FISH简介
FISH实验ppt课件
生物多样性等研究领域被广泛采用。近几年, 应用FISH 技术
研究自然环境微生物群落的报道较多, 如海水沉积物的群落, 海水、河水和高山湖雪水的浮游菌体、土壤和根系表面的寄 居群落等。
食品检测方面：传统的食品微生物检测大多采用培养 分离的方法，食品中菌落总数测定采用平板计数法获得结 果需要1-2 d，致病位杂交应用最成功的是基因定位。基因定位研 究是构建基因图谱的基本要素, 基因位置的确定有助于了 解基因的功能, 利用FISH 技术, 可以直接确定某一DNA 序
列在染色体上的位置。
二、FISH实验及图例展示
• 1、样本的准备与处理
• 2、实验操作及注意事项
• 3、实验结果的检测 • 4、实验图例的展示
间有互补的碱基序列，在已有的放射性原位杂交技
术的基础上发展起来的一种非放射性DNA分子原位
杂交技术。它利用荧光标记的核酸片段为探针与组
织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合 成专一的核酸杂交分子，通过荧光检测系统将待测 核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
2、FISH的发展
• 1969年Gall和Pardue利用放射性同位素标记的 DNA探针检测细胞制片上非洲爪蟾细胞核内的rDNA获 得成功。
现今越来越多的学者趋向于FISH与IF的结合实验，通 俗一点讲，就是在同一个样本上既进行FISH实验，又同时
进行IF实验检测。这方面实验一般适用于检测一个目的基
因以及该目的基因所相对应的蛋白，我们公司在这方面实 验上条件已非常成熟。另外公司也提供其他方面的实验服 务，有Southern blot 、Northern blot、CHIP、COIP， QPCR等等；蛋白类实验有IHC、IF、WB等。
FISH检测在血液肿瘤中的应用-临床宣讲
指导临床用药（个体化治疗）
各细胞遗传学亚组MM患者生存期(n=351)
24.7
42.3
50.5
Fonseca R. Blood 2003;101:4569-4575.
各细胞遗传学亚组MM患者生存期（n=159）
Fonseca R. Leukemia 2006;20,2034-2040.
（二）白血病FISH产品
样本DNA变性
FISH技术的特点
操作简便，探针标记后稳定，利于回顾性分析； 方法敏感，能迅速得到结果，24小时就可以完成检测； 标本来源丰富，间期细胞，分裂中期细胞、分化或未分
化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测。
FISH探针标记类型
telomere subtelomere
着色探针 着丝粒探针
111 32 79
114
133
Dö hner H, Engl J Med. 2000;43:1910-1916.
▶ 慢性粒细胞白血病（CML）
慢性粒细胞白血病（CML）检测BCR/ABL融合基因、ASS基因。
推荐样本：骨髓
适用人群： CML初诊及治疗监测的患者
BCR/ABL融合基因检测试剂盒
•探针：GLP BCR/GLP ABL
评估预后
CBFB基因断裂重组的AML患者对化疗敏感、预后较好。
▶ 急性淋巴细胞白血病(ALL)
• ALL主要是儿童疾病，75%发生在6岁以下的儿童。 • 我国l5岁以下小儿白血病的发病率为2.73/10万，ALL是儿 童中发病率最高的恶性肿瘤。
DF探针 只可检测是否有BCR/ABL融合基因，不能区分主、次 断裂点，可用于治疗效果监测及用药指导。
BCR/ABL融合基因检测意义
FISH实验
现今越来越多的学者趋向于FISH与IF的结合实验，通 俗一点讲，就是在同一个样本上既进行FISH实验，又同时
进行IF实验检测。这方面实验一般适用于检测一个目的基
因以及该目的基因所相对应的蛋白，我们公司在这方面实 验上条件已非常成熟。另外公司也提供其他方面的实验服 务，有Southern blot 、Northern blot、CHIP、COIP， QPCR等等；蛋白类实验有IHC、IF、WB等。
2、实验操作及注意事项
实验操作过程中的注意事项
a、石蜡切片脱蜡过程要脱蜡完全。
b、需预热的洗液和变性液应该提前放于达到预热温度的 水浴锅内，预热至少30min。 c、操作过程中应该尽量减少探针接触白光时间，减少荧 光的损耗。
d、实验过程中最好设立一个阴性对照组，不加探针，直接 用洗液代替探针进行孵育，排除组织本身的非特异性表 达。
FISH与IF的结合实验实例
小鼠血管
人病变血管
常见问题解答
石蜡组织切片FISH检测结果受其他诸多因
素的影响，如组织标本的解剖位置、标本厚度、
固定条件、实验室环境、操作人员的差异、蛋白 酶效价的差异、探针的质量等，都可能影响实验 结果。我们实验室已进行过多种标本的FISH检 测，会根据不同的样本在一定范围内对实验条件
进行适当调整优化，从而获得理想的实验结果。
石蜡常见样本图释
荧光原位杂交应用最成功的是基因定位。基因定位研 究是构建基因图谱的基本要素, 基因位置的确定有助于了 解基因的功能, 利用FISH 技术, 可以直接确定某一DNA 序
列在染色体上的位置。
二、FISH实验及图例展示
• 1、样本的准备与处理
• 2、实验操作及注意事项
• 3、实验结果的检测 • 4、实验图例的展示
fish技术定量的方法
fish技术定量的方法一、引言随着生物科学技术的不断发展，荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，简称FISH）技术在生物学研究领域得到了广泛应用。
作为一种非放射性杂交技术，FISH在基因表达、染色体核型分析、基因定位等方面具有显著优势。
本文旨在介绍FISH技术定量的方法，以期为相关领域的研究者提供参考。
二、FISH技术简介1.原理FISH技术利用荧光标记的核酸探针与目标DNA序列特异性结合，通过荧光显微镜观察杂交信号，实现对特定基因或染色体区域的定位与分析。
2.操作步骤FISH技术的操作步骤主要包括：探针设计、样本处理、染色、图像获取与分析、数据处理与定量分析。
3.优点与局限性FISH技术具有非放射性、高灵敏度、特异性强、操作简便等优点。
