醌类化合物的提取分离实例
【资料】醌类化合物的提取分离课件见403汇编
例如：萱草提取物中主要含有下面4种化合物。
OH O
OCH3 OCH3
OH O OH
CH3
OA
CH3 O
B
OH O
OCH3 OHBiblioteka OH O OHCH3
O
C
COOH
O
D
采用pH梯度萃取法对其进行分离的流程如下：
萱草根
乙醇浸膏
乙醚
乙醚溶液
5%NaHCO3
不溶物
NaHCO3液
例如: 用Sephadex LH-20分离大黄蒽醌, 以70%甲醇提取液
加样, 并用70%甲醇洗脱, 分段收集, 依次得到二蒽酮苷, 蒽 醌二葡萄糖苷, 蒽醌单糖苷, 游离苷元.
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H+， 重结晶
（D）
乙醚液
5%Na2CO3
Na2CO3液
乙醚液
1%NaOH
（C）
NaOH液 （B）
乙醚液
重结晶
（A）
2. 溶剂萃取法 提取物水溶液，分别用氯仿和正丁醇萃取，游离蒽醌
在氯仿层，苷在正丁醇层中，将它们分开。
3. 色谱法 硅胶（一般不用氧化铝，特别是碱性氧化铝） 聚酰胺 葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)
何首乌蒽醌类提取和分离
何首乌蒽醌类化学成分的提取和鉴别何首乌是常用补益中药, 来源于蓼科植物何首乌的干燥块根。
中医药认为, 何首乌味苦、涩, 性温。
归肝、心、肾经。
生用解毒消痈, 润肠通便; 制用补肝肾, 益精血, 乌须发, 强筋骨。
含游离蒽醌类衍生物约1.1%，大部分与葡萄糖结合成苷现代研究表明, 何首乌具有降血脂、延缓动脉粥样硬化、抗衰老、提高免疫力、益智等作用。
（王文静, 薛咏梅,等.何首乌的化学成分和药理作用研究进展[ J ].云南中医学院报，2007，1000—2723）,何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflo-rumThunb.的干燥块根,为常用中药。
现代研究发现何首乌含有二苯乙烯苷类、蒽醌类、黄酮类等多种成分[1],具有抗衰老、增强免疫力、抗菌、调血脂等多方面的药理作用[2]。
我国植物资源丰富,分布于东北、中南、华东、西南各省。
国内外学者对四川和广东产的何首乌进行了较多的研究,为了更好的开发和利用植物资源,进一步寻找活性成分,笔者对采自泰山的何首乌化学成分进行了系统的研究,从中得到9个蒽醌类化合物,分别鉴定为大黄素(emodin,Ⅰ)、大黄素甲醚(physcion,Ⅱ)、拟石黄衣醇(迷人醇,fallacinol,Ⅲ)、大黄素-8-甲醚(questin,Ⅳ)、桔红青霉素(emodin-6,8-dimethylether,Ⅴ)、ω-羟基大黄素(citreorosein,Ⅵ)、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucopyranoisde,Ⅶ)、大黄素-8-O-(6′-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷[emodin-8-O-(6′-O-acetyl)-β-D-glucopyranoside,Ⅷ]和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(physcion-8-O-β-D-glucopyranoside,Ⅸ)。
化合物Ⅴ为首次从该科植物中分得,化合物Ⅲ和Ⅷ为首次从该种植物中分得。
实验二虎杖中蒽醌类成分的提取
5%NaHCO3萃取2次，每次40ml
水层（紫红色）乙醚层
HClpH=25%Na2CO3萃取数次，每次40ml
大黄酸沉淀（粗品）
水层（红色）乙醚层
HClpH=22% NaOH萃取2次，每次40ml
大黄素沉淀（粗品）水层（红色）
HClpH=2
大黄酚和大黄素甲醚
七、实验结果
八、实验讨论
九、思考题
一、思考题
（2）中等酸性成分——大黄素的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液（测5%碳酸钠水溶液的pH值）萃取5～9次，每次40ml，直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液，小心加盐酸调pH2，放置，抽滤，水洗沉淀至中性，抽干，干燥称重。计算得率。
