醌类化合物的提取分离实例

研究超声波技术对大黄中蒽醌类成分提取率的影 响,并与传统提取方法做比较. 方法:以超声波强化提取法为试验组,以常规煎煮 法及乙醇回流法对对照组,进行平行试验. 结果:以水为提取溶剂,采用超声波强化提取10 min对游离蒽醌的提取率即与水煎煮法煎煮60 min 提取效果相当;以乙醇为提取溶剂的提取效果明显 好于水,几种方法相比较,以乙醇作为提取溶剂超 声波萃取法对大黄蒽醌的提取效果最好. 结论:超声波法提取大黄蒽醌类成分具有提取效率 高、操作简便、省时等优点,值得推广应用.
实例：硅胶柱色谱法分离大黄酚、大黄素-6-甲醚
装柱：用石油醚－乙酸乙酯（ 9.8:0.2 ）浸 泡200～300目硅胶约20 g，搅拌均匀，尽量赶出气泡。 一次性倒入 1.8 cm X 28 cm 的层析柱中，轻轻敲打 使硅胶均匀下沉，至硅胶界面不再下降为止。 上样：将离大黄酚和大黄素 -6- 甲醚的混合 物用乙醇加热溶解，伴入少量硅胶，水浴60℃左右烘 干，加到已装好的硅胶柱顶端，最后在样品带上盖上 一层硅胶或棉花，以保护样品界面不受干扰。 洗 脱 ： 先 用 100 ml 石 油 醚 － 乙 酸 乙 酯 （ 9.8:0.2 ）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换 用 100 ml 石油醚－乙酸乙酯（ 9.5:0.5 ）洗脱下第二 条色带。
（一）从大黄中提取分离羟基蒽醌类还可采用下列方法 用80%乙醇室温渗漉提取，回收溶剂，得浸膏后依 次以石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取，得到的石油醚部 分和三氯甲烷部分再分别上硅胶色谱柱以石油醚-乙酸乙 酯（95∶5）和（90∶10）洗脱，分离得到大黄素甲醚、 大黄酚及大黄素、芦荟大黄素单体。工艺流程如下：
黄色物质 黄色物质 蒸干石油醚， 蒸干石油醚， 甲醇重结晶 甲醇重结晶 大黄酚 大黄素6-甲醚
流程说明： 决明子蒽醌可用干柱色谱 予以分离。 决明子用氯仿和20%H2SO4 提取后，合并氯仿提取液 ，浓缩，然后拌在少量磷 酸氢钙上，把它加在预 先装好的磷酸氢钙（干装 ）上。用苯洗脱，先在柱 上出现5个色带，继续用苯 洗脱，分别收集各色带的 洗脱液分别进行处理。
铅盐法：
中药粉 提取液
90%乙醇加热提取
浓缩
浓缩液
氯仿（或乙醚、苯）萃取
氯仿液 （游离蒽醌）来自百度文库沉淀
水层
加醋酸铅溶液，过滤
滤液 沉淀（Pb2S）
水洗，悬浮于水中，通H2S脱铅过滤
蒽醌苷
滤液
蒽醌苷/ H2O 醋酸铅 滤液 沉淀（蒽醌苷+醋酸铅） 加水； 通入硫化氢气 体使沉淀分解 硫化铅 蒽醌苷 / H2O 放置 苷类析出
5.微波提取法



优选微波技术提取大黄游离蒽醌的工艺。 方法：先采用单因素考察,然后采用正交试验法考 察微波输出功率、乙醇浓度、浸出时间、料液比4 个因素对提取率的影响,优选大黄游离蒽醌的最佳 浸出方案。 结果：采用70%乙醇溶液在微波输出功率中高火, 用70%乙醇,料液比为1∶8,提取5 min,提取2次,大 黄游离蒽醌提取率为1.31%,相对提取率达到 88.52%。 结论：用微波浸提法提取大黄中的蒽醌类成分效 率高、操作简便、省时。
五、应用举例 实例 番泻叶中蒽醌类化学成分的 提取分离技术
番泻苷A不溶于水、 苯、乙醚或氯仿， 难溶于甲醇、乙 醇或丙酮，，但 在与水相混的有 机溶剂中的溶解 度随含水量的增 加而增大，溶剂 中含水量达30%时 溶解度最大。 采用大孔吸附 树脂法进行分离。
2、羟基蒽醌的酸性差别不大时，采用色谱方 法，可得到彻底分离。 PH梯度萃取法对蒽衍生物进行初步分离，对 性质相似，酸性强弱相差不大的羟基蒽醌类则不 能很好分离，故初分后再结合色谱法进一步分离。 多用硅胶为吸附剂，有时也用聚酰胺，不宜 用氧化铝，尤其是碱性氧化铝，因为羟基蒽醌能 与氧化铝形成牢固螯合物，难以洗脱。
游离醌类化合物的分 离
分离方法
1、羟基蒽醌的酸性差别很大时，采用PH梯度萃取法。
由于蒽醌羟基位置、数目及羧基的有无，其酸度 大小是有区别的，可分别溶于不同碱性的水液，故可 采用梯度PH萃取法。此法为分离游离蒽醌衍生物的经 典方法，也为常用方法。 5%NaHCO3液 → 含-COOH及两个以上β -酚OH 5%Na2CO3液 → 含一个β -酚OH蒽醌类 1%NaOH液 → 含两个a-酚OH蒽醌类 5% NaOH液 → 含一个a-酚OH蒽醌类
大黄 乙醇微波辅助提取540min 提取液 减压回收溶剂 浸膏（总蒽醌）
3. PH梯度萃取法对蒽衍生物进行初步分离，对性质 相似，酸性强弱相差不大的羟基蒽醌类则不能很好 分离，故初分后再结合层析法进一步分离。 多用吸附柱层析，以硅胶、磷酸氢钙、聚酰胺粉为 吸附剂，不宜用氧化铝，尤其是碱性氧化铝，因为 羟基蒽醌能与氧化铝形成牢固螯合物，难以洗脱。
醌类化合物的提取
提取方法
1.水蒸气蒸馏法