但同时也存在一定的局限性，如对探针设计的要求较高、样本制备过程较为繁琐等。
三、FISH技术定量方法1.荧光染料选择选择具有良好光谱分辨率和量子产率的荧光染料，如FITC、Cy3、Cy5等，用于标记核酸探针。
2.样本处理与染色针对不同类型的样本（如细胞、组织切片、染色体悬液等），采用适当的处理方法进行制备。
染色过程中，需注意控制探针浓度、杂交温度、杂交时间等条件，以获得最佳实验效果。
3.图像获取与分析利用荧光显微镜对染色后的样本进行观察，捕获杂交信号。
通过专业图像分析软件，对图像进行处理和定量分析。
4.数据处理与定量分析对处理后的图像进行阈值设定、背景扣除等操作，计算目标区域的荧光信号强度。
根据信号强度，对基因表达水平、染色体拷贝数等进行定量分析。
四、实验应用与案例分析1.基因表达分析FISH技术可用于检测特定基因在细胞或组织中的表达水平，有助于研究基因在生物过程中的功能。
2.染色体核型分析FISH技术可实现对染色体核型的快速准确分析，对遗传病的诊断和染色体异常研究具有重要意义。
3.细胞定位分析通过FISH技术，可定位特定基因在细胞内的表达位置，有助于研究细胞结构和功能。
基因芯片与sky
基本状况
基因芯片(Chromosomal Microarray Analysis ，CMA)
1998 年底 美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科 学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。目前已应用于生物 科学众多的领域之中。 在实际应用方面：疾病诊断和治疗、 药物筛选、农作物的优育优选、 司法鉴定、食品卫生监督、环境检测、国防、航天等许多领域。
微珠无序组装，每个光纤代表一个
微珠
基因芯片基本原理 ⑵.原位合成法（光刻技术）
在合成碱基单体5‘羟基末端连接一 个光敏保护基 首先使支持物羟基化，并采用光敏 保护起来 每次选取适当蔽光膜使需要聚合的 部位透光，受光部位脱羟基保护而活 化 每次通过控制蔽光膜的图案（透光 或不透光）决定哪些区域应被活化， 以及所用单体的种类和反应次序，就
SKY
CMA
目录
FISH、SKY和 CMA简介 基因芯片(CMA)临床应用
基本状况
基因芯片的优点
最大的优点是高通量，其次是解决了目前遗传物质盲区的 检测（基因组病），是细胞遗传向分子遗传过度的技术，检测 精确度高，可以发现未知片段。
基因芯片基本原理
临床上最常用基因芯片技术
⑴.SNP array：以检测SNP位点为主的微整列基因芯片技术
① ② ③ ④
CMA产前诊断临床适应症
产前超声或磁共振（MRI）检查提示胎儿结构异常：推荐CMA技术替代染色体核
型分析作为一线检测方法
胎儿核型为遗传自亲代或为新发平衡重组且表型异常：推荐CMA进一步检测 胎儿核型无法明确诊断的染色体：推荐CMA技术进一步检测。这种情况包括衍 生染色体、标记染色体等，通过CMA检测可帮助明确异常片段的来源和性质 无明确超声结构异常但接受产前诊断的胎儿样本：CMA和核型分析可任选其一 这种情况包括孕妇高龄、血清学筛查阳性、孕妇焦虑、不良生育史、染色体异 常家族史、超声软指标阳性等
FISH参考
in （var） 若 var 是字符串则输出， 若不是则等待键盘输入。 （返回值依赖于字符的类型。 FISH 首先作为整型输入，然后作为浮点型——若是输入的是可编码为整型或 是浮点型的单值，那么返回值就是整型或是浮点型。这个数字独立占用一行。 但是，若其后有空格、逗号或是括号，那么在改行中其他字符将被忽略。若用 户输入的字符不能编译为单值数字， 那么返回值将会是一系列的字符串。 用户 可以通过函数 type（）确定返回的是什么。 ） 2－14 out（s）将 s 信息显示在屏幕上（若记录文件是打开的，则记录到记录文件里）变量 s 的类型必须是字符型。若无错误函数的返回值为零，若有错误则返回 1（如 s 不是字符型的） string（var）将 var 变为字符型 这些函数的用途之一就是控制输入输出。例 2.7 表明用这些函数给杨氏模量和泊松比 输入参数。 例 2.7 交互输入的控制
变量或函数名必须以非数字开头并且不得包含下列符号（运算符） . , */+-^=<>#()[ ]@;‘“ 用户自定义名可以任意长度，但是他们以为行的有限而截取。一般情况下，名字只要不 与 FISH 表达式（见 2.3 节）和预定义的变量和函数名（见 2.5 节）相同，就可任意选取。 在 FLAC 中还有一些其他的单词需要避免。 表 2.1 包含了所有的可能产生冲突的名字的清单、 但是，潜在的冲突取决与所选名字是如何使用的。例如，单词 gravity 可以用做 FISH 变量， 在 FISH 函数中提供出来。 冲突只有在用 SET 命令设定其值是才出现， 因为 gravity 对于 SET 命令是有争议的。类似的，如果它的名字与 PRINT 命令的参数相同，也会产生冲突。若想 毫无顾虑的使用名字， 请参见表 2.1 或者名字的缩写 （因为 FLAC 允许关键字和命令的缩写） 作为一种可选策略， FLAC 命令 SET safe on 可以用来强制在命令行中的 FISH 变量的得 到认可。@符号在任意 FISH 变量之前可以确认物体并强制命令行避免其他任何翻译。例如 假设 FISH 函数 initial 已建立，如例 2.1 所示。在命令行运行该函数将产生错误，因为命令 INITIAL 的优先权超过了 FISH 的 initial 的优先权。 但是在变量前使用 FISH 确认符号@给出 确定，纠正翻译。
03_FLAC3D5.0_fish应用
FISH变量、函数和操作
如何定义FISH函数
DEF <name> ... END
条件语句
CASE_OF expr · · · CASE n · · · END_CASE IF expr 1 test expr 2 · · · ELSE · · · END_IF
循环语句
LOOP var (expr1, expr2) · · · END_LOOP LOOP WHILE expr1 test expr 2 · · · END_LOOP
FISH的编写习惯