（3）弱酸性成分——大黄酚和大黄素甲醚混合物的提取将Na2CO3提取过的乙醚液，用2%的NaOH水溶液萃取，每次40ml，萃取2次，合并碱液，滴加20%的HCl调pH1-2，放置沉淀、抽滤、水洗、干燥称重，得大黄酚和大黄素甲醚混合物。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
四、实验内容
1.亲脂性成分——羟基蒽醌类的提取和分离
2.羟基蒽醌类的鉴定
（1）显色反应
① Borntrager’s反应；
8．β-谷甾醇
9．鞣质：属缩合鞣质，可溶于醇及水，不溶于苯、乙醚、氯仿等。
10、其他虎杖中还含有少量大黄素-8-葡萄糖苷、甾醇等。
结构：
大黄素R=OH二苯乙烯衍生物
大黄酚R=H
大黄素甲醚R=OCH3
白黎芦醇R=H
白黎芦醇R=C3H11O5
虎杖中醌类物质的提取分离与鉴定
虎杖中蒽醌类物质的提取、分离及鉴定（吕培银）【药物简介】虎杖，又名阴阳莲、斑杖、苦杖、酸汤杆等。
可在春、秋两个季节采挖，除去须根，洗净后，趁鲜切短段或厚片，晒干。
微苦，微寒。
归肝、胆、肺经。
利湿退黄，清热解毒散瘀止痛，止咳化痰。
用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，癥瘕，跌打损伤，肺热咳嗽。
虎杖中主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类、香豆素类以及一些脂肪酸类化合物。
药理作用包括抗炎、抗病毒、抗菌、调血脂、抗血栓、改变血流变、扩张血管、保护心肌、抗氧化、抗肿瘤，改善阿尔茨海默症及预防艾滋病等。
【实验目的】一、学会撰写实验方案。
二、掌握中药材有效成分回流提取的方法和操作。
三、掌握pH梯度萃取法分离不同酸度游离羟基蒽醌的原理和操作。
四、掌握硅胶柱层析的操作方法。
五、掌握羟基蒽醌的理化检识和薄层检识方法。
【实验原理】羟基蒽醌类化合物及二苯乙烯类成分均可溶于乙醇，所以可以采用乙醇回流提取法，利用羟基蒽醌类苷元与苷的溶解度差异可以用乙醚捏溶的方法分离游离的蒽醌衍生物苷元和蒽醌苷类。
根据游离羟基蒽醌类化合物含有酚羟基数目和位置不同，不同表现出酸性强弱不同，利用梯度pH萃取法分离不同酸性强弱的有蒽醌衍生物。
硅胶吸附柱色谱法的原理是物质的吸附性具有差别，属于物理吸附。
碱梯度萃取虎杖中主要蒽醌的方法，优点是简单快捷，但很难提取到单一的蒽醌，往往夹带有酸性接近的蒽醌，要通过多次重结晶或色谱再分离，才能获得单一蒽醌，收率低。
柱色谱法虽然能分离到单一蒽醌，但是该法耗时间费溶剂，难以形成规模生产。
【1】化学检识的原理是羟基蒽醌类在碱性溶液中发生颜色改变，会使颜色加深，多呈橙、红、紫红色以及蓝色。
该显色反应与形成共轭体系的酚羟基和羰基有关。
【实验用品】实验材料：虎杖（100g）、95%的乙醇、乙醚、5%NaHCO3溶液、5%Na2CO3溶液、2%NaOH溶液、硅胶、石油醚、乙酸乙酯、MgAc2乙醇溶液。
醌类化合物的提取分离
（一）游离羟基蒽醌的分离 1、羟基蒽醌的酸性差别很大时，采用PH梯 、羟基蒽醌的酸性差别很大时，采用PH梯 度萃取法。 由于蒽醌羟基位置、数目及羧基的有无， 其酸度大小是有区别的，可分别溶于不同碱 性的水液，故可采用梯度PH萃取法。此法为 性的水液，故可采用梯度PH萃取法。此法为 分离游离蒽醌衍生物的经典方法，也为常用 方法。
实例
大黄 药材 粗粉 70％ 70 ％ 甲醇 提取 提 取 液 LHLH - 20 葡 聚糖 凝胶 柱色 谱 70％ 70 ％ 甲醇 洗脱 分 段收 集 二蒽 酮苷 (sennoside A~D) 分子 量由 大至 小依 次洗 脱 蒽醌 二葡 萄糖 苷 蒽醌 单糖 苷 游离 苷元
5%NaHCO3液 5%NaHCO3液 → 含-COOH及两个以上β-酚OH COOH及两个以上 及两个以上β 5%Na2CO3液 5%Na2CO3液 → 含一个β-酚OH蒽醌类 含一个β OH蒽醌类 1%NaOH液 含两个a OH蒽醌类 1%NaOH液 → 含两个a-酚OH蒽醌类 NaOH液 含一个a OH蒽醌类 5% NaOH液 → 含一个a-酚OH蒽醌类