适用于小分子的游离醌类化合物的提取， 由于其具有挥发性，可随水蒸气馏出，故 可用此法提取，如白雪花中蓝雪醌的提取。
实例
白雪花粗粉 │加水浸泡 │水蒸气蒸馏 ↓ 馏出液 │放置 ↓ 结晶 │抽滤 ↓ 结晶 │甲醇重结晶 ↓ 蓝雪醌（mp：75～76℃）
2.有机溶剂提取法
洗脱部分（9:1） 洗脱部分（85:15）
结晶Ⅲ 第120～122份 第132～135份 反相柱色谱 硅胶柱色谱 甲醇-水 氯仿-甲醇 梯度洗脱 梯度洗脱 洗脱部分（7:3） 结晶Ⅴ
流程说明： 采用溶剂提取法进行提取，系统溶 剂法进行粗分，得到不同极性部分。对各 极性部分应用色谱法如硅胶色谱法、反相 柱色谱法进行分离。
补充实例 用不同浓度的乙醇回流提取茜草粗粉，得到浸膏采用不同极性溶剂萃 取，再使用色谱法分离。茜草中主要化学成分提取分离方法：
茜草根粗粉 95%乙醇回流提取 乙醇提取液 回收乙醇 浸膏 依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取
石油醚层
氯仿层 乙酸乙酯层 回收溶剂 回收溶剂 浸膏 浸膏 硅胶柱色谱 硅胶柱色谱 氯仿-乙酸乙酯 氯仿-丙酮 梯度洗脱 梯度洗脱 洗脱部分（10:1） 梯度洗脱 洗脱部分（3:1） 结晶Ⅰ 结晶Ⅱ
实例
大黄药材粗粉 70 ％甲醇提取 提 取 液
LH-20 葡聚糖凝胶柱色谱 70 ％甲醇洗脱
3.碱提酸沉法



适用于具有酚羟基的醌类化合物，由于其 可溶于碱液，加酸后又沉淀出。 1、用于提取带游离酚羟基的醌类化合物。 2、利用酚羟基与碱成盐溶于碱水中，酸化 后沉淀析出。
4.超声提取法

