实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定.
肠杆菌科鉴定报告模板
肠杆菌科鉴定报告模板1. 引言肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，广泛存在于土壤、水体、动植物体内以及人体肠道等环境中。
由于肠杆菌科中存在大量的致病菌和污染指示菌，对其进行准确鉴定十分重要。
本报告对所鉴定菌株进行了详细的特征描述和分析，以期为疾病防控和食品安全提供科学依据。
2. 材料与方法本次实验使用的样本为来自XX地区的食品样品，性状检测采用以下常规方法：1. 培养基选择：用花红素琼脂糖平板培养基(XLD) 和大肠杆菌培养基(EC) 进行肠杆菌属的培养。
2. 培养条件：接种菌株后，在37恒温培养箱中培养24-48小时。
3. 病原细菌鉴定：通过病原细菌常见特征进行初步鉴定，包括菌落形态观察、革兰染色、氧需求情况、氧化酶试验、产气试验等。
4. 进一步确认：通过生化试验和分子生物学方法进一步确认菌株种属，包括典型的碳水化合物利用试验、酸碱产物检测、16S rRNA序列测定等。
3. 结果及讨论经过上述步骤，我们成功鉴定出了本次食品样品中的菌株，并对其进行了分析和评估。
菌落特征描述观察菌落形态，本菌株与典型的肠杆菌科细菌相似，呈圆形、灰白色、整齐的菌落，直径约为2-3毫米。
在花红素琼脂糖平板上，菌落中心呈深红色，周围部分为透明带，边缘锐利，与大肠杆菌相符合。
生理生化特征首先，我们对菌株的革兰染色结果进行了观察，显示菌株呈现典型的革兰氏阴性菌形态，即细胞不保持染色，但在碘溶液中可保持染色。
进一步进行了氧需求试验，结果显示该菌株为好氧菌，即需氧生长。
另外，通过进行氧化酶试验，观察到菌株中有明显的氧化酶酶活性表现。
在加入氧化酶试剂后，观察到菌株变色，出现深紫色反应，符合肠杆菌科细菌的特征。
分子生物学鉴定利用PCR技术对该菌株进行了16S rRNA序列测定，得到了一段约1500碱基的序列。
通过序列比对和系统发育树构建，与肠杆菌科细菌高度同源，与典型的大肠杆菌(Escherichia coli) 的相似度在99%以上。
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 掌握肠道杆菌的生理生化特性。
2. 熟悉并掌握肠杆菌科细菌的鉴定方法，如IMViC试验等。
3. 通过实验，提高对微生物学实验技能的运用和操作能力。
二、实验原理肠杆菌科细菌是一类革兰氏阴性、无芽孢、无荚膜的杆菌，广泛分布于自然界、人和动物的肠道中。
本实验通过对肠杆菌进行一系列生理生化试验，包括吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、V.P试验（V）、柠檬酸盐利用试验（C）等，以鉴定和区分不同肠杆菌科细菌。
三、实验材料1. 菌株：大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌等。
2. 培养基：蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、柠檬酸盐培养基、双糖铁培养基等。
3. 试剂：吲哚试剂、甲基红试剂、V.P试剂、40%KOH、-茶酚、溴麝香草酚蓝、苯酚红等。
4. 仪器：酒精灯、试管、试管架、烧杯、量筒、接种环、接种针、无菌玻片、显微镜等。
四、实验方法1. 吲哚试验（I）（1）将试验菌接种于蛋白胨水培养基，37℃培养24小时。
（2）取1 mL培养液，加入1 mL乙醚，充分振荡，使乙醚层浮于培养液表面。
（3）沿管壁加入吲哚试剂10滴，静置片刻。
（4）观察培养液颜色变化，呈玫瑰红色为阳性，不变色为阴性。
2. 甲基红试验（M）（1）将试验菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基，37℃培养24小时。
（2）沿管壁加入甲基红试剂3-4滴。
（3）观察培养液颜色变化，呈红色为阳性，黄色为阴性。
3. V.P试验（V）（1）将试验菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基，37℃培养24小时。
（2）加入40%KOH 10-20滴，再加入等量-茶酚，用力振荡。
（3）37℃培养4小时后观察，仍无色产生为阴性。
4. 柠檬酸盐利用试验（C）（1）将试验菌接种于柠檬酸盐培养基斜面上，37℃培养24-28小时。
（2）观察培养基颜色变化，若含有溴麝香草酚蓝的斜面呈现蓝色为阳性，呈绿色为阴性；含苯酚红的斜面呈现红色为阳性，呈黄色为阴性。
五、实验结果1. 吲哚试验：大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
治疗用药：碳青酶烯、抑制剂复合类或头霉 素
AmpC -内酰胺酶：
肠杆菌属，枸橼酸杆菌属，
特点：染色体、质粒编码，诱导酶，非边界 耐药（青霉素类，头孢菌素1，2，3代，头霉素） 对抑制剂不敏感。
治疗用药：碳青酶烯，头孢4代
埃希氏菌属（Escherichia）
• 分类
