Roche-LightCycler-480-中文操作说明要点

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Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准(SOP-1)

Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准(SOP-1)

Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准(SOP-1)1 目的:确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。

2 适用范围:Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。

3操作人 ** **4标准操作方法:4.1在打开电源以前,先确认以下内容:4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。

4.1.2 Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。

4.2.核酸扩增仪操作方法:4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR检测系统”界面;4.2.2模板制好后,按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽,注意阴阳性、阳性标准品、质控品位置,标本不够用空白管填补;4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟;4.2.4点击“运行”键,打开“运行”文件中“达安”试剂程序;4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮,输入样本资料,并清空缺省样本号;点击“确认”保存样本资料信息,保存的文件名为:年月日+批次(批次用a、b、c表示)如20030516a 文件自动形成后缀名为*.flr4.2.4点击仪器运行的红色按钮“!!”,仪器进入运行状态。

4.2.5检测结果分析:a.程序运行结束后,系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存,在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键,进入结果分析界面。

b.定量分析:1)单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令,在分析方法选择中可选择样点拟合法。

2)样点数选择:样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点,系统根据选择的样点数,将被选中的样点拟合成直线,该直线与域值的交叉点即为CT值(仅适合于样点拟合)。

3)击“零点调整”,在弹出零点调整对话框进行设置——手动调整:以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定(用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品4)检测,通常起始及终止为5-15,结果较理想)。

罗氏_荧光定量PCR仪_Lightcycler480使用说明书-中文版

罗氏_荧光定量PCR仪_Lightcycler480使用说明书-中文版

羅氏應用科學L i g h t C y c l e r®480儀器操作手冊軟體版本1.0修訂史前言頁一.修訂史 (9)二.聯繫地址 (9)三.一致性申明 (10)四.保證 (10)五.商標 (10)六.用途 (11)七L i g h t C y c l e r®許可聲明 (11)八.軟體許可協定 (12)九.導言 (16)十.L i g h t C y c l e r®480儀器操作手冊的用法 (16)十一.本手冊中的約定 (17)文字約定 (17)符號 (17)十二.警告和預防 (19)操作要求 (19)一般預防 (20)電氣安全 (21)十三.儀器處理 (22)A概述頁1.介紹 (25)2.L i g h t C y c l e r®480規格 (26)2.1一般規格 (26)2.2環境參數 (26)2.3介面 (27)2.4樣本容量 (27)2.5運輸 (27)2.6數據站 (28)3.檢測單位規格 (29)3.1激發 (29)3.2探測器 (29)3.3濾光器 (29)4.溫度阻斷迴圈控制器規格 (30)5.多孔板條碼掃描器規格 (31)6.手提式條碼掃描器規格 (32)前言3修訂史4L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版B系統描述 頁1. 系統包裝...........................................................35 2. 安裝 ..............................................................36 2.1 安裝要求.............................................................36 2.2 空間和電源要求.......................................................36 2.3 環境要求.............................................................38 2.4 L i g h t C y c l e r ® 480 儀器安裝 ...........................................39 3. 系統描述...........................................................43 3.1 L i g h t C y c l e r ® 480儀器描述.............................................43 3.2 熱迴圈器單元描述.................................................... 47 3.3 檢測單元描述.........................................................50 3.4 檢測通道描述.........................................................52 3.5 L i g h t C y c l e r ® 480儀器耗材.............................................53 3.6 L i g h t C y c l e r ® 480儀器P C R 試劑 .........................................55 3.7 所需的額外設備.......................................................56 3.8 L i g h t C y c l e r ® 480 儀器即時P C R 檢測格式 ............................ ..56 3.8.1 概述...............................................................56 3.8.2 使用S Y B R 綠色I 染料監控P C R ..........................................58 3.8.3 使用水解探針監控P C R ...............................................60 3.8.4 使用H y b P r o b e 探針監控P C R ............................................62 3.8.5 使用S i m p l e P r o b e 探針基因分型. (64)C操作頁1. 介紹................................................................................................67 2. 系統的啟動.......................................................................................68 3. 準備和開始L i g h t C y c l e r ® 480儀器的運轉.............................................69 4. 更換L i g h t C y c l e r ® 480熱迴圈器 (72)修訂史D軟體頁前言5修訂史6L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版1. L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體概述.........................................................81 1.1 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體用戶介面通則..........................................81 1.2 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體的啟動..................................82 1.3 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體主視窗...................................................85 1.4 選擇與流覽特性...........................................................................90 1.4.1 流覽器....................................................................................90 1.4.2 查詢表....................................................................................94 1.4.3 樣品選擇與樣品表.....................................................................98 1.5 導出與導入檔與物件.....................................................................100 2. 試驗的編程與運行........................................................................109 2.1 試驗的編程....................................................................................110 2.1.1 設定檢測格式...........................................................................112 2.1.2 定義程式與溫度靶.....................................................................113 2.1.3 定制線上資料顯示.....................................................................117 2.2 試驗運行.......................................................................................118 2.3 輸入樣品資訊.................................................................................120 3. 試驗分析概述..............................................................................126 3.1 分析步驟概述.................................................................................127 3.2 使用分析視窗.................................................................................129 3.2.1 選擇濾光器組合與顏色補償.........................................................130 3.2.2 在分析中處理樣品.....................................................................131 3.2.3 使用圖表.................................................................................132 3.2.4 添加分析注解...........................................................................132 3.2.5 對分析進行刪除或重新命名.........................................................133 4. 進行絕對定量分析........................................................................134 4.1樣品交叉點................................................... ..............................135 4.2 關於標準曲線的作用........................................................................136 4.3 提供標準曲線.................................................................................138 4.4 使用絕對定量方法...........................................................................140 5. 進行溶解曲線分析........................................................................144 5.1 使用溶解曲線特徵進行D N A 產物及其基因型的鑒定.................................144 5.1.1 定義溶解程式...........................................................................145 5.1.2 溶解溫度分析的內容..................................................................145 5.2 進行溶解溫度調用分析..................................................................146 6. 進行顏色補償分析........................................................................152 6.1 進行顏色補償試驗...........................................................................153 7. 使用範本與巨集..............................................................................156 7.1 製作與使用範本..............................................................................156 7.2 製作與使用宏.................................................................................156 8. 使用子功能表.................................................................................162 9. 使用圖表....................................................................................164 9.1 列印,導出與複製圖表.....................................................................165 9.2 進行變焦和變位元以查看圖表詳細內容 (169)D軟體 頁10. 生成報告 (171)修訂史11.使用選項工作 (174)11.1使用圖解選項 (175)11.1.1設定圖表表頭與標籤類型 (176)11.1.2設定螢光圖表內容 (177)11.1.3設定標準曲線圖表的外觀 (178)11.1.4設定溫度圖表的內容與外觀 (179)11.1.5覆蓋默認的圖表選項 (180)11.2使用樣品選項 (183)11.2.1更改所有試驗的樣品選項 (183)11.2.2重新設置默認的圖表選項 (185)11.3生成一個單獨的選項專案並將其設為默認 (187)11.4設定用戶選項 (188)12.管理工具 (189)12.1管理用戶訪問 (190)12.1.1用戶帳戶 (190)12.1.2組 (191)12.3.3角色 (191)12.1.4高級用戶角色的特權 (192)12.1.5本地管理員角色的特權 (193)12.1.6用戶訪問物件 (194)12.1.7管理用戶、組和角色 (197)12.1.8使用角色 (202)12.1.9更改密碼 (203)12.2報告的設置 (203)12.3.資料庫資訊 (204)12.4.儀器 (207)12.4.1定義儀器 (209)12.5檢測格式 (210)13.診斷工具 (213)14.L i g h t C y c l e r®480基礎軟體的安裝與維護 (214)14.1初始啟動步驟 (215)14.2L i g h t C y c l e r®480基礎軟體的安裝 (216)14.3保存一個已有的資料庫和安裝附加資料庫 (219)14.4登錄到不同資料庫 (223)14.5用一個資料庫檔替換一個已存在的同名資料庫 (224)14.6在L i g h t C y c l e r®480基礎軟體中整合一個恢復的資料庫檔使之成為附加資料庫 (225)14.7刪除L i g h t C y c l e r®480的基礎軟體 (228)14.8F L E X n e t許可證管理員 (229)前言7修訂史8L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版E 維護頁1. 常規維護.................................................. .........237 2. 儀器清潔操作指南 ...................................................237 2.1 常規清潔.................................................. ........ 237 2.2 預防性維護.................................................. ...... 237 3 更換氙氣燈................................................. ........238 4 更換風道灰塵篩檢程式......................................... ........242 5 更換保險絲 ..................................................... (244)F 附錄頁1. 訂購資訊.......................................................................................251 2. 索引................................... .. (253)前言修訂史前言9一、修訂史版本修訂時間1.02005年9月© 版權2005, R o c h e D i a g n o s t i c s G m b H . 版權所有.本手冊資訊可以在未經通知的情況下變更。