第一步 def abc end abc 第二步 def abc p_gp = gp_head loop while p_gp # null p_gp = gp_next(p_gp) endloop end abc 第三步 def abc p_gp = gp_head loop while p_gp # null command endcommand p_gp = gp_next(p_gp) endloop end abc 第四步 def abc p_gp = gp_head loop while p_gp # null command app nstress … endcommand p_gp = gp_next(p_gp) endloop end abc
WHILE_STEPPING
INT FLOAT STRING ARRAY var(n1, n2) (definition of an array) (change the type of the associated variable)
FISH内置数学函数
Mathematical functions atan atan2 cos exp tan ln log sin sqrt abs max min sgn Type conversion float int string type Tables xtable Message functions in out
FISH简介
FISH简介荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称FISH)由于其直观, 快速, 敏感性⾼和⽅便灵活越来越得到⼴泛应⽤, 尤其是在⾎液学领域中. 因为⽩⾎病标本⽐较容易取得和制备, 不同类型的⽩⾎病⼜往往有其特异的染⾊体异常, FISH在⽩⾎病诊断, 治疗监测, 预后估计和微⼩残留病检测等诸⽅⾯都正成为不可缺少的重要⼿段.FISH的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻⽚上的标本)退⽕杂交, 通过观察荧光信号在染⾊体上的位置来反映相应基因的情况. FISH探针按标记⽅法可分为直接标记和间接标记: ⽤⽣物素(biotin)或地⾼⾟(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测⽅能看到荧光信号, 因⽽步骤较多, 操作⿇烦, 其优点是在信号较弱或较⼩时可经抗原抗体反应扩⼤; 直接⽤荧光素标记DNA的⽅法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提⾼, 直接标记的荧光探针越来越成为⾸选, 采⽤多种不同颜⾊的荧光, ⽅便在同⼀标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度和信号⼤⼩都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH过程变得简便⽽易于操作. FISH并不能取代传统的⽩⾎病MCI诊断, 但它却能使MIC分型更为准确和深⼊. , MIC即细胞形态学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对⽩⾎病进⾏分型诊断, 对不同类型的⽩⾎病采⽤不同治疗⽅案⼿段. 随着⼈们对⽩⾎病的不断认识, 仅进⾏MIC分型不够全⾯, 还要加上对⽩⾎病的分⼦(M)诊断, 成为MICM分型. FISH就是连接细胞遗传学和分⼦⽣物学的桥梁.FISH流程仪器设备1、医⽤微波炉；2、⽔浴锅；3、OLYMPUS BX51荧光显微镜；4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。
FISH检测在临床上的应用
FISH检测在临床上的应用FISH检测在临床上的应用一、简介- FISH（Fluorescence in situ hybridization）即原位荧光杂交技术，是一种用于研究基因组和染色体结构的分子生物学技术。
- FISH检测在临床应用中可以提供重要的染色体遗传学信息，用于诊断和监测某些疾病。
二、FISH检测的原理- FISH技术基于荧光标记的核酸探针与细胞或组织标本中的特定DNA序列发生互补杂交，通过荧光显微镜观察以检测特定基因组或染色体的异常。
- FISH检测可以提供高度准确的定量和定位信息，特别适用于检测具有微小或亚显性突变的染色体异常。
三、临床应用领域1、适用于癌症诊断和分型- FISH检测可以检测染色体上的特定基因重排，从而辅助癌症的诊断、分型和治疗方案的选择。
- 例如，FISH检测可以用于检测BCR-ABL融合基因以确认慢性髓性白血病的诊断。
2、适用于先天性遗传病的筛选和诊断- FISH检测可用于检测染色体异常，如唐氏综合征（21三体综合征）、爱德华氏综合征（18三体综合征）和智商障碍相关的染色体异常，用于婴儿和先天性遗传病的筛选和诊断。
3、适用于遗传性肿瘤相关基因的检测- FISH检测可以用于检测和定位遗传性肿瘤相关基因的异常，如BRCA1和BRCA2基因异常与乳腺癌和卵巢癌的遗传风险相关。
4、适用于感染性疾病的诊断和追踪- FISH检测可以用于检测和定位细菌、和寄生虫等感染性病原体的核酸序列，辅助感染性疾病的诊断和追踪。
四、技术要点和注意事项1、样本处理- 对于固定的细胞或组织标本，需要进行脱脂、脱水等预处理步骤。
- 不同类型的标本可能需要不同的处理方法，如骨髓涂片、组织切片等。
- 样本处理过程中需注意保持核酸完整性和避免污染。
2、探针设计与标记- 根据要检测的目标基因或染色体序列设计特异性的核酸探针。
- 核酸探针需要选择适当的荧光染料进行标记，以便在荧光显微镜中观察到。
- 标记的探针需要存储在适当的条件下，以保持标记稳定性和活性。
FISH-中英文翻译.讲义
2 FISH REFERENCE2.1 Introduction and Overview简介和概述This section contains a detailed reference to the FISH language. Following the introduction, Section2.2 describes the rules of the language and how variables and functions are used. Section 2.3explains FISH statements and Section 2.4 describes how the FISH language links with PFC2D. Pre-defined FISH variables, functions and arrays are described in Section 2.5.这部分包含FISH语言的详细参考。