肠杆菌科，埃希氏菌属，5个种，大肠埃希氏 （E.coli）最为常见，以下主要叙述。
• 重要性：
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠道杆菌的实验报告
一、实验目的1. 熟悉肠道杆菌的基本生物学特性。
2. 掌握肠道杆菌的分离与鉴定方法。
3. 学会使用生化反应和显微镜观察等方法对肠道杆菌进行鉴定。
二、实验原理肠道杆菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于人体肠道中。
它们分为条件致病菌和致病菌两大类。
本实验通过观察肠道杆菌的形态特征、生化反应和血清学试验等方法，对分离到的肠道杆菌进行鉴定。
三、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。
2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁培养基、血清学反应用培养基等。
3. 试剂：革兰氏染色液、生化试剂、血清等。
4. 仪器：显微镜、接种环、酒精灯、培养箱等。
四、实验方法1. 菌株分离（1）将实验菌株接种于普通琼脂培养基上，在37℃培养箱中培养18-24小时。
（2）用接种环挑取单菌落，接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况。
2. 形态观察（1）将分离得到的菌株涂片，进行革兰氏染色。
（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、染色特性等。
3. 生化反应（1）将分离得到的菌株接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况和颜色变化。
（2）根据菌落生长情况和颜色变化，判断菌株的生化反应类型。
4. 血清学试验（1）将分离得到的菌株与相应的血清进行玻片凝集试验。
（2）观察凝集反应，判断菌株的血清学类型。
五、实验结果1. 菌株分离实验菌株在普通琼脂培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为白色。
2. 形态观察革兰氏染色结果显示，实验菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈短杆状，大小约为0.5×1.5μm。
3. 生化反应双糖铁培养基结果显示，实验菌株能够发酵葡萄糖，产生酸和气体，不发酵乳糖，不还原硝酸盐。
4. 血清学试验玻片凝集试验结果显示，实验菌株与相应的血清发生凝集反应，判断为该血清学类型。
六、实验讨论本实验通过对肠道杆菌的分离与鉴定，掌握了肠道杆菌的基本生物学特性和鉴定方法。
实验结果表明，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌，能够发酵葡萄糖，不发酵乳糖，不还原硝酸盐，且与相应的血清发生凝集反应，符合肠道杆菌的生物学特性。
肠杆菌科细菌检验课件
12 0.5
25 0.33 22.5 1000
配方二
配方三
1000
850
7.5（胨）
15
10
10 （ 透 析 ） 150（ml）（牛
胆汁）
5
11
15
11
1
4
5
4
18
20
0.33
1.0
37
70
配方四 5
5 10
8.5（混合）
8.5
8.5 1
13.5 0.33
25
1000
MACC SS
大肠埃希杆菌呈典型粉红色，乳糖发酵菌落。福氏 痢疾杆菌 菌落小，无色透明，非乳糖发酵菌。 （18hr,37℃)
双糖铁培养基(KIA)
蛋白胨 氯化钠 牛肉膏 琼脂 水
10g 5g 3g 16g 1000ml
葡 萄 糖 1g 乳 糖 10g 硫代硫酸钠 0.2g 硫酸亚铁 0.2g 0.4%酚红 6ml
细菌在KIA中的生长现象
• 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
肠杆菌科细菌检验课件
目的要求
• 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 • 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 • 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 • 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术
实验材料
一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、 MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人） 三、诊断血清： 沙门菌多价 四、其他： 玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、 液体石蜡
实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定.
