即用型FISH探针
低碳生物冶金技术研究进展
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低碳生物冶金技术研究进展发布时间:2022-10-19T06:24:44.257Z 来源:《科学与技术》2022年第11期6月作者:宋文强张楠[导读] 现如今,经济在快速发展,社会在不断进步,在“碳达峰、碳中和”的背景下,资源节约、循环与综合利用成为矿冶行业发展与转型的重要指导理念。
宋文强张楠内蒙古科技大学材料与冶金学院内蒙古自治区包头市 014000;山东建筑大学外国语学院山东省济南市 250100摘要现如今,经济在快速发展,社会在不断进步,在“碳达峰、碳中和”的背景下,资源节约、循环与综合利用成为矿冶行业发展与转型的重要指导理念。
因操作简单、成本低廉、环境友好等特点,生物冶金技术成为矿冶行业绿色高质量发展的关键技术之一。
随着社会需求的变化及科学技术的进步,生物冶金的研究范围不断扩大,与不同研究方向的交叉融合也日渐频繁。
在传统硫化矿的基础上,生物冶金也开始广泛应用于处理铀矿、稀土矿、海底矿、深地矿、外太空矿及固体废弃物(尾矿、冶炼渣、电子废弃物等)等资源。
通过VOSviewer分析了新世纪以来生物冶金领域的研究热点和发展动态,并在此基础上简要综述了生物冶金的起源和发展,“双碳”背景下生物冶金在矿冶行业的发展前景,以及硫化矿、稀土矿、铀矿和固体废弃物生物冶金的基本原理、研究与应用进展。
关键词:碳达峰,碳中和,生物冶金,进展ABSTRACTNowadays, with rapid economic development and social progress, resource conservation, recycling and comprehensive utilization have become important guiding concepts for the development and transformation of the mining and metallurgical industry in the context of "carbon peaking and carbon neutral". Because of simple operation, low cost and environmental friendly features, biometallurgy technology has become one of the key technologies for green and high quality development in the mining and metallurgy industry. With the change of social needs and the progress of science and technology, the research scope of biometallurgy is expanding and the cross-fertilization with different research directions is becoming more and more frequent. Based on the traditional sulfide ore, biometallurgy has also started to be widely applied to treat resources such as uranium ore, rare earth ore, subsea ore, deep earth ore, outer space ore and solid waste (tailings, smelting slag, electronic waste, etc.). Based on this, we briefly review the origin and development of biometallurgy, the development prospect of biometallurgy in mining and metallurgy industry under the background of "double carbon", and the progress of biometallurgy of sulfide ore, rare earth ore, uranium ore and solid waste. The basic principles, research and application progress of biometallurgy of sulfide ore, rare earth ore, uranium ore and solid waste. Key words: Carbon Dacron, Carbon Neutral, Biometallurgy, Progress引言生物冶金,即生物浸出技术指的是以细菌为本体的微生物技术在铁矿石、铜矿及其他矿产资源的提取上的广泛应用,在相关浸矿细菌长期存在情况下,由于细菌的催化反应和氧化作用,借助浸矿细菌或其新陈代谢衍生物对某些矿物和元素所具有的氧化、还原、溶解及吸附等作用,从矿石中溶浸金属或从水中可回收金属。
遗传学的分子诊断技术简介
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技术难点
检测操作注意事项:
• 试剂的离子成分和PH值对杂交的好坏有直接的影响。 因而在实验的试剂配置准备过程中要注意使用超纯水 进行配置,同时配好的试剂要使用PH试纸或PH仪校准。
• 细胞质较多时也会引起杂交率低下,信号弱,因而在 实验操作时应特别注意消化时间的掌握。
优技术点优:势
• 探针能长期保存,重复性好、稳定; • 安全快速,高灵敏性及特异性; • 可用于中期染色体和间期细胞的分析,不需要细胞
• FISH技术无法达到百分百完全杂交,特别是在应用 较短cDNA探针时存在杂交效率明显下降的问题。 但随着各种新型分子探针以及更为精密高端的光学