（一）有机溶剂提取法 1、用于提取苷元（游离醌类）。 2、可用苯、氯仿等极性较小的溶剂提取。 （二）碱提酸沉法 1、用于提取带游离酚羟基的醌类化合物。 、用于提取带游离酚羟基的醌类化合物。 2、利用酚羟基与碱成盐溶于碱水中，酸化后 沉淀析出。 （三）水蒸气蒸馏法 适用于分子量小的苯醌及萘醌类化合物 适用于分子量小的苯醌及萘醌类化合物 （四）其它方法 超临界流体萃取法、超声波提取法等， 既提高蒽醌苷类的分离 常用色谱法。 这类成分水溶性强，分离及精制工 作都较为困难，色谱前用铅盐法或溶剂 法处理，除去大部分杂质，得较纯总苷 后，再进一步用色谱反复分离。
实验五大黄中游离蒽醌的提取
实验五⼤黄中游离蒽醌的提取实验五⼤黄中游离蒽醌的提取、分离与检识⼤黄为寥科植物掌叶⼤黄（Rheum Palmatum L.），药⽤⼤黄（R. offIcinale Beill ）和唐古特⼤黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf ）的根及根茎。
是泻下、健胃、清热、解毒的常⽤中药。
⼤黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以甙的形式存在，总含量为 2 ~5%，⼤黄中主要的羟基蒽醌类化合物有⼤黄酚(1)、⼤黄素(2)、⼤黄酸(3)、⼤黄素甲醚(4)、芦荟⼤黄素(5)及其甙类。
OH O OH R 2R 1R 1 R 2H CH 3OH CH 3H COOHOCH 3 CH 3H CH 2OH ′⼤黄酚⼤黄素⼤黄酸⼤黄素甲醚芦荟⼤黄素⼤黄酚（Chrysophanol ）为⾦黄⾊⽚状结晶（⼄醇或苯），mp.196-197 ℃，能升华，可溶于丙酮、⼄醚、氯仿、甲醇、⼄醇、热苯和氢氧化钠⽔溶液，微溶于⽯油醚、⼄醚，不溶于⽔、碳酸钠和碳酸氢钠⽔溶液。
⼤黄素（Emodin ）为橙黄⾊针状结晶（⼄醇或冰醋酸），mp.256—257℃，能升华，易溶于稀氨⽔、碳酸钠和氢氧化钠⽔溶液，可溶于⼄醇、丙酮，在⼄醚、氯仿、苯、四氯化碳、⼆硫化碳等溶剂中溶解度较⼩，⼏乎不溶于⽔。
⼤黄酸（Rheine ）为黄⾊针状结晶（升华法），mp.321－322℃，330℃分解，易溶于碱⽔液、吡啶，微溶于⼄醇、丙酮、⼄醚、氯仿、苯、⽯油醚。
⼏乎不溶于⽔。
⼤黄素甲醚（Physcion ）砖红⾊针状结晶（苯），mp.203-207 ℃，能升华，溶解性质与⼤黄酚相似。
芦荟⼤黄素（Aioeemodin ）为橙黄⾊针状结晶（甲苯），mp.223-224 ℃，能升华，可溶于⼄醚、热⼄醇、苯、稀氨⽔、碳酸钠和氢氧化钠⽔溶液。
羟基蒽醌甙有⼤黄素甲醚葡萄糖甙，⼤黄素葡萄甙，⼤黄酸葡萄糖甙, ⼤黄酚葡萄糖甙，⼤黄素-1-O-B-D-葡萄糖甙，芦荟⼤黄素-ω-O-B-D-葡萄糖甙。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
陈羽迪2012332870002 12生物制药（1 ）大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定实验报告一、实验目的1．掌握蒽醌苷元的提取方法—双相酸水解法。
2．掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法。
3．掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法。
二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H1.提取原理双相酸水解法，为一相为与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双相酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
醌类化合物的提取分离
MeO
OMe O
OMe
(二)、乙酰化反应
1、常用的乙酰化试剂及乙酰化能力强弱顺序 乙酰氯 > 醋酐 > 酯 > 冰醋酸
2、不同羟基乙酰化反应的活性顺序： R-OH > -OH（酚）> -OH（酚）
3、常用催化剂及催化能力： 吡啶 > 浓硫酸
例：曲菌素的乙酰化反应
OH O
HO OH O
HOAc 少量乙酰氯
O
-
[H]
+ 2HCHO + 2OH
醛类 碱
O
氧化剂 还原剂 催化剂
OH
+ 2HCOO-
氢醌
OH
OH
NO2
[O]
+
NO2
OH-
OH
邻二硝基苯
三、蒽醌苷与游离蒽醌衍生物的分离
