微生物检验第十四章 肠杆菌科及检验讲义

第十四章肠杆菌科及检验概述和通性——分类根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。

大多数属于正常菌群（条件致病菌）。

引起腹泻和肠道感染：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属等。

导致院内感染：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属等。

概述和通性——生物学特性形态与结构形态：杆菌。

染色：G-。

特殊结构：多数有周鞭毛，能运动。

志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛。

均不形成芽胞，少数菌属（埃希菌属和克雷伯菌属）可形成荚膜。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：需氧或兼性厌氧。

菌落特征：普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长，并形成中等大小的菌落，湿润光滑。

抗原变异：包括菌落S-R变异和鞭毛H-O变异。

表现为耐药性或生化反应性质的改变。

抵抗力：不强。

加热60℃，30分钟即被杀死。

不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。

对低温有耐受力，能耐胆盐。

概述和通性——微生物检验及鉴定标本采集形态学检查：革兰阴性杆菌。

分离培养：将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离。

克氏双糖铁琼脂（KIA）培养基：葡萄糖/乳糖发酵；产气；硫化氢试验。

动力-吲哚-尿素（MIU）培养基生化反应：①用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌鉴别；②用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群；③选择生化反应进行属种鉴别；④用诊断血清做凝集反应。

埃希菌属——分类包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。

临床最常见的是大肠埃希菌，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群。

埃希菌属——生物学特性形态与结构形态：短杆菌。

染色：G-。

特殊结构：多数有周鞭毛，能运动，有菌毛、荚膜或微荚膜。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：兼性厌氧。

菌落特征：营养琼脂上呈圆形，凸起，边缘整齐，灰白色的光滑型菌落，直径2～3mm，少数菌株产生β-溶血环。

伊红亚甲蓝琼脂上，由于发酵乳糖，菌落呈蓝紫色并有金属光泽。

麦康凯和SS琼脂上，胆盐对其有抑制作用，耐受菌株能生长并形成粉红色菌落。

抗原由菌体抗原（O）、表面抗原（K）和鞭毛抗原（H）三种构成。

埃希菌属——微生物检验及鉴定标本采集：肠道感染采集粪便；肠道外感染可采集中段尿液、血液、脓汁、胆汁、脑脊液、痰、分泌液等。

形态学检查：脓汁及增菌培养物发现单一革兰阴性短杆菌。

分离培养：粪便标本可用弱选择鉴别培养基进行分离，脓汁等可用血平板分离，得到典型菌落。

生化反应：药敏试验：超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）产酶株。

肠道内感染：血清学鉴定、毒素测定或毒力试验。

埃希菌属——致病性及临床意义致病因素：侵袭力、内毒素、肠毒素。

肠道外感染：泌尿系统感染最常见。

还有菌血症，胆囊炎，腹腔脓肿，肺炎、新生儿脑膜炎、伤口感染、腹泻。

内毒素还可引起发热、休克、DIC等。

肠道感染志贺菌属——分类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。

根据生化反应与血清学试验分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。

我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。

志贺菌属——生物学特性形态与结构形态：短小杆菌。

染色：G-。

特殊结构：无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。

培养特性气体环境：需氧或兼性厌氧。

菌落特征：普通琼脂平板和SS培养基上培养18～24h形成中等大小、半透明的光滑型菌落，宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落。

抗原：只有O抗原无鞭毛（H）抗原，个别菌型及新分离菌株有K抗原。

O抗原分群特异性抗原和型特异性抗原两类。

根据抗原构造可将志贺菌分为四个血清群，40余种血清型（包括亚型）。

加热100℃、60min可破坏K抗原。

志贺菌属——微生物检验及鉴定标本采集：发病早期及治疗前采集新鲜粪便（脓血便或黏液便）。

形态学检查：革兰阴性短小杆菌。

分离培养：同时接种强弱选择性不同的两个平板。

强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基（SS）；弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。

志贺菌属——微生物检验及鉴定生化反应：志贺菌属——微生物检验及鉴定鉴别反应志贺菌属——致病性及临床意义致病因素：侵袭力、内毒素及外毒素（A群产生志贺毒素，具有细胞毒素、肠毒素、神经毒素）。

