SDSPAGE操作方法要点
SDS-PAGE电泳实验步骤
SDS-PAGE电泳实验步骤垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋⽩质⼀、实验⽬的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋⽩质的分⼦量的原理和基本操作技术。
⼆、实验原理蛋⽩质是两性电解质，在⼀定的pH条件下解离⽽带电荷。
当溶液的pH⼤于蛋⽩质的等电点(pI)时，蛋⽩质本⾝带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH⼩于蛋⽩质的等电点时，蛋⽩质带正电，在电场中将向负极移动；蛋⽩质在特定电场中移动的速度取决于其本⾝所带的净电荷的多少、蛋⽩质颗粒的⼤⼩和分⼦形状、电场强度等。
聚丙烯酰胺凝胶是由⼀定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合⽽成的三维⽹状孔结构。
本实验采⽤不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺⽤量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分⼦量的蛋⽩质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同⽽表现出不同的迁移率。
由于上层胶的孔径较⼤，不同⼤⼩的蛋⽩质分⼦在通过⼤孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进⼊⼩孔胶时，分⼦量⼤的蛋⽩质移动速度减慢，因⽽在两层凝胶的界⾯处，样品被压缩成很窄的区带。
这就是常说的浓缩效应和分⼦筛效应。
同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采⽤两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris —HCI缓冲液中的Tris⽤于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离⼦；CI-是前导离⼦。
在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离⼦，⽽在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离⼦的解离度，进⽽达到控制其有效迁移率之⽬的。
不同蛋⽩质具有不同的等电点，在进⼊分离胶后，各种蛋⽩质由于所带的静电荷不同，⽽有不同的迁移率。
由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分⼦筛效应及电荷效应，使不同的蛋⽩质在同⼀电场中达到有效的分离。
如果在聚丙烯酰胺凝胶中加⼊⼀定浓度的⼗⼆烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有⼤量的负电荷，且这种阴离⼦表⾯活性剂能使蛋⽩质变性，特别是在强还原剂如巯基⼄醇存在下，蛋⽩质分⼦内的⼆硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋⽩质分⼦与SDS充分结合，形成带负电性的蛋⽩质—SDS复合物；此时，蛋⽩质分⼦上所带的负电荷量远远超过蛋⽩质分⼦原有的电荷量，掩盖了不同蛋⽩质间所带电荷上的差异。
蛋白质SDS-PAGE电泳注意事项
匀浆:1.匀浆缓冲液含有多种蛋白酶抑制剂，降低蛋白酶活性，以防蛋白降解。
2.SDS在匀浆以后再加入，以防起沫。
3.所有操作尽量在冰上进行。
4.94C水浴（或沸水浴）处理的作用是为了是蛋白变性，以防降解（水浴锅事先要打开升温）。
5.PMSF是有毒试剂，处理时注意。
6.操作过程尽量带上手套，以防人手表面的蛋白和脂肪的污染。
7.热水浴后，离心是用的可以控温的离心机，使用前15分钟打开使温度降到4C,即可。
8.离心后分装，可以用枪头先把表面的一层吸走，换取新的枪头在分装。
9.SDS,DDT,PMS是用时临时加入缓冲业的，根据母液的浓度计算所需的量。
制胶：10.APS和TEME是促凝的，根据温度加入的量是可以变动，一般不超过30%。
11.玻璃板一定要洗干净，否则制胶是会有气泡。
12.丙烯酰胺是有毒的，操作时注意安全。
（凝胶以后，聚丙烯酰胺毒性降低。
）13.1.5mm的玻璃板有黑色条带封低，1mm勺玻璃板用白色条带封底。
（封紧以防漏胶）14.凝胶的时间要严格控制好，一般在20-30min。
15.样品处理时，沸水浴使蛋白充分变性以防在电泳时产热蛋白质降解。
一般要5-10分钟。
而且要注意把样品的管口封好，以防沸水浴时冲开（出错了）。
16.点样时，如果孔比较多，尽量点在中央。
（点在边上时，跑出的带是斜的）17.点样前要排尽胶底部的气泡，防止干扰电泳。
18.开始电泳时，电压调到80V,当跑过浓缩胶时电压调到100V。
19.电泳结束后，取胶时，小心把玻璃板翘起（防止再次落下）20.脱色时，尽量多次进行换水。
21.上样量不宜太高，蛋白含量每个孔控制在10卩g-50卩g,，一般V 15卩I.22.做胶时，凝胶时间控制在25min。
梳子不能歪来歪去。
23.上样时，Mark最好标在中间，边上的孔尽量不要上样。
24.制胶时，在加APS前尽量不要搅拌，加入APS后可以轻轻搅拌，不要产生气泡。
注意：温度，时间，光照，APS和TEMEDfE会对凝胶产生影响。
蛋白质sds-page凝胶电泳实验步骤
蛋白质sds-page凝胶电泳实验步骤嘿，朋友们！今天咱就来讲讲蛋白质 SDS-PAGE 凝胶电泳实验那些事儿。