1、蒽醌苷元与其苷类常常共同存在 ２、苷及苷元多通过酚羟基或-COOH结合成Mg+ 、K+、Na+、Ca++盐形式存在,必须预先加酸进行 酸化使之全部游离
药材 HOAc 湿润、风 干；氯仿 提
药渣
CHCl3
95%EtOH 提 （ 苷元及 游离蒽醌）
药渣
EtOH
5%KOH； 过滤（ 无机盐不溶于乙醇溶液）
沉淀 重结晶
结晶
母液
（含-COOH的 羟基蒽醌类）
乙 醚液 5%Na2CO3
Na2CO3提取液
乙 醚液
酸化
1%NaOH
沉淀
重 结晶 晶体
Na%NaOH
羟基蒽醌类）
沉淀 重 结 晶 残留 物
NaOH 溶 液
酸化
晶体
沉淀
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定大黄种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumPalmatum.L ）、 大黄R.officinale Baill ）及唐古特大黄（R.tanguticum Maxiim et Regll ）的根茎及根。
蒽醌类化合物在植物体内主要以苷的形式存在，其中有大黄酸-葡萄糖苷；大黄素甲醚-葡萄糖苷；芦荟大黄素-葡萄糖苷；大黄素-葡萄糖苷；大黄酸双葡萄糖苷等。
此外尚含鞣质类成分如葡萄糖没食子鞣质，儿茶鞣质、没食子酸等。
大黄中还含有属于双蒽酮的番泻苷A 及番泻苷B 。
蒽苷内服后有致泻、清热解毒作用，尤其是大黄酸葡萄糖苷有较强的致泻作用。
游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。
1．大黄酸（OOOHOHCOOH3．大黄素甲醚（Physcion ）OOOHOHCH 3H 3CO4．大黄酚（ChrysophanolOOOHOHCH 35．芦荟大黄素（Aloe emodin ）OOOHOHCH 2OH[目的要求]：1．掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取分离方法。
2．掌握双相酸水解的原理及操作。
3．掌握液－液萃取的原理及操作。
4．掌握制备薄层的原理及操作。
5．掌握蒽醌类成分的各类检识方法。
[实验原理]（*此项内容由学生自行预习、归纳并整理） [实验内容]一、大黄中总游离蒽醌成分的提取分离1. 双相酸水解2. pH梯度萃取法3. 制备薄层分离取沉淀Ⅲ适量，加甲醇1ml使溶解，条状点样于硅胶G制备薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，定位，刮取色谱带，用适量甲醇溶解，滤过，回收溶剂至干，依次得样品Ⅲa、Ⅲb、Ⅲc。
二、蒽醌类化合物的鉴定1．化学检识（1）Brontrager’s反应取样品适量，加2％NaOH溶液数滴，观察颜色变化。
（2）醋酸镁反应取样品适量，加乙醇数滴使溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液数滴，观察颜色变化。
（3）浓硫酸反应取样品适量，滴加浓硫酸，观察颜色变化。
天然第八章醌类
一、蒽醌类化合物的一般性质
性状
溶解性 酸性
（一）性状与升华性 荧光： 多数蒽醌有荧光。
升华性：游离醌多有升华性，成苷消失。
挥发性：小分子的苯醌和萘醌类有挥发性。
目标 概述 结构类型 性质 鉴别 提取 分离 结构测定 实例 小结 同步测验 实训
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菲格尔 亚甲蓝
3、活性次甲基试剂反应 试剂：活性次甲基试剂 (乙酰醋酸乙酯、丙二酸酯等) 结果：蓝绿色或蓝紫色
活性次甲基 反应范围：苯醌或萘醌类醌环上有未被取代位置
碱 醋酸镁
蒽醌类化合物无此反应， 可加以区别！
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二、蒽醌类化合物的检识
概述
含义
醌类化合物（quinonoids）
分布
是指分子内具有不饱和环二酮结
构（醌式结构）及其容易转变为
具有醌式结构的化合物。蒽醌是
作用 广泛存在于植物界的一种色素。
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概述
含义 分布 作用