Roche LightCycler 480 中文操作说明要点

Roche LightCycler 480 中文操作说明要点

LightCycler® 480 中文操作说明罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门February 2008目录一. 启动机器与软件 3二. 软件设定 --- 开启新实验 5三. 样品编辑9四. 结果分析12五. 报告18六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输19 入)七. 使用者管理19一.启动机器与软件•启动机器1.机器主开关位于机器右后方。

2.机器正面两个警示灯代表机器状态。

待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯,警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟),表示机器已经启动完成。

3.按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。

放置完成后,左右两警示灯都呈现绿色。

•启动软件1.开启计算机,并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。

User name: OPERATORPassword: LC4802.开启 LightCycler 480 软件,并输入正确的使用者与密码。

二.软件设定-- 开启新实验•设定新实验1.软件开启后,会进入主画面。

点选“New Experiment”。

2.出现实验设定窗口。

任何时候需要回主画面的话,点选画面右边的按钮。

•设定实验❖若要套用设定好的实验步骤 (Template),请跳至 6.。

1.在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Forma t。

选项包含:另外可再点选“Customize” 勾选所需的滤片组合。

2.输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul,而 384 well plate 范围为 5-20 ul。

3.设定实验步骤 (Program)•设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。

利用『+』与『-』增加或删除步骤。

•设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。

LightCycler480_系统操作快速指南2.1

LightCycler480_系统操作快速指南2.1

罗氏应用科学部/分子诊断部rLightCycler® 480实时荧光定量PCR系统操作快速指南 V 2.0说明及版本历史1.基本界面及图标1.1.Overview界面1.2.New Experiment 界面1.3.Navigator 界面2.PCR及结果分析2.1.开机2.2.运行一次PCR实验2.2.1.PCR程序的设定2.2.2.样本的编辑2.2.3.程序的运行2.3.实验结果的分析2.3.1.绝对定量分析2.3.2.相对定量分析2.3.3.基因分型分析2.3.4.Tm calling2.4.结果报告3.数据管理及模块化操作3.1.历史数据的处理3.2.应用Template和Macros简化实验流程4.用户管理5.日常维护6.Troubleshooting本指南用于本指南用于简要说明简要说明LightCycler® 480 系统软件系统软件的界面及操作要点的界面及操作要点的界面及操作要点,,对初学者了解系统软件有所帮助统软件有所帮助。

但荧光定量PCR 是一个相对较为复杂和精确的定量方法是一个相对较为复杂和精确的定量方法,,要求使用者对仪器仪器、、软件和实验设计有比较系统深入的了解软件和实验设计有比较系统深入的了解,,方能对方能对实验的设计实验的设计实验的设计、、操作及分析运用自如操作及分析运用自如。

因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后,,尽快通过完整的操作手册尽快通过完整的操作手册,,熟悉系统相关软件和实验设计关软件和实验设计、、分析分析。

版本历史1.0 2007-3-272.02007-8-22第一部分 基本基本界面及界面及界面及图标图标概述概述::一、 O verview 界面Exit :关闭LC480软件Log off :从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库Overview :点击该图标进入点击该图标进入““Overview ”界面Navigator :点击该图标进入点击该图标进入““Navigator ”界面界面,,可进行数据的导入导出等操作可进行数据的导入导出等操作,,详见详见。

RocheLightCycler中文操作说明

RocheLightCycler中文操作说明

LightCycler® 480 中文操作说明罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门February 2008目录一. 启动机器与软件 3二. 软件设定 --- 开启新实验 5三. 样品编辑9四. 结果分析12五. 报告18六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输19 入)七. 使用者管理19一.启动机器与软件•启动机器1.机器主开关位于机器右后方。

2.机器正面两个警示灯代表机器状态。

待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯,警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟),表示机器已经启动完成。

3.按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。

放置完成后,左右两警示灯都呈现绿色。

•启动软件1.开启计算机,并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。

User name: OPERATORPassword: LC4802.开启 LightCycler 480 软件,并输入正确的使用者与密码。

二.软件设定-- 开启新实验•设定新实验1.软件开启后,会进入主画面。

点选“New Experiment”。

2.出现实验设定窗口。

任何时候需要回主画面的话,点选画面右边的按钮。

•设定实验❖若要套用设定好的实验步骤 (Template),请跳至 6.。

1.在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Forma t。

选项包含:另外可再点选“Customize” 勾选所需的滤片组合。

2.输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul,而 384 well plate 范围为 5-20 ul。

3.设定实验步骤 (Program)•设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。

利用『+』与『-』增加或删除步骤。

•设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。

罗氏lightcycler-480-Software1.5中文说明书

罗氏lightcycler-480-Software1.5中文说明书

LightCycler480 Software 1.5软件操作(中文版)第一部分基本界面及图标概述:一、Overview界面Exit:关闭LC480软件Log off:从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库Overview:点击该图标进入“Overview”界面Navigator:点击该图标进入“Navigator”界面,可进行数据的导入导出等操作,详见。

Save:点击该图标进行保存Export:导出当前打开的文件Close:关闭当前打开的文件Print:打印当前打开的窗口Tools:打开“Tools”界面,可进行密码修改,建立和编辑用户,系统设置,查看数据库状态、仪器状态、滤光片组合等操作Help:查看软件版本,操作说明书等二、New Experiment 界面Run Module:编辑、运行或查看PCR程序及查看PCR实时数据Subset Editor:点击该模块后可进行子集的编辑Sample Editor:点击后进行样品信息的编辑Analysis Module: 点击进行结果分析或查看已保存的分析结果Report Module:选择需要的内容以报告的形式给出结果Summary Module : 查看实验的总体概况,包括实验名称,所用的程序,检测模式,滤光片组合等。

