PCR实验室标准操作规程
PCR生产操作规程
PCR生产操作规程PCR（聚合酶链反应）是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA序列。
PCR的操作过程需要严格控制条件，以保证反应的准确性和稳定性。
以下是PCR生产的操作规程：1. 实验室准备：- 确保实验室整洁干净，操作台面清洁无尘。
- 确保实验室内温度适宜，保持恒温状态。
- 准备PCR试剂盒，包括DNA模板、引物、逆转录酶、聚合酶、dNTPs等。
2. 样品处理：- 提取DNA样品时，要避免污染、降解和损伤。
- 使用无菌管、无菌试剂和消毒仪器，避免样品交叉污染。
3. PCR试剂配置：- 根据实验样品的数量和浓度，计算所需的试剂量。
- 试剂配置过程中要注意无菌操作和准确的配比，避免试剂误差。
4. 反应体系：- 根据实验需求进行不同的PCR反应设置，包括温控系统、反应管、引物和试剂的加入顺序等。
- 准备阳性和阴性对照样本，以检验PCR反应的准确性。
5. 反应条件：- 根据PCR扩增的要求，设置反应体系的温度、时间和循环次数等。
- 设置好PCR反应的温度曲线，包括变性、退火和延伸阶段，以保证扩增效果。
6. 仪器操作：- 启动PCR仪器前，确保设备完好、无异常情况。
- 设置好PCR仪器的程序和参数，包括温度梯度、循环次数、温度保持时间等。
- 监控PCR反应的过程，及时调整温度和时间等参数。
7. 结果分析：- PCR反应结束后，分析PCR产物的扩增结果。
- 使用电泳技术对PCR产物进行分析，观察扩增片段的大小和条带的强度。
- 对PCR结果进行解读，确认是否成功扩增目标DNA序列。
8. 结果记录和保存：- 将PCR结果记录在实验日志中，包括样品编号、反应条件、扩增结果等信息。
- 将PCR产物进行保存，可以冷冻保存或进行二次扩增和测序等后续实验。
9. 试剂和废弃物处理：- 将使用过的试剂垃圾按照规定的分类进行处理，尽量减少对环境的污染。
- 将废弃物进行消毒处理，避免有害生物的传播和污染。
10. 定期维护和检验设备：- 定期对PCR仪器进行检验和维护，确保其正常工作。
PCR实验室操作标准流程
乙型肝炎病毒(HBV DNA PCR ABI7300)检侧原则操作程序一、INFORMATIONFORTEST检测信息项目名称乙型肝炎病毒核酸措施聚合酶链反映措施根据卫生部《全国临床检查操作规程》第三版（）第七篇第六章第一节二、ANALYTICALPRINCTPLE检测原理聚台酶链式反映(PCR〕可对特定核苷酸片段进行指数级旳扩增，而实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反映体系中加入荧光基团，运用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过原则曲线对未知模板进行定量分析旳措施。
在实时荧光定量PCR反映中，引入了一种荧光化学物质，荧光物质有两种：荧光探针和荧光染料。
我们目前是使用TaqMan荧光探针旳检测原理：PCR扩增时在加入一对引物旳同步加入一种特异性旳荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一种报告荧光基团和一种淬灭荧光基团。
探针完整时，报告基团发射旳荧光信号被淬灭基团吸取；PCR扩增时，Taq酶旳5’一3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接受到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一种荧光分子形成，荧光信号强度也等比例增长（图一）。
这样就可以通过荧光强度变化监测产物量旳变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
三、操作环节（一）试剂配制1、进入试剂准备区，启动冰箱冷冻层取出HBV-DNA检测试剂盒。
查看外包装盒(涉及生产批号、有效期)，无误后拆开试剂盒，取出核酸提取液、反映液及Taq酶(核对核酸提取液、HBVPCR反映液及Taq酶管上批号与试剂外包装盒批号与否一致)（图1），不一致则不可使用，需更换新旳试剂。
室温平衡20min，完全融化后rpm离心备用。
2、核酸提取液旳分装（1）取0.5ml离心管架置于超净工作台内(开机前用紫外线消毒30分钟)，用右手拿起镊子逐个将离心管放入离心管架（注意应夹住离心管外壁，不能遇到管内壁)，摆放顺序为横列从左往右摆，竖列为从上往下隔行排，离心管个数为n(n=样本数+对照品+质控品)。
pcr实验室的操作流程及注意事项
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pcr实验室操作流程
pcr实验室操作流程PCR实验室操作流程。
PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。
它是一种重要的实验手段，广泛应用于基因克隆、基因检测、DNA测序等领域。
下面将介绍PCR实验室的操作流程，希望能够对初学者有所帮助。
1. 实验室准备。
在进行PCR实验之前，首先需要准备好实验室所需的各种试剂和设备。
确保PCR工作台表面清洁，使用紫外线消毒工作台。
准备好PCR试剂盒、PCR管、PCR仪、蒸馏水、DNA模板等。
2. 反应体系设计。
根据实验需要设计PCR反应体系，包括引物、模板DNA、缓冲液、酶和核苷酸。
确保反应体系中各组分的浓度和配比符合实验要求，避免出现反应体系不稳定或者无法扩增的情况。
3. PCR反应设置。
将设计好的PCR反应体系分装到PCR管中，注意避免气泡的产生。
在加盖后进行离心，确保反应体系均匀混合。
将PCR管放置于PCR仪中，设置好反应程序和温度，启动PCR反应。
4. PCR反应后处理。
PCR反应结束后，取出PCR管，检查反应体系是否正常。
将PCR 产物进行电泳检测，确认扩增片段的大小和纯度。
根据需要，可以进行DNA提取、测序或者下一步的实验操作。
5. 实验室清洁。
实验结束后，及时清洁PCR工作台和PCR仪，避免污染下一次实验。
将实验台面和设备用75%乙醇擦拭消毒，保持实验室的整洁和卫生。
以上就是PCR实验室操作流程的简要介绍，希望能够对初学者有所帮助。
在进行PCR实验时，需要严格按照操作流程进行，避免出现污染或者错误的情况。
同时，注意实验室安全和个人防护，确保实验过程安全顺利进行。
PCR技术的应用范围广泛，掌握PCR实验室操作流程对于科研工作者来说是非常重要的基本技能。
希望大家能够在实验操作中熟练掌握PCR技术，为科研工作的顺利进行提供有力支持。