分布于蓼科、茜草科、豆科、鼠李 科、百合科、紫草科等植物。醌类化合 物主要存在于植物的根、枝、心材及叶 中，也可存在于茎、种子、果实中。
（二）溶解性：
性状
溶解性
应用：某中药中含有蒽醌苷，可选用哪些溶剂提取？
A、氯仿 B、水 C、乙醇 D、碱水
答案：B、C、D、
酸性
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一、醌类化合物的一般性质
实验5 大黄中蒽醌类的提取与分离
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5.pH梯度萃取
取乙醚提取液2/3量，置 250ml分液漏斗中。
1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃 取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤， 得大黄酸沉淀。
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2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用 2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三 次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大 黄素沉淀。
1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸 性与结构的关系。
2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用 该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合 物？
3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与 结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸 附剂？Rf值顺序如何？
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26
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17
3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层， 继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取， 合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤 可得芦荟大黄素沉淀。
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4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出 芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓 盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不 同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的 次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时 用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8， 5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
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五、思考题
用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛 细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不 得超过0.5cm!），自然风干
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
醌类化合物提取分离
+ 35 ppm
- 16.9 ppm
126.2 136.6
O
131.7 184.6
138.6
136.6
138.6
131.7 184.6
126.2 O
- 12.4 ppm
161.8
OH O
114.8 190.0
124.2 - + - + 138.4
136.4
139.3
131.5 183.9
118.9 O
6.95 2-OMe 2-OH 2-OCOMe 2-Me
3-H 6.17 6.37 6.76
6.79
向高场移动
2、芳环上的质子
① α-H处于羰基的负屏蔽区，共振信号出现在 低场，化学位移值较大；
② β-H受羰基的影响较小，共振信号出现在 较高场，化学位移值较小。
③ 当芳环上存在取代基时，芳环上的质子峰 的数目及峰位都将改变。
中 药 粉 末 0.1g
10%硫 酸 5ml 2- 10' H+ H 2O
放 冷 加 乙 醚 2ml
+
H H 2O
E t2O 5% N aO H 1m l
E t2O 黄 无色
O H - H 2O 红色
(4)与活性次甲基试剂反应(Kesting-Craven法) 当苯醌及萘醌类化合物的醌环上有未被
取代的位置时，即可在氨碱性下与一些含有 活性次甲基试剂的醇溶液反应，生成兰绿色 或兰紫色。
3、常用催化剂及催化能力： 吡啶 > 浓硫酸
例：曲菌素的乙酰化反应
OH O
HO OH O
HOAc 少量乙酰氯
OH OH OAc
OH O
A c2O 回 流 2'
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实例：硅胶柱色谱法分离大黄酚、大黄素-6-甲醚
装柱：用石油醚－乙酸乙酯（ 9.8:0.2 ）浸 泡200～300目硅胶约20 g，搅拌均匀，尽量赶出气泡。 一次性倒入 1.8 cm X 28 cm 的层析柱中，轻轻敲打 使硅胶均匀下沉，至硅胶界面不再下降为止。 上样：将离大黄酚和大黄素 -6- 甲醚的混合 物用乙醇加热溶解，伴入少量硅胶，水浴60℃左右烘 干，加到已装好的硅胶柱顶端，最后在样品带上盖上 一层硅胶或棉花，以保护样品界面不受干扰。 洗 脱 ： 先 用 100 ml 石 油 醚 － 乙 酸 乙 酯 （ 9.8:0.2 ）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换 用 100 ml 石油醚－乙酸乙酯（ 9.5:0.5 ）洗脱下第二 条色带。
5.微波提取法
优选微波技术提取大黄游离蒽醌的工艺。 方法：先采用单因素考察,然后采用正交试验法考 察微波输出功率、乙醇浓度、浸出时间、料液比4 个因素对提取率的影响,优选大黄游离蒽醌的最佳 浸出方案。 结果：采用70%乙醇溶液在微波输出功率中高火, 用70%乙醇,料液比为1∶8,提取5 min,提取2次,大 黄游离蒽醌提取率为1.31%,相对提取率达到 88.52%。 结论：用微波浸提法提取大黄中的蒽醌类成分效 率高、操作简便、省时。
工艺二：
决明子粗粉 95%乙醇回流提取3次，每次1h，减压回收 浸膏 加水混悬，石油醚脱脂后正丁醇萃取
水相
正丁醇相 聚酰胺柱层析，乙醇-水梯度洗脱 洗脱液 反复TsgelHW-40柱层析 2-甲氧基大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 4,6.7-三甲氧基芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 大黄素-6- O-β-龙胆二糖苷
生大黄 80%乙醇室温渗漉提取 回收溶剂，得浸膏 依次以石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取
石油醚部分
三氯甲烷部分
乙酸乙酯部分
水相
石油醚、乙酸乙酯梯度洗脱
95∶5
大黄素甲醚、大黄酚
90∶10
大黄素、芦荟大黄素
（二）从大黄中提取分离总蒽醌类可采用下列方法 工艺一： 工艺二：
大黄 水煎煮3次（1.5倍量，20分钟） 提取液 通过大孔吸附树脂，70乙乙醇提取浓缩液 乙醚 残渣(蒽苷类) 乙醚液(游离蒽醌苷元) 5% NaHCO 3 乙醚层 5%Na2CO3 萃取 水溶液 酸化
OH O
萃取 水溶液 HCl 酸化