概况的内容由系统自动生成三、Navigator 界面Import:导入一个文件Export:导出一个文件Batch Import:导入一批数据Batch Export:导出一批数据New:新建一个实验或文件夹New Folder:新建一个文件夹Open:打开一个文件Rename:重命名Delete:删除选中的目标Copy:拷贝选中的目标Note:所有上述图标在深蓝色时为激活状态,灰色时为灭活状态也就是不可用状态。

各图标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备。

软件操作一.打开软件打开电脑,Windows操作系统的用户名为operator,密码为LC480(区分大小写),电脑操作系统启动完毕,检查电脑右下角是否有图标。

LightCycler480荧光定量PCR仪安全使用说明及SOP

LightCycler480荧光定量PCR仪安全使用说明及SOP

LightCycler480荧光定量PCR仪安全使用说明及SOPLightCycler480荧光定量PCR仪安全使用说明1.每次反应最后一步都必须做降温,降至40度,维持至少30秒。

2.在操作过程中,切忌戴有粉末的乳胶手套或裸手接触光学透性封板膜。

3.先开电脑和仪器,编辑程序后,再配制反应液。

加样封膜完毕,在板式离心机中1500×g(3000rpm)离心两分钟,排除气泡。

4.先开电脑再开仪器,先关仪器再关电脑。

打开电脑,并打开LightCycler480软件,然后打开LightCycler480仪器后方的电源开关,仪器与电脑软件接通后进行自检,仪器正面右边两盏桔黄色的灯会闪烁。

自检完毕后,左边的灯会变绿,右边的灯仍为桔黄色。

这时按一下灯右边带双箭头的开关,仪器的载板器会自动伸出,将准备好的反应板放入载板器中(反应板的切角在右下角)。

再按一下带双箭头的开关,仪器的载板器会自动缩入仪器内,此时仪器能自动检测到反应板,原来呈桔黄色的灯会变绿,软件中Start Run按钮也同时变为激活状态。

5.设定完实验程序并编辑完样本后(样本信息可以在实验完成后编辑),点击软件中Start Run按钮,运行实验。

6.软件界面上出现Run Complete….标识时,说明实验运行完毕,按一下仪器上带双箭头的按钮,使载板器伸出,取下反应板,再按一下带双箭头的按钮,使载板器缩回,关闭LightCycler480仪器后方的电源开关,在电脑上分析实验数据。

7.分析完实验数据后保存结果,打印报告,并关闭电脑及总电源。

实验员在离开PCR扩增区时带走用完的反应板。

维护SOPLightCycler 480是一台免维护的仪器。

做任何维护工作前,须确认主机电源已被关闭。

预防性维护:1.检查LightCycler 480主机两侧与背后空间,确保无任何阻碍空气流通的物品,包括书本、纸张或窗帘等;2.若主机表面和桌面有灰尘,用不起毛的软布蘸少量清水擦拭干净。

LightCycler480快速操作指南

LightCycler480快速操作指南

一.前期准备:配制好反应体系,封好膜。

接通LC480与电脑电源,电脑帐号operator,密码LC480,点击LC480软件,登录帐号user,密码Master1。

二.开始实验:点击,在列表中选择对应的程序,如H1N1或HBV,点击窗口右下角的,点击软件界面右下角的,输入实验文件名点击窗口右下角的开始实验。

三.编辑子集:点击subset editor,点击左下角的,按ctrl键的同时鼠标选择本次实验的孔,最后点击应用。

注意,一次实验可以同时运行相同扩增参数的多个实验(如H1N1、HIV与HCV),那么可以分别设置多个子集设置样品:先在subset中选择本次实验的子集,点击左上角的,样品输入样品名,再选择标准品类型和浓度或者阳性对照/阴性对照四.数据分析:实验运行完成后进入,选择Abs Quant/Fit Ppoint,在窗口中的Subset(第二行)中选择本次实验的子集,点击软件界面中上方的,在Noise Band中调节noiseband高度,使之处于对数增长期并高于所有噪音信号,如右图。

再点击进入,点击软件界面中间偏右的再点击软件界面左下角的值或浓度值等以及平均值标准误等信息,该部分可以鼠标拖动滑块或鼠标拖曳、鼠标点击软件右上角的为本次分析命名,如输入H1N1或其它名称五.报告输出打印:点击软件右侧的保存当前实验的分析结果,再点击软件左侧的,点击软件中部左侧的detailed 选择需要输出的分析结果,如H1N1,分析中建议选择results或standard curve,点击软件界面左下方的,生成PDF报告,如装了打印机,直接点击软件中间上方的,或者点击,选择pdf文件保存位置后点击save保存六.维护保养•环境要求LC480 UPS≥2500 V A,配备有良好的接地线•实验室温度:20 ±5℃;实验室湿度:20% - 80%•实验室配备有空调做温度及湿度的调控•3~6个月清洗或更换防尘滤网•实验数据建议定期备份到D盘•仪器避免阳光直射,也避免处在强电磁干扰或通风不畅等环境中七.售后支持•若LC480开机自检后第一个指示灯显示为红色,请立即直接致电400-820-8864,将软件下方的错误代码报给Roche公司维修人员,以确定故障类型,便于后续维修工作•如遇到任何软件使用问题,可以参考查询D盘的电子版中文说明书,也可直接致电800-820-0577或021-********•实验数据建议定期备份到D盘。

罗氏realtime PCR操作指南(Roche LightCycler480)

罗氏realtime PCR操作指南(Roche LightCycler480)

LightCycler ® 480 系统快速操作指南1 一.配制好反应体系,封好膜。

接通LC480与电脑电源,电脑帐号operator ,密码LC480,点击LC480软件,登录帐号user ,密码Master1。

二.开始实验:点击,在列表中选择对应的程序,如H1N1或HBV ,点击窗口右下角的,点击软件界面右下角的,输入实验文件名点击窗口右下角的开始实验。

三.编辑子集:点击subset editor ,点击左下角的,按ctrl 键的同时鼠标选择本次实验的孔,最后点击应用。

注意,一次实验可以同时运行相同扩增参数的多个实验(如H1N1、HIV 与HCV ),那么可以分别设置多个子集设置样品:先在subset 中选择本次实验的子集,点击左上角的,样品输入样品名,再选择标准品类型和浓度或者阳性对照/阴性对照四.数据分析:实验运行完成后进入,选择Abs Quant/Fit Ppoint ,在窗口中的Subset (第二行)中选择本次实验的子集,点击软件界面中上方的,在Noise Band 中调节noise band 高度,使之处于对数增长期并高于所有噪音信号,如右图。

再点击进入,点击软件界面中间偏右的再点击软件界面左下角的值或浓度值等以及平均值标准误等信息,该部分可以鼠标拖动滑块或鼠标拖曳、鼠标点击软件右上角的为本次分析命名,如输入H1N1或其它名称五.报告输出打印:点击软件右侧的保存当前实验的分析结果,再点击软件左侧的,点击软件中部左侧的detailed 选择需要输出的分析结果,如H1N1, 分析中建议选择results 或standard curve ,点击软件界面左下方的,生成PDF 报告,如装了打印机,直接点击软件中间上方的,或者点击,选择pdf 文件保存位置后点击save 保存。