接下来，2.2描述语言规则及如何运用变量和函数。
2.3解释FISH 陈述。
2.4描述FISH语言如何与PFC联系在一起。
2.5讲述如何预定义FISH变量、函数和数列。
FISH is a programming language embedded within PFC2D that enables the user to define new variables and functions. These functions may be used to extend PFC2D’s usefulness or add use r defined features. For example, new variables may be plotted or printed, special particle generators may be implemented, servo-control may be applied to a numerical test, unusual distributions of properties may be specified, and parameter studies may be automated.FISH是PFC内置的一种编程语言，用户可以自定义变量和函数。
FISH技术在临床中的应用
探针设计
检测遗传物质的得与失
在单个细胞核内针对某个特定靶分子检测到多于或少 于2个探针信号被认为异常
正常 异常 异常
<
<
染色体、基因重排检测
—已知断点的平衡易位 探针设计 - 双色单融探针（DC /SF） 9 22
正常
异常
探针设计 - 双色单融探针（DC /SF）
• 使用指导
存在假阳性 如一个细胞中信号叠加。
探针设计 - 双色额外信号探针（ES）
很好地克服了双色单融出现的假阳性
探针设计 - 双色双融探针（DC/DF）
•
使用指导
• 最敏感的探针（假阳性<1 %）
• 可用来检测微小残留性疾病
• 不足是对融合信号不能区分
二、如何正确使用探针
CE认证 在欧洲，用于临床诊断的医疗器械是需要的CE（CONFORMITE EUROPEENNE）认证 的。 近年来，在欧洲经济区（欧洲联盟、欧洲自由贸易协会成员国，瑞士除外）销售
FISH技术在临床中的应用
基因科技（上海）有限公司
一、如何正确选择探针
二、如何正确使用探针 三、临床应用 —胃癌
一、如何正确选择探针
FISH探针种类
染色体结构
端粒(TTAGGG)n
染色体计数探针（CEP)
位点特异性标识分子（LSI） 端粒探针
特定区域或基因
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
短臂
着丝粒
长臂
端粒(TTAGGG)n
Fallon et al. J Neuropathol Exp Neurol 2004; 63:314 322. Horbinski et al. Brain Pathology 2011; 21:57–73 Nikiforova & Hamilton. Arch Pathol Lab Med. 2011;135:558–568
FISH实验
荧光原位杂交技术及其应用
主要内容
一、荧光原位杂交技术简介 二、FISH实验及图例展示
一、荧光原位杂交技术简介
FISH与IF的结合实验实例
小鼠血管
人病变血管
常见问题解答
石蜡组织切片FISH检测结果受其他诸多因
素的影响，如组织标本的解剖位置、标本厚度、
固定条件、实验室环境、操作人员的差异、蛋白 酶效价的差异、探针的质量等，都可能影响实验 结果。我们实验室已进行过多种标本的FISH检 测，会根据不同的样本在一定范围内对实验条件
现今越来越多的学者趋向于FISH与IF的结合实验，通 俗一点讲，就是在同一个样本上既进行FISH实验，又同时
进行IF实验检测。这方面实验一般适用于检测一个目的基
因以及该目的基因所相对应的蛋白，我们公司在这方面实 验上条件已非常成熟。另外公司也提供其他方面的实验服 务，有Southern blot 、Northern blot、CHIP、COIP， QPCR等等；蛋白类实验有IHC、IF、WB等。
肿瘤病理组织更好的了解。
3、FISH的应用
FISH技术已经在细胞遗传学、基因图谱等科 研领域；肿瘤生物学、基因定位、基因扩增、产
前诊断及哺乳动物染色体进化等医学领域；微生
物检测等环境和食品领域得到了广泛应用。
环境监测领域：近几年, 由于FISH 技术的灵敏性和快捷
性使其成为微生物系统发育学、微生物生态学、微生物意事项
a、石蜡切片脱蜡过程要脱蜡完全。
b、需预热的洗液和变性液应该提前放于达到预热温度的 水浴锅内，预热至少30min。 c、操作过程中应该尽量减少探针接触白光时间，减少荧 光的损耗。
海豚简介50字英语作文
海豚简介Dolphins are intelligent marine mammals renowned for their friendly nature and acrobatic abilities. With sleek bodies and distinctive smiles, they navigate the oceans with ease, leaping and twisting through the waves. Dolphins use echolocation to hunt and communicate, emitting clicks that bounce off objects, allowing them to perceive their surroundings. They are social creatures, often traveling in pods and engaging in complex behaviors. Dolphins have long been a source of fascination for humans, their elegance and intelligence making them a symbol of joy and freedom in many cultures.海豚是聪明的海洋哺乳动物，以其友善的天性和杂技般的本领而闻名。