PCR实验室标准操作规程SOP
一、基因扩增检验实验室基本情况 （一） 实验室所属法人单位名称：________________________________________________
地址：__________________________________________________________________ 邮编：_____________________________________ 法定代表人：_____________________实验室负责人：_________________________ 联系人：_________________________email：_________________________________ 电话：___________________________传真：__________________________________ （二） 实验室总人数：__________________名 （其中初级职称人数人员___名，占____；中级职称人数人员_____名，占______。）
质量手册
一、 管理性程序： 程序文件的管理和维护 ……………………………………………………………………… 1 PCR 实验室管理制度 …………………………………………………………………………… 2 生物安全准则 ………………………………………………………………………………… 4 实验室生物防护措施 …………………………………………………………………………… 7 实验室传染性废弃物管理制度 ………………………………………………………………… 9 PCR 实验室的人员配置及管理制度 …………………………………………………… 12 PCR 实验室的人员培训计划及措施 …………………………………………………………… 14 PCR 实验记录管理制度 ………………………………………………………………………… 15 惠安县医院 PCR 检验报告单保密制度 ……………………………………………………… 17 检验结果的传送管理制度 ……………………………………………………………………… 19 实验室的清洁制度 ……………………………………………………………………………… 20 化学试剂的管理程序 …………………………………………………………………………… 22 实验室消耗品购买、验收和贮存程序 ………………………………………………………… 23 新项目审批程序 …………………………………………………………………………………… 25 仪器设备的管理制度 …………………………………………………………………………… 26 仪器设备的使用制度 …………………………………………………………………………… 28 仪器设备的标准操作制度 ……………………………………………………………………… 29 仪器设备的维护保养程序和制度 ……………………………………………………………… 31 仪器设备的校准制度 …………………………………………………………………………… 34 仪器设备发生故障的应急处理制度 ………………………………………………………… 35 PCR 检测的标本管理制度 …………………………………………………………………… 36
PCR实验室操作流程
PCR实验室操作流程PCR（聚合酶链反应，Polymerase Chain Reaction）是一种可以通过体外合成DNA的方法，也是现代生物技术中一项重要的分子生物学技术。
PCR技术的应用广泛，包括基因测序、基因突变检测、表达定量等。
下面是PCR实验室操作的一般流程。
1.设计引物：PCR实验的第一步是设计引物。
引物是用于扩增目标DNA片段的短链DNA序列。
两个引物分别对应目标序列的两端，其长度通常在18-24个碱基对之间。
引物的碱基序列必须与目标序列互补，以确保引物的结合和扩增特异性。
2. 制备PCR反应液：将PCR反应所需的试剂制备成PCR反应液。
PCR 反应液包括模板DNA、引物、聚合酶、反应缓冲液、dNTPs和Mg2+等。
聚合酶可以是常见的Taq聚合酶，也可以是其他高保真度的热稳定聚合酶。
反应缓冲液包含缓冲盐、pH调节剂和聚乙二醇等成分。
3.加热变性：PCR反应开始前，需要对DNA模板进行热变性，将其双链DNA解开成单链DNA，以供引物结合。
一般在95℃左右进行加热变性步骤，持续1-5分钟。
4.循环扩增：PCR实验主要包括循环扩增的步骤。
循环扩增主要分为三个步骤：变性、退火和延伸。
变性温度一般设置在94-98℃，可以使DNA双链变为单链；退火温度根据引物序列的特性来设计，一般设置在50-70℃之间，可以使引物与DNA模板序列结合；延伸温度一般为72℃，此温度下聚合酶能够合成新的DNA链。
5.PCR循环反复：PCR反应通常进行30-40个循环，每个循环包括变性、退火和延伸的三个步骤。
这样可以进行指数级扩增，生成大量目标DNA片段。
6. PCR产物检测：PCR反应结束后，可以通过凝胶电泳等方法对PCR产物进行检测。
将PCR产物与DNA分子量标记物一起电泳，可以通过与标准品比较得知扩增片段的大小。
也可以通过染色剂如SYBR Green等进行荧光定量，或者使用定量PCR方法定量扩增产物的数量。
7.结果分析和数据处理：根据PCR产物的结果进行数据分析和处理。
PCR实验室操作流程
PCR实验室操作流程PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学实验技术，用于在体外扩增DNA序列。
下面是PCR实验室操作流程的详细说明。
1.实验前准备：a.准备必需的试剂和材料，包括PCR反应缓冲液、dNTPs、引物、聚合酶、模板DNA、消毒水、离心机、PCR仪等。
b.检查PCR反应缓冲液、dNTPs、引物和聚合酶的保存条件和有效期。
c.将PCR反应管、移液器、移液枪、显微镜幻灯片等进行消毒处理。
2.PCR反应体系的准备：a.将PCR反应缓冲液、dNTPs、引物和聚合酶按照规定比例混合，制备PCR反应体系。
b.添加模板DNA，使总体积达到预定的体积。
3.PCR反应管的装填：a.执行无菌操作，将PCR反应体系均匀地分装到PCR反应管中，避免空气泡影响反应结果。
b.添加防止蒸发的润滑油至PCR反应管中。
4.PCR仪的设置：a.打开PCR仪，设定所需的温度和时间参数。
b.确保PCR仪处于冷却状态，使反应管可以准确控制升温和降温的过程。
5.PCR反应程序设置：a.根据扩增的目标基因长度和引物设计，确定适当的PCR循环数、退火温度和延伸时间。
b.在PCR仪的控制面板上设置所需的循环数、温度和时间参数。