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定课程名称:兽医微生物学实验学时:6学时一、目的要求1.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性;2.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法;3.掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理;4.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现;5.熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌,运动者周身鞭毛;在普通培养基上生长好;发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气;在麦康凯琼脂上生长;细胞色素氧化酶阴性;还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌(E.coli简称大肠杆菌,作为原发和继发病原可引起多种动物疾病:犊牛的肠道感染和水泻;幼猪的水泻和腹泻,二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病;狗的尿道感染;鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿(Coligranuloma。
沙门氏菌(Salmonella,虽然沙门氏菌血清型超过2200个,但承认的种为数不多,在O抗原的基础上,沙门氏菌血清组(群用字母A、B、C…表示,然后根据它的H抗原(鞭毛抗原再分,用阿拉伯数字1、2、3…等表示,沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病,是肠杆菌科重要的致病菌,如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium可引起动物流产,胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎,这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌(proteus引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌(yersinia引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料每6人一组,每组所需材料:1.普通琼脂斜面培养物2管:分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌(提供实验用菌种;2.普通肉汤2管:分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;3.普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;4.生化试验用培养基2套,包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质,M.R、V.P试验、柠檬酸盐利用,硝酸盐还原试验等;5.三糖铁琼脂斜面培养基2管;6.选择性培养基2个,如:麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板;7.各种生化试验试剂:靛基质试剂,M.R试剂,V.P试剂,硝酸盐还原试剂;8.沙门氏菌因子血清。
肠杆菌科其他菌属的微生物学检验
肠杆菌科其他菌属的微生物学检验肠杆菌科除上述主要对人致病的菌属外，还有克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属等，为条件致病菌，在临床上感染性疾病中较常见。
1 克雷伯菌属克雷伯菌属主要包括肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌等，为条件致病菌，临床上感染性疾病中以肺炎克雷伯菌多见。
肺炎克雷伯菌包括肺炎亚种、臭鼻亚种和鼻硬结亚种。
1.1微生物学检验：克雷伯菌检验程序可按肠杆菌科细菌进行检验。
据不同疾病采集不同标本，如血液、痰、脓汁、尿液、脑脊液、胸水和腹水等。
取痰、脓汁、尿液、脑脊液、胸水、腹水标本，离心后将沉淀物涂片做革兰染色镜检，可见革兰阴性球杆菌，有明显的荚膜。
血液标本或穿刺液标本接种于肉汤培养基增菌培养，其他标本接种于血平板和MAC平板。
35℃孵育18～24 h，取血平板上灰白色大而黏稠的菌落和 MAC上乳糖不发酵型黏液菌落，作进一步鉴定。