Roche罗氏LightCycler480实时荧光定量PCR

Roche罗氏LightCycler480实时荧光定量PCR

型号:LightCycler® 480产品介绍Roche罗氏LightCycler 480实时荧光定量PCR系统可以让你实现实时在线的高通量快速荧光定量PCR循环,可同时检测96或384孔板样品。

结果可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析。

复杂的光学检测系统可以进行多重PCR检测,并适用于多种检测模式。

超过10年的实时定量PCR系统与试剂研发的丰富经验,凝聚成今日业界的巅峰之作。

主要特性:1.高灵敏度:可检测单拷贝基因2.动力学范围广:可同时检测到1-1010个拷贝DNA3.高重复性:CV%<0.15%4.高分辨率:轻松区分1000与2000拷贝浓度差异5.高速:40分钟完成40个PCR循环(384孔板)6.技术创新:采用Therma-BaseTM热循环专利技术和先进的光学检测系统,彻底消除边缘效应,保持稳定优异的检测结果。

7.全能:分析模式多样,绝对定量、相对定量、基因分型(溶解曲线法和终点法)、高分辨率溶解曲线分析,同时适用几乎所有检测模式(染料检测、水解探针(TaqMan探针)、杂交探针、简单探针等)8.开放式平台:可使用市面上绝大多数荧光染料以及第三方提供的8 连管,96孔板和384孔板9.灵活:可互换的96孔、384孔加热模块,用户可自行更换,无需工程师到场10.自动化平台:配以LIMS系统及自动进样机械臂,可实现远程操作及全自动化运行。

技术指标产品应用1.绝对定量2.相对定量3.终点法基因分型4.溶解曲线法基因分型5.DNA甲基化研究6.Micro RNA研究7.HRM基因扫描......。

LC480Software1.5中文使用说明(简单版)

LC480Software1.5中文使用说明(简单版)

LightCycler480 Software 1.5软件操作(中文版)第一部分基本界面及图标概述:一、Overview界面Exit:关闭LC480软件Log off:从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库Overview:点击该图标进入“Overview”界面Navigator:点击该图标进入“Navigator”界面,可进行数据的导入导出等操作,详见。

Save:点击该图标进行保存Export:导出当前打开的文件Close:关闭当前打开的文件Print:打印当前打开的窗口Tools:打开“Tools”界面,可进行密码修改,建立和编辑用户,系统设置,查看数据库状态、仪器状态、滤光片组合等操作Help:查看软件版本,操作说明书等二、New Experiment 界面Run Module:编辑、运行或查看PCR程序及查看PCR实时数据Subset Editor:点击该模块后可进行子集的编辑Sample Editor:点击后进行样品信息的编辑Analysis Module: 点击进行结果分析或查看已保存的分析结果Report Module:选择需要的内容以报告的形式给出结果Summary Module : 查看实验的总体概况,包括实验名称,所用的程序,检测模式,滤光片组合等。

概况的内容由系统自动生成三、Navigator 界面Import:导入一个文件Export:导出一个文件Batch Import:导入一批数据Batch Export:导出一批数据New:新建一个实验或文件夹New Folder:新建一个文件夹Open:打开一个文件Rename:重命名Delete:删除选中的目标Copy:拷贝选中的目标Note:所有上述图标在深蓝色时为激活状态,灰色时为灭活状态也就是不可用状态。

各图标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备。

软件操作一.打开软件打开电脑,Windows操作系统的用户名为operator,密码为LC480(区分大小写),电脑操作系统启动完毕,检查电脑右下角是否有图标。

罗氏realtime PCR操作指南(Roche LightCycler480)

罗氏realtime PCR操作指南(Roche LightCycler480)

LightCycler ® 480 系统快速操作指南1 一.配制好反应体系,封好膜。

接通LC480与电脑电源,电脑帐号operator ,密码LC480,点击LC480软件,登录帐号user ,密码Master1。

二.开始实验:点击,在列表中选择对应的程序,如H1N1或HBV ,点击窗口右下角的,点击软件界面右下角的,输入实验文件名点击窗口右下角的开始实验。

三.编辑子集:点击subset editor ,点击左下角的,按ctrl 键的同时鼠标选择本次实验的孔,最后点击应用。

注意,一次实验可以同时运行相同扩增参数的多个实验(如H1N1、HIV 与HCV ),那么可以分别设置多个子集设置样品:先在subset 中选择本次实验的子集,点击左上角的,样品输入样品名,再选择标准品类型和浓度或者阳性对照/阴性对照四.数据分析:实验运行完成后进入,选择Abs Quant/Fit Ppoint ,在窗口中的Subset (第二行)中选择本次实验的子集,点击软件界面中上方的,在Noise Band 中调节noise band 高度,使之处于对数增长期并高于所有噪音信号,如右图。

再点击进入,点击软件界面中间偏右的再点击软件界面左下角的值或浓度值等以及平均值标准误等信息,该部分可以鼠标拖动滑块或鼠标拖曳、鼠标点击软件右上角的为本次分析命名,如输入H1N1或其它名称五.报告输出打印:点击软件右侧的保存当前实验的分析结果,再点击软件左侧的,点击软件中部左侧的detailed 选择需要输出的分析结果,如H1N1, 分析中建议选择results 或standard curve ,点击软件界面左下方的,生成PDF 报告,如装了打印机,直接点击软件中间上方的,或者点击,选择pdf 文件保存位置后点击save 保存。

LightCycler标准操作程序

LightCycler标准操作程序

LightCycler操作程序一 准备工作:1.打开LightCycler机器电源开关;2.打开计算机,键入用户名和密码登录;3.在桌面或Windows开始菜单中点击LightCycler图标,进入LightCycler软件主界面;4.点击“RUN”进入程序参数设定和运行界面,稍后屏幕自动提示“是否自检?”对话框;选择“Start Selftest”,机器即进入自检;选择“Skip Selftest”,机器即跳过自检。

自检结束后,屏幕显示“Selftest Passed”,点击确认后,进入程序编辑界面;(机器只需在每天第一次实验前自检一次,自检:空卡盘放在机器中,放下盖子,点击“Start Selftest”进行自检;如果自检结果显示“Selftest failed”,则记下报错信息,并与Roche公司联系)5. 创建新的实验程序,进入二:创建新实验程序;调用已有实验程序,进入三:调用已有实验程序;二 创建新实验程序:同一厂家相同产品编号的试剂盒使用相同的实验程序;第一次编好的程序可以反复调用。