6.PCR反应的进行：a.将PCR反应管放入PCR仪的样品位。
b.关闭PCR仪的盖子，启动PCR反应。
7.PCR反应结束后：a.关闭PCR仪，取出PCR反应管。
b.使用电泳或其他方法，对PCR产物进行分析和检测。
8.PCR反应管和废弃物处理：a.将PCR反应管中的废液倒入废液收集容器中。
b.将PCR反应管进行无菌处理，避免污染实验室环境。
c.将废弃物放入相应的废弃物容器中，以便进行妥善处置。
需要注意的是，PCR实验室操作流程中的无菌操作和个人防护是非常重要的。
在整个实验过程中，实验人员应佩戴实验手套，并注意将不同试剂和反应物进行分装。
此外，实验结束后，实验台面和设备都需要进行彻底的清洁和消毒处理，以保证实验环境的无菌和清洁。
PCR实验室操作流程
乙型肝炎病毒（HBV DNA PCR ABI7300）检侧标准操作程序飞INFORMATIONFORTE检测信息二、ANALYTICALPRINCTP检测原理聚台酶链式反应（PCR可对特定核苷酸片段进行指数级的扩增，而实时荧光定量PCF技术，是指在PCF反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，荧光物质有两种：荧光探针和荧光染料。
我们目前是使用TaqMan荧光探针的检测原理：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCRT增时，Taq 酶的5' —3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，荧光信号强度也等比例增加（图一）。
这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图3■- atwnch-ftr三、操作步骤（一）试剂配制1、进入试剂准备区，开启冰箱冷冻层取出 HBV-DNA 佥测试剂盒。
查 看外包装盒（包括生产批号、有效期），无误后拆开试剂盒，取出核酸 提取液、反应液及Taq 酶（核对核酸提取液、HBVPC 反应液及Taq 酶 管上批号与试剂外包装盒批号是否一致）（图1）,不一致则不可使用， 需更换新的试剂。
室温平衡20min ,完全融化后2000rpm 离心备用。
2、核酸提取液的分装 （1）取0.5ml 离心管架置于超净工作台内（开机前用紫外线消毒30 分钟），用右手拿起镊子逐个将离心管放入离心管架（注意应夹住离 心管外壁，不能碰到管内壁），摆放顺序为横列从左往右摆，竖列为 从上往下隔行排，离心管个数为n （n 二样本数+对照品+质控品）。
PCR实验检测标准操作规范
PCR检测实验室操作规范一、PCR实验室的设置及管理i•目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2•适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3•负责人：4.细则：4. 1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。
4. 2本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4. 3各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4. 4各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4. 5严格遵守从“试剂准备区T标本处理区T扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4. 6非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4. 7实验完毕后做好清洁消毒工作。
1、PCR实验室工作制度1.目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
2.适用范围：所有本实验室人员。
3.负责人：4.细则：4. 1本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。
4. 2各区的用品不得混用。
4. 3在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。
4. 4试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP文件）。
4. 5标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成（见相关SOP文件）。
PCR实验室操作规范
PCR实验室操作规范PCR检测技术是一种借助PCR扩增仪进行体外DNA高效复制的核酸扩增技术，其优势就是灵敏度极高，能准确快速判断样本中是否存在目标病原，但同时也存在气溶胶扩散、易污染实验环境的风险。
为了有效避免污染，获得稳定可靠的检验结果，建议PCR实验检验人员按照以下要求规范操作：1.严格控制进出实验室人员。
实验无关人员不得随意进出实验室，有条件情况下要在各分区设置独立通道和进出整个实验区的门。
2.尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
3.试剂准备区（配液区）是洁净级别要求最高的区域，最好在超净工作台中进行操作。
分装反应液后，阴性对照最先加样，盖上管盖；阳性对照在完成样本加样后再加，动作应轻柔准确，防止高浓度的阳性对照核酸扩散。
4.扩增反应区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等。
5.各个实验区域根据需求配备专区专用仪器设备和耗材，如超净工作台、离心机、移液枪、枪头盒等，避免仪器设备及实验耗材交叉使用。
6.实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。
移液器吸头、反应管等实验耗材应一次性使用。
7.实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都必须更换手套，最好实验服、口罩、帽子也及时更换，以避免不同实验区交叉污染。
8.装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离心至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
9.PCR检测试剂盒应低温冷冻保存，同时应与样品和PCR产物分开，不应放于同处。