菌落性状、形态染色特性符合克雷伯菌的特点，氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性，在KIA试验斜面产酸、底层产酸产气、H2S阴性，MIU试验为－－+／－，V－P试验为阳性，可初步鉴定为克雷伯菌。
然后可进一步进行生化反应鉴定到种和亚种，并结合荚膜肿胀试验进行鉴别。
1.2生物学性状：形态与染色：克雷伯菌为革兰阴性杆菌，卵圆形或球杆状，常成双排列，有菌毛；无芽胞，无鞭毛。
有明显的荚膜，荚膜肿胀试验是本属菌与其他类似菌的主要鉴别方法；培养特性：克雷伯菌兼性厌氧，营养要求不高，在血平板上形成较大凸起、灰白色、不透明、不溶血、黏液型菌落，用接种环挑起时可出现拉丝现象。
在肠道选择培养基上，可发酵乳糖产酸，形成较大的有色黏稠菌落。
在液体培养基中呈混浊型生长，可见菌膜和黏性沉淀物。
生化反应：克雷伯菌IMViC试验结果为－－++，脲酶、ONPG、丙二酸盐、黏质酸盐试验呈阳性。
1.3临床意义克雷伯菌是医院感染中常见的条件致病菌，以肺炎克雷伯菌感染较多见。
肺炎克雷伯菌可引起典型的原发性肺炎，也可引起肺外感染，如肠炎、婴儿脑膜炎、菌血症、泌尿系统感染等。
肠杆菌科鉴定全
（C. rodentium）
塞拉克枸橼酸杆菌 （C. sedlakii）
魏克曼枸橼酸杆菌 （C. werkmanii）
扬哥枸橼酸杆菌
（C. youngae）
吉乐枸橼酸杆菌
（C. gillenii）
穆利枸橼酸杆菌
（C. murliniae）
法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri）
1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别
＋
＋
志贺菌属 －
－
－
大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌
在中国兰平板上为蓝色菌落 在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落 在麦康凯和SS平板上为红色菌落
四
沙
培养特征
门 菌
兼性厌氧菌
属 营养要求不高
菌落呈中等大小、无
色、半透明、光滑
在SS平板上，因产生 H2S可形成黑色中心 的菌落
伤寒沙门菌菌落形态（SS平板）
氏2
溶超 解压
菌 赖氨酸脱
羧酶
++ + --
----- ----
--
属 山梨醇 + - - V VP试验 + + V V +
---++ +++++
++++ +--+
++ ++
七叶苷 + + + V +
++-V+ +V++
++
蜜二糖 + + V V +
靛基质 +
-
-
-
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实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定
课程名称:兽医微生物学实验学时:6学时
一、目的要求
1.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性;
2.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法;
3.掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理;
4.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现;
5.熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景
肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌,运动者周身鞭毛;在普通培养基上生长好;发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气;在麦康凯琼脂上生长;细胞色素氧化酶阴性;还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌(E.coli简称大肠杆菌,作为原发和继发病原可引起多种动物疾病:犊牛的肠道感染和水泻;幼猪的水泻和腹泻,二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病;狗的尿道感染;鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿(Coligranuloma。