显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世,问 题可以得到解决。 • 无法准确判断断裂基因的具体坐标位置,进一步判
断需要RNA seq来检测。
技术优势
多少基因或染色体可用FISH检测:
培养; • 可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及(羊水)
穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。
目前,FISH已成为一种常见检测手段,国内外广 泛地用于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体 瘤等方面的检测。 (欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体异常占 30-40%)。
技术优势
缺点:
• 目前FISH主要集中在DNA水平方面检测,而针对 RNA这块比较困难。
如果针对ALK设计一个探针,但是如果发生了融合, 也不能确定是何种融合类型。
技术优势
设计已知融合基 因的探针,比如 针对ALK和 EML4的,ALK 全部用红色探针 覆盖,EML4用 黄色探针覆盖, 正常就是红黄分 开,融合就是红 黄在一起。
ALK EML4技术优势来自设计已知融合基 因的探针,比如 针对ALK的,用 红色和黄色覆盖 ALK基因的上下 游区域,正常就 是红黄在一起, 融合就是ALK发 生了断裂就是红 黄分开了
FISH技术在白血病中的应用~
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FISH技术在白血病中的应用目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。
在临床应用中,荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度,已在产前诊断、实体瘤(乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌)以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。
血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一,随着对疾病发病机制的深入研究,发现细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。
但常规的细胞遗传学分析(CC)方法只能分析中期染色体,而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。
而FISH技术弥补了CC在这方面的不足,因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。
在临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面:①染色体异位形成的融合基因检测如慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的BCR-ABL融合基因检测,急性粒细胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML)M3中的PML-RARA融合基因检测和M2b中的AML1-ETO融合基因检测。
对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断,还能帮助我们估计患者预后情况以及选择有效的治疗方案。
②基因缺失的检测一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。
但是目前的染色体显带技术分辨率低,只有大于4.5 Mb的缺失才能检测到,而FISH分辨率高,可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的不足。
在临床应用中,如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53基因缺失提示患者的预后很差,疾病进展较早,且对联合化疗不敏感,多数生存期仅为3个月。
而同样在慢性淋巴细胞性白血病患者中,如检测到13q单一缺失则提示患者预后较好,中位生存期可达到133个月。
③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation,allo-HSCT)是治疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。
FISH简介
![FISH简介](https://img.taocdn.com/s3/m/1a8a523887c24028915fc317.png)
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称FISH)由于其直观, 快速, 敏感性高和方便灵活越来越得到广泛应用, 尤其是在血液学领域中. 因为白血病标本比较容易取得和制备, 不同类型的白血病又往往有其特异的染色体异常, FISH在白血病诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段.FISH的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况.FISH探针按标记方法可分为直接标记和间接标记: 用生物素(biotin)或地高辛(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较弱或较小时可经抗原抗体反应扩大; 直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 采用多种不同颜色的荧光, 方便在同一标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH过程变得简便而易于操作. FISH并不能取代传统的白血病MCI诊断, 但它却能使MIC分型更为准确和深入. , MIC即细胞形态学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对白血病进行分型诊断, 对不同类型的白血病采用不同治疗方案手段. 