首先呢，得准备好各种材料和试剂，这就好比要出门得先把鞋穿好一样重要。
什么电泳槽啦、玻璃板啦、丙烯酰胺溶液啦等等，一个都不能少。
然后就是配胶啦！这就像做菜，得把各种材料按照一定的比例调好。
先配分离胶，小心翼翼地把各种溶液倒在一起，搅拌均匀，可别搅出气泡来哟，不然就像蛋糕里有了疙瘩，可不好看啦。
接着让它静置一会儿，等它凝固得差不多了，再倒上浓缩胶，这浓缩胶就像是给蛋糕加上一层漂亮的奶油。
胶配好啦，接下来就是上样啦！把处理好的蛋白质样品加到孔里，就好像是给小格子里放上宝贝。
这时候可得细心点，别把样品洒出来啦。
接着就是电泳啦！通上电，让蛋白质在电场里欢快地奔跑起来。
它们就像一群小朋友在赛跑，跑得快慢不一样，最后就分开啦。
在这个过程中，可别闲着呀，要时刻盯着，就像看着自己的宝贝在比赛一样。
看看电泳液有没有变少呀，电泳的情况怎么样呀。
等电泳结束啦，就可以染色啦！把胶放到染色液里泡一泡，就像给它洗个彩色的澡。
等染上颜色了，就能清楚地看到蛋白质的条带啦。
哎呀，你说这蛋白质 SDS-PAGE 凝胶电泳实验是不是很有趣呀？就像一场小小的冒险，每一步都充满了惊喜和挑战。
虽然过程可能有点繁琐，但当你看到那清晰的条带时，就会觉得一切都值得啦！就好像辛苦种的花儿终于开了一样开心。
所以呀，别害怕，大胆地去尝试吧！只要按照步骤一步一步来，肯定能做出漂亮的结果。
就像学走路一样，一开始可能会跌跌撞撞，但只要坚持，总会走得稳稳当当的。
加油哦，朋友们！相信你们一定能在蛋白质 SDS-PAGE 凝胶电泳实验中找到属于自己的乐趣和成就感！。
sdspage实验报告
sdspage实验报告SDS-PAGE实验报告引言：SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
通过SDS（十二烷基硫酸钠）的作用，可以使蛋白质在电泳过程中带有负电荷，从而使其按照分子量大小在凝胶上进行分离。
本实验旨在通过SDS-PAGE技术分离和分析不同来源的蛋白质样品，探究其分子量和纯度。
材料与方法：1. 样品制备：从不同来源（如细菌、植物、动物）获得蛋白质样品，并进行样品的提取和纯化。
2. SDS-PAGE凝胶制备：根据所需分离范围选择合适的凝胶浓度，并制备上胶液和下胶液。
3. 样品处理：将样品与样品缓冲液混合，并加入还原剂和SDS。
4. 电泳条件：将样品加载到凝胶孔中，进行电泳操作。
设置适当的电压和时间。
5. 凝胶染色：将电泳后的凝胶进行染色，以可视化蛋白质带。
结果与讨论：通过SDS-PAGE技术，我们成功地分离和分析了不同来源的蛋白质样品。
在电泳过程中，蛋白质样品在电场作用下向阳极迁移，其迁移速率与其分子量成反比。
因此，我们可以根据蛋白质在凝胶上的迁移距离来推测其分子量。
观察到的凝胶图像显示出多个蛋白质带，每个带代表一个具有特定分子量的蛋白质。
通过与已知分子量标准品进行比较，我们可以推断出样品中蛋白质的分子量范围。
同时，通过比较不同来源的样品，我们可以观察到它们之间的差异。
在某些情况下，我们可能观察到一些额外的带，这可能是由于蛋白质的不同修饰或附加物所致。
例如，糖基化的蛋白质可能会在凝胶上显示出多个带，每个带代表不同程度的糖基化。
此外，我们还可以通过观察蛋白质带的强度来推断其纯度。
如果某个蛋白质带非常明亮且没有其他杂质带的干扰，那么可以认为该蛋白质具有较高的纯度。
相反，如果某个带非常弱或有其他带的干扰，那么可能表示该样品中存在其他蛋白质或杂质。
结论：通过SDS-PAGE技术，我们成功地分离和分析了不同来源的蛋白质样品。
通过观察蛋白质带的位置、分子量范围和强度，我们可以推断蛋白质的分子量和纯度。
SDS-PAGE具体步骤
（一）安装夹心式垂直版电泳槽各部分依下顺序安装：装上储槽和固定螺丝销钉，仰放在桌面上；将长、短玻璃板分别插到硅胶框的凹形槽中。
注意勿用手接触灌胶面，以保持玻璃清洁；将已插好玻璃板的凝胶模平方在储槽上，短玻璃板应面对上储槽；将下储槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上储槽，双手以对角线的方式旋紧螺丝帽。
竖直电泳槽，用细头长滴管吸取已熔化的1%琼脂（糖）溶液，封住长玻璃板下端与硅胶膜间的缝隙。
加琼脂（糖）溶液时，应防止气泡进入。
琼脂（糖）溶液用不连续体系电极缓冲液配制。
（二）配胶及凝胶板的配制1、配胶配胶应根据所测蛋白质相对分子质量范围选择适宜的分离胶浓度。
2、凝胶板的配制分离胶的制备：按表配制20mL10%的聚丙烯酰胺（PAA）溶液，混匀后用细长头滴管将凝胶液加至长、短玻璃板之间的缝隙内，约8cm高，用1mL注射器取少许蒸馏水，沿长玻璃板壁缓慢注入，约3~4mm高，以进行水封。
30min后，凝胶与水封层间出现折射率不同的界线，则表示凝胶完全聚合。
倾去水封层的蒸馏水，再用滤纸条吸去多余水分。
浓缩胶的制备：按表配制10mL3%的PAA，混匀后用细长头滴管将浓缩胶加到已聚合的分离胶上方，直至距离玻璃板上缘约0.5cm处轻轻将样品槽模板插入浓缩胶内，约30min后凝胶聚合，再放置20~30min，使凝胶“老化”。
小心拔去样品槽模板，将pH值为8.3的Tris-甘氨酸缓冲液倒入上、下储槽中，应没过短玻璃板0.5cm以上，即可准备加样。
(电极缓冲液即pH值为8.3的Tris-甘氨酸缓冲液，内含0.1%的SDS)（三）样品的处理与加样样品的处理：称取0.5~1mg蛋白质加1mL样品溶解液处理，溶解后，在100摄氏度沸水浴中保温3min，取出冷却后取样电泳。
（如处理好的样品暂时不用，可放在-20摄氏度冰箱内保存，使用前在100摄氏度沸水中加热3min，以除去亚稳态聚合物。
）加样：（加样体积要根据凝胶厚度及样品浓度灵活掌握，一般加样体积为10~15uL(即2~10ug蛋白)；如样品较稀，加样体积可达100uL。
SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档
SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)一．仪器装置1．电泳仪2．夹心式垂直电泳槽3．玻璃板：长14.5×11.5×2mm、短14.0×11.5×2mm4．可调微量移液器5．微量进样器6．转移脱色摇床二．试剂配制1．丙烯酰胺液（30%T/2.7%C）用天平分别称取58.4g丙烯酰胺（Acr）和1.6g N,N’-亚甲双丙烯酰胺（Bis），溶于120ml温热（37℃左右，以利于溶解Bis）的去离子水中，然后转移至200ml容量瓶中，补加去离子水至刻度，摇匀，用滤纸过滤后，检查其pH值应不大于7.0，贮存在棕色瓶中，4℃保存。
每隔2个月重新配制。
小心：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套。
如不慎接触皮肤，应立即用水和肥皂清洗。
2．分离胶缓冲液（1.5M Tris-HCl，pH8.8）用天平称取36.3g三羟甲基氨基甲烷（Tris），溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至8.8~8.9（先加5ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
3．浓缩胶缓冲液（0.5M Tris-HCl，pH6.8）用天平称取12.1g Tris，溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至6.7~6.8（先加8ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
4．10% 十二烷基硫酸钠溶液用天平称取20.0g 电泳级十二烷基硫酸钠（SDS），加180ml去离子水，68℃水浴使溶解后，用去离子水定容至200ml，室温保存。
5．10% 过硫酸铵溶液用天平称取0.50g过硫酸铵（APS），溶于5ml去离子水中，分装Eppendof管冰冻保存。
6．四甲基乙二胺（TEMED）液7．分离胶覆盖液（（0.375M Tris-HCl，pH8.8，0.1% SDS）取分离胶缓冲液25ml、10% SDS溶液1.0ml，混匀，加去离子水定容至100ml，室温保存。
SDS-PAGE电泳标准操作流程
SDS-PAGE电泳标准操作规程1、目的建立SDS-PAGE电泳的标准操作规程,确保电泳操作有序进行，保证电泳的安全性、有效性。
2.范围与职责适用SDS-PAGE电泳操作岗位。
配制岗位操作人员对本标淮实施负责，QA检查员、生产主管负责监督。
3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。
放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。
3.1.2 分离胶的配置3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：3.1.2.2 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内(胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm)。
3.1．2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。
静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。
3.1.3浓缩胶的配置3.1.3.1 5%浓缩胶配方下表：3.1.3.2插入制胶梳混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方)，轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。
约30分钟，聚合完全。
3.2. 电泳3.2.1 安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。
两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。
将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。
倒入1X tris-gly电泳缓冲液。
3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80µl的样品，依次加上20µl 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。
对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。
3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10μl，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker 加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。
SDSPAGE操作方法要点
SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS 多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与 g去污剂结合。