改变测试项目、试剂盒版本升级、更换试剂盒生产厂家时,需注意根据试剂盒说明书调整实验程序。

1.点击左上角“New Experiment”,在跳出的对话框中填入测试项目名称(例如:HBV-DAAN-XXXXX,表示该程序设为:使用达安公司产品编号为XXXXX的HBV试剂盒)点击save保存;2.电脑自动跳出对话框 “Please name this new run program.”,输入第一轮温度循环的名称,例如:Preincubation或1(第一步通常为50度孵育几分钟,让UNG酶消化可能的污染),点击“OK”;然后在屏幕中央的编辑框中,按照试剂盒说明书指示设定各项参数;温度段参数Target Temperature(第一个框): 输入目的温度Incubation Time(第二个框): 输入在目的温度下要保持的时间(默认为秒-S)Temperature Transition Rate(第三个框): 实验过程中升降温的速率Acquisition Mode(最后一个框): 选择荧光获取模式NONE-无SINGLE-单点获取CONT-连续获取STEP-一步一步获取Ins: 添加新温度段Del: 删除该温度段其他参数Display Mode:选择显示模式的荧光检测通道(F1/F2/F3)Cycles: 输入本轮温度循环次数Analysis Mode: 选择实验结果分析模式None-无Quantification-定量分析Melting Curves-溶解曲线分析3.点击右上角“Experiment”显示框下的“Add”键,输入第二轮温度循环的名称,例如:Denaturation或2,点击“OK”;然后在屏幕中央的编辑框中,按照试剂盒说明书指示设定各项参数;(参数设定同2)4.点击右上角“Experiment”显示框下的“Add”键,输入第三轮温度循环的名称,例如:Cycles或3(通常设为40个三温循环),点击“OK”;然后在屏幕中央的编辑框中,按照试剂盒说明书指示设定各项参数;(参数设定同2)5.点击右上角“Experiment”显示框下的“Add”键,输入第四轮温度循环的名称,例如:Cooling或4,点击“OK”;然后在屏幕中央的编辑框中,按照试剂盒说明书指示设定各项参数;(这一步处理是为了让机器内部尽快降温,维护机器,也便于操作者取出卡盘和毛细管)(参数设定同2)6.完成后,点击“Save Experiment File”,保存实验程序;7.进入四:编辑样品;三 调用已有实验程序:1.点击屏幕左上角 “Open Experiment File”,从路径中选择需要的程序,点击open打开;2.进入四:编辑样品;四 编辑样品:1.程序编辑界面上,点击“Edit Sample”,进入样本编辑界面;2.设定样品数量,名称,类型,标准品浓度;点击“Clear”可清理界面重新填写;样本编辑参数Maximum Position:输入实验的样品数量Sample Name: 输入或者默认样本的名称Type: 选择样本的类型Positive-阳性Negative-阴性Standard-标准品(已知浓度,要输入每个标准品的浓度)Unknown-未知(待测)Concentration: 标准品浓度3.点击“Done”返回编辑程序界面,样品信息将与选定的实验程序一起保存;4.点击 “Run”,跳出对话框“Save the Data ?”,选择“Yes”,在保存框中填入本次实验结果的编号(例如:HBV2002/12/15,意为2002年12月15日所作HBV检测实验),点击“save”保存,再次点击“DONE”确认信息,转入运行界面,开始检测卡盘中样本;实验程序运行界面结构上方“Samples Display Histogram”样本荧光柱状图:显示每个样品实时荧光值;左下方“Temperature History Graph”温度历时曲线图:显示运行过程中的实际温度值;右下方“Fluorescence History Graph”荧光历时曲线图:记录每个样本荧光值变化趋势;5. 完成运行后,软件自动保存数据,转入LightCycler数据分析主界面;6. 进入五:数据分析;五 数据分析1.在数据分析主界面点击“Quantification”,进入定量界面;2.在“Analysis”功能区 :选择“Fit Points”;3.在“Base Line”功能区:选择“Arithmetic”, “Number of Point” 固定选2点;4.右边曲线框上方,选择“Step 2: Noise Band”:选中基线(红色水平线),按住鼠标左键,上下移动基线,至刚刚覆盖阴性对照曲线顶部位置;5.右边曲线框上方,选择“Step 3: Analysis”;6.点击右下方“Minimize Error”,优化至最佳;7.读取未知样本的计算浓度;实验结果分析界面右:Position Name Standard Calculated Concentration Crossing Point 样本颜色 样本位置 样本名称 标准品浓度计算浓度 样本Cp/Ct值六 报告存档1.打印结果:同一界面上点击 “File”, 下拉菜单中点击“Print Window”, 打印报告;2.操作者在报告单上注明时间、项目,并签字;3.报告存档;七 结束工作1.取出卡盘,用退管器取出毛细管,按照有关规定处理用过的毛细管;2.关LightCycler机器的电源;3.关闭LightCycler软件及计算机系统;4.在仪器使用记录单上作相应记录;5.清理操作台面。