它们拥有流线型的身体和标志性的微笑，在海洋中轻松穿梭，跃出水面，在波涛中翻腾。
海豚利用回声定位来捕猎和交流，发出点击声，这些声音碰到物体后会反弹回来，使它们能够感知周围环境。
海豚是社会性动物，经常成群旅行，参与复杂的行为。
海豚一直以来都是人类着迷的对象，它们的优雅和智慧使它们成为许多文化中快乐和自由的象征。
Dolphins occupy a unique position in the marine ecosystem, serving as both predators and prey. Their dietconsists primarily of fish and squid, but they also have the ability to cooperate with other dolphins to herd and corral larger prey. Despite their prowess in the water, dolphins face numerous threats in the modern world, including pollution, climate change, and entanglement in fishing nets. Conservation efforts are crucial to protect these remarkable creatures and ensure their survival for future generations.海豚在海洋生态系统中占据着独特的地位，既是捕食者也是猎物。
分子细胞遗传学诊断技术简介
技术优势
➢ 重复性好、稳定；
➢ 高灵敏性及特异性；
➢ 可用于间期细胞，不需要细胞培养；
目前，FISH已成为一种常见检测手段，国外广泛地用 于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体瘤等方面的
检测。在欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体 异常占30-40%。
技术原理与方法
产前诊断检测非整倍体需要21、13、 18、X和Y染色体上的五种探针。其中21 号和13号染色体检测探针列为一组，为 位点特异探针，分别用Rhodamine (红 色和FITC (绿色)标记。18号、X和Y染色 体探针列为一组，为染色体着丝粒特异性 重复序列探针,分别用DEAC(蓝色) FITC (绿色)和Rhodamine (红色)标记。
➢ 试剂及设备成本高。
aCGH快速检测间期细胞全基 因组拷贝数
Байду номын сангаас
21世纪细胞遗传学的革命 – aCGH
简称：aCGH
英文名：array-comparative genomic hybridization； Microarray based Comparative Genomic Hybridization ）
SpectralWare® software provides a visual representation of the data generated from the microarray
Targeted aCGH
对已知病症提供清晰的信号
避免实验室反复用FISH 方法来 进行实验诊断
结果易懂 将错失不覆盖区域的基因缺失
因。 生育过先天性心脏病患儿父母进行检测，
可以预测下一胎儿患先心病的可能性。
光谱核型分析技术检测染色体异常
尿脱落细胞的FISH检查在膀胱癌诊断及复发监测中的应用
尿脱落细胞的FISH检查在膀胱癌诊断及复发监测中的应用膀胱癌是泌尿系统常见肿瘤，尿液脱落细胞的FISH检查在膀胱癌诊断及复发检测的应用是目前研究的热点，本文就FISH技术在膀胱癌诊断及术后复发检测中的应用进行综述。
标签：FISH检查；膀胱癌膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，我国大约90%的膀胱癌为移行细胞癌。
膀胱癌术后复发率较高，术后需长期随访。
其诊断和术后随访方式一直是临床上研究的重要课题。
目前我国主要以膀胱镜检查辅以尿脱落细胞检查作为膀胱癌诊断及复发监测的主要手段[1]。
膀胱镜检查作为侵入性检查，会给患者带来痛苦，不易被接受，且对低恶性的膀胱癌患敏感度不高。
尿脱落细胞形态学检查敏感度低，易受到血尿、尿路感染及膀胱灌注化疗等情况影响。
美国食品药品管理局已经批准了部分尿液膀胱肿瘤标志物（如尿核基质蛋白和膀胱肿瘤抗原等）用于膀胱癌的诊断，但也存在特异性低和高昂的检查费用等问题[2]。
寻找一种非侵入性的、特异性级敏感度高的新的膀胱癌诊断及复发监测方法成为了近年来的研究热点。
随着近年来肿瘤基因学的研究，荧光杂交技术（FISH）已广泛用于肿瘤的病因研究、治疗及诊断等多个方面，在膀胱癌领域也有极佳的表现。
目前尿脱落细胞的FISH检查已用于膀胱癌的诊断。
本文就尿脱落细胞的FISH检查在膀胱癌诊断及复发监测中的应用进行综述。
1 荧光杂交技术（（FISH）简介[3]FISH是一门20世纪80年代初期在原有放射性原位杂交的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。
与传统的放射性标记原位杂交相比具有安全、快速、灵敏度高、检测信号强、杂交特异性高、能同时显示多种颜色等优点。
染色体的荧光原位杂交技术最早是随着绘制高分辨人类基因组图谱需求而出现的，此后广泛应用于基因领域的基础研究。
随着医学的发展，FISH这项原本用于基础研究领域的技术已经被迅速推广应用于临床。
目前已被广泛应用于多种肿瘤的诊断、治疗等。
例如HER2基因擴增的双色FISH评估技术能够预期乳腺癌的预后并指导靶向治疗。
荧光原位杂交技术