当分子量在15 KDa到200 KDa 之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K – bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
sds page凝胶电泳步骤
sds page凝胶电泳步骤以SDS-PAGE凝胶电泳步骤为标题的文章SDS-PAGE凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和测量方法，其步骤包括蛋白质样品的制备、样品加载、电泳运行、染色和图像分析等。
本文将详细介绍SDS-PAGE凝胶电泳的步骤及相关注意事项。
一、蛋白质样品的制备准备要分离的蛋白质样品，并将其加入样品缓冲液中，以使蛋白质溶解并保持其天然构象。
样品缓冲液通常包含Tris-HCl缓冲液、甘油、SDS和β-巯基乙醇等成分，用于维持样品的pH值和还原环境，使蛋白质完全展开。
二、样品加载将制备好的蛋白质样品加载到凝胶孔中。
通常使用微量吸管或微量注射器将样品缓冲液缓慢地注入凝胶孔中，确保样品完全进入凝胶中。
三、电泳运行将已加载样品的凝胶板放置在电泳槽中，确保凝胶完全浸泡在电泳缓冲液中。
然后将电泳槽连接到电源，并设置合适的电压和电流参数。
根据需要，可以选择常规电泳或快速电泳。
在电泳过程中，蛋白质样品会在凝胶中被电场推动，根据其分子大小和电荷不同，被分离成不同的带状条带。
较小的蛋白质分子迁移速度较快，而较大的蛋白质分子迁移速度较慢。
四、染色电泳结束后，需要对凝胶进行染色以可视化蛋白质带状条带。
常用的染色方法有银染色和Coomassie蓝染色。
银染色对蛋白质敏感性高，但操作繁琐；而Coomassie蓝染色操作简单，但对蛋白质敏感性相对较低。
五、图像分析通过使用分析软件或图像扫描仪，将染色后的凝胶图像数字化，并进行分析。
可以测量蛋白质带状条带的相对迁移距离和相对强度，进而确定蛋白质的分子大小和相对丰度。
在进行SDS-PAGE凝胶电泳实验时，还需要注意以下事项：1. 准备工作确保操作台和仪器干净，并准备好所需的试剂和设备。
避免在实验过程中发生交叉污染。
2. 样品加载在加载样品时，应避免空气泡和溢出。
确保样品均匀地加载到凝胶孔中，以获得清晰的带状条带。
3. 电泳运行条件根据蛋白质样品的大小和分离需求，选择合适的电压和电流参数。
SDS-PAGE凝胶电泳操作
SDS-PAGE凝胶电泳操作一、常规试剂的配制1. 30% 聚丙烯酰胺贮液：丙烯酰胺150g，甲叉双丙烯酰胺4g，双蒸水500ml，滤纸过滤后，棕色瓶避光4℃保存；2. 1.5mol/L，pH 8.8 Tris-HCl分离胶缓冲液：18.15g Tris，用1mol/L HCl定容至100ml，棕色瓶避光4℃保存；3. 1.0mol/L，pH 6.8 Tris-HCl分离胶缓冲液：12g Tris，用1mol/L 调pH至100ml，棕色瓶避光4℃保存；4. 10% SDS溶液：10g SDS加水定容至100ml，完全溶解室温保存；5. 10% AP溶液：0.1g AP（过硫酸铵）加水定容至1ml，用前新鲜配制；6. 1×SDS-PAGE电泳缓冲液：25mM Tris（3.0285g/L），192mM甘氨酸（14.41g/L），0.1%SDS （1g/L），pH 8.30；7. 染色液：0.25g 考马斯亮蓝R-250溶解于45ml甲醇，45ml水，10ml冰醋酸，过滤除去杂质；8. 脱色液：45ml甲醇，45ml水，10ml冰醋酸；9. 固定液：50ml甲醇，40ml水，10ml冰醋酸；10. 2×SDS-PAGE上样缓冲液：10% SDS 0.4ml，0.375M Tris-HCl（pH 6.8）0.333ml，甘油0.2ml，1% 溴酚兰10μL，β-疏基乙醇100μL，加水定容至1ml，分装后-20℃保存。
二、样品的处理1. 蛋白含量较低的酶制剂或原料样品（1）粉剂（或颗粒）样品称取样品1g，加入3-5ml蒸馏水进行搅拌溶解1h（搅拌时间可根据实际情况进行增减），4000rpm离心10min，取离心上清液等体积加入20%的三氯乙酸聚沉30min，离心，弃去离心上清液，用70%的丙酮溶液洗涤沉淀，4000rpm离心10min，重复洗涤3-5次，将丙酮洗涤液吹干，加入适量（1-3ml）PBS溶解沉淀，溶解液即可用于电泳实验。
(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法
SDS-PAGE一. 实验原理SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。
在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。
由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。
蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。
基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。
二. 试剂器材30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制；注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。