随着人们对白血病的不断认识, 仅进行MIC分型不够全面, 还要加上对白血病的分子(M)诊断, 成为MICM分型. FISH就是连接细胞遗传学和分子生物学的桥梁.FISH流程仪器设备1、医用微波炉;2、水浴锅;3、OLYMPUS BX51荧光显微镜;4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。
荧光原位杂交技术(FISH)的基本原理及应用
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荧光原位杂交技术(FISH)的基本原理及应⽤我接触“FISH”也是刚刚两年多的时间,作为⼀个“初学者”刚开始接触“FISH”可能跟⼤多数⼈⼀样满脑⼦的疑惑:“FISH”是做什么的?有什么临床作⽤呢?那些红红绿绿的点都是些什么意思?……今天让我们慢慢的去揭开FISH的不太神秘的⾯纱。
1.FISH的前世今⽣在FISH技术问世之前,基于20世纪60年代,放射性核素探针的原位杂交⽅法,检测间期染⾊体和分裂期染⾊体上特定DNA和RNA序列的⽅法,该⽅法存在操做⽐较⿇烦、分辨率有限、探针不稳定、放射性同位素的危害较⾼等问题,故⽬前弃之不⽤。
20世纪80年代⽤⾮放射性半抗原如⽣物素进⾏核酸标记的技术逐渐开展后,探针也开始使⽤这种⾮放射性标记⽅法。
随后FISH技术逐渐开展起来,1986年以后该技术被应⽤于分析细胞分裂期染⾊体铺⽚的DNA序列。
相对于放射性来说,FISH具有稳定性好、操作安全、结果迅速、空间定位准确、⼲扰信号少、⼀张玻⽚可以标记多种颜⾊探针等优点。
这些优点逐渐使FISH成为⼀种研究分⼦细胞遗传学很好的⽅法。
FISH即染⾊体荧光原位杂交(Flourescence in situ hybridization,FISH)是通过荧光素标记的DNA探针与样本细胞核内的DNA靶序列杂交,从⽽获得细胞核内染⾊体或基因状态的信息。
FISH是将传统的细胞遗传学同DNA技术相结合,开创了⼀门新的学科——分⼦细胞遗传学。
(如下图所⽰)2.FISH信号解读-红红绿绿是什么⽬前临床上⽤于FISH检测的探针的荧光素⼤都是绿⾊的和橙红⾊标记,可⼤致分为:染⾊体计数(着丝粒)探针(centromere-enumerationprobes,CEP),位点特异性识别探针(locus-specific identifier probes,LSI),染⾊体涂染(paint,WCP)探针。
其中CEP和LSI探针中的计数探针、融合探针及分离重排探针,在⾎液病诊断与预后分型中最为常⽤。
FISH技术全攻略
![FISH技术全攻略](https://img.taocdn.com/s3/m/291f7ac59b89680203d825ad.png)
FISH(荧光原位杂交)技术全攻略荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示核酸序列位置的方法。
该技术问世与70年代中期左右,其曾多于与染色体异常的研究,近年来随着FISH探针种类的不断增多,使得该技术逐步应用于各种领域。
该技术具有快速,安全,灵敏度高以及探针可长期保存等特点,目前已广泛应用于细胞遗传学,肿瘤生物学,基因定位,基因作图,基因扩增及分子诊断等领域。
1对于FISH操作来说,那些因素比较重要?在FISH中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。
温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响了荧光染料的强度,因此探针要避光保存,其已经杂交的片子可用防荧光淬灭剂封片且避光保存;各种试剂pH也要精确达到要求,这也直接关系到FISH的稳定性。
2 如何保证FISH操作中的温度?最佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作,如Vysis的Hybrit FISH杂交仪。
如果是手工操作,首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查,如水浴锅、孵箱,对其中不符合要求的要进行更换(疾病诊断中的探针要求温控精度在0.5度以内)。
其次,要尽可能地保持操作环境温度在20度以上,对于在冬季进行的FISH操作尤为重要。
此外对于需要预热以达到要求温度的试剂,在使用前必须使用温度计对其进行测温。
同时检测的样本最好不能超过4块。
操作中的行动一定要迅速。
操作者还往往忽视一些小部件的温度,诸如载玻片和盖玻片。
特别是在冬季,盖玻片本身温度就低,加之探针的量本就不多(10ul),因此事先没有预热的盖玻片会使得杂交液的温度急剧下降严重地影响了探针和目标DNA的杂交效率。
因此对上述小部件的要进行预热处理,不然会影响FISH 的杂交效果。
3 使用荧光显微镜观察结果时,最初有清晰而明亮的信号,但随后信号急剧衰减,几分钟后信号就消失了。
常见血液肿瘤FISH检测小册
![常见血液肿瘤FISH检测小册](https://img.taocdn.com/s3/m/81eb06b1ba1aa8114431d9f9.png)
实用标准文档常见血液肿瘤FISH检测小册文案大全实用标准文档一.FISH是什么文案大全实用标准文档FISH即荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization),是在细胞遗传学水平上检测染色体及基因数目和结构异常的一种分子病理检测技术。