10.应遵循实验室内部质量控制相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:2015年＊月＊日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响得、来自实验室内部或外部得不正当得商业、财务与其她方面得压力与影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性得信任得活动。
2、严格遵循实验室认可依据得国际标准,严格按标准得管理要素与技术要素得要求建立自我完善得管理体系与控制检测全过程各环节得机制,所有与检测有关得人员熟悉与之相关得质量文件,并在工作中执行这些政策与程序,真正把标准作为科学管理检测实验室得先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果与技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”得服务宗旨,严格保护客户得机密与所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意得服务标准。
4、主动开展实验室得比对实验与其她有效地检测质量监控方案,并通过日常检测得监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性与有效性、修订页目录前言 ............................................................................................................................................ 错误!未定义书签。
质量方针ﻩ错误!未定义书签。
质量管理体系组织结构图ﻩ错误!未定义书签。
一、工作制度............................................................................................................................. 错误!未定义书签。
PCR实验室得设置及管理规程ﻩ错误!未定义书签。
pcr实验室流程
pcr实验室流程PCR实验室流程一、引言PCR（聚合酶链式反应）是一种在实验室中常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。
PCR实验室流程是指在进行PCR实验时所需的步骤和操作。
本文将详细介绍PCR实验室流程的各个环节。
二、实验前的准备工作1. 提取DNA样本：从待检测的生物体中提取DNA，可以通过使用DNA提取试剂盒进行提取。
2. 设计引物：根据需要扩增的目标DNA片段的序列，设计合适的引物。
引物应具有高度特异性，避免与其他非目标序列结合。
3. 制备PCR反应体系：根据所需扩增的目标DNA片段的大小和扩增效率，精确计算反应液中的各个组分的浓度。
三、PCR反应体系的配制1. 选择合适的PCR反应管：PCR反应管应具有良好的热传导性能，以保证反应的均一性。
2. 加入引物：根据所设计的引物，向反应管中加入合适浓度的引物。
引物的浓度应根据实验需要进行优化。
3. 加入模板DNA：向反应管中加入所提取的DNA模板。
模板DNA的浓度应在合适范围内，过高或过低的浓度都会影响PCR反应的效果。
4. 加入PCR反应缓冲液：PCR反应缓冲液中含有适当的离子浓度和pH值，以保证PCR反应的进行。
5. 加入dNTPs：向反应管中加入dNTPs，提供PCR反应所需的四种核苷酸单体。
6. 加入聚合酶：向反应管中加入高保真聚合酶，以保证PCR反应的准确性和高效性。
7. 加入辅助物质（如Mg2+）：根据实验需要，向反应管中加入辅助物质，如Mg2+，以优化PCR反应的条件。
四、PCR反应的进行1. 放入热循环仪：将配制好的PCR反应管放入热循环仪中，进行PCR反应。
2. 程序设定：根据实验需要，设定PCR反应的温度和时间参数。
常见的PCR反应程序包括：变性步骤、退火步骤和延伸步骤。
3. 变性步骤：将PCR反应管加热至94-98℃，使DNA解旋成单链。
4. 退火步骤：将PCR反应管降温至引物的退火温度，使引物与目标DNA序列结合。
pcr生物安全操作规程
pcr生物安全操作规程PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，可以在体外扩增DNA序列。
由于PCR操作涉及到核酸材料与反应酶，因此需要严格遵守生物安全操作规程，以确保实验的安全性和准确性。
2. 实验室内应配备安全通风柜或类似设备，用于处理样本、制备反应混合液和装载PCR反应管。
3. 实验室工作台面需要严格清洁，以避免交叉污染。
4. 所有用于PCR分析的仪器设备和试剂应按照相关规定定期检查和维护，确保其正常工作状态。
二、操作人员准备1. 操作人员应熟悉PCR技术的原理和实验操作步骤。
2. 操作人员需要穿戴实验室指定的个人保护装备，包括实验服、手套、护目镜、口罩等。
3. 携带长发的操作人员应将头发用橡皮带或发网束起，避免干扰实验操作。
三、核酸材料处理1. 所有核酸材料应视为潜在的污染源，操作人员应小心操作，避免接触皮肤和吸入。
2. 核酸材料的制备和处理应在已准备好的安全通风柜或类似设备下进行。
3. 必须使用专门为核酸样本准备的纯化试剂和设备，避免反应过程中的污染。
四、试剂准备和反应混合液制备1. 所有试剂和缓冲液应按照相关规定储存，并在有效期内使用。
2. 所有试剂的标签应清晰易读，以避免误用和交叉污染。
3. 反应混合液的制备应在干净的工作台上进行，避免污染。
4. 使用相应的容量计量器，避免过量或不足。
五、PCR反应设置和运行1. PCR反应管或板应在安全通风柜或类似设备下装载。
2. 所有参与PCR反应运行的操作人员都应保持手套的佩戴，以避免交叉污染。
3. 反应混合液的装载应准确无误，避免污染反应管的外部壁面。
4. PCR反应应按照制定好的温度和时间进行，严禁随意调整参数。
六、PCR反应后处理1. 在PCR反应结束后，反应管或板应在安全通风柜或类似设备下取出。
2. 运输PCR产物时，应使用专门的PCR管架和封闭袋，避免泄露和污染。
3. PCR产物的处理应按照实验室的规定进行，避免环境污染。
七、实验室清洁和废物处理1. 实验室内的台面、设备和器皿应定期进行清洁和消毒，以避免污染。
PCR实验室标准操作规程SOP
年月日
IV
拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验