乙醚液 1% NaOH 萃取
橙红色沉淀 EtOH-Py 重结晶 浅黄色沉淀沉淀 （大黄酸）
O COOH OH O OH
OMe OH
黄色物质 黄色物质 蒸干石油醚， 蒸干石油醚， 甲醇重结晶 甲醇重结晶 大黄酚 大黄素6-甲醚
流程说明： 决明子蒽醌可用干柱色谱 予以分离。 决明子用氯仿和20%H2SO4 提取后，合并氯仿提取液 ，浓缩，然后拌在少量磷 酸氢钙上，把它加在预 先装好的磷酸氢钙（干装 ）上。用苯洗脱，先在柱 上出现5个色带，继续用苯 洗脱，分别收集各色带的 洗脱液分别进行处理。
加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr， 趁热抽滤
醇液
药渣
乙醇提取液
静置冷却，抽滤
滤液
减压回收乙醇至糖浆状，将浓 缩物转移至250ml三角瓶中
乙醇总提物
放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20′将 乙醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
乙醚层
浸膏
乙醚总提液
实例：建立了同时测定化妆品中蒽醌类含量 的HPLC法，以评价化妆品的美容功效。采用 甲醇超声提取，HPLC法分离测定。结果为3 种被测物在11min内均得到良好的分离。在 1μ g／mL-250μ g／mL均与其各自对应的峰 面积呈良好线性关系（R〉0．9997）。在添 加质量浓度为0．5μ g／mL～5．0μ g／mL， 回收率在92．0％-102．5％，精密度RSD 〈2．1％，最低检出限（S／N=3）为芦荟苷 0．5160μ g／mL，芦荟大黄素0．0864μ g／ mL，大黄酚0．1016μ g／mL。该法简便、快 速、准确，可用于化妆品中蒽醌类含量的检 测。
正丁醇层
水层
回收溶剂 浸膏 硅胶柱色谱 氯仿-甲醇 梯度洗脱
结晶Ⅰ：1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌 结晶Ⅱ：1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-βD-吡喃葡萄糖苷 结晶Ⅲ：1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-βD-吡喃木糖（1→2）-β-（6’-O-乙 酰基）吡喃葡萄糖苷 结晶Ⅳ：1,2-二羟基蒽醌-2-O-β-D-吡喃木 糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷 结晶Ⅴ：1,3-二羟基-2-羟甲基蒽醌-3-O-βD-吡喃木糖（1→6）-β-D-吡喃葡 萄糖苷
结晶Ⅳ
实例
（一）从决明子中提取分离蒽醌类化合物还可采用下列方 法
决明子药材
工艺一：
药渣
8倍量水提取3次，过滤
滤液
WDL树脂吸附，先用水冲洗至无色， 再用70%乙醇洗至无色，回收乙醇
浸膏 硅胶柱层析，氯仿-甲醇-水洗脱， 结合硅胶H干柱层析 大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素 橙钝新素、大黄素甲醚-8-β-D-吡喃葡萄糖苷
补充实例 用不同浓度的乙醇回流提取茜草粗粉，得到浸膏采用不同极性溶剂萃 取，再使用色谱法分离。茜草中主要化学成分提取分离方法：
茜草根粗粉 95%乙醇回流提取 乙醇提取液 回收乙醇 浸膏 依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取
石油醚层
氯仿层 乙酸乙酯层 回收溶剂 回收溶剂 浸膏 浸膏 硅胶柱色谱 硅胶柱色谱 氯仿-乙酸乙酯 氯仿-丙酮 梯度洗脱 梯度洗脱 洗脱部分（10:1） 梯度洗脱 洗脱部分（3:1） 结晶Ⅰ 结晶Ⅱ
研究超声波技术对大黄中蒽醌类成分提取率的影 响,并与传统提取方法做比较. 方法:以超声波强化提取法为试验组,以常规煎煮 法及乙醇回流法对对照组,进行平行试验. 结果:以水为提取溶剂,采用超声波强化提取10 min对游离蒽醌的提取率即与水煎煮法煎煮60 min 提取效果相当;以乙醇为提取溶剂的提取效果明显 好于水,几种方法相比较,以乙醇作为提取溶剂超 声波萃取法对大黄蒽醌的提取效果最好. 结论:超声波法提取大黄蒽醌类成分具有提取效率 高、操作简便、省时等优点,值得推广应用.