其基本原理是利用标记了荧光素的核酸作为探针,按照碱基互补原则,与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退火而形成杂交双链核酸,然后通过荧光显微镜进行检测和分析。
FISH技术具有直观、快速、敏感性高和方便灵活等特点,目前已经广泛应用于临床的肿瘤遗传学及各种基因相关疾病的分型与个体化治疗等多个领域。
文案大全实用标准文档二.血液肿瘤的诊断分型MICM:血液肿瘤诊断的精确分型是临床选择正确治疗方案的前提,目前国际上通用的是结合细胞形态学(Morphology)、免疫学(Immunology)、细胞遗传学(Cytogenetics)和分子生物学(Molecular)的MICM分文案大全实用标准文档型。
●形态学诊断(Morphology)细胞学:外周血、骨髓涂片,淋巴结穿刺组织学:骨髓、淋巴结活检●免疫学检查(Immunology)免疫组化(IHC),流式细胞(FCM)●细胞遗传学检查(Cytogenetics)核型分析,荧光原位杂交(FISH)●分子生物学检查(Molecular)PCR,DNA测序文案大全实用标准文档三.FISH技术的作用及优势FISH作为一项很重要的分子遗传学检测技术,在血液肿瘤的诊断中有很大的作用,得到了NCCN等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。
目前与血液肿瘤相关的FISH探针有接近100种,常用的就有60种左右,包括急慢性白血病、骨髓增生异常文案大全实用标准文档综合症(MDS)、多发性骨髓瘤(MM)、淋巴瘤等多种血液肿瘤。
FISH技术的相对优势:●FISH技术更敏感,可检测出核型分析检测不出的细微缺失或易位,如MDS中的5q缺失综合征;●FISH技术不需要中期分裂相细胞,而核型分析需要培养时间较长且需要较高的操作要求;●FISH技术是在细胞形态的基础上进行结果判读,可有效地降低假阴性或假阳性的风险,而PCR技术经过倍增扩增,不能在形态的基础上判读,对实验要求高,易产生假阴性或假阳性。
FISH检测在临床上的应用
![FISH检测在临床上的应用](https://img.taocdn.com/s3/m/4c1ea81f492fb4daa58da0116c175f0e7cd119d1.png)
FISH检测在临床上的应用FISH检测在临床上的应用一、简介- FISH(Fluorescence in situ hybridization)即原位荧光杂交技术,是一种用于研究基因组和染色体结构的分子生物学技术。
- FISH检测在临床应用中可以提供重要的染色体遗传学信息,用于诊断和监测某些疾病。
二、FISH检测的原理- FISH技术基于荧光标记的核酸探针与细胞或组织标本中的特定DNA序列发生互补杂交,通过荧光显微镜观察以检测特定基因组或染色体的异常。
- FISH检测可以提供高度准确的定量和定位信息,特别适用于检测具有微小或亚显性突变的染色体异常。
三、临床应用领域1、适用于癌症诊断和分型- FISH检测可以检测染色体上的特定基因重排,从而辅助癌症的诊断、分型和治疗方案的选择。
- 例如,FISH检测可以用于检测BCR-ABL融合基因以确认慢性髓性白血病的诊断。
2、适用于先天性遗传病的筛选和诊断- FISH检测可用于检测染色体异常,如唐氏综合征(21三体综合征)、爱德华氏综合征(18三体综合征)和智商障碍相关的染色体异常,用于婴儿和先天性遗传病的筛选和诊断。
3、适用于遗传性肿瘤相关基因的检测- FISH检测可以用于检测和定位遗传性肿瘤相关基因的异常,如BRCA1和BRCA2基因异常与乳腺癌和卵巢癌的遗传风险相关。
4、适用于感染性疾病的诊断和追踪- FISH检测可以用于检测和定位细菌、和寄生虫等感染性病原体的核酸序列,辅助感染性疾病的诊断和追踪。
四、技术要点和注意事项1、样本处理- 对于固定的细胞或组织标本,需要进行脱脂、脱水等预处理步骤。
- 不同类型的标本可能需要不同的处理方法,如骨髓涂片、组织切片等。
- 样本处理过程中需注意保持核酸完整性和避免污染。
2、探针设计与标记- 根据要检测的目标基因或染色体序列设计特异性的核酸探针。
- 核酸探针需要选择适当的荧光染料进行标记,以便在荧光显微镜中观察到。
- 标记的探针需要存储在适当的条件下,以保持标记稳定性和活性。
两种FISH试剂盒检测羊水染色体的比较
![两种FISH试剂盒检测羊水染色体的比较](https://img.taocdn.com/s3/m/e6fc1a0549649b6649d7474b.png)
两种FISH试剂盒检测羊水染色体的比较目的应用两种荧光原位杂交(FISH)试剂盒检测羊水染色体,比较两者在临床的应用效果。
方法采用北京金菩嘉和美国雅培Vysis生产的FISH试剂盒对30例未培养的羊水进行染色体检测,比较两者在信号强度和杂交率的差异。
结果30例样本均获得FISH检测结果,且两种试剂临床诊断符合率达到100%,杂交率无统计学意义(P>0.05)。
Vysis试剂21/13染色体荧光杂交信号较强,金菩嘉试剂18染色体信号清楚,不易融合。
结论Vysis与金菩嘉两种FISH检测试剂应用染色体异常产前诊断均可达到同样的临床诊断效果。