的需求情况以及实验室运行的预测分析
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临床检验中心PCR实验室标准操作程序
****医院临床检验中心临床基因扩增实验室管理程序标准操作程序（SOP）起草人：批准人：生效日期：年月日目录临床基因扩增实验室的设置 (4)临床基因扩增实验室内部管理规章 (12)临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训 (16)临床基因扩增实验室的设施和环境 (19)临床基因扩增实验室清洁制度规章 (20)临床基因扩增实验室仪器设备管理规章 (22)Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）未修改. 27 Finnpipette 可调式移液器的使用与维护标准操作(SOP-2) (36)Finnpipette可调式移液器校准标准管理程序(SOP-3) (40)温度计及湿温度计的校正标准管理程序(SOP-4) (41)离心机使用与维护标准操作程序(SOP-5) (42)超净工作台使用与维护标准操作程序(SOP-6) (46)恒温水浴箱使用、维护与校正（SOP-7） (47)旋涡振荡器使用与维护标准操作程序（SOP-8） (50)冰箱的使用与维护标准操作程序（SOP-9） (51)可移动紫外灯标准操作程序（SOP-10） (53)仪器故障时标记、放置标准操作程序（SOP-11） (54)仪器设备发生故障时的应急处理程序（SOP-12） (55)临床标本的收集管理标准操作程序（SOP-13） (58)检验标本的验收和保存标准操作程序（SOP-14） (59)样本编号的标准操作程序(SOP-15) (64)PCR标本管理标准操作程序（SOP-16） (66)标本前处理标准操作程序（SOP-17） (68)核酸扩增及产物分析检测标准操作程序（SOP-18） (69)乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序（SOP-19） (71)基因扩增检测实验结果分析标准操作程序(SOP-20) (76)实验结果有效性判断标准操作程序（SOP-21） (79)室内质量控制标准操作程序(SOP-22) (80)实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序（SOP-23） (86)试剂质检标准操作程序（SOP-24） (92)实验室耗材质检标准操作程序（SOP-25） (95)手套使用及左右手分开的原则（SOP-26） (98)实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护（SOP-27） (99)抱怨的处理程序（SOP-28） (102)实验室记录管理规章标准操作程序（SOP-29） (106)检验报告单管理标准操作程序（SOP-30） (109)实验室台面摆放顺序程序（SOP-31） (113)实验室常用溶液配置标准操作程序（SOP-32） (114)临床基因扩增实验室的设置1目的：依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性2 范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度3 操作人：** **4 实验室设置规章：4.1 依据：本实验室按《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置，并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8号）的要求开展临床基因扩增工作(拟开展基因扩增检验项目见附表1)4.2 实验室设置:4.2.1实验室主要由试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）、标本制备区（PCR-Ⅱ）、PCR扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ）三个工作室组成。
pcr操作规程
pcr操作规程PCR操作规程引言：聚合酶链反应（PCR）是一种用于扩增DNA片段的核酸技术。
它广泛应用于生物学、分子生物学、医学诊断等领域。
为了能够准确和高效地进行PCR实验，下面是一份PCR操作规程供参考。
一、实验前准备1.1 检查实验室中PCR反应液的储存条件，确保其保存在-20℃的冰箱或冷冻库中，避免反应液过期。
1.2 检查PCR反应管、PCR板和无菌tips等试剂的储存情况，确保其洁净无污染。
1.3 检查邻近实验台是否摆放了所需的试剂和设备，以便操作过程中快速取用。
二、PCR体系的准备2.1 根据实验需要准备所需的PCR反应体系，包括模板DNA、引物、酶、缓冲液和试剂。
2.2 采用冰上配置体系，避免体系成分发生不可逆的酶解反应。
2.3 计算PCR反应体系的总体积，根据实验需要配置相应体积的试剂，保持体系的配比平衡。
2.4 混匀配制的试剂，避免体系中有一侧含有较高浓度的试剂。
三、PCR反应条件的设定3.1 设定所需的PCR反应条件，包括温度和时间等参数。
一般的PCR反应条件为：98℃预变性10分钟，然后30-40次循环（98℃变性30秒、退火温度30秒、72℃延伸时间依据片段长度调整），最后72℃延伸10分钟。
具体参数根据实验需求进行调整。
3.2 针对不同反应体系，根据实验要求添加适当的PCR 增强剂或增强剂，以提高PCR的效率和特异性。
四、模板DNA的添加4.1 将所需的模板DNA量转化为体积，并按计算结果向PCR反应体系中加入模板DNA。
4.2 使用无菌的微量吸管或枪头，避免交叉污染。
4.3 对于浓度较低的模板DNA，可以使用前处理技术进行浓缩或增加反应的循环数，以提高PCR效果。
4.4 完成模板DNA的加入后，立即封闭PCR管。
五、引物的添加5.1 根据实验设计的需要，准备相应的引物，确保引物的浓度和质量良好。
5.2 使用无菌的微量吸管或枪头，避免交叉污染。
5.3 尽量避免引物的反复冻融，以保持其稳定性。
pcr 操作规程
pcr 操作规程PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，被广泛应用于基础研究、医学诊断和法医学等领域。
它可以在体外迅速扩增目标DNA序列，并且可以在少量DNA 样本中检测到极低浓度的目标DNA。
为了确保PCR实验的准确性和重复性，制定一份操作规程是非常重要的。
