牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌

牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌

一、实验目的：

1、学习并掌握培养基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。

2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。

二、实验原理：

（一）微生物分离与纯化

1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

三、实验仪器和试剂

1、仪器：

分析天平；锥形瓶；移液管；高温电炉；容量瓶；烧杯；无菌培养皿；pH试纸；胶头滴管；玻璃试管；酒精灯；高压蒸气锅；玻璃棒；

2、试剂：

牛肉膏；蛋白胨；NaCl ；琼脂；蒸馏水；

四、实验步骤：

（一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液

1、培养基的配置

配置牛肉膏蛋白胨的液体培养基，待培养基冷却后进行分装。将分装完毕后的培养基进行高压蒸汽灭菌；

①称量：按试验用微生物培养基配方，逐一称取各种药品放入烧杯中。

液体培养基配方：

②溶解：将去蒸馏水加入到上述烧杯中使各种成分溶解，难溶的物质，例如蛋白胨、加热促进其溶解，待全部溶解后，加水补足加热蒸发的水量。制备固体培养基，加热融化琼脂时要不断的搅拌，避免琼脂糊底烧焦。

③调节pH值；初配好的培养基往往不能符合所需要的pH值，故需用pH试纸检测，并以一定浓度的盐酸溶液和氢氧化钠溶液调节培养基溶液pH值至7—8。

④分装：将调节好pH值的培养基分装于十支试管和两个锥形瓶中(注意防止培养基沾污管口或瓶口，避免浸湿橡皮塞塞引起杂菌污染)。分装液体培养基时，每支试管装的量为试管高度的1/3～1/2，锥形瓶中各加入250—300ml培养基。分装完毕后，将试管及锥形瓶用橡皮塞塞紧，防止高压蒸汽灭菌时管内压力过大冲开。

⑤包扎：加塞后，在全部试管胶塞外包裹双层报纸，并用棉绳捆扎好，同样的，将两个锥形瓶也用同样的方法包扎好。最后，用记号笔注明培养基名称，日期。

2、灭菌

本试验采用高压蒸气灭菌法。

①加水，立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1/3处。

②把需灭菌的器物放入锅内(器物不要装得太满，否则灭菌不彻底)，

关严锅盖(对角式均匀拧紧螺旋)，打开排气阀。

③启动电源开关。

④待炉内水沸腾后，蒸气将炉内冷空气驱净，关闭排气阀。

⑤升压，升温。关闭排气阀以后，锅内成为密闭系统，蒸气不断增加，压力计和温度计的指针上升，当压力达到1.05kg/cm2(温度为121℃)即灭菌开始，这时开、关电源，保证压力维持在1.05 kg/cm2，20min左右。

⑥中断热源，达到灭菌时间要求后停止加热，任其自然降压，当指针回到“0”时，打开排气阀(排气阀不能过早打开，否则培养基因压力突降，温度没下降而翻腾冲到棉塞处，既损失培养基又沾污了棉塞)。

⑦揭开锅盖，取出器物，分装至无菌培养皿中，静置。

⑧二十四小时后观察是否有菌种出现。

六、试验结论

据观察，培养皿中没有菌种产生，说明本次实验的操作合格，没有大问题出现，实验成功。（附图）

10级水环境检测与保护

周超