[Abstract] Objective Two fluorescence in situ hybridization (FISH)kits were utilized to inspectamniotic fluid chromosomes,to compare the both kits in clinical application. Methods Two fluorescence in situ hybridization (FISH)kits from Beijing GPmedical and Abbott were utilized to inspect 30 samples of amniotic fluid chromosomes.Their differences in respect of signal intensityand hybridizing were compared. Results All samples of the 30 cases were successfully detected by the both FISH kits.The hybridizing ratethere was no significant difference (P>0.05).Vysis kits 21/13 chromosome fluorescent hybridization signal was stronger than the GP kits’.The GP kits 18 chromosomes signal was clear and not easy to fuse. Conclusion the FISH kits from the Beijing GPmedical and Abbott Vysis can make the same prenatal diagnosis for the chromosome abnormality.[Key words] Fluorescence in situ hybridization;Prenatal dignosis;Chromosomal aneuploid熒光原位原位杂交技术(FISH)基于分子细胞遗传学发展的学科,始于1998年,至今在临床研究中广泛应用,在产前诊断领域更是不断完善和推广[1-3]。
2024荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范(全文)
![2024荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范(全文)](https://img.taocdn.com/s3/m/4f0f94dccd22bcd126fff705cc17552706225e69.png)
2024荧光原位杂交技术在血液肿瘤中的应用规范(全文)荧光原位杂交(FISH)技术是基于碱基互补配对原则,利用荧光标记的核酸探针,对待测标本DNA序列进行定位、定性和定量分析的技术,是遗传学异常的主要检测手段之一。
相较于核型分析,FISH技术具有快速、灵敏度高及特异性强的优势,是血液肿瘤诊断和预后判定的重要手段。
为进一步规范FISH技术在血液肿瘤中的应用,中国抗癌协会血液病转化医学专业委员会、中国老年医学学会病理学分会及中华医学会血液学分会组织国内血液学、病理学和检验学专家,制定了FISH 在血液肿瘤中的应用规范。
1 FISH在血液肿瘤诊疗中的应用价值1.1 诊断分型遗传学改变是血液肿瘤诊断分型的主要依据。
急性白血病(AL)、慢性粒细胞白血病(CML)、伴嗜酸粒细胞增多和酪氨酸激酶基因融合的髓系/淋系肿瘤(MLN-TK)、骨髓增生异常综合征(MDS)、大B 细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、间变大细胞淋巴瘤(ALCL)、T幼淋巴细胞白血病(T-PLL)等均需要借助FISH检测关键的遗传学异常才能精准分型。
1.2 预后分层目前针对急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、MDS、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、原发性骨髓纤维化(PMF)、多发性骨髓瘤(MM)等血液肿瘤,世界卫生组织(WHO)、美国国立综合癌症网络(NCCN)指南已提出了基于遗传学异常的预后分层/评分体系。
FISH检测在血液肿瘤的预后评估中发挥着不可替代的作用。
1.3 指导治疗CML患者中费城染色体(Ph染色体)或BCR::ABL1融合基因的发现开启了酪氨酸激酶抑制剂(TKI)靶向治疗的新时代。
此外,针对PML::RARA融合基因或其他RARA重排的全反式维甲酸和砷剂、ABL信号通路(ABL1、ABL2、PDGFRA、PDGFRB重排)的TKI药物、JAK-STAT信号通路(CRLF2、JAK1/2/3重排)的JAK抑制剂、FLT3重排的FLT3抑制剂、ALK重排的ALK抑制剂等均已正式应用于临床治疗或处于临床试验阶段。
FISH技术在临床中的应用
![FISH技术在临床中的应用](https://img.taocdn.com/s3/m/cc1b53fd80eb6294dd886c32.png)
探针设计
检测遗传物质的得与失
在单个细胞核内针对某个特定靶分子检测到多于或少 于2个探针信号被认为异常
正常 异常 异常
<
<
染色体、基因重排检测
—已知断点的平衡易位 探针设计 - 双色单融探针(DC /SF) 9 22
正常
异常
探针设计 - 双色单融探针(DC /SF)
• 使用指导
存在假阳性 如一个细胞中信号叠加。
探针设计 - 双色额外信号探针(ES)
很好地克服了双色单融出现的假阳性
探针设计 - 双色双融探针(DC/DF)
•
使用指导
• 最敏感的探针(假阳性<1 %)
• 可用来检测微小残留性疾病
• 不足是对融合信号不能区分
二、如何正确使用探针
CE认证 在欧洲,用于临床诊断的医疗器械是需要的CE(CONFORMITE EUROPEENNE)认证 的。 近年来,在欧洲经济区(欧洲联盟、欧洲自由贸易协会成员国,瑞士除外)销售
FISH技术在临床中的应用
基因科技(上海)有限公司
一、如何正确选择探针
二、如何正确使用探针 三、临床应用 —胃癌
一、如何正确选择探针
FISH探针种类
染色体结构
端粒(TTAGGG)n
染色体计数探针(CEP)
位点特异性标识分子(LSI) 端粒探针
特定区域或基因
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
短臂
着丝粒
长臂
端粒(TTAGGG)n
Fallon et al. J Neuropathol Exp Neurol 2004; 63:314 322. Horbinski et al. Brain Pathology 2011; 21:57–73 Nikiforova & Hamilton. Arch Pathol Lab Med. 2011;135:558–568
