培养基：适合于检测大肠杆菌等肠道杆菌，能够区分乳糖发酵强度。
(3) Triple Sugar Iron琼脂培养基：可用于区分肠道杆菌的糖代谢类型，如葡萄糖、乳糖和蔗糖。
2. 常用生化测试：(1) 氧化/发酵试验：通过观察细菌在含糖和底物的培养基上产生气体或酸碱变化来判断其代谢类型。
(2) 非葡萄糖发酵试验：检测细菌对非葡萄糖类底物的代谢能力，如甘油、琼脂和麦芽糖等。
(3) 酶反应试验：检测细菌对不同酶的产生情况，如氧化酶、羟丁酸氧化酶和尿素酶等。
四、分子生物学鉴定法1. PCR技术：(1) 16S rRNA基因PCR：利用通用引物扩增16S rRNA基因片段，进行序列比对来确定目标细菌种属和亚属分类。
(2) 特异性PCR：利用特异性引物扩增目标细菌的DNA片段，进行电泳分离和检测来确定其存在与否。
2. 基因测序：(1) 16S rRNA基因测序：通过对PCR扩增的16S rRNA基因片段进行测序，进行比对和分类鉴定。
(2) 多基因组合测序：通过同时对多个基因进行测序，提高鉴定准确性和可靠性。
五、鉴定结果的判断1. 生化鉴定法：根据细菌在不同培养基上的生长特征和代谢产物来判断其种属和亚属分类。
实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定课程名称：兽医微生物学实验学时：6学时一、目的要求1．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性；2．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法；3．掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理；4．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现；5．熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌，运动者周身鞭毛；在普通培养基上生长好；发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气；在麦康凯琼脂上生长；细胞色素氧化酶阴性；还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌（E.coli）简称大肠杆菌，作为原发和继发病原可引起多种动物疾病：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病；狗的尿道感染；鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿（Coligranuloma）。
沙门氏菌（Salmonella），虽然沙门氏菌血清型超过2200个，但承认的种为数不多，在O抗原的基础上，沙门氏菌血清组（群）用字母A、B、C…表示，然后根据它的H抗原（鞭毛抗原）再分，用阿拉伯数字1、2、3…等表示，沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病，是肠杆菌科重要的致病菌，如鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）可引起动物流产，胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员：肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎，这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌（proteus）引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌（yersinia）引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料每6人一组，每组所需材料：1．普通琼脂斜面培养物2管：分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌（提供实验用菌种）；2．普通肉汤2管：分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；3．普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；4．生化试验用培养基2套，包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质，M．R、V．P试验、柠檬酸盐利用，硝酸盐还原试验等；5．三糖铁琼脂斜面培养基2管；6．选择性培养基2个，如：麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板；7．各种生化试验试剂：靛基质试剂，M．R试剂，V．P试剂，硝酸盐还原试剂；8．沙门氏菌因子血清。
肠杆菌科鉴定全
土生克雷伯菌（K. terrigena）
柔特勒菌属 解鸟氨酸柔特勒菌（R. ornithinolytica） (Raoultella)
植生柔特勒菌（R. planticola）
土生柔特勒菌（R. terrigena）
克 培养特征
雷 伯 血琼脂上菌落较大，呈 菌 黏液状，以接种环挑取 属 时易拉成丝
+
葡萄糖酸盐 － － － － + + + + + + － － － － － － － +
六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别
试 验 变形杆菌属 普鲁维登菌属 摩根氏菌属 塔特姆属