Roche LightCycler 480系统操作手册说明书

Roche LightCycler 480系统操作手册说明书

The E-Method: a highly accurate technique for gene-expression analysisRoche Applied Science has repeatedly set standards for high-speed real-time PCR systems. The new LightCycler® 480 System offers different methods of data analysis for relative quantification of gene-expression behavior. Whereas the ∆∆C T Method provides fast, easy analysis of gene expression, the E-Method from Roche Applied Science can produce more accurate relative quantification data by compensating for differences in target and reference-gene amplification efficiency, either within an experiment or between experiments.Twenty years ago, the PCR—an amazingly simple idea that would become one of the most revolutionary scientific techniques of the 20th century—was first described. Since then, the invention of real-time PCR technology has permitted further revolutionary advances in DNA analysis. For years, Roche Applied Science has set standards for innovative, high-speed real-time PCR systems.The innovations started with the carousel-based LightCycler® Real-Time PCR Systems (32 capillaries per run), which are currently widely accepted by the scientific community. Roche Applied Science now extends this tradition of innovation and high performance to higher-throughput applications with the new LightCycler 480 System (96- and/or 384-well plate format).The cutting-edge LightCycler 480 System (Fig. 1) design includes modular instrumentation and software, high-performance reagents and tailor-made disposables, all of which guarantee the best PCR results. Technological enhancements in the LightCycler 480 System, which include a sophisticated thermal cycler and optical system, permit rapid and precise analysis of gene expression and genetic variation. When combined with assays from Roche Applied Science’s new Universal ProbeLibrary ⎯a new probe-based, yet highly flexible, gene-expres-sion assay system ⎯the LightCycler 480 System provides convenient fast-tracking of many research activities.Effect of efficiency on relative quantification methodsReal-time PCR can be used to accurately quantify a target nucleic acid, using either absolute quantification methods (for example, todetermine the actual number of viral copies in a sample) or relative quantification methods (for example, to determine the ratio of a regu-lated target gene to an unregulated housekeeping gene in the same sample)1,2. As the name suggests, the latter method calculates the nor-malized values of one gene’s expression level relative to another rather than absolute values.The relative quantification method has become the method of choice for investigating changes in gene expression behavior, such as the expression of a tumor suppressor gene under non-disease and disease conditions. However, the reliability of all relative quantification calculations depends on the quality of the PCR.Efficiency is a quantitative expression of the quality of the PCR pro-cess. The highest-quality PCRs run with an efficiency of 2, meaning that the number of target molecules doubles with every PCR cycle. Unfortunately, PCR efficiency is highly sensitive to many aspects of the reaction that vary from run-to-run (for example, sample preparation,Gudrun TellmannRoche Applied Sciences, Nonnenwald 2, 82372 Penzberg, Germany. Correspondence PUBLISHED ONLINE 21 JUNE 2006; DOI:10.1038/NMETH894Figure 1 | The LightCycler 480 Instrument from Roche Applied Science.NATURE METHODS | JULY 2006 | iAPPLICATION NOTES©2006 N a t u r e P u b l i s h i n g G r o u p h t t p ://w w w .n a t u r e .c o m /n a t u r e m e t h o d sAPPLICATION NOTESnucleic acid purification, PCR primers and probes). Consequently, two different PCRs may not have identical efficiencies.A choice of relative quantification methodsFor precise relative quantification, the most recent generation of LightCycler Systems (the LightCycler® 2.0 Instrument and the LightCycler® 480 Instrument) offers a choice of different meth-ods of data analysis, such as the ∆∆C T Method and the E-Method,each of which handles the problem of efficiency differently (Fig. 2). Furthermore, these software modules allow fast-tracking research activities based on a highly flexible design.The ∆∆C T Method was the method used in early relative quantifica-tion experiments, and it can still provide fast, easy analysis of gene expression 3. This method, however, only provides reliable quantita-tive data if certain assumptions inherent in the method are met: the efficiency of the PCR assays for both target and reference genes must be optimal and/or identical. For the ∆∆C T calculation, the efficiency of both PCRs is assumed to be 2, which represents a doubling of mol-ecules in each cycle. But if target and reference PCR efficiencies are neither identical nor optimal, the ∆∆C T Method may produce incor-rect gene expression data. In such cases, methods that are based on true efficiency values, such as Roche Applied Science’s E-Method, can provide more accurate data.The E-Method can produce more accurate relative quantification data because it can compensate for differences in target and reference gene amplification efficiency either within an experiment or between experiments. The E-Method analyzes the amplification efficiency of target and reference genes by using so-called relative standards. These standards are serial dilutions of a single sample (for example, undi-luted, 1:10, 1:100 and so on), where concentration is expressed in rela-tive units (for example, 1, 0.1, 0.01 and so on). By using such dilutions to generate a standard curve, the E-Method avoids the time-consuming preparation of artificial or cloned standards, and the determination of their absolute values. Additionally, as the relative standards contain normal sample material, their amplification efficiencies are very similar to those of all the unknown samples.Furthermore, the E-Method can normalize for run-to-run differences, such as those caused by variations in reagent chemistry. For such nor-malization, one sample (for example, one of the relative standards) must be designated a calibrator for the target and for the reference gene. These calibrators are then used repeatedly in subsequent runs during the entire study to guarantee a common reference point and allow comparison of all experiments within the series.ConclusionThe relative quantification software of the LightCycler Systems provides several highly accurate algorithms for relative quantification. Reliable gene-expression data can be generated with either the ∆∆C T Methodor the Roche Applied Science E-Method, depending on the PCR effi-ciency of a particular experimental system.Additional information about the LightCycler Systems and the described gene expression approaches is available on the Roche Applied Science Special Interest Page ().LIGHTCYCLER is a trademark of Roche. Patent and license dis-claimer information is available online ().1. Edwards, K. et al. Real-Time PCR: An Essential Guide (Horizon Bioscience,Norfolk, 2004).2. Bustin, S.A. A–Z of Quantitative PCR (International University Line, La Jolla,2006).3. Livak, K.J. & Schmittgen, T.D. Analysis of relative gene expression data usingreal-time quantitative PCR and the 2–∆∆C T method. Methods 25, 402–408 (2001).This article was submitted to Nature Methods by a commercial organization and has not been peer reviewed. Nature Methods takes no responsibility for the accuracy or otherwise of the information provided.abcFigure 2 | Two different relative quantification analyses of the same run. (a ,b ) A typical target and reference run, with unknowns (red and blue) and calibrator samples (green), is analyzed via either the ∆∆C T Method (a ) or the E-Method (b ). Whereas the data in a are based on an assumption that efficiency (E) = 2, the E-Method data are based on the true efficiency of each reaction, which is derived from serial dilutions of the target (light red; E = 2.021) and reference genes (light blue; E = 1.966). (c ) The final results from b are automatically calculated from the crossing point (Cp) values of the target (unknowns and calibrator) and the reference (unknowns and calibrator).ii | JULY 2006 | NATURE METHODS©2006 N a t u r e P u b l i s h i n g G r o u p h t t p ://w w w .n a t u r e .c o m /n a t u r e m e t h o d s。

LightCycler480 系统操作快速指南

LightCycler480 系统操作快速指南

LightCycler® 480 系统快速操作指南一.配制好反应体系,封好膜。

打开LC480主机电源与电脑的电源,电脑帐号LCinstall,密码LCinstall。

带LC480自检完毕,左侧第一盏指示灯变为绿色后,点击LC480软件进行联机,登录帐号admin,密码Master01。

二.开始实验:点击,在列表中选择对应的程序,如H1N1或HBV,点击窗口右下角的,点击软件界面右下角的,输入实验文件名点击窗口右下角的开始实验。

三.编辑子集:点击subset editor,点击左下角的,按ctrl键的同时鼠标选择本次实验的孔,最后点击应用。

注意,一次实验可以同时运行相同扩增参数的多个实验(如H1N1、HIV与HCV),那么可以分别设置多个子集设置样品:先在subset中选择本次实验的子集,点击左上角的,样品输入样品名,再选择标准品类型和浓度或者阳性对照/阴性对照四.数据分析:实验运行完成后进入,选择Abs Quant/Fit Ppoint,在窗口中的Subset(第二行)中选择本次实验的子集,点击软件界面中上方的,在Noise Band中调节noiseband高度,使之处于对数增长期并高于所有噪音信号,如右图。

再点击进入,点击软件界面中间偏右的自动设置阈值或手工调节阈值(鼠标左键按住拖动或在输入阈值大小),再点击软件界面左下角的,软件左下方出现每个样品的Ct值或浓度值等以及平均值标准误等信息,该部分可以鼠标拖动滑块或鼠标拖曳、鼠标点击软件右上角的为本次分析命名,如输入H1N1或其它名称五.报告输出打印:点击软件右侧的保存当前实验的分析结果,再点击软件左侧的,点击软件中部左侧的Detailed 选择需要输出的分析结果,如H1N1,分析中建议选择results或standard curve,点击软件界面左下方的,生成PDF报告,如装了打印机,直接点击软件中间上方的,或者点击,选择pdf文件保存位置后点击save保存。