乳腺浸润性导管癌组织HER2基因的FISH检测
![乳腺浸润性导管癌组织HER2基因的FISH检测](https://img.taocdn.com/s3/m/03c0aa31ba0d4a7302763af3.png)
乳腺浸润性导管癌组织HER2基因的FISH检测摘要】目的探讨荧光原位杂交(FISH)在乳腺浸润性导管癌组织HER2基因检测中的应用。
方法分别采用免疫组化(IHC)、FISH方法对117例乳腺浸润性导管癌组织的HER2基因进行检测。
结果 IHC-、1+、2+、3+与FISH结果符合率分为100%、2.9%、25%、90.3%。
结论 FISH是一种准确可靠的HER2基因检测方法。
【关键词】乳腺浸润性导管癌 HER2 免疫组化荧光原位杂交【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)27-0126-02【Abstract】Objective To explore the application value of Fluorescence in situ hybridization(FISH) in the detection of HER2 gene expression of invasive breast carcinoma tissues. Methods IHC and FISH was used for HER2 gene expression of 100 cases, respectively. Results The accordant rate of HER2 gene between IHC-、1+、2+、3+ and FISH is 100%、2.9%、25%、90.3% ,respectively. Conclusion FISH is an accurate and dependable detection methods of HER2 gene.【Key words】 Invasive breast carcinoma HER2 IHC FISH乳腺癌是女性高发的恶性肿瘤,靶向治疗的出现给HER2阳性、或有转移、或对放化疗无效的乳腺癌患者带来了福音。
荧光原位杂交技术(FISH)常见问答
![荧光原位杂交技术(FISH)常见问答](https://img.taocdn.com/s3/m/8a73443243323968011c928c.png)
荧光原位杂交技术(FISH)常见问答对于FISH操作来说,那些因素比较重要?在FISH中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。
温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响了荧光染料的强度;各种试剂pH是否符合要求直接关系到FISH的稳定性。
在夏季成功检测的同一探针和样本为什么在冬季就得不到理想的效果?发生上述现象最大的可能是FISH操作的环境温度发生了变化导致的。
在我国,冬季普遍比夏季寒冷,低的环境温度使FISH得不到良好的杂交效率。
此外,探针的保存不当也容易引起荧光素的萃灭而导致效果不佳。
因此保证FISH操作中的温度非常重要。
该如何保证FISH操作中的温度?最佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作。
如果是手工操作,首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查,诸如水浴锅、孵箱,对其中不符合要求的要进行更换(疾病诊断中的探针要求温控精度在1度以内)。
其次,要尽可能地保持操作环境温度在20度以上,对于在冬季进行的FISH 操作尤为重要。
此外对于需要预热以达到要求温度的试剂,在使用前必须使用温度计对其进行测温。
同时检测的样本最好不能超过4块。
操作中的行动一定要迅速。
操作者还往往忽视一些小部件的温度,诸如载玻片和盖玻片。
特别是在冬季,盖玻片本身温度就低,加之探针的量本就不多(10ul),因此事先没有预热的盖玻片会使得杂交液的温度急剧下降严重地影响了探针和目标DNA的杂交效率。
因此对上述小部件的预热也能有效地提高FISH的杂交效果。
使用荧光显微镜观察结果时,最初有清晰而明亮的信号。
但随后信号急剧衰减。
几分钟后信号就消失了。
这是探针本身的质量问题吗?在正常情况下,目前的商业化探针即使是杂交后,如果保存适当,荧光信号能保持半年以上。
出现上述情况主要的原因是操作观察的过程中或是探针的保存过程中没有采取严格的避光措施。
阳光或是强的灯光都会使荧光染料发生急剧的淬灭,从而造成了观察结果的不稳定。
FISH实验标准操作程序(FISH实验资料一)
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FISH实验标准操作程序(成都新基因格实验室内部完整版)一实验目的通过荧光原位杂交实验,辅助临床医疗诊断:提高优生优育(产前诊断中的应用)、提前预防及治疗病患(产后诊断及膀胱癌诊断等)、对肿瘤确诊病人评估预后及中位生存期、无病痛生存期(Dsease-Free Srvival,DFS),指导用药及治疗方案(针对乳腺癌、胃癌患者的HER-2基因诊断,针对CML患者的bcr/abl融合基因诊断等)。
二实验原理利用DNA碱基对的互补性,将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况 三仪器设备及耗材(一) 仪器设备:①:全自动分子杂交仪②:荧光显微镜及分析软件③:恒温水浴箱3个以上(小型号)④:冰箱2台(提供试剂和标本存放,4摄氏度和-20摄氏度)⑤:离心机(用于羊水标本以及血液标本,绒毛标本处理过程的离心)⑥:通风橱(配固定液,等操作)⑦:迷你离心机(探针,缓冲液的离心。
可离1.5ml管、0.2ml管)⑧:考普林瓶15个(FISH实验中盛放各种试剂,溶液)⑨:移液枪(5ml,1000ul,200ul,10ul)放于杂交室和制备室。