硕士学位论文荧光原位杂交技术及其在环境领域内的应用Fluorescence in situ hybridization technology and its application in thefield of environment作者姓名：**学科、专业：环境科学与工程学号：********指导教师：***完成日期：2014/3/26XX理工大学Dalian University of Technology摘要荧光原位杂交（FISH）是现代分子生物学及基因工程中广泛应用的新技术，本文概述了FISH实验原理、实验流程以及技术问题等。
总结了一些实验关键步骤的操作要点和注意事项，并对荧光原位杂交技术在环境微生物监测方面的应用做了综述。
利用FISH 技术在环境样品上直接原位杂交，不仅可以测定不可培养微生物的形态特征及丰度，而且可原位分析它们的空间及数量分布。
并且展望了FISH技术的未来。
关键词：荧光原位杂交技术；探针；环境微生物；监测AbstractFluorescence in situ hybridization （FISH）isa new technologywhich is widely used in modern molecular biology and genetic engineering. This article summarizes the experimental principle, process and technical issues of FISH.Also we summarize some operation points and matters needed attention of key steps, and review application of FISH in environmental microbe monitoring. Using FISH technology directly in the environmental samples, can not only measure the morphology and abundance of uncultured microorganisms, but alsoanalyse their spatial distribution and quantity in situ. And look forward to the futureof FISH.Key Words：Fluorescence in situ hybridization technology; Probe; Environmental microbes; monitoring目录摘要IAbstractII1 荧光原位杂交技术简介41.1 FISH发展历史41.2 FISH原理51.3 FISH基本过程61.3.1 探针制备61.3.2 探针的标记71.3.3杂交前处理71.3.4 杂交81.3.5荧光检测与结果分析91.4 FISH技术特点101.5 常见的技术问题及解决措施101.5.1 FISH检测的假阳性101.5.2 FISH检测的假阴性112 FISH技术在环境领域的应用112.1 对硝化细菌的监测112.2 对除磷细菌的监测122.3 FISH技术在丝状微生物研究中的应用122.4 对厌氧颗粒污泥中微生物的监测132.5 对自然环境中微生物多样性的监测133 未来展望14参考文献151荧光原位杂交技术简介荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子结合，杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。
IHC、DNA测序、FISH简介
优点：特异性强；敏感性高；定位准确、形态与功能相 结合。
缺点：准确率差；操作复杂；人为主关影响大；均质性 差；样本单一；蛋白水平。
临床常用检测技术
IHC
免疫组化（IHC） 样本类型 灵敏性，特异性 准确性 重复性 理论基础 DNA扩增突变 定位作用 mRNA表达 蛋白质表达 操作复杂程度 实验要求 均质性 组织切片，细胞爬片等 较高 高(50%~75%) 较高 免疫反应 —— 原位 —— 定性，相对定量 复杂 高 否 高 高(95%以上) 高 链式聚合酶反应 能(突变定量) —— 相对/绝对定量 —— 简便 严格指控，无污染 是 临床常用检测技术 RT-PCR 所有样本
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临床常用检测技术
其他
液相芯片技术
临床常用检测技术
其它
变性高效液相色谱（DHPLC）
利用液相色谱技术（HPLC），既在高压闭合液相流路中，将DNA样品自动注 入并在缓冲液携带下流过专利的DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，
在不同分离柱温度条件下实现对DNA不同的分析；由紫外检测或荧光检测被
FISH
操作流程
红色探针：与17号染色体Her2基因结合 绿色探针：与17号染色体中心粒结合 临床常用检测技术
FISH
结果判读
红色探针：与17号染色体Her2基因结合 绿色探针：与17号染色体中心粒结合
临床常用检测技术
FISH
优点
• 准确性高，重复性好
• 与临床疗效相关性好 • 冰冻和固定的标本均可
分离的DNA样品。
临床常用检测技术
谢 谢！
15%~20% 高
不需要 —— 定性 —— ~1000bp 复杂 是 科研，临床
5~10% 高
中白蝴蝶鱼的品种简介,珠蝴蝶鱼的品种简介
中白蝴蝶鱼的品种简介,珠蝴蝶鱼的品种简
介
中白蝴蝶鱼的品种简介
中白蝴蝶鱼
中白蝴蝶鱼又名白面蝶，由于中白蝴蝶鱼的面部为白色，而面部后面的颜色比较复杂，所以有人称之为白面蝶。
中白蝴蝶鱼对同种的蝶鱼并不是很友好，所以不适合混养性格温顺的观赏鱼。
中文学名：中白蝴蝶鱼
拉丁学名：Chaetodonmesoleucos
别称：白面蝶
界：动物界
门：脊索动物门
亚门：脊椎动物亚门
纲：硬骨鱼纲
亚纲：辐鳍亚纲
目：鲈形目
亚目：鲈亚目
科：蝴蝶鱼科
亚科：蝴蝶鱼亚科
属：蝴蝶鱼属
种：中白蝴蝶鱼
英文名称：White－facebutterflyfish
珠蝴蝶鱼的品种简介
珠蝴蝶鱼
珠蝴蝶鱼的前半部分为淡茶色，后半部分为暗黄色，在海底，珠蝴蝶鱼的色彩并不鲜艳，不过，还是受到了一些水族爱好者的喜爱。