结晶Ⅳ
实例
（一）从决明子中提取分离蒽醌类化合物还可采用下列方 法
决明子药材
工艺一：
药渣
8倍量水提取3次，过滤
滤液
WDL树脂吸附，先用水冲洗至无色， 再用70%乙醇洗至无色，回收乙醇
浸膏 硅胶柱层析，氯仿-甲醇-水洗脱， 结合硅胶H干柱层析 大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素 橙钝新素、大黄素甲醚-8-β-D-吡喃葡萄糖苷
萱草根乙醇提取浓缩液 乙醚 残渣(蒽苷类) 乙醚液(游离蒽醌苷元) 5% NaHCO 3 乙醚层 5%Na2CO3 萃取 水溶液 酸化
OH O
萃取 水溶液 HCl 酸化
乙醚液 1% NaOH 萃取
橙红色沉淀 EtOH-Py 重结晶 浅黄色沉淀沉淀 （大黄酸）
O COOH OH O OH
OMe OH
黄色沉淀
CH 3（决明蒽醌） O
乙醚液 浓缩
NaOH 液 酸 化 金黄色结晶
OH O OH
橙黄色结晶 （决明蒽醌甲醚）
OH O
乙醚液 （含β-谷甾醇）
(大黄酚)
CH 3 O
OMe OMe
CH 3
O
实例
大黄中蒽醌类化学成分的提 取分离技术
根据大黄中 的羟基蒽醌苷 经酸水解成游 离苷元，苷元 可溶于氯仿而 被提出的原理。 再利用各羟基 蒽醌类化合物 酸性不同，采 用pH梯度萃取 法分离而得各 单体苷元。
实例：建立了同时测定化妆品中蒽醌类含量 的HPLC法，以评价化妆品的美容功效。采用 甲醇超声提取，HPLC法分离测定。结果为3 种被测物在11min内均得到良好的分离。在 1μ g／mL-250μ g／mL均与其各自对应的峰 面积呈良好线性关系（R〉0．9997）。在添 加质量浓度为0．5μ g／mL～5．0μ g／mL， 回收率在92．0％-102．5％，精密度RSD 〈2．1％，最低检出限（S／N=3）为芦荟苷 0．5160μ g／mL，芦荟大黄素0．0864μ g／ mL，大黄酚0．1016μ g／mL。该法简便、快 速、准确，可用于化妆品中蒽醌类含量的检 测。
实例：建立了以苯酚为原料合成对苯二酚过 程中各物质的高效液相色谱(HPLC)及气相色 谱(GC)分析方法。HPLC 方法采用 Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,10μ m),流动相 组成:V(甲醇):V(水):V(改性 剂)=20:80:0.15,流动相流速为1.0 mL/min, 定量环进样20μ L,Prostar 紫外检测器检测 波长为254 nm,实现了对低含量对苯二酚、 对苯醌、邻苯二酚及苯酚4种物质的分离测 定;同时,采用氢火焰离子化检测器对上述4 种物质在较高浓度下进行了 GC 分析,测定 快速准确。
生大黄 80%乙醇室温渗漉提取 回收溶剂，得浸膏 依次以石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取
石油醚部分
三氯甲烷部分
乙酸乙酯部分
水相
石油醚、乙酸乙酯梯度洗脱
95∶5
大黄素甲醚、大黄酚
90∶10
大黄素、芦荟大黄素
（二）从大黄中提取分离总蒽醌类可采用下列方法 工艺一： 工艺二：
大黄 水煎煮3次（1.5倍量，20分钟） 提取液 通过大孔吸附树脂，70乙醇洗脱 洗脱液 回收溶剂 总蒽醌
决明子 氯仿和20%硫酸提取3次 氯仿提取物 浓缩，拌样，上磷酸氢钙柱，苯洗脱
实例
第五条色带 蒸干苯
第一条色带 蒸干苯 黄色物质
第二条色带 第三条色带 蒸干苯 蒸干苯
第四条色带 蒸干苯
针状结晶 长针状结晶 针状结晶 针状结晶 磷酸氢钙 甲醇重结晶 乙醇重结晶 甲醇重结晶 乙醇重结晶 柱层析， 钝新素 黄钝新素 橙钝新素 石油醚洗脱 钝叶素
蒽醌苷类的分离

由于蒽醌苷类水溶性较强，分离精制较困 难，故现多需进行预处理。 溶剂法是用中等极性的有机溶剂如乙酸乙 酯、正丁醇等，从除去游离蒽醌衍生物的 水溶液中，将蒽醌苷萃取出来，再作进一 步分离。
溶剂法：
虎杖浸膏的水溶液
氯仿回流
氯仿液
（含大黄素等 游离蒽醌脂溶成分）
水液 EtOAc萃取 EtOAc液 （含大黄素苷等 蒽醌苷极性成分）
工艺二：
决明子粗粉 95%乙醇回流提取3次，每次1h，减压回收 浸膏 加水混悬，石油醚脱脂后正丁醇萃取
水相
正丁醇相 聚酰胺柱层析，乙醇-水梯度洗脱 洗脱液 反复TsgelHW-40柱层析 2-甲氧基大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 4,6.7-三甲氧基芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 大黄素-6- O-β-龙胆二糖苷
正丁醇层
水层
回收溶剂 浸膏 硅胶柱色谱 氯仿-甲醇 梯度洗脱
结晶Ⅰ：1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌 结晶Ⅱ：1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-βD-吡喃葡萄糖苷 结晶Ⅲ：1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-βD-吡喃木糖（1→2）-β-（6’-O-乙 酰基）吡喃葡萄糖苷 结晶Ⅳ：1,2-二羟基蒽醌-2-O-β-D-吡喃木 糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷 结晶Ⅴ：1,3-二羟基-2-羟甲基蒽醌-3-O-βD-吡喃木糖（1→6）-β-D-吡喃葡 萄糖苷


常用甲醇或乙醇提取，可将不同极性或类 型的醌类成分都提取出来，得到总醌类再 进行分离。 1、用于提取苷元（游离醌类）。 2、可用苯、氯仿等极性较小的溶剂提取。
实例：
大黄中总蒽醌成分的提取
大黄粗粉100g
置1000ml 圆底烧瓶中，加入95%乙醇250ml， 回流提取2hr，趁热抽滤
醇液
药渣
加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr， 趁热抽滤
醇液
药渣
乙醇提取液
静置冷却，抽滤
滤液
减压回收乙醇至糖浆状，将浓 缩物转移至250ml三角瓶中
乙醇总提物
放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20′将 乙醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
乙醚层
浸膏
乙醚总提液