肠杆菌科细菌鉴定

在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成
透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的
敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度 （MIC）呈
负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
实验方法 （一）接种肉汤培养基
（二）菌液均匀涂抹平板培养基
（三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大 霉素和头孢拉定四种抗生素纸片贴在平


初步确定为大肠杆菌
初步确定为伤寒杆菌
革兰染色镜检
挑取纯培养后的可疑菌落进行革兰染色，确定为革兰阴性 菌后进行细菌的生化培养基接种。
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短杆状，分散排列
生化试验鉴定
将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接 种于各种生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计 有糖发酵管（葡.乳.麦.甘.蔗）各1支，蛋白胨水1支 （I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸橼酸盐琼脂斜面 1支（C）。接种完毕后，试管置于试管架上，送37℃温箱 培养24~48小时后观察记录结果。
二.纯培养
（一）确定可疑菌落。 1.观察EMB表面的菌 落特征： （1）.凡紫黑色的单 个菌落可初步定为 可疑大肠杆菌菌落， 标号为。 （2）.凡光滑无色透 明的单个小菌落可 初步定为痢疾杆菌 属菌落或伤寒杆菌 属菌落，标号为。
（二）.可疑菌落纯化培养 无菌操作用接种针挑取已编号可疑菌落，分别接种在双 糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37℃温箱培 养24~48小时。 （三）.双糖铁琼脂斜面培养特征观察与动力观察
糖发酵试验
1.不变黄，小管无气泡：糖发 酵为阴性（—）。 2.黄色，小管有气泡（产酸， 产气）：糖发酵为阳性（+）。 黄色，小管无气泡（产酸， 不产气）：糖发酵为阳性（+）。
吲哚试验(I)
甲基红试验(MR)试验
红色为甲基红试验阳性（+），桔黄 色为阴性（-） 结果：红色为吲哚试验阳性 （+），无变化为阴性（-）
板上进行培养
实验结果
●
实验结果
青霉素(mm） 链霉素（mm） 头孢拉定（mm）庆大霉素（mm）
18>15(敏感） 16>15(敏感） 22>15(敏感） 24>15(敏感） 19>15(敏感） 25>15(敏感） -
大肠杆菌 沙门菌 志贺菌
三种菌对链霉素和庆大霉素敏感，但对青霉素和头孢拉定耐药。
肠杆菌科细菌鉴定
组员：李木生，颜大钧，郑伟坛，朱 俊林，胡思妙，王荣迎，陈琳蔓
肠杆菌科细菌一般性鉴定程序
未 知 肠 杆 菌
分 离 培 养
挑 取 可 疑 菌 落
纯 培 养
革 兰 染 色 镜 检
生 化 实 验 鉴 定
药 敏 试 验
血 清 学 试 验
一.分离培养
• 无菌操作用接种环提取可疑肠道杆菌，在EMB上分区划线 接种。送37℃培养24小时。
VP试验
枸橼酸盐利用试验(C)
红色为VP阳性。
斜面上有菌苔，且变成深蓝 色，为阳性；斜面上 无菌苔，仍是绿色为阴性。
表1
细菌 葡萄 乳 编号 糖 糖
肠杆菌科细菌生化反应鉴定结果记录表
麦芽 甘露 糖 醇 蔗 糖 吲 哚 甲基 红 VP 枸橼 H2S 酸盐 动力
大肠 杆菌
伤寒 杆菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ 表2
乳 糖
+ 蔗 糖
+ 吲 哚
+ +
甲基 红
-
+
+
+ +
⊕ ⊕
麦芽 糖 甘露 醇
肠杆菌科细菌生化反应鉴定数据参考表
VP 枸橼 H2S 酸盐 动力
细菌 葡萄 编号 糖 大肠 杆菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ /+
+ -
+ +
-
-
-
+ +
伤寒 杆菌
+
-
+
+
-
/+
药物敏感试验
实验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的 琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解 后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
血清学试验