分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；电泳缓冲液(1L)：称取试剂Tris 3.03g和甘氨酸 14.4g置于500mL烧杯中，向烧杯中加入约400mL双蒸水充分溶解，再加入10%SDS溶液1.0mL，以双蒸水定容至1L (自然pH值为8.3，无需再调)，4℃ 贮存，可重复使用5-6次；2×加样缓冲液(10mL)：取下列试剂置于10mL塑料离心管中0.5mol/L Tris-HCl缓冲液(pH6.8) 2.0mL10%SDS溶液 4.0mL甘油 2.0mL巯基乙醇 2.0mL溴酚蓝 0.02g，混匀后1mL分装，-70℃可贮存6个月；10%AP：称取(NH4)2S2O3 1.0 g，溶于10.0mL双蒸水中，分装成每份1mL，-20℃贮存；TEMED：分装成每份1mL，4℃避光贮存；水饱和正丁醇(100mL)：在玻璃瓶中加入50mL双蒸水和50mL正丁醇，振摇。
SDS-PAGE
制备浓缩胶
配制浓缩胶溶液
浓缩胶(5%.3ml) H2O 30%Acr-Bis Buffer 10%SDS 10%Ap TEMED 0.7ml 1.5ml 0.5mol/L pH=6.8 Tris-HCl 0.75ml 0.03ml 0.03ml 4µl
样梳需一次平稳插入,梳 口处不得有气泡,梳底需 水平。 插入样品梳
SDS-PAGE原理
要点内容
基本原理概述 SDS的性质与作用 PAGE胶的性质 缓冲液系统 基本步骤
基本原理概述
SDS-PAGE技术是根据SDS能使蛋白质变性解 聚成肽链并与肽链侧链以一定比例结合成SDS— 肽链复合体（雪茄状），从而掩盖了肽链本身 所带电荷（SDS带负电），并消除了蛋白质分子 间的形状差异，再结合PAGE技术（根据分子的 形状、电荷、分子量综合差异来分离不同分子 的技术）来分离不同分子量蛋白质或测定定蛋 白质分子量的实验技术。
PAG聚合过程图
聚丙烯酰胺凝胶性质
• Acr和Bis在它们单独存在或混合在一起时是稳定的， 且具有神经毒性，操作时应避免接触皮肤。但在具 有自由基团体系时，它们聚合。引发产生自由基团 的方法有两种，即化学法和光化学法。 • Acr-Bis(39:1)即为含40％ acrylamidebisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和 bisacrylamide的比例为39:1。
聚丙烯酰胺凝胶性质
PAGE和SDS-PAGE的比较
PAGE
X
-
-
Y
- +
Z
+ SDS
SDS-PAGE X Y Z
+
结果受分子量大小电荷形状的影响 结果只与分子量大小有关
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳SDSPAGE实验原理和操作步骤
S D S聚丙烯酰胺凝胶电泳S D S P A G E实验原理和操作步骤The pony was revised in January 2021SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。
该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。
SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。
SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。
在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。
蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。
试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。
可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。
2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。
过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。
3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。
4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。
5. TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。
置4℃保存，临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解SDS-（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种电泳技术，用于分离蛋白质。
它是目前最常用的蛋白质分离方法之一、以下将详细介绍SDS-的原理和操作步骤。
一、原理SDS-利用凝胶电泳原理，在电场作用下，将蛋白质按照其分子量大小分离。
其中SDS（Sodium Dodecyl Sulfate）是一种阴离子表面活性剂，它会使蛋白质解离成单个多聚体，并赋予了所有蛋白质相同的电荷密度，使其仅以分子量来分离。
此外，SDS还能够疏水化蛋白质，使其保持线性构象。
二、流程操作步骤1.制备凝胶：a.准备获得所需蛋白质分子量范围内的分离凝胶（通常为8-20%)和浓缩凝胶（通常为4%）。
b.根据实验需要，自制聚丙烯酰胺凝胶，或购买预铸凝胶片。
c. 使用缓冲液（常见的是Tris-HCl缓冲液）将凝胶片激活。
d.将激活的凝胶放在垂直电泳仓中，然后在最上层加入新鲜的蒽胺溶液以形成平整的上胶液面。