珠蝴蝶鱼可以和其他蝶鱼混养，包括同种蝶鱼，不过需要同时入缸才可以。
中文学名：珠蝴蝶鱼
拉丁学名：Chaetodonkleinii
界：动物界
门：脊索动物门
亚门：脊椎动物亚门
纲：硬骨鱼纲
亚纲：辐鳍亚纲
目：鲈形目
亚目：鲈亚目
科：蝴蝶鱼科
亚科：蝴蝶鱼亚科
属：蝴蝶鱼属
种：珠蝴蝶鱼
分布区域：印度、太平洋和南海
英文名称：Sunburstbutterflyfish。
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荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称FISH)由于其直观, 快速, 敏感性高和方便灵活越来越得到广泛应用, 尤其是在血液学领域中. 因为白血病标本比较容易取得和制备, 不同类型的白血病又往往有其特异的染色体异常, FISH在白血病诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段.FISH的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况.FISH探针按标记方法可分为直接标记和间接标记: 用生物素(biotin)或地高辛(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较弱或较小时可经抗原抗体反应扩大; 直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 采用多种不同颜色的荧光, 方便在同一标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH过程变得简便而易于操作. FISH并不能取代传统的白血病MCI诊断, 但它却能使MIC分型更为准确和深入. , MIC即细胞形态学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对白血病进行分型诊断, 对不同类型的白血病采用不同治疗方案手段. 随着人们对白血病的不断认识, 仅进行MIC分型不够全面, 还要加上对白血病的分子(M)诊断, 成为MICM分型. FISH就是连接细胞遗传学和分子生物学的桥梁.FISH流程仪器设备1、医用微波炉；2、水浴锅；3、OLYMPUS BX51荧光显微镜；4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。
FISH试剂（1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃；（2）20×SSC（pH7.0）；（3）2×SSC，由20×SSC溶液稀释而成；（4）25mg/ml蛋白酶K消化液。
（5）变性液(70％甲酰胺+2×SSC，pH7.0)：4ml 20×SSC；8ml蒸馏水；28ml甲酰胺。
每次新鲜配制。
（6）杂交后洗涤液：20×SSC 4ml；蒸馏水16ml；甲酰胺20ml。
每次新鲜配制。
调节pH前升至室温。
实验步骤1）二甲苯脱蜡3次，每次5min；2）100％酒精两次，每次2min；3）移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。
2、蛋白酶处理:1）每个染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC 40ml倒人Facal管，在水浴槽中预热。
将消化酶液加入管内，摇动直到酶溶解。
2）37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。
37℃孵育20min。
3）×SSC在室温下漂洗切片3次，每次1min。
4）梯度酒精脱水（-20℃预冷）。
3、变性：1）每一个立式染色缸配制40ml变性溶液；2）78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸；3）78℃孵育8min；4）即移入-20℃预冷70%酒精的染色缸内2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃预冷酒精内，每缸2min；5）空气干燥。
4、杂交：1）准备探针；2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；3）滴10μl探针在切片的组织上，加盖玻片；4）盖上湿盒盖，37℃孵育12h～16h。
杂交后的水洗：5）镊子小心去除盖玻片；6）43℃预热杂交后水洗溶液40ml水洗切片15min；7）2×SSC(37℃)洗两次，每次10min；8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。
检测：9）从1×PBS中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。
把切片放入湿盒内，同时处理4张切片。
10）每张切片使用30μl～60μl罗丹明抗-地高辛抗体或FITC卵白素，室温下孵育20min；11）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。
1×PBS室温下洗3次，每次2min。
扩增：12）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；13）每张切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20min；14）去掉塑料盖膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。
1×PBS室温下洗3次，每次2min；15）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；16）每张切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20min；17）1×PBS室温下洗3次，每次2min。