480 操作手册-2

480 操作手册-2

5. 手动换刀被放松并推出。一手
压着开关另一手将要锁上的刀具对准主轴刀上的定位键(drive key),刀具插上后,放开手动
退刀开关,刀具即被锁紧在主轴上。
注意:为保持主轴的精度,将刀具锁上主轴之前请先将主轴刀柄座斜度部分及将锁上的刀柄 擦拭清洁再锁上。
2.4 机器的开机及关机
冲屑开关 押此按钮开关启动冲屑用切削水;再押一次停止冲屑切削水。
切削水程序连锁开关 切削水之由程序来指令控制。
工作灯 手动控制工作灯开关。
蜂鸣器解除 警报产生时,蜂鸣器会响,操作者可按此开关先将蜂鸣器暂时解除,再做问题排除的工作。
紧急停止解除 2-5
当 X/Y/Z 任何一轴有超过行程,EM 指示灯亮起。持续押此按钮开关并使用微调模式将进入紧急停 止开关内之轴反方向移开 100mm 时再放开,紧急停止区域的情况即可解除。
第4轴 手动移动第 4 轴,可依第 4 轴按钮开关上之方向标示¸移动第 4 轴之方向。轴回到机械原点时,灯会亮。
各类按钮开关功能说明
M01 (选择性停止) 注意!! 此操作开关依操作者之需要作选择,当开关的指示灯亮时表示 M01 机能有效。 在 M01 机能有效情况下: 1. M01 单节背执行。 2. 各轴与主轴会停止。(主轴不停止可由 DGN 设定,参考电器手册) 3. 切屑水停止与进给暂停指示灯亮。(切屑水不停止可由 DGN 设定,参考电器手册) 4. 押循环启动按钮开关后,程序继续执行。 5. 进给暂停指示灯熄灭。
手动原点复归
1. 选择
模式。
2. 押下欲回原点的轴"+或-"方向的按钮,轴即会往"+/-"方向移动。当该轴原点复归动作完 成时,原点位置表示灯会亮起。
原点复归注意事项

Lightcycler使用手册

Lightcycler使用手册

单击此处的两个 小圆点。
将此数值设置到 4。
单击 Step2 Noise Band.
热线电话:021-5446 0832 8009881995 E-mail:master@
5 网址:
7.并且设置基线值
单击此处的双短 横线。
单击此处,输入基线 值。再单击 OK 。
单击editsamples在这一栏内可以输入标准品的浓这里输入要检测样本的数量
Lightcycler 使用手册
1.双击桌面上的 LightCycler, 选择 RUN。
2.设置程序。
三 设置循环
设置温度 设置时间 设置升降温速率
选择到 single
热线电话:021-5446 0832 8009881995 E-mail:master@
8. 观察结果:
热线电话:021-5446 0832 8009881995 E-mail:master@
6 网址:
在这一 栏内可 以看到 最后测 得的标 本浓度. 本浓度
上海闪晶分子生物科技有限公司
地址:上海市闵行区北桥镇吴河路328号A栋2楼 邮编:201109 联系:市场部 电话:5446 0832 800-988-1995 E-mail:master@ 网址:
1 网址:
3.单击 Edit Samples
此处 输入 样本 名称

此处设定样 本类型。有 阴性、阳性、 标本、标准 等类型
这里输入要检测样本的 数量.
在这一栏内可以 输入标准品的浓 度
热线电话:021-5446 0832 8009881995 E-mail:master@
2 网址:
4.图示为运行过程中的窗口
纵 坐 标 表 横 坐 标 表 示 目前温度 示温度。 时间。

LightCycler 480II 实时荧光定量PCR仪 说明书

LightCycler 480II 实时荧光定量PCR仪 说明书

LightCycler® 480 II 实时荧光定量PCR仪非凡体验谋求突破,专业设计诠释经典LightCycler ® 480 II 实时荧光定量PCR 仪具备出色的分辨率、重复性及高速度,可广泛应用于科研、临床诊断、食品安全、疫情监控等1985 Kary Mullis 发明PCR 技术▼▲*1991 罗氏公司获得PCR全球专利权▲1993 Kary Mullis 因发明PCR 技术而获得诺贝尔化学奖▲1998 罗氏应用科学部推出LightCycler ®全自动实时定量PCR 仪▲2012 含新光源的LightCycler ®480 II 上市▲2006 LightCycler ® 480全自动实时定量PCR 仪问世!1993 罗氏公司Russell Higuchi 发明实时定量PCR 仪▼1995 罗氏诊断公司推出PCR 诊断行业金标准:COBAS Amplicor▼2008 全新升级型号,LightCycler ® 480 II 正式上市▼2005 LightCycler ®全球装机突破5000台,成为全球销量成绩斐然的单型号实时定量PCR 仪▼高精密度轻松区分1.5倍浓度差异,置信度≥99.8%高灵敏度可检测单拷贝基因动力学范围广可同时检测到1-1010个拷贝DNA 高重复性重复性高,CV <0.15%高速40分钟完成40个PCR 循环(384孔板)技术领先采用Therma-Base TM热循环技术(专利号US Patent No.5161609)、导热性能好的银质热循环模块和先进的光学检测系统,彻底消除边缘效应,保持稳定优质的检测结果,且整个过程中无需使用ROX 等内参染料,有效节约成本全能分析模式多样,绝对定量、相对定量、基因分型(熔解曲线法及终点法)、高分辨率熔解曲线分析,同时适用市面上主流的检测模式(染料检测、水解探针(TaqMan ®探针)、杂交探针、简单探针等)开放式平台可使用市面上绝大多数常见荧光染料以及第三方提供的8联管、96孔板和384孔板灵活可互换的96孔、384孔加热模块,用户可自行更换,无需工程师到场自动化平台配以LIMS 系统及自动进样机械臂,可实现远程操作及全自动化运行LightCycler ® 480 II 实时荧光定量PCR 仪——温控系统独具匠心的PCR热循环模块设计加热模块和冷却元件之间引入的高效热平衡技术(Therma-Base TM),同时使用导热性能出色的银质材质,使LightCycler ® 480 II 的温控系统获得了技术性的进步。

LC480操作与维护规程

LC480操作与维护规程

文件类型技术文件机密等级内部公开文件编号W-SBYQ-***工艺代号/Roche LightCycler 480Ⅱ实时荧光定量PCR系统操作与维护规程参考资料文件编号说明文件发放部门(必填)保密文件,知识产权属迈瑞公司所有。

第1 页共19 页(3.0)保密文件,知识产权属迈瑞公司所有。

第 1 页 共 19 页修订记录版本 ECN/CR/PCN/TC N修 改 内 容 概 述修订人 生效日期(注:此模板3.0版开始加入“生效时间”列,故之前修订记录中此项信息为空)Roche LightCycler 480Ⅱ实时荧光定量PCR系统操作维护规程1目的使Roche LightCycler 480Ⅱ实时荧光定量PCR系统能够正确和正常的使用,保证系统的正常运行的准确性和精密度,以获得准确可靠的检验结果。

2适用范围使用Roche LightCycler 480Ⅱ实时荧光定量PCR系统进行相应的临床项目检测,并经过系统维护保养工作培训(至少已经阅读过系统操作手册和保养手册)的试剂研发工程师和厂家维修工程师。

3术语和定义3.1实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实时荧光定量PCR技术于1996年产生,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。

3.2实时荧光定量PCR系统实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。

与实时设备相连的计算机收集荧光数据。

数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。

原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。

原始数据收集后可以开始分析。

实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。

正常化后可以设定域值水平,这就是分析荧光数据的水平。

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LightCycler® 480 中文操作说明罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门February 2008目录一. 启动机器与软件 3二. 软件设定 --- 开启新实验 5三. 样品编辑9四. 结果分析12五. 报告18六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输19 入)七. 使用者管理19一.启动机器与软件•启动机器1.机器主开关位于机器右后方。

2.机器正面两个警示灯代表机器状态。

待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯,警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟),表示机器已经启动完成。