沙门氏菌(Salmonella,虽然沙门氏菌血清型超过2200个,但承认的种为数不多,在O抗原的基础上,沙门氏菌血清组(群用字母A、B、C…表示,然后根据它的H抗原(鞭毛抗原再分,用阿拉伯数字1、2、3…等表示,沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病,是肠杆菌科重要的致病菌,如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium可引起动物流产,胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎,这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌(proteus引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌(yersinia引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料
每6人一组,每组所需材料:
1.普通琼脂斜面培养物2管:分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌(提供实验用菌种;
2.普通肉汤2管:分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;
3.普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;
4.生化试验用培养基2套,包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质,M.R、V.P试验、
柠檬酸盐利用,硝酸盐还原试验等;
5.三糖铁琼脂斜面培养基2管;
6.选择性培养基2个,如:麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板;
7.各种生化试验试剂:靛基质试剂,M.R试剂,V.P试剂,硝酸盐还原试剂;
8.沙门氏菌因子血清。
四、操作程序
1.观察大肠杆菌和沙门氏菌在琼脂平板上的菌落特征并作描述;
2.观察大肠杆菌和沙门氏菌肉汤培养物,注意生长表现;
3.从两种菌琼脂平板上挑取菌落涂片作革兰氏染色,注意菌体形态特征和染色特性;
4.用两种菌琼脂斜面培养物分别接种生化试验用的各种培养基以及三糖铁琼脂斜面(先斜面划线再穿刺
接种;
5.用两种菌肉汤培养物在鉴别性培养基平板划线,分别用其1/2面积;
6.将接种的试管和平板以组为单位放人37℃培养箱中培养24-48小时,观察结果;
7.检查并记录大肠杆菌和沙门氏菌糖发酵试验结果及在三糖铁琼脂斜面/底部的生长表现;
8.观察大肠杆菌和沙门氏菌在麦康凯琼脂平板上的菌落表现;
9.沙门氏菌血清群和型的鉴定。
(1分群:取一张洁净玻片,取2满环沙门氏菌多价O血清(A—E群至玻片上,再用接种环挑取疑为
沙门氏菌的纯培养物少许,与玻片上的多价O血清混匀,再稍动玻片,若在2min 内出现凝集现象,即可初步确定该菌为沙门氏菌:同样用生理盐水代替多价血清作一对照,以免由于细菌的自凝而判断错误。
再用代表A群(O2、B群(O4、C1群(O7、C2群(O8、D群(O9与E群(O3的O因子血清作同样的玻片凝集反应,视其被哪一群O因子血清所凝集,则确定被检沙门氏菌为该群。
(2定型:菌群决定后,用该群所含的各种O因子血清和被检菌作玻片凝集反应,以确定其含哪些O抗
原。
同样,用该群H因子血清与被检菌作玻片凝集反应、以确定其H抗原。
根据检出的O抗原和H 抗原列出被检菌的抗原式,查对沙门氏菌的抗原表即可知被检菌为哪种沙门氏菌,譬如某一菌的O 抗原为O1、4、5、12,而H抗原为i:1,2,其抗原结构式为1,4,5,12:i:1,2,查知这个菌为鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimuium。
一般情况下,如不要求定型,只做到定群这一步即可。
在实际工作中,判定被检菌是否为沙门氏菌,应根据被检菌的生化反应和血清学诊断结果结合起来考虑。
凡两者均符合沙门氏菌特性,即确认为沙门氏菌,凡两者中有一项符合沙门氏菌特性者,则可认为是沙门氏菌。
本实验中大肠杆菌与沙门氏菌的区别
肠杆菌科细菌检验程序示意图
五、细菌特性描述菌种
描述其主要生物学特性与生化特性菌落:
革兰氏染色:
菌体形态:
运动性:
葡萄糖乳糖蔗糖麦芽糖
糖发酵
靛基质 M.R V .P 枸橼酸盐利用生化试验
大肠杆菌 (E.coli 三糖铁琼脂斜面(斜面/底部的变化: 菌落:。
革兰氏染色:。
菌体形态:
运动性:。
葡萄糖乳糖蔗糖麦芽糖糖发酵
靛基质 M.R V .P 枸橼酸盐利用生化试验
沙门氏菌 (S.typhimurium
三糖铁琼脂斜面(斜面/底部的变化:
六、问题分析
1、比较大肠杆菌与沙门氏菌形态、染色特征以及在普通肉汤和普通琼脂培养基上的生长表现。
2、大肠杆菌与沙门氏菌主要生化性质有哪些不同?
3、对本试验中的几种生化实验的原理?
4、血清型的分群和定型在肠杆菌科细菌鉴定上有何重要性?
5、大肠杆菌与沙门氏菌在三糖铁琼脂斜面与底部生长表现有何不同?简述原理。
七、成绩评定
1.能认真预习实验内容,教师提问优秀者占总成绩20%。
2.动手能力好、能独立操作且操作正确占总成绩40%。
3.报告清晰、结果正确、并有一般讨论分析占总成绩 30%。
4.讨论分析有参考文献、具有创新意识者占总成绩10%。