蒽醌苷类的分离
由于蒽醌苷类水溶性较强，分离精制较困 难，故现多需进行预处理。 溶剂法是用中等极性的有机溶剂如乙酸乙 酯、正丁醇等，从除去游离蒽醌衍生物的 水溶液中，将蒽醌苷萃取出来，再作进一 步分离。
溶剂法：
虎杖浸膏的水溶液
氯仿回流
氯仿液
（含大黄素等 游离蒽醌脂溶成分）
水液 EtOAc萃取 EtOAc液 （含大黄素苷等 蒽醌苷极性成分）
铅盐法：
中药粉 提取液
90%乙醇加热提取
浓缩
浓缩液
氯仿（或乙醚、苯）萃取
氯仿液 （游离蒽醌） 沉淀
水层
加醋酸铅溶液，过滤
滤液 沉淀（Pb2S）
水洗，悬浮于水中，通H2S脱铅过滤
蒽醌苷
滤液
蒽醌苷/ H2O 醋酸铅 滤液 沉淀（蒽醌苷+醋酸铅） 加水； 通入硫化氢气 体使沉淀分解 硫化铅 蒽醌苷 / H2O 放置 苷类析出
（一）从大黄中提取分离羟基蒽醌类还可采用下列方法 用80%乙醇室温渗漉提取，回收溶剂，得浸膏后依 次以石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取，得到的石油醚部 分和三氯甲烷部分再分别上硅胶色谱柱以石油醚-乙酸乙 酯（95∶5）和（90∶10）洗脱，分离得到大黄素甲醚、 大黄酚及大黄素、芦荟大黄素单体。工艺流程如下：
大黄 乙醇微波辅助提取540min 提取液 减压回收溶剂 浸膏（总蒽醌）
3. PH梯度萃取法对蒽衍生物进行初步分离，对性质 相似，酸性强弱相差不大的羟基蒽醌类则不能很好 分离，故初分后再结合层析法进一步分离。 多用吸附柱层析，以硅胶、磷酸氢钙、聚酰胺粉为 吸附剂，不宜用氧化铝，尤其是碱性氧化铝，因为 羟基蒽醌能与氧化铝形成牢固螯合物，难以洗脱。
黄色沉淀
CH 3（决明蒽醌） O
乙醚液 浓缩
NaOH 液 酸 化 金黄色结晶
OH O OH
橙黄色结晶 （决明蒽醌甲醚）
OH O
乙醚液 （含β-谷甾醇）
(大黄酚)
CH 3 O
OMe OMe
CH 3
O
实例
大黄中蒽醌类化学成分的提 取分离技术
根据大黄中 的羟基蒽醌苷 经酸水解成游 离苷元，苷元 可溶于氯仿而 被提出的原理。 再利用各羟基 蒽醌类化合物 酸性不同，采 用pH梯度萃取 法分离而得各 单体苷元。
醌类化合物的提取
提取方法
1.水蒸气蒸馏法
适用于小分子的游离醌类化合物的提取， 由于其具有挥发性，可随水蒸气馏出，故 可用此法提取，如白雪花中蓝雪醌的提取。
实例
白雪花粗粉 │加水浸泡 │水蒸气蒸馏 ↓ 馏出液 │放置 ↓ 结晶 │抽滤 ↓ 结晶 │甲醇重结晶 ↓ 蓝雪醌（mp：75～76℃）
2.有机溶剂提取法
游离醌类化合物的分 离
分离方法
1、羟基蒽醌的酸性差别很大时，采用PH梯度萃取法。
由于蒽醌羟基位置、数目及羧基的有无，其酸度 大小是有区别的，可分别溶于不同碱性的水液，故可 采用梯度PH萃取法。此法为分离游离蒽醌衍生物的经 典方法，也为常用方法。 5%NaHCO3液 → 含-COOH及两个以上β -酚OH 5%Na2CO3液 → 含一个β -酚OH蒽醌类 1%NaOH液 → 含两个a-酚OH蒽醌类 5% NaOH液 → 含一个a-酚OH蒽醌类
实例：建立了以苯酚为原料合成对苯二酚过 程中各物质的高效液相色谱(HPLC)及气相色 谱(GC)分析方法。HPLC 方法采用 Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,10μ m),流动相 组成:V(甲醇):V(水):V(改性 剂)=20:80:0.15,流动相流速为1.0 mL/min, 定量环进样20μ L,Prostar 紫外检测器检测 波长为254 nm,实现了对低含量对苯二酚、 对苯醌、邻苯二酚及苯酚4种物质的分离测 定;同时,采用氢火焰离子化检测器对上述4 种物质在较高浓度下进行了 GC 分析,测定 快速准确。