2.蛋白质样品处理：a. 将样品蛋白质进行还原处理，可以使用还原剂如β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol）或二巯基甘油（dithiothreitol）。
b.加入相应体积的SDS缓冲液（含有SDS和甘油），将样品加热至100°C，以使其完全变性。
c.在样品中加入跟踪染色剂，常用的有溴酚蓝。
3.加载样品：a.打开电泳仓的盖子并插入试验板。
b.将样品架（通常是细长的注射器或者微量吸管）插入样品孔中，并缓慢地向内注入样品。
c.尽量确保样品的数量均匀，然后小心地将试验板放入电泳槽中。
4.电泳：a. 确保试验板完全浸没在含有缓冲液（如Tris-Glycine缓冲液）的电泳槽中。
b.调整电泳仓的参数，如电流和电压。
c.开启电源，运行电泳，直到跟踪染色剂移动到凝胶底部。
5.凝胶染色和成像：a.将凝胶从电泳槽中取出，并进行染色。
sds-page聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量实验注意事项
SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量的实验注意事项如下：
1. 实验器材的清洁：ACr和BIs是神经性毒剂且对皮肤有刺激作用，配制贮液、配胶、灌胶操作时，要戴上医用乳胶手套或指套，避免与皮肤接触。
只要细心操作，一般不会引起损伤。
2. 严谨操作：SDS-PAGE 测定分子量有误差，不可完全信任。
有必要时，应同时作标准曲线。
并且SDS—PAGE 测定分子量有10%误差，不可完全信任。
3. 注意个人安全：在实验过程中请注意个人安全，避免直接接触化学试剂。
以上就是用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量的注意事项，如果您对实验步骤有疑问或者想了解更多信息，请咨询专业人士。
sds-page标准方法
SDS-PAGE标准方法如下：1.试剂：准备所需的试剂，包括2M Tris-HCl（pH8.8）、1M Tris-HCl（pH6.8）、10%SDS、50%甘油、1%溴酚蓝、10%过硫酸铵和5×电泳缓冲液等。
2.工作液：制备30%（w/v）丙烯酰胺/0.8%（w/v）双丙烯酰胺的工作液，加蒸馏水至100ml，缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。
可在4℃存放数月。
3.凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。
过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。
4.pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。
5.pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。
6.TEMED（四乙基乙二胺）原液。
7.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）。
8.考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
9.操作步骤：制备凝胶贮液、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液等；按照所需比例配制丙烯酰胺和双丙烯酰胺工作液；加蒸馏水至所需体积；将工作液和Tris碱混合并冷却至室温；加入SDS和TEMED；倒入制胶模具中并插入样品梳；放入电泳槽中加入电极缓冲液；连接电源开始电泳；电泳结束后取下凝胶；用考马斯亮蓝染色液染色；脱色并观察结果。
请注意，具体操作方法可能因实验室条件和需求而有所不同。
如有任何疑问或需要进一步了解SDS-PAGE标准方法的具体细节，建议咨询专业技术人员或查阅相关文献资料。
细胞因子分子量还原型SDSPAGE测定标准操作规程
细胞因子分子量还原型SDSPAGE测定标准操作规程 依据：《中华人民XX国药典》2005年版第三部。
X围：适用于细胞因子蛋白质分子量测定。
目的：测定待检品分子量是否符合《中华人民XX国药典》2005年版要求原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是利用丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺在催化剂的作用下聚合成大分子凝胶后再进行电泳。
因此它兼具了分子筛效应与电泳效应。
其催化系统为过硫酸铵-TEMED系统。
而SDS这种阴离子表面活性剂的加入，它能使蛋白质氢键、疏水键打开，并按一定比例与蛋白质分子结合成带负电的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质原有的电荷，因而掩盖了不同种类的蛋白质间原有的电荷差别。
这样就使电泳的迁移率只取决于分子量大小这一因素，从而达到分离不同组分的蛋白质的目的，并在还原剂巯基乙醇的存在下，（定量的巯基乙醇可以使蛋白质分子内的二硫键彻底还原；以使SDS定量的结合到蛋白质分子上去，使蛋白质具有相同的构象），可以检测到是否有蛋白质聚合体的产生。
内容：1 材料1．1样品：经二人复核批号无误后检测1．2试剂甲醇 CH3OH分析纯无水乙醇 C2H5OH分析纯浓盐酸 HCl 分析纯甘油 C3H8O3分析纯硝酸银 AgNO3分析纯重铬酸钾 K2Cr2O7分析纯正丁醇 C4H9OH分析纯甲醛 HCHO分析纯丙烯酰胺 CH2CHCONH2分析纯甲叉双丙烯酰胺[（CH2CHCONH2）2]CH2分析纯过硫酸铵 （NH4）2S2O8分析纯TEMED（四甲基乙二胺）(CH3)2N(CH2)2N(CH3)2分析纯甘氨酸 C2H5NO2分析纯SDS（十二烷基硫酸钠）C12H25O4SNa分析纯乙酸 CH3COOH 分析纯碳酸钠 Na2CO3分析纯β-巯基乙醇HSCH2CH2OH 分析纯溴酚蓝 C19H10Br4O5S 分析纯1．3分子量标准品：法玛西亚公司。
