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实验十一、方法学评价实验
-回收试验
2020/6/18
临床生物化学检验 李恒
2861832496@qq.com
概述
• 临床实验室应对使用的检验方法或在建立新的检验方法时， 对该方法的基本性能进行评价，达到提高分析方法质量的 目的。
• 方法学评价（evaluation of methodology）是通过实验 途径测定分析方法的技术性能，并评价其是否可接受。
2020/6/18
实验原理
• 1.GOD—POD法测血清葡萄糖的实验原理 • 2.回收试验实验原理 • 回收试验是反映分析方法准确测定加入样品中已
知浓度或量的纯分析物能力的试验，是评价准确 度的有效方法。 • 本实验通过GOD-POD法测定生理盐水中加入血糖的 回收率，判断GOD-POD法比例系统误差的大小，从 而评价方法的准确性。
血清量（ml）+标准液量（ml）+生理盐水（ml）
回收量（mmol/L）=回收样品测定值-基础样品测定值
回收率（%）=回收量/加入浓度×100%
2020/6/18
注意事项
• 1.加入标准品溶液及生理盐水的体积不得超过血清样本的 10%，避免将血清样品过度稀释；
• 2.加入标准液后的样品浓度应在医学决定水平附近，且在 方法的分析范围内，一般需测定高、中、低不同浓度的回 收率；
2020/6/18
试剂与器材
• 722分光光度计、加样枪、5ml刻度吸管等 • GOD-POD血糖测定试剂盒 • 80mmol/L葡萄糖标准液 • 2.2mmol/L混合血清
2020/6/18
操作步骤
• 1.样品制备
加入物（ml）
基础管
血清
0.9
80mmol/L葡萄糖标准液
-
生理盐水
0.1
回收管
1
2
3
0.9 0.9 0.9
0.01 0.06 0.09
0.09 0.04 0.01
• 2.工作液制备
2020/6/18
操作步骤
• 3.血糖浓度按下表测定：
加入物（ml）
Hale Waihona Puke Baidu
空白管 标准管 基础管 回收管1 回收管2 回收管3
蒸馏水
0.03
-
-
-
-
-
葡萄糖标准液
-
0.03
-
-
-
-
基础样品
-
-
0.03
-
2020/6/18
概述
• 定量实验的方法学评价指标通常包括： 准确度 精密度 灵敏度 特异性 线性范围
2020/6/18
概述
• 方法学评价试验： • 准确度的评价:回收试验、干扰试验、方法比较
试验 • 精密度的评价：重复性试验 • 线性范围评价：线性范围评价试验
2020/6/18
实验目的
• 掌握：回收试验的实验原理和应用 • 熟悉：回收试验的操作方法和注意事项； • 了解：回收试验的评价。
• 3.准确加样尤其重要。
2020/6/18
思考题
• 进行回收试验时，加入标准 液体积控制在10%以内的目的 是什么？
2020/6/18
-
-
回收样品1
-
-
-
0.03
-
-
回收样品2
-
-
-
-
0.03
-
回收样品3
-
-
-
-
-
0.03
GOD-POD工作液
3
3
3
3
3
3
37℃水浴10min，空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度。
2020/6/18
结果与计算
• 血清葡萄糖浓度（mmol/L）=A测定管/A标准管×葡萄糖标准液浓度
加入浓度=
标准液量（ml）×标准液浓度
-回收试验
2020/6/18
临床生物化学检验 李恒
2861832496@qq.com
概述
• 临床实验室应对使用的检验方法或在建立新的检验方法时， 对该方法的基本性能进行评价，达到提高分析方法质量的 目的。
• 方法学评价（evaluation of methodology）是通过实验 途径测定分析方法的技术性能，并评价其是否可接受。
2020/6/18
实验原理
• 1.GOD—POD法测血清葡萄糖的实验原理 • 2.回收试验实验原理 • 回收试验是反映分析方法准确测定加入样品中已
知浓度或量的纯分析物能力的试验，是评价准确 度的有效方法。 • 本实验通过GOD-POD法测定生理盐水中加入血糖的 回收率，判断GOD-POD法比例系统误差的大小，从 而评价方法的准确性。
血清量（ml）+标准液量（ml）+生理盐水（ml）
回收量（mmol/L）=回收样品测定值-基础样品测定值
回收率（%）=回收量/加入浓度×100%
2020/6/18
注意事项
• 1.加入标准品溶液及生理盐水的体积不得超过血清样本的 10%，避免将血清样品过度稀释；
• 2.加入标准液后的样品浓度应在医学决定水平附近，且在 方法的分析范围内，一般需测定高、中、低不同浓度的回 收率；
2020/6/18
试剂与器材
• 722分光光度计、加样枪、5ml刻度吸管等 • GOD-POD血糖测定试剂盒 • 80mmol/L葡萄糖标准液 • 2.2mmol/L混合血清
2020/6/18
操作步骤
• 1.样品制备
加入物（ml）
基础管
血清
0.9
80mmol/L葡萄糖标准液
-
生理盐水
0.1
回收管
1
2
3
0.9 0.9 0.9
0.01 0.06 0.09
0.09 0.04 0.01
• 2.工作液制备
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操作步骤
• 3.血糖浓度按下表测定：
加入物（ml）
Hale Waihona Puke Baidu
空白管 标准管 基础管 回收管1 回收管2 回收管3
蒸馏水
0.03
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葡萄糖标准液
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0.03
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基础样品
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0.03
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概述
• 定量实验的方法学评价指标通常包括： 准确度 精密度 灵敏度 特异性 线性范围
2020/6/18
概述
• 方法学评价试验： • 准确度的评价:回收试验、干扰试验、方法比较
试验 • 精密度的评价：重复性试验 • 线性范围评价：线性范围评价试验
2020/6/18
实验目的
• 掌握：回收试验的实验原理和应用 • 熟悉：回收试验的操作方法和注意事项； • 了解：回收试验的评价。
• 3.准确加样尤其重要。
2020/6/18
思考题
• 进行回收试验时，加入标准 液体积控制在10%以内的目的 是什么？
2020/6/18
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回收样品1
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0.03
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回收样品2
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回收样品3
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GOD-POD工作液
3
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37℃水浴10min，空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度。
2020/6/18
结果与计算
• 血清葡萄糖浓度（mmol/L）=A测定管/A标准管×葡萄糖标准液浓度
加入浓度=
标准液量（ml）×标准液浓度