所致疾病：1.急性菌痢。

2.慢性菌痢：人-人传播，可引起暴发流行。

3.中毒性菌痢：小儿多见。

4.一般不入血，不引起败血症。

形态与结构形态：直杆菌。

染色：G-。

特殊结构：无芽胞、无荚膜；大多有周身鞭毛，能运动；多数有菌毛。

沙门菌属——生物学特性培养特性营养要求：不高。

气体环境：兼性厌氧。

温度环境：35～37℃。

菌落特征：SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上35～37℃24h可形成直径约2～4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。

产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心菌落。

抗原：沙门菌属——微生物检验及鉴定标本采集：肠热症的第一、二周采血液，第二、三周采粪便与尿液。

食物中毒采集食物与粪便。

整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。

形态学检查：革兰阴性直杆菌。

分离培养：粪便直接接种于SS和麦康凯平板上。

血液和骨髓：增菌后移种到血平板和肠道菌鉴别培养基。

尿液：经硫磺酸盐肉汤增菌后，再接种于肠道菌选择培养基或血平板上进行分离培养。

沙门菌属——微生物检验及鉴定生化反应：血清学诊断：肥达试验：用已知的伤寒沙门菌O、H抗原，检测患者血清中抗体的含量。

诊断伤寒：O凝集效价≥1:80，H凝集效价≥1:160。

沙门菌属——致病性及临床意义形态与结构形态：两端钝圆，有明显的多形性，呈球状或丝状。

染色：G-。

特殊结构：无芽胞，无荚膜；有周身鞭毛，运动活泼。

变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属——生物学特性培养特性营养要求：一般。

气体环境：兼性厌氧。

温度环境：10～43℃。

菌落特征：营养琼脂或血琼脂平板：变形杆菌大多数呈迁徙扩散生长（苯酚、硼酸、胆盐可抑制）。

含有胆盐的培养基：菌落扁平、圆形、半透明。

肠道菌选择培养基：形成不发酵乳糖菌落。

SS培养基：常形成黑色中心菌落。

抗原变形杆菌属细菌具O抗原及H抗原。

外-斐（Weil-Felix）反应：普通变形杆菌的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，这就是用以诊断某些立克次体病的依据。

变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属——微生物检验及鉴定标本采集：尿液、脓汁、伤口分泌物及婴儿粪便等。

形态学检查：革兰阴性杆菌，多形性。

分离培养：血琼脂平板、麦康凯或伊红亚甲蓝琼脂平板、SS琼脂平板孵育35～37℃18～24h。

变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长，在SS琼脂上常为有黑色中心的菌落。

变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属——微生物检验及鉴定生化反应变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属——致病性及临床意义克雷伯菌属——分类共有7个种，引起的医院感染日见增多。

肺炎克雷伯菌最为多见；产酸克雷伯菌次之。

克雷伯菌属——生物学特性形态与结构形态：卵圆形或球杆状；培养物菌体较长，可呈多形性或丝状。

排列：成双排列。

染色：G-。

特殊结构：有明显荚膜，无鞭毛，无芽胞。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：兼性厌氧。

菌落特征：血琼脂上，35℃培养24h，形成3～4mm圆形，凸起，灰白色，不溶血的菌落。

有时菌落呈现黏液型，用接种环挑取时呈长丝状。

肠道菌选择培养基中为乳糖产酸菌落。

克雷伯菌属——微生物检验及鉴定标本采集：肠炎患者采集粪便，败血症者采集血液。

形态学检查：带有荚膜的革兰阴性球杆菌。

无芽胞，无鞭毛。

分离培养：粪便标本接种于肠道选择鉴别培养基，血液标本先增菌后接种血平板，经35℃培养16～24h，取肠道选择鉴别培养基上乳糖发酵的黏性菌落或血琼脂上灰白色大而黏的菌落。