10:震荡混匀器11:计时器,温度计,温度湿度显示器。
12:载玻片盒(用于存放已经FISH实验后的FISH片子)13:洗耳球,吸量管(10ml),烧杯,容量瓶,电子天平,常用天平称。
(二)耗材:载玻片(最好,带磨砂的,写用铅笔患者编号,因为不带磨砂的贴标签会被乙醇洗掉。
)大盖玻片(方形,用于镜检)小盖玻片(方形或圆形,圆形佳,用于分子杂交时候封片)离心管(10ml,1.5ml,200ul)3ml一次性吸管个人防护用品,标签纸等。
四实验样本及试剂样本:外周血,骨髓血,羊水,尿液,病理组织切片等。
试剂:4%NaOH液、0.1%NP-40、20XSSC、2XSSC、0.075M Kcl、1M Hcl、PBS缓冲液、0.08mg/ml 胃蛋白酶工作液、200ug/ml蛋白酶K工作液、检测试剂盒等。
最新常见血液肿瘤FISH检测小册资料
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最新常见⾎液肿瘤FISH检测⼩册资料精品⽂档常见⾎液肿瘤FISH检测⼩册精品⽂档精品⽂档精品⽂档⼀.FISH是什么FISH即荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization),是在细胞遗传学⽔平上检测染⾊体及基因数⽬和结构异常的⼀种分⼦病理检测技术。
其基本原理是利⽤标记了荧光素的核酸作为探针,按照碱基互补原则,与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退⽕⽽形成杂交双链核酸,然后通过荧光显微镜进⾏检测和分析。
FISH技术具有直观、快速、敏感性⾼和⽅便灵活等特点,⽬前已经⼴泛应⽤于临床的肿瘤遗传学及各种基因相关疾病的分型与个体化治疗等多个领域。
精品⽂档⼆.⾎液肿瘤的诊断分型MICM:⾎液肿瘤诊断的精确分型是临床选择正确治疗⽅案的前提,⽬前国际上通⽤的是结合细胞形态学(Morphology)、免疫学(Immunology)、细胞遗传学(Cytogenetics)和分⼦⽣物学(Molecular)的MICM分型。
形态学诊断(Morphology)细胞学:外周⾎、⾻髓涂⽚,淋巴结穿刺组织学:⾻髓、淋巴结活检精品⽂档精品⽂档●免疫学检查(Immunology)免疫组化(IHC),流式细胞(FCM)●细胞遗传学检查(Cytogenetics)核型分析,荧光原位杂交(FISH)●分⼦⽣物学检查(Molecular)PCR,DNA测序三.FISH技术的作⽤及优势FISH作为⼀项很重要的分⼦遗传学检测技术,在⾎液肿瘤的诊断中有很⼤的作⽤,得到了NCCN等国内外各⼤⾎液肿瘤诊疗指南的认可和建议。
⽬前与⾎液肿瘤相关的FISH探针有接近100种,常⽤的就有60种左右,包括急慢性⽩⾎病、⾻髓增⽣异常综合症(MDS)、多发性⾻髓瘤(MM)、淋巴瘤等多种⾎液精品⽂档精品⽂档肿瘤。
FISH技术的相对优势:●FISH技术更敏感,可检测出核型分析检测不出的细微缺失或易位,如MDS中的5q缺失综合征;●FISH技术不需要中期分裂相细胞,⽽核型分析需要培养时间较长且需要较⾼的操作要求;●FISH技术是在细胞形态的基础上进⾏结果判读,可有效地降低假阴性或假阳性的风险,⽽PCR技术经过倍增扩增,不能在形态的基础上判读,对实验要求⾼,易产⽣假阴性或假阳性。
病理方面的染色技术,HE染色,IHC,FISH
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免疫组化的特点
▪ 特异性强 ▪ 敏感度高 ▪ 定位准确
免疫组化的分类
▪ 按标记物质的种类 免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等
▪ 按染色步骤 直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)
▪ 按结合方式 1、抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)
法 2、亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)
实验对照组的设置
实验对照目的: * 证实抗体和检测试剂盒效价是否可靠。 * 染色操作是否正确。 * 避免试剂失效或操作失当而出现假阴
性和假阳性,确保染色结果的可靠性。
一、阳性对照
用已证实含用待测抗原的组织,与待检标 本做同样处理后,进行免疫组化染色,结 果应为阳性,称为阳性对照。
二、阴性对照
用确知不存在待检抗原的组织切片染色,结果为 阴性。阴性对照可证实组织内若不含靶抗原就不 应染色,可排除在染色过程中由于非特异性染色 或交叉反应等因素造成的“假阳性”结果。
与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
HE染色原理
▪ 脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,
带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精 碱性染料以离子键结合而被染色。
▪ 伊红是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成 带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳
离子结合使胞浆染成红色或粉红色,与蓝色的细 胞核形成鲜明对比。
FISH的应用领域
▪ 基因定位与基因制图(gene mapping)。FISH已经极大 地加速了人类基因定位和基因制图的进程
▪ 基因诊断(gene diagnosis)。精确、直观、明了 ▪ 间期细胞遗传学(interphase cytogenetics) ▪ FISH在肿瘤生物学中的应用: ①肿瘤细胞遗传学(onco-cytogenetics); ②基因定位:FISH可用于分离出的癌基因与抑癌基因初步
