实验用培养基适用性检查标准操作规程

起草人Prepared by:

起草日期

Date: _____________________ QC

审核人Reviewed by:

审核日期

Date: _____________________ QC

审核人Reviewed by:

审核日期

Date: QA

批准人Approved by:

批准日期

Date:

质量部QD

目的Purpose

为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。

范围Scope

本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。

职责Responsibility

分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。

主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。

内容procedure

1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。

2试验用菌种及培养基

2.1菌种:

2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。

2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]

2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]

2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]

2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]

2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]

2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]

2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]

2.2培养基

2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。

2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth

2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar

2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar

2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel

2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar

2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth

2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar

2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth

2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar

2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar

2.3微生物计数培养基的适用性检查

2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

2.3.2菌悬液的制备

2.3.3上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬

液，制备黑曲霉孢子悬浮液时，添加3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液

或pH7.2磷酸盐缓冲液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%

（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu

的孢子悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。黑曲

霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。

2.4大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验

2.4.1取以上前3种菌悬液各0.1ml(不大于100cfu)，分别注入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的

试管中，于30℃-35℃培养不超过3天。同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培

养基进行上述试验。培养结束后进行观察，如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过促生

长试验的培养基的生长情形基本一致，则判定此培养基通过促生长试验。反之则判定此培养基不符

合规定，未通过促生长试验。

2.5 大豆酪蛋白消化琼脂和沙氏葡萄糖琼脂促生长试验

2.5.1 取以上5种菌悬液各1ml （不大于于100cfu ），分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼

脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30℃-35℃培养不超过3天，计数，后2种菌悬液不超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于100cfu ，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20℃-25℃培养不超过5天，计数。同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基进行上述试验。进行促生长试验的培养基平皿上，微生物生长情况必须与已通过促生长试验的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌落数与已通过促生长试验的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于70%-200%之间,则判定此培养基通过促生长试验；反之则判定该培养基不符合规定，未通过促生长试验。

2.6 控制菌测试所用培养基的适用性检查

2.6.1 控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 2.6.2 菌悬液的制备

2.6.3 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。菌悬液在室温下

放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在

24小时内使用。

2.6.4 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各

培养基的检查测试项目及所用菌株见下表