克雷伯菌属——微生物检验及鉴定生化反应克雷伯菌属——致病性及临床意义耶尔森菌属——分类包括11个种，其中鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌与人类致病有关。

耶尔森菌属——生物学特性形态与结构鼠疫耶尔森菌耶尔森菌属——生物学特性培养特性耶尔森菌属——微生物检验及鉴定生化反应耶尔森菌属——致病性及临床意义沙雷菌属——分类包括黏质沙雷菌、液化沙雷菌、深红沙雷菌、普城沙雷菌、臭味沙雷菌、虫媒沙雷菌及无花果沙雷菌。

广泛分布于自然界，是水和土壤中常居菌群，也是重要的条件致病菌。

沙雷菌属——生物学特性形态与结构形态：细小杆菌（体积最小的细菌）。

染色：G-。

特殊结构：有周鞭毛，能运动；部分有微荚膜，无芽胞。

沙雷菌属——生物学特性培养特性营养要求：不高。

气体环境：兼性厌氧。

菌落特征：在4%氯化钠条件下可生长。

普通营养琼脂：呈白色、红色或粉红色菌落，直径1.5～2.0mm。

产生两种色素：灵菌红素（非水溶性）和吡羧酸（水溶性）。

沙雷菌属——微生物检验及鉴定生化反应沙雷菌属——致病性及临床意义黏质沙雷菌可导致呼吸道与泌尿道感染。

液化沙雷菌是条件致病菌，主要引起呼吸道感染。

肠杆菌属——分类包括阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、聚团肠杆菌、日勾维肠杆菌、坂崎肠杆菌、中间型肠杆菌及河生肠杆菌等11个种。

肠杆菌属——生物学特性形态与结构形态：短而粗的杆菌。

染色：G-。

特殊结构：有周鞭毛，能运动，部分有荚膜，无芽胞。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：兼性厌氧。

温度环境：30℃。

菌落特征：普通琼脂：形成大而湿润的黏液状菌落。

血琼脂板：不溶血。

肠道菌选择培养基：多数形成乳糖发酵菌落。

液体培养基：均匀浑浊，表面有薄膜，管底有黏稠性沉淀物。

肠杆菌属——微生物检验及鉴定生化反应肠杆菌属——致病性及临床意义阴沟、产气、聚团、日勾维等肠杆菌常导致条件致病，引起呼吸道、泌尿生殖道感染，亦可引起菌血症，引起新生儿脑膜炎。

枸橼酸杆菌属——分类包括弗劳地枸橼酸杆菌、异型枸橼酸杆菌和无丙二酸盐枸橼酸杆菌三个种。

广泛分布在自然界，属正常菌群成员。

枸橼酸杆菌属——生物学特性形态与结构形态：直杆状。

排列：单个或成对排列。

染色：G-。

特殊结构：无荚膜，无芽胞，具有周鞭毛，有动力。

培养特性营养要求：不高。

气体环境：兼性厌氧。

菌落特征：血液琼脂：灰色或白色菌落，隆起，边缘整齐，直径2～4mm，不溶血。

肠道选择培养基：大多数菌株发酵乳糖。

液体培养基：浑浊生长。

枸橼酸杆菌属——致病性及临床意义条件致病菌，常在一些慢性疾病如白血病、自身免疫性疾病或医疗插管术后的泌尿道、呼吸道中检出，可引起败血症、脑膜炎、骨髓炎、中耳炎和心内膜炎等。

哈夫尼亚菌属生物学特性：革兰阴性周毛菌，30℃培养长出周鞭毛，能运动，无荚膜，无芽胞，兼性厌氧，普通营养琼脂培养基上易生长。

致病性：条件致病菌，偶可致泌尿道、呼吸道感染、小儿化脓性脑膜炎与败血症。

爱德华菌属生物学特性：革兰阴性周毛菌，兼性厌氧，在普通琼脂上易生长，菌落较小。

致病性：罕见条件致病菌。

迟缓爱德华菌可导致肠道外感染。

泛菌属生物学特性：革兰阴性粗短杆菌，有周边毛，能运动；无荚膜和芽胞。