H2S
+
-
-
-
枸橼酸盐
+/-
+
-
-
靛基质
+/-
+
+
-
1.变形杆菌属内各种的鉴别
试 验 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘液变形杆菌
+
分类：现有13个种2个生物型
肠
杆 原有7个种2个生物型
菌 属
产气肠杆菌(E. aerogenes)
阴沟肠杆菌(E. cloacae)
杰高维肠杆菌
坂崎肠杆菌
泰洛肠杆菌
中间肠杆菌
聚团肠杆菌
河生肠杆菌生物群2
后增加7个菌 阿氏肠杆菌 何氏肠杆菌 溶解肠杆菌 超压肠杆菌 克沃尼肠杆菌 考伯肠杆菌 帕瑞勒肠杆菌
属
致泻性E.coli分为5类：
肠毒素型大肠埃希菌 (ETEC)
肠致病性大肠埃希菌 (EPEC)
肠杆菌科细菌鉴定
肠杆菌科细菌鉴定1. 引言肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性杆状细菌，广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、动物和人体内。
肠杆菌科细菌对人类和动物的健康具有重要影响，它们可以引起多种疾病，包括胃肠道感染、尿路感染、呼吸道感染等。
因此，准确鉴定肠杆菌科细菌对于预防和治疗相关疾病具有重要意义。
本文将介绍肠杆菌科细菌的鉴定方法、常见的鉴定技术以及其在临床和环境领域中的应用。
2. 肠杆菌科细菌的鉴定方法2.1 形态学特征肠杆菌科细菌通常为革兰氏阴性，呈杆状或梭形，并且具有运动性。
它们在营养琼脂平板上形成灰白色至粉红色的圆形或不规则形状的菌落。
2.2 生理生化特性肠杆菌科细菌具有一系列特殊的生理生化特性，可以通过对其代谢产物和酶活性的检测来进行鉴定。
常见的生理生化特性检测包括氧需求、产气、发酵糖类、蛋白质分解等。
2.3 分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，PCR和DNA测序等方法在肠杆菌科细菌鉴定中得到了广泛应用。
通过特定基因序列的扩增和比对，可以快速准确地确定细菌的种属和亚种。
3. 肠杆菌科细菌鉴定技术3.1 常规培养法常规培养法是最常用的肠杆菌科细菌鉴定技术之一。
它包括对细菌进行纯培养、观察形态学特征和进行一系列生理生化试验。
这些试验可以通过使用不同培养基和指示剂来检测氧需求、发酵糖类、产气等特征。
3.2 快速鉴定方法为了提高肠杆菌科细菌的鉴定速度和准确性，快速鉴定方法逐渐得到广泛应用。
其中包括基于生化反应的API系统、基于荧光的VITEK 2系统和基于质谱的MALDI-TOF技术。
这些方法可以在短时间内对大量样品进行鉴定，并且具有较高的准确性和可靠性。
3.3 分子生物学方法分子生物学方法在肠杆菌科细菌鉴定中发挥着越来越重要的作用。
通过PCR扩增特定基因序列，如16S rRNA基因，可以快速确定菌株的种属和亚种。
此外，DNA测序技术可以提供更详细的遗传信息，帮助进一步确定细菌的亲缘关系和种类。
肠杆菌科细菌的鉴定、小结
肠杆菌科细菌的鉴定小结
●肠杆菌科细菌的生化反应及结果分析●玻片凝集的操作及注意事项
●G染色法操作方法及注意点
观察记录生化反应
●IMViC、KIA、U，所有菌种已接种37℃培养24h以上。
●观察生化反应、作出记录及分析
血清学鉴定－直接玻片凝集
●沙门菌：
用A～F多价O抗确定沙门菌属 用O因子血清分群
用H因子I相血清型定型
伤寒沙门菌：O9Hd
乙型副伤寒沙门菌：O4Hb
●福氏志贺菌：
A、B、C、D多价血清定志贺菌属
按流程分型
不同肠道菌在SS与CB的菌落特征
SS CB
大肠红色中心混浊S型菌落大而混浊蓝色S型菌落产气红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落肺炎红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落伤寒透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
副乙透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
福氏透明微黄S型菌落透明红色S型菌落
变形透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
不同肠道菌的生化特征
I M V C动力U产气乳糖硫化氢
大肠杆菌++--+-++-产气肠杆菌--+++-++-肺炎克雷伯菌--++-+++-伤寒沙门菌-+--+---+乙型副伤寒-+-++-+-+福氏志贺菌-+-------变形杆菌
+/-+-/V-/++++-+（普通/奇异）。
肠杆菌科细菌检验课件
12 0.5
25 0.33 22.5 1000
配方二
配方三
1000
850
7.5（胨）
15
10
10 （ 透 析 ） 150（ml）（牛
胆汁）
5
11
15
11
1
4
5
4
18
20
0.33
1.0
37
70
配方四 5
5 10
8.5（混合）
8.5
8.5 1
13.5 0.33
25
1000
MACC SS
大肠埃希杆菌呈典型粉红色，乳糖发酵菌落。福氏 痢疾杆菌 菌落小，无色透明，非乳糖发酵菌。 （18hr,37℃)
双糖铁培养基(KIA)
蛋白胨 氯化钠 牛肉膏 琼脂 水
10g 5g 3g 16g 1000ml
葡 萄 糖 1g 乳 糖 10g 硫代硫酸钠 0.2g 硫酸亚铁 0.2g 0.4%酚红 6ml
细菌在KIA中的生长现象
• 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
肠杆菌科细菌检验课件
目的要求