1．4注射用水：符合《中华人民XX国药典》2005年版要求1．5设备扭力天平 XX第二天平仪器厂垂直板状电泳槽东方仪器厂恒温恒流电泳仪法玛西亚公司快速电泳槽 BIORAD USA全自动扫描仪 CS-930 日本岛津TS-1型摇床1．6器皿：500ml瓶、100ul移液器、1ml吸管、10ml吸管、3000ml三角瓶、平皿、1000ml 烧杯、80ml烧杯，以上器皿经本室洗刷组处理。
SDSPAGE操作方法要点
SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。
当分子量在15 KDa到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K – bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
SDS-PAGE操作方法要点
SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。
当分子量在15 KDa到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K – bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
S D S P A G E操作方法要点 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】SDS-PAGE教程1SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与去污剂结合。
当分子量在15KDa到200KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K–bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE[Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。
严格核实pH不得超过，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
1MTris-HCl（）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTris-HCl【配制方法】称量碱溶于80mL的去离子水，充分搅拌溶解，加约9mL的浓HCl调节至所需要的pH值，将溶液定容至100mL，高温高压灭菌后，室温保存。
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
【保存条件】室温保存。
【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。
（）(分离胶buffer)【组分浓度】【配制方法】100mL称量碱溶于80mL的去离子水中，充分搅拌溶解，加约3mL浓HCl调节至所需要的pH值，将溶液定容至100mL，高温高压灭菌后，室温保存。
【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH 值大约降低个单位。
10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中，加入约16mL的去离子水，于68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节pH至，定容至20mL后，室温保存。
【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害，请注意防护。
10%过硫酸铵溶液-----10%(w/v)APS【组分浓度】10%(w/v)过硫酸铵(APS)【配制方法】称取过硫酸铵置于离心管，加1mL去离子水吹打溶解，亦可以加倍，即称取1g过硫酸铵，加入10mL的去离子水后搅拌溶解。
4℃保存。
【保存条件】4℃保存10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液-----5×Tris-Glycinebuffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）【组分浓度】【配制方法】称取，甘氨酸（glycine），，用800mL蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000mL，室温保存。
得L甘氨酸电极缓冲液。
临用前稀释5倍。
【保存条件】室温保存，两年有效。
【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。
5×SDS-PAGE加样缓冲液-----5×SDS-PAGELoadingBuffer【组分浓度】；10%(W/V)SDS；%(W/V)BPB(溴酚蓝)；50%(V/V)甘油；5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)或(二硫苏糖醇)【配制方法】量取（），，25mgBPB，甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（份）分装，于室温保存。