5、细胞核染色：1）张切片加10μl～20μl DAPI，覆盖盖玻片并在室温下孵育2～5ml；2）尽可能快的在荧光显微镜下观察或封闭盒内保存在-20℃冰箱。
切片在染色之后1h内可以在显微镜下观察。
最近有一些战友对荧光原位杂交技术比较感兴趣，我整理了相关资料和自己的心得，和大家交流一下。
不妥之处，请大家指出，共同讨论学习。
内容发布在丁香园和螺旋网上，有兴趣的战友也可以去那里看一下（/html/keshi/gaogan1/zhuanjiazaixian/20070515/1481.html）内容分三部分：一、概述1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征2、染色体异常常见的类型3、染色体异常的检测方法二、荧光原位杂交及其探针1、荧光原位杂交的原理2、荧光原位杂交的探针三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交（按试验流程介绍）一、概述1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关，然而这还仅仅只是一个假说；1960年Nowell和Hungerford在7例慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia，CML）的患者中发现后来被称为费城染色体（Philadelphia chromosome）的微小染色体；1973年Rowley证实了Ph染色体是9号和22号染色体易位所致，这是人们在肿瘤中认识到的第一个染色体易位；目前，已经有11,500篇文献报道了55,600多种克隆性细胞遗传学异常。
这些染色体畸变，尤其是染色体易位及其相应的融合基因在肿瘤致病的起始阶段有着重要的作用，无不说明克隆性细胞遗传学异常是肿瘤的特征，在肿瘤起源中起重要作用。
2、染色体异常的常见类型染色体异常指数目异常和结构异常两类：前者包括整条染色体数目的扩增和缺失；后者包括染色体易位、插入、倒置、区带的缺失或扩增等。
下图是染色体数目异常染色体结构异常3、染色体异常的检测方法染色体异常的识别得益于二十世纪六十年代后发展起来的胰蛋白酶－姬姆萨染色和常规显带技术，使得常规筛查全基因组染色体异常和检测染色体核型改变成为可能。
染色体显带是细胞遗传学分析技术中标准和常用的方法，但耗时且依赖于获得良好的分裂相，还难于分析复杂和隐匿的异常。
PCR或荧光原位杂交（FISH，fluorescent in situ hybridization）对染色体异常的检出依赖于引物或探针与模板的结合，因此较常规显带具有更高的特异性，是高通量检测染色体异常的敏感和特异的方法。
二、荧光原位杂交及其探针1、荧光原位杂交的原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合，这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。
其基础是Southern blot原理，以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和靶序列双链DNA变性后杂交，互补的异源单链DNA分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链DNA，通过荧光标记的亲和素或抗地高辛抗体将半抗原显示出来，通过荧光显微镜观察杂交信号。
FISH具有快速灵敏、特异性好的特点，可同时分析分裂期和间期的多个细胞，并进行定量；可以检测隐匿或微小的染色体畸变以及复杂核型；还可以使用多种荧光标记，显示DNA片段及基因之间的相对位置与方向，空间定位精确。
2、荧光原位杂交探针的类型FISH技术种类甚多，发展迅速，其实现需要获得能与靶序列互补结合的探针。
常用的探针有以下三类：1、染色体重复序列探针，主要是指着丝粒α-卫星DNA重复序列探针和端粒重复序列探针，用以检测染色体数目异常，同时由于G显带时，端粒区是苍白的，因此涉及此区的易位常难以检测，而应用端粒探针则弥补了G显带的不足；2、染色体涂染探针，包括通过流式分选或显微切割获得的全染色体或染色体臂以及特异性区带的涂染探针，用以检测染色体数目或结构异常；3、染色体单一序列探针，包括各类人工染色体探针，如酵母人工染色体(yeast artificial chromosome, YAC)、细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, BAC）、P1人工染色体（P1 artificial chromosome, PAC）探针，主要用以识别染色体的易位、缺失和扩增。
α-卫星DNA（alpha satellite DNA）是唯一一个存在于所有人类染色体着丝粒区域的着丝粒DNA （centromere DNA，CEN-DNA）家族，由171bp的单体为单位组成的高度串联重复片段，重复数百次至数千次，跨越长达100kb的着丝粒DNA区域，其杂交将产生很强的杂交信号。
因此常被选为着丝粒探针的来源。
The Wellcome Trust Sanger Institute（Hinxton, Cambridge）由Wellcome Trust和British Medical Research Council联合建立，是世界上较早开展人类基因组大规模测序并具有相当实力的测序中心。
该中心利用能容纳大片段人类基因组DNA的高容量载体（如粘粒、BAC、PAC等）构建了大片段人类基因组DNA文库，通过文库中末端相互重叠的DNA片段连接成叠连群（contig）并与鸟枪法相结合，加快了基因组测序，实现了人类基因组计划（Human Genome Project，HGP）中人类基因组的物理作图（physical mapping）和基因组测序相结合的目标。
因此，这些克隆文库为基因定位研究提供了丰富的DNA 序列资源，NCBI Clone Registry（/genome/clone/）、Ensembl Genome Browser（/index.html）和UCSC Genome Bioinformatics（/）提供的网络生物信息学资源也记载了许多克隆基因组定位的详细信息，为我们选择相应克隆为作为染色体单一序列和端粒探针的来源提供了便利。