下面是一份PCR操作规程：一、实验准备1. 检查PCR试剂盒的有效期，确保试剂的质量和纯度。
如果试剂过期或出现异常，应及时替换。
2. 温度设置：将实验室温度提前设定在室温（25℃），PCR仪预热至需要的温度。
3. 化学物品准备：准备好的试剂和物品包括PCR试剂盒、试剂所需的缩微管、用于装载PCR试剂的微量移液器和相应的移液器尖等。
4. 试剂检查：确认PCR试剂盒中的主要成分完好无损，并检查是否有任何已经发生的异常。
5. 设计引物：根据研究的目的和样本的特性，设计合适的引物序列。
确保引物能够与目标序列特异性结合，避免二次结构和自身互补性。
二、实验操作步骤1. DNA提取：根据需要选择合适的DNA提取方法，从样本中提取出所需的DNA。
2. DNA浓度测定：利用分光光度计检测DNA的浓度，确保DNA的浓度适合PCR扩增反应。
如果浓度过高或过低，可以进行适当的稀释或浓缩。
3. 反转录：如果是从RNA提取DNA，则首先需要进行反转录反应，将RNA转化为cDNA。
反转录反应的条件和步骤根据所用的反转录酶和试剂盒而有所不同，需按照相应的操作手册进行。
4. PCR试剂配置：按照PCR试剂盒说明书中所提供的配方准确称取PCR试剂，配置PCR反应体系。
确保试剂的质量和纯度，并且避免交叉污染。
5. PCR反应体系的装载：将PCR反应体系按照试剂盒说明书中的要求装入PCR管或反应板中。
确保每个反应管或反应孔中的体积均匀且准确。
6. PCR反应条件设定：根据所扩增的目标序列和引物的特性，设定合适的PCR反应条件，包括温度、时间和循环次数等。
一般情况下，PCR反应包括初始变性、循环变性、退火和延伸等步骤。
pcr实验流程和注意事项
PCR实验流程如下：
试剂准备阶段：在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行，用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。
所有的PCR体系都应该在-20℃保存，除了ddH2O之外，其余的试剂组份需完全融化之后再加入，以免影响浓度。
配制反应体系应在快速进行，以减少非特异性扩增。
体系配制完成之后应马上进行PCR反应。
样本制备阶段：样本制备是整个PCR反应中最为关键的环节，在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。
严格遵守操作规程进行加样操作，操作时候尽量少说话或者不说话。
所有操作需要在生物安全柜内进行，操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒，注意生物安全柜中物品的排放。
戴手套并勤于更换，要有无核酸观念。
在样本检测的同时设立对照（阳性对照、阴性对照、阴性模板、试剂对照）。
PCR实验注意事项：
引物长度通常在18-22个碱基之间。
解链温度Tm值通常要在52-58度之间。
GC含量也是一个重要的因素。
以上信息仅供参考，具体步骤和注意事项可能会因实际情况而有所不同，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号：第1版编制：审核：批准：生效日期：2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测，不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动。
2、严格遵循实验室认可依据的国际标准，严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制，所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件，并在工作中执行这些政策和程序，真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式，尽可能把差错降到最低限度，确保检测数据准确可靠，检测结果和技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨，严格保护客户的机密和所有权，热忱提供优质服务，努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案，并通过日常检测的监督机制，持续改进、不断完善管理体系，从而保证其充分性和有效性。
修订页目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (4)一、工作制度 (5)PCR实验室的设置及管理规程 (5)PCR实验室内务管理规程 (6)PCR实验室人员的配置及管理规程 (7)PCR实验室管理规程 (10)PCR实验室生物安全防护措施 (14)PCR实验室废弃物的处理管理规程 (16)PCR实验室清洁消毒管理规程 (17)PCR实验室仪器设备的管理规程 (18)试剂管理规程 (20)清洁剂、消毒剂管理规程 (21)异常情况应急处理管理规程 (22)采购管理规程 (25)仓库管理制度 (28)临床标本的管理规程 (31)PCR实验室记录管理规程 (32)检验报告单发放、保密管理规程 (33)PCR实验室岗位责任制 (34)二、操作指导书 (36)PCR实验室的清洁消毒操作规程 (36)冰箱、冷藏柜的使用操作程序 (37)冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序 (38)洁净工作台使用操作规程 (40)洁净工作台维护、清洁操作规程 (41)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程 (43)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程 (44)高速冷冻离心机使用标准操作规程 (45)高速冷冻离心机维护保养操作规程 (46)生物安全柜使用操作规程 (47)生物安全柜的维护保养操作规程 (49)加样器的使用操作规程 (50)加样器的维护保养操作规程 (51)干式恒温箱的使用操作规程 (52)干式恒温箱的维护保养操作规程 (53)紫外灯的使用操作规程 (54)紫外灯的维护保养操作规程 (55)温湿度计自行检定操作规程 (56)PCR实验室试剂的质检标准操作规程 (57)PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程 (58)临床标本的采集、运送、接收操作规程 (59)临床标本的保存操作规程 (61)清洁剂、消毒剂配制操作规程 (62)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程 (64)室内质量控制标准操作程序 (66)室间质评操作规程 (69)三、引用图表 (70)实验室负责人简历 (70)实验室工作人员一览表 (72)拟开展的临床基因扩增检验项目 (75)实验室质量管理程序文件和作业指导书（SOP）目录 (76)北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表 (78)前言1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成：管理性程序；仪器设备标准操作程序、维护保养程序；检测项目操作程序；相关图表；相关复印件2.