• 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 • 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 • 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 • 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术
实验材料
一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、 MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人） 三、诊断血清： 沙门菌多价 四、其他： 玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、 液体石蜡
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血清学试验
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成
透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的
敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度 （MIC）呈
负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
实验方法 （一）接种肉汤培养基
（二）菌液均匀涂抹平板培养基
（三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大 霉素和头孢拉定四种抗生素纸片贴在平
初步确定为大肠杆菌
初步确定为伤寒杆菌
革兰染色镜检
挑取纯培养后的可疑菌落进行革兰染色，确定为革兰阴性 菌后进行细菌的生化培养基接种。
短杆状，分散排列
生化试验鉴定
将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接 种于各种生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计 有糖发酵管（葡.乳.麦.甘.蔗）各1支，蛋白胨水1支 （I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸橼酸盐琼脂斜面 1支（C）。接种完毕后，试管置于试管架上，送37℃温箱 培养24~48小时后观察记录结果。
板上进行培养
实验结果
●
实验结果
青霉素(mm） 链霉素（mm） 头孢拉定（mm）庆大霉素（mm）
18>15(敏感） 16>15(敏感） 22>15(敏感） 24>15(敏感） 19>15(敏感） 25>15(敏感） -
大肠杆菌 沙门菌 志贺菌
三种菌对链霉素和庆大霉素敏感，但对青霉素和头孢拉定耐药。
乳 糖
+ 蔗 糖
+ 吲 哚
+ +
甲基 红
-
+
+
+ +
⊕ ⊕
麦芽 糖 甘露 醇
肠杆菌科细菌生化反应鉴定数据参考表
VP 枸橼 H2S 酸盐 动力
细菌 葡萄 编号 糖 大肠 杆菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ /+
+ -
+ +
-
-
-
+ +
伤寒 杆菌
+
-
+
+
-
/+
药物敏感试验
实验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的 琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解 后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
VP试验
枸橼酸盐利用试验(C)
红色为VP阳性。
斜面上有菌苔，且变成深蓝 色，为阳性；斜面上 无菌苔，仍是绿色为阴性。
表1
细菌 葡萄 乳 编号 糖 糖
肠杆菌科细菌生化反应鉴定结果记录表
麦芽 甘露 糖 醇 蔗 糖 吲 哚 甲基 红 VP 枸橼 H2S 酸盐 动力
大肠 杆菌
伤寒 杆菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ 表2
二.纯培养
（一）确定可疑菌落。 1.观察EMB表面的菌 落特征： （1）.凡紫黑色的单 个菌落可初步定为 可疑大肠杆菌菌落， 标号为。 （2）.凡光滑无色透 明的单个小菌落可 初步定为痢疾杆菌 属菌落或伤寒杆菌 属菌落，标号为。
（二）.可疑菌落纯化培养 无菌操作用接种针挑取已编号可疑菌落，分别接种在双 糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37℃温箱培 养24~48小时。 （三）.双糖铁琼脂斜面培养特征观察与动力观察
肠杆菌科细菌鉴定
组员：李木生，颜大钧，郑伟坛，科细菌一般性鉴定程序
未 知 肠 杆 菌
分 离 培 养
挑 取 可 疑 菌 落
纯 培 养
革 兰 染 色 镜 检
生 化 实 验 鉴 定
药 敏 试 验
血 清 学 试 验
一.分离培养
• 无菌操作用接种环提取可疑肠道杆菌，在EMB上分区划线 接种。送37℃培养24小时。
糖发酵试验
1.不变黄，小管无气泡：糖发 酵为阴性（—）。 2.黄色，小管有气泡（产酸， 产气）：糖发酵为阳性（+）。 黄色，小管无气泡（产酸， 不产气）：糖发酵为阳性（+）。
吲哚试验(I)
甲基红试验(MR)试验
红色为甲基红试验阳性（+），桔黄 色为阴性（-） 结果：红色为吲哚试验阳性 （+），无变化为阴性（-）