使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。
加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。
【保存条件】-20℃保存，至少一年有效。
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT或β-巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。
二者作用相似，但DTT的刺激性和毒性都低于β-巯基乙醇，且粉末的稳定性也高于β-巯基乙醇。
DTT的最佳工作pH范围为，但DTT价格略高一些。
蛋白巯基还原实验DTT的常用工作浓度是1-10mM。
摘自Takara商品目录--实验室常规试剂配制方法TEMED原液直接使用考马斯亮蓝R-250染色液【组分浓度】%(w/v)考马斯亮蓝R-250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸考马斯亮蓝R250染色，染色时间控制在。
（注意：（1）保存考马斯亮蓝R250可回收使用，可保存很长时间，但一般不超过6个月；（2）染色时间过长难以脱色，过短染色效果不佳；）考马斯亮蓝染色脱色液【组分浓度】10%(v/v)醋酸，5%(v/v)乙醇脱色（三个小时后应换次脱色液，再重新加入脱色液且约需脱色24小时，直到背景清晰为止）（1）蒸馏水中冲洗2-3次（2）7％冰乙酸固定（3）7％冰乙酸10％乙醇83ml蒸馏水脱色（4）7％冰乙酸保存（要检测脱色后的胶，则需保存于7％冰乙酸中）蒸馏水冲洗→7％冰乙酸（关键步骤），10％乙醇脱色脱色液：7％冰乙酸，10％乙醇，83ml蒸馏水7％冰乙酸保存（蒸馏水冲洗后用7％冰乙酸保存且约二～四天后再照胶，条带更为清晰）。
银氨染色用凝胶固定液（质谱用）【组分浓度】50%(V/V)甲醇，10%(V/V)醋酸银氨染色用凝胶处理液【组分浓度】50%(v/v)甲醇，10%(v/v)戊二醛银氨染色用凝胶染色液【组分浓度】%(w/v)AgNO3，1%(v/v)浓NH3·H2O，%(w/v)NaOH【配制方法】取上述试剂加入100~200mL的试剂瓶中，均匀混合。
该溶液应为无色透明状。
如果氨水浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水直至透明。
本染色液应现用现配，不宜保存。
银氨染色用显影液【组分浓度】%(w/v)柠檬酸，%(v/v)甲醛SDS-PAGE凝胶配方1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：来源于《蛋白质技术手册》汪家政每种浓度的变性胶的分离范围不是指能跑出哪个范围分子量的蛋白质，而是指在这个区间内，蛋白质迁移率基本和分子量成正比，也就是线性关系，为了数据的可靠性，大家尽量根据这个来选择自己配胶的浓度。
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
1)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：TBST缓冲液每2L体积中含：Westernblot用的缓冲溶液。
1)抗体去除液每50mL抗体去除液中含：SDS-PAGE操作方法1、20uL收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。
按照上面配方制SDS-PAGE凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。
3、按一定顺序在加样孔中加入样品，根据SDS-PAGE电泳玻璃板间隙厚度不同，选择加入样品量，一般间隙15孔的上样量<10uL/孔,1mm间隙10孔的上样量<20ul/孔。
上样量根据实际经验自己掌握。
4、打开电源将电压调到80v（一般15min左右），待样品跑过压缩胶后将电压调到120v 至样品电泳到胶底部为止。
5、将凝胶小心取下放入容器中，加入染色液，用摇床摇2－3h6、待条带清晰后倒出染色液，加入脱色液过夜7、将脱色液倒掉，可以用QualityOne，或者相应的成像系统拍照、分析、估算蛋白浓度。
SDS-PAGE胶的凝结速度受温度影响很大，随着温度的升高，凝结速度越来越快，温度降低则反之。
所以，夏天时胶凝结的比较快，而冬天胶的凝结速度则变慢，甚至不能凝结，解决此类问题较可行的方法是：冬天在原配方的基础上加倍过硫酸铵和TEMED的使用量，可很好的解决胶凝结速度过慢的问题。
借鉴Tricine-SDS-PAGE中添加甘油或者尿素来提高分辨率的成功经验，在普通的SDS-PAGE中加入约13%的甘油，同样可以提高分辨率，有效防止小分子量蛋白的弥散。
只要把原来配方中的水换成60%的甘油，就可以了。
在分离胶中加尿素和甘油都可以，加上尿素和甘油改变胶的孔径！特别是对分离糖蛋白的时候很有用处！一方面可以把条带压窄，减少拖尾现象的产生,另一方面对分离小分子量的蛋白有好处!一般加的量在－3g尿素/12ml分离胶！自己可以跑来实验一下你跑9KD分子量的蛋白，建议用tricine-sds-page电泳来跑！也可以在分离胶中加尿素！以我经验来看，加尿素会好于甘油！电泳在二液槽中安放铂金丝电极；正极在下，负极在上。
接通电源进行电泳，电场强度10伏/厘米左右，视室温高低而定。
室温较高时宜用较低的电压以免发热过度影响分离。
蛋白质向正极移动。
待染料前沿移动至管底近处，停止电流。
电泳时间为1-2小时。
加入染色液后，先放入微波炉里加热5-10秒，使染色液微热即可（千万不要加热太久，否则冰醋酸就挥发了）。