现有文件编号与本公司现行ISO9001质量体系一致；3.文件管理：现有的文件由公司行政办公室负责管理；实验室主任保存全套文件一份；各工作区保存该区使用的文件，以方便工作人员随时使用。
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ＰCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:２015年*月*日质管部ＰCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响得、来自实验室内部或外部得不正当得商业、财务与其她方面得压力与影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性得信任得活动。
2、严格遵循实验室认可依据得国际标准,严格按标准得管理要素与技术要素得要求建立自我完善得管理体系与控制检测全过程各环节得机制,所有与检测有关得人员熟悉与之相关得质量文件，并在工作中执行这些政策与程序,真正把标准作为科学管理检测实验室得先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果与技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”得服务宗旨,严格保护客户得机密与所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意得服务标准。
4、主动开展实验室得比对实验与其她有效地检测质量监控方案,并通过日常检测得监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性与有效性。
修订页目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (3)一、工作制度ﻩ４PCR实验室得设置及管理规程 (4)PＣR实验室内务管理规程.................................................................................................................................... ５PCＲ实验室人员得配置及管理规程ﻩ6ＰCR实验室管理规程 (8)PＣR实验室生物安全防护措施ﻩ1112PCR实验室废弃物得处理管理规程ﻩPＣR实验室清洁消毒管理规程ﻩ13ＰＣR实验室仪器设备得管理规程 (14)试剂管理规程 (15)16清洁剂、消毒剂管理规程ﻩ异常情况应急处理管理规程ﻩ１7采购管理规程 (20)23仓库管理制度ﻩ26临床标本得管理规程ﻩPCR实验室记录管理规程 (27)检验报告单发放、保密管理规程ﻩ２８PCR实验室岗位责任制 ....................................................................................................................................... 2９二、操作指导书.................................................................................................................................................... 3０PCＲ实验室得清洁消毒操作规程....................................................................................................................... ３031冰箱、冷藏柜得使用操作程序ﻩ冰箱、冷藏柜得维护保养操作程序 (32)34洁净工作台使用操作规程ﻩ洁净工作台维护、清洁操作规程........................................................................................................................ ３5 AＢI ７5００实时跟踪荧光ＰCＲ仪使用操作规程ﻩ3738ABＩ750０实时跟踪荧光PＣＲ仪维护保养操作规程ﻩ高速冷冻离心机使用标准操作规程 (39)40高速冷冻离心机维护保养操作规程ﻩ41生物安全柜使用操作规程ﻩ生物安全柜得维护保养操作规程 (42)加样器得使用操作规程 (43)加样器得维护保养操作规程 (44)干式恒温箱得使用操作规程 (45)干式恒温箱得维护保养操作规程 (46)47紫外灯得使用操作规程ﻩ紫外灯得维护保养操作规程ﻩ４８温湿度计自行检定操作规程ﻩ4９PCＲ实验室试剂得质检标准操作规程............................................................................................................... ５0 PCＲ实验室标本唯一标识编号编制操作规程................................................................................................... ５1 临床标本得采集、运送、接收操作规程ﻩ5２临床标本得保存操作规程ﻩ54清洁剂、消毒剂配制操作规程 (55)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程................................................................................................................ ５6 室内质量控制标准操作程序. (58)室间质评操作规程ﻩ6162三、引用图表ﻩ实验室负责人简历 (62)实验室工作人员一览表ﻩ6369北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表ﻩ前言１、临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成:1、1管理性程序；1、2仪器设备标准操作程序、维护保养程序;1、3检测项目操作程序；1、4相关图表;1、5相关复印件2、现有文件编号与本公司现行ISO9001质量体系一致;３、文件管理：3、1现有得文件由公司行政办公室负责管理;3、２实验室主任保存全套文件一份;3、3各工作区保存该区使用得文件,以方便工作人员随时使用。