FISH技术
![FISH技术](https://img.taocdn.com/s3/m/d7630c44852458fb770b56c7.png)
原位杂交技术原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。
RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。
该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。
其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。
RNA原位杂交技术经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。
尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已成为最有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。
1.基因组原位杂交技术基因组原位杂交(Genome in situ hybridization,GISH)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。
它主要是利用物种之间DNA同源性的差异,用另一物种的基因组DNA以适当的浓度作封阻,在靶染色体上进行原位杂交。
GISH技术最初应用于动物方面的研究(Pinkel et al.,1986),在植物上最早应用于小麦杂种和栽培种的鉴定(余舜武等2001;王文奎等2000)。
2.荧光原位杂交技术荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是在已有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性DNA分子原位杂交技术。
罗氏全自动免疫组化染色仪特点
![罗氏全自动免疫组化染色仪特点](https://img.taocdn.com/s3/m/76e770c043323968001c9206.png)
目前罗氏独占的SISH技术和北京金菩嘉的FISH技术两者区别如下:之阿布丰王创作由于FISH方法中的荧光容易淬灭,保管时间短,晦气于病理科存档.没有相应的仪器完玉成自动检测,对把持人员技术要求高,荧光显微镜价格昂贵;但技术开展较早,有较好的市场声誉.SISH与目前应用的FISH方法比较其结果符合率年夜于98%;可用仪器全自动完成检测;把持相对简单;不需特殊显微镜;结果可长期保管;将是未来分子病理发展的重点,目前罗氏可提供Her2和EGFR探针,可同时和17号染色体在同一张片子上显色,未来会有TOP2,MIT等各种新的探针提供给临床.FISH:荧光原位杂交,需用荧光显微镜观察.SISH:银染原位杂交,可用光学显微镜观察.●Benchmark XT 仪器介绍Benchmark XT病理检测系统是罗氏于2008年推出的最新型全自动多功能的组织病理检测系统,具有以下优势:➢运用于免疫组化和原位杂交技术免疫组织化学技术与原位杂交技术是近年来病理诊断发展先进的检测技术;为临床实现个体化及分子靶向治疗提供有力的支持.➢具备最佳检测性能,包括以下指标:1.高灵敏度2.高特异性检测3.高稳定性4.全液体试剂5.条形码技术6.专利的喷射清洗7.多喷头分配器8.专利液体封盖膜技术(LCS)9专利空气涡流混匀技术10.专利Themopad温控技术11.检测方案多样化及个性化(为各厂家最齐全的)12.专利的脱蜡液1.仪器可以开展哪些新项目?会对学科发展和临床诊断有哪些指导作用?仪器除解决惯例IHC的工作,还可以进行基因检测ISH,如鼻咽癌和Bukitt’s淋巴瘤的EBER,宫颈HPV 6和16型检测, 乳腺癌her2/new基因检测等.这些基因检测目前对临床的靶向治疗有指导作用,同时在病人癌前预测方面有价值,值得推广.2.新的广东省免疫组化收费是几多钱、银染原位杂交收费是几多钱?新的广东省免疫组化收费,年夜概是200元左右/项;银染原位杂交收费年夜概是2200元左右/项.3.该设备可给医院和科室解决哪些问题?减少免疫组化染色工作中手工把持带来的误差,使把持法式标准化,缩短实验时间,提高科室工作效率,可满足科室免疫组化质量控制.满足免疫组化需求及分子病理项目的开展,为临床实现个体化及分子靶向药物治疗提供有力的支持.环保的试剂有益于病理技术人员身体健康,降低医院处置废液的本钱.Roche Benchmark XT与Leica Bond-Max比较表。
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myTags®探针设计可以使用任何已知序列来生成复杂的 oligo 文 库,消除 号并降低背景噪音,使目标区域可视 化。目前已应用到 DNA-FISH, RNA-FISH, Cryo-FISH, FIBER-FISH, 染色体绘制,基因图谱,Scaffold 序列组装等方面,相对于其他探针 具有显著特点。
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荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)技术是 一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体 上显示 DNA 序列位置的方法。目前已广泛应用于染色体结构变异检 测、基因作图、基因定位、基因扩增、产前诊断,疾病检测等领域, 在临床诊断上具有很大的影响。myTags®打破了传统 FISH 探针的限 制,是具有高度特 异性、无重复序列 的探针。my扩增; myTags®同样可以 提供即用型标记探针。
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使用 myTags 提供的标签标记方案,在需要的时候生成标记探针。