3.按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。

放置完成后,左右两警示灯都呈现绿色。

•启动软件1.开启计算机,并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。

User name: OPERATORPassword: LC4802.开启 LightCycler 480 软件,并输入正确的使用者与密码。

二.软件设定-- 开启新实验•设定新实验1.软件开启后,会进入主画面。

点选“New Experiment”。

2.出现实验设定窗口。

任何时候需要回主画面的话,点选画面右边的按钮。

•设定实验❖若要套用设定好的实验步骤 (Template),请跳至 6.。

1.在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Forma t。

选项包含:另外可再点选“Customize” 勾选所需的滤片组合。

2.输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul,而 384 well plate 范围为 5-20 ul。

3.设定实验步骤 (Program)•设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。

利用『+』与『-』增加或删除步骤。

•设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。

通常 Amplification (PCR) program设定成『Quantification』,而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。

4.设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同)•点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤,请根据产品说明书来设定,利用『+』与『-』增加或删除步骤。

需要设定的参数包含Target (℃) 目标温度,Acquisition Mode (荧光侦测模式),Hold (hh:mm:ss) 停留时间。

Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度,范围如下:Ramp Rate (℃/s) Heating up Cooling down96-well Block 1.0 – 4.4℃/s 1.0 – 2.2℃/s384-well Block 1.0 – 4.8℃/s 1.0 – 2.5℃/s❖若设定温度低于 50℃,请把 Ramp Rate调整成1.5℃/s (96 well) 或2.0℃/s (384 well)。

5.将实验步骤储存成『Template』以便下次进行套用。

点选左下角“Save As Template” 即可把此步骤储存起来。

6.若要进行套用时,请直接点选窗口左下角“Apply Template” ,选择欲套用之实验步骤即可。

7.设定完成后点选“Start Run” 开始进行实验。

8.跳出档案储存窗口,请输入欲储存之文件名称。

❖实验进行中会进入另一个 Data窗口,窗口下方按键功能如下:✓End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。

✓+ 10 Cycles : 实时增加循环数目。

✓Abort Run: 马上结束此实验,请注意,若按此键,则此次实验的结果将不储存。

三.样品编辑•将样品分群1.点选窗口左边的“Subset Editor”。

2.点选“New” 新增新的群组,并将其命名。

3.利用鼠标选取此群组之样品位置,点选窗口右下角“Apply” ,此时被选取的样品位置会呈现实心的蓝色,如下图。

4.以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。

❖样品必须分群才能够独立分析,但是样品是否分群并不影响样品的 Cp 值。

•编辑样品名称1.点选窗口左边的“Sample Editor”。

2.输入每个位置之样品名称 (Name)与重复(Repl. Of)。

3.若要更快速输入,可直接在左边的图上点选欲编辑之样品:❖若 A1, A2 与 A3 为三重复,在A2 与 A3 Repl. Of 字段上都填上A1 即为三重复。

❖在编辑过程中,可利用『Ctrl』+『C』复制文字,『Ctrl』+『V』贴上文字。

4.根据实验分析模式,编辑 Abs Quant (绝对定量),Rel Quant (相对定量),或Genotyping 分页,设定 Sample Type。

绝对定量 (Abs Quant):『Unknown』:未知浓度样品『Standard』: 已知浓度标准品相对定量 (Rel Quant):『Target』: 目标基因『Reference』: 参考基因『Calibrator』: Control 样品『Standard』: 已知浓度的样品『Unknown』:未知浓度样品❖其它分析模式之分页在此不赘述,请自行参考 LightCycler 480 Instrument Operator’s Manua l。

5.若设定成『Standard』之样品请输入浓度。

6.若想要将此样品编辑储存成 Template,可点选窗口左下角“Save AsTemplate” 即可,下次实验时可点选“Apply Template” 进行套用。

四.结果分析• 点选左边的 “Analysis ”,选取分析模式,并选择所需分析之群组,如下图:分析模式说明Abs Quant / 2nd Derivative Max 绝对定量 (自动法) Abs Quant / Fit Points 绝对定量 (手动法)Color Compensation 色差校正 (多色实验校正用)Gene Scanning 基因扫描 (适用于High Resolution Melting Curve, HRM 分析) Genotyping基因分型 (适用于 HybProbe 之基因分型实验) Relative Quantification 相对定量 Tm CallingTm 分析1.2.3.•绝对定量 (Absolute Quantification)1.点选下方的“Calculate” 即可得到样品之 Cp 与标准曲线。

各個樣品之 Cp 值與濃度重複樣品平均後之Cp值與濃度, 並自動計算標準差2.数值之数据输出: 在数值分析表上按鼠标右键,点选“Export” 即可输出成 .txt 档案格式。

可直接以 Microsoft Excel 软件开启。

3.图形输出: 在图形上按鼠标右键,点选“Export” 即可输出成各种图形档案格式。

4.标准曲线储存: 点选窗口下方 Std Curve之“Saveas external”,输入适合档名后即可储存在数据库中。

•相对定量 (Relative Quantification)1.在选择相对定量分析后,出现下面窗口:❖Reference Sample Location: 若 Reference (Housekeeping gene) 之样品在同一盘上请选择“In-Run”,否则请选择“External” 可输入另一次实验的数据一起分析。

❖建议将Auto Pair打勾让计算机自动将样品配对。

2.进入『Target』与『Reference』分页,右下角显示“Eff = 2” 表示将目标基因与参考基因的 PCR 效率以 2.0 来计算。

3.若需要校正目标基因与参考基因之 PCR 效率,则需要输入标准曲线。

在『Target』与『Reference』分页之右下角,输入 (import) 标准曲线。

❖Use in run:输入 (import) 同一盘上之标准曲线。

❖Use external:输入(import)之前已储存于数据库中之标准曲线。

4.点选『Pairing』分页,检查计算机自动配对结果是否正确。

其中,红色表示 Unknown样品,绿色表示 Calibrator 样品。

若欲外加配对,则可直接以鼠标点选样品后按“Add” 即可增加配对。

5.点选『Results』分页,点选“Calculate” 即可得到计算结果。

6.数值和图形输出与绝对定量相同。

(请参考绝对定量)•基因分型 (Genotyping)1.进入基因分型的窗口中。

2.窗口右下角可设定分类方式❖Auto Group:自动分组❖In-run:标准品包含在本次实验中❖External:标准品在之前已储存之实验中3.点选“Calculate” 即可得到分型结果。

•Tm 分析 (Tm Calling)1.进入 Tm 分析窗口2.确认波峰数目3.选择检测模式4.点选“Calculate"即可得到每个样品之 Tm 值。

五.报告 (Report)1.将分析后结果储存后即可点选报告键。

数据储存报告2.勾选想要呈现的报告内容。

3.点选“Generate” 即可产生报告。

4.点选“PDF” 即可将此报告储存成 .pdf 档案格式。

六.数据转移至其它计算机 (数据输出与输入)•数据输出1.点选 (navigator)2.点选所要输出的实验档案,点选即可将档案输出成 .ixo档案3.将此ixo档案以光盘或随身碟存到另一计算机•数据输入1.分析计算机上开启 LightCycler 480 软件,登入后点选2.点选,选取所要输入的 .ixo 档案并开启,即可开始进行实验数据分析3.点选将此实验档案储存至数据库中七.使用者管理1.点选右方工具键。

2.点选“User and Groups”。

3.点选“New” 即可新增使用者,并设定使用者名称、密码与权限。

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