4、文件得有效期;4、1文件得有效性:文件自实验室职责签字后即为现行有效文件；4、2本文件为试运行文件,通过实际工作得检验、修改完善后将形成正式得质量体系文件。
4、3正式得第一版质量体系文件将作为本公司ISO9００1质量体系文件得一部分出现;4、4试运行文件得修订时间不得超过一年。
5、文件得修改:5、1作为试运行文件,允许以进行细小得修改;5、2文件修改最重要得就就是要维持各工作区文件得现行有效及其与“保存文件”得一致性；6、实验室质量体系完成时,文件得管理、修改严格按ISＯ9０01质量体系文件管理要求进行。
重要参考资料:１、临床基因扩增检验实验室管理暂行办法。
2.临床基因扩增检验实验室基本设置标准。
3.临床基因扩增检验实验室工作规范。
4.临床基因扩增检验实验室技术人员培训班资料汇编,卫生部临床检验中心。
5.临床检验及实验室设备。
质量方针北京汉氏联合生物技术股份有限公司质管部临床基因扩增检验实验室就就是严格按照部、市临床基因扩增实验室规范化标准进行管理与操作，始终遵循:以储户为中心以质量为核心以科学为依据质量管理体系组织结构图一、工作制度ＰＣR实验室得设置及管理规程1、目得：建立实验室得合理设置与科学管理,防止实验污染,保证检测结果得可靠性。
2、范围:本程序适用于分子诊断室得设置、工作流程与日常管理等。
3、职责:PCＲ检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。
4、程序:4、1 分子诊断室为检验科下设得专业实验室，从事临床标本得基因扩增检测及相关科研工作。
4、2 本实验室采用实时荧光定量ＰCR技术作为临床基因诊断得主要手段,实验室分为三个区:试剂准备区(第一区）、标本处理区(第二区)、扩增分析区(第三区)。
每一工作区配备专用得设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显得区分标识。
各区标签颜色:红色(第一区)、白色或绿色（第二区)、蓝色（第三区);专用工作服：粉红色(第一区)、白色(第二区）、蓝色(第三区）。
标本得接收则在检验科标本接收处进行。
4、3各工作区专用得仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材与清洁用具等,不可混用。
4、4 各工作区配置、功能与内务管理见各相关ＳOＰ文件。
4、5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”得单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4、6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内;进修、实习或其她科室人员因科研活动需要,进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增分析区)需首先熟悉本程序得各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。
4.7实验完毕后做好清洁消毒工作。
5、相关文件：实验室设计平面图６、相关记录：PCR实验室内务管理规程１、目得:保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。
2、范围：适用于PCＲ实验室得内务管理及清洁工作。
3、职责:实验室相关人员及医院相关清洁工人。
4、程序:4、1非本室工作人员未经允许不得进入实验室。
4、2各区得用品不得混用。
4、3实验人员要有强烈得时间观念，按时上下班,不迟到、早退。
4、4进入实验室得工作人员必须遵守实验室得单一流向得规定,禁止逆向走动。
4、5所有仪器（如PCR扩增仪)须有专人负责,并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作,并严格遵守操作规程。
4、6所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录,未经允许不得随意带出本实验室。
4、7每天了解仪器运转情况及试剂使用情况,确保仪器整洁安全,试剂合格使用。
4、8各区得各种清洁消毒均应有记录,工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。
4、9注意保持实验室卫生整洁,严禁在室内抽烟、吃零食,非实验操作人员应尽量少入。
4、10下班前检查门、窗、水、电,节假日应指定人员负责检查实验室得仪器、设备。
5、相关文件:无6、相关记录:PCＲ实验室人员得配置及管理规程1、目得:保证实验室有足够数量得合格得具备开展该类实验能力得实验人员。
2、范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。
3、职责:实验室工作人员共同遵守、相互督促。
4、程序:4、1 人员要求４、1、1 本实验室工作人员应为医学检验专业或相关专业毕业，具有中级以上技术职称或专科以上学历。
４、1、2 实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办得PCR技术培训,并取得合格证。
4、１、3 对于新进入本室得人员,如尚未取得PCR技术培训合格证,应在实验室有培训合格证得上级技术人员得指导下进行实验工作,实验报告由有资格人员出具,并应在最短得时间内取得上岗培训合格证。
４、2 人员配置4、2、1 实验室应根据工作需要配备足够得工作人员，目前实验室有主管技师2人、技师1人,3人都已获得培训合格证,视工作量得增加与业务发展需要，会适当增加工作人员。