Roche-LightCycler-480-中文操作说明要点

LightCycler® 480 中文操作说明

罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门

February 2008

目录

一. 启动机器与软件 3

二. 软件设定 --- 开启新实验 5

三. 样品编辑9

四. 结果分析12

五. 报告18

六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输

19 入)

七. 使用者管理19

一．启动机器与软件

•启动机器

1.机器主开关位于机器右后方。

2.机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转

变成稳定橘色灯，警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟)，表示机器已经启动完成。

3.按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔

盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。

•启动软件

1.开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。

User name: OPERATOR

Password: LC480

2.开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。

二．软件设定-- 开启新实验

•设定新实验

1.软件开启后，会进入主画面。点选“New Experiment”。

2.出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的

按钮。

•设定实验

❖若要套用设定好的实验步骤 (Template)，请跳至 6.。

1.在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Forma t。选项包含:

另外可再点选“Customize” 勾选所需的滤片组合。

2.输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul，而 384 well plate 范围

为 5-20 ul。

3.设定实验步骤 (Program)

•设定 program，包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。利用『+』与『－』增加或删除步骤。

•设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR) program设定成『Quantification』，而 Melting Curve program 设

定成『Melting Curve』。

4.设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同)

•点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明书来设定，利用『+』与『－』增加或删除步骤。需要设定的参数包含Target (℃) 目标温度，Acquisition Mode (荧光侦测模式)，Hold (hh:mm:ss) 停留时间。Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度，范围如下：

Ramp Rate (℃/s) Heating up Cooling down

96-well Block 1.0 – 4.4℃/s 1.0 – 2.2℃/s

384-well Block 1.0 – 4.8℃/s 1.0 – 2.5℃/s

❖若设定温度低于 50℃，请把 Ramp Rate调整成1.5℃/s (96 well) 或

2.0℃/s (384 well)。

5.将实验步骤储存成『Template』以便下次进行套用。点选左下角

“Save As Template” 即可把此步骤储存起来。

6.若要进行套用时，请直接点选窗口左下角

“Apply Template” ，选择欲套用之实验步骤

即可。

7.设定完成后点选“Start Run” 开始进行实验。

8.跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。

❖实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下：

✓End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。

✓+ 10 Cycles : 实时增加循环数目。

✓Abort Run: 马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结果将不储存。

三．样品编辑

•将样品分群

1.点选窗口左边的“Subset Editor”。

2.点选“New” 新增新的群组，并将其命名。

3.利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角“Apply” ，此时

被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。

4.以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。

❖样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品的 Cp 值。

•编辑样品名称

1.点选窗口左边的“Sample Editor”。

2.输入每个位置之样品名称 (Name)与重复

(Repl. Of)。

3.若要更快速输入，可直接在左边的图上点选欲编辑之样品：

❖若 A1, A2 与 A3 为三重复，在A2 与 A3 Repl. Of 字段上都填上A1 即为三重复。

❖在编辑过程中，可利用『Ctrl』+『C』复制文字，『Ctrl』+『V』贴上文字。

4.根据实验分析模式，编辑 Abs Quant (绝对定量)，Rel Quant (相对定

量)，或Genotyping 分页，设定 Sample Type。

绝对定量 (Abs Quant)：

『Unknown』:未知浓度样品

『Standard』: 已知浓度标准品

相对定量 (Rel Quant)：

『Target』: 目标基因

『Reference』: 参考基因

『Calibrator』: Control 样品

『Standard』: 已知浓度的样品

『Unknown』:未知浓度样品

❖其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考 LightCycler 480 Instrument Operator’s Manua l。

5.若设定成『Standard』之样品请输入浓度。

6.若想要将此样品编辑储存成 Template，可点选窗口左下角“Save As

Template” 即可，下次实验时可点选“Apply Template” 进行套用。