考研课件生理学实验蛙心灌流hanPPT
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生理学实验PPT蛙心灌流-王课件
• 进行各观察项目时，作用明显后应立即用新 鲜任氏液换洗，以免心肌受损，心跳难以恢复 待心跳恢复正常频率和幅度后，方能进行下一 步实验。
• 滴加药品时，要及时标记，以方便观察分析
观察项目
1) 描记正常曲线，观察收缩与舒张相 2) 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl 3) 全部更换为新鲜任氏液，反复换洗数次，待曲线恢
• 正常蛙心收缩曲线
•
曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。
•
曲线密度：代表心跳频率。
•
曲线的规律性：代表心跳的节律性。
•
曲线的基线：代表心室舒张的程度。
•
曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。
分析讨论
• 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl后， 曲线（观察收缩幅度，舒张程度以及心率）有什么 变化？为什么？
2. 高钙：蛙心收缩力增强，但舒张不完全，收缩基 线上移。在Ca2+ 浓度较高的情况下，心脏会停止
在收缩状态，称为钙僵。心肌的舒缩活动与肌浆 中的Ca2+ 浓度高低有关，当Ca2+ 浓度升高至105mol/l 时 ， 作 为 钙 受 体 的 肌 钙 蛋 白 结 合 了 足 够 的 Ca2+ ，这就引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而 触发肌丝滑行，肌纤维收缩。当肌浆中的Ca2+ 浓 度降至10-7mol/l时， Ca2+ 与肌钙蛋白解离，心肌 随之舒张。当用高Ca2+ 任氏液灌注蛙心，使得肌 浆中的Ca2+ 浓度不断升高， Ca2+ 与肌钙蛋白结
复正常，滴加2%CaCl2 1-2滴 4) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加
1%KCl 1-2滴 5) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加
• 滴加药品时，要及时标记，以方便观察分析
观察项目
1) 描记正常曲线，观察收缩与舒张相 2) 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl 3) 全部更换为新鲜任氏液，反复换洗数次，待曲线恢
• 正常蛙心收缩曲线
•
曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。
•
曲线密度：代表心跳频率。
•
曲线的规律性：代表心跳的节律性。
•
曲线的基线：代表心室舒张的程度。
•
曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。
分析讨论
• 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl后， 曲线（观察收缩幅度，舒张程度以及心率）有什么 变化？为什么？
2. 高钙：蛙心收缩力增强，但舒张不完全，收缩基 线上移。在Ca2+ 浓度较高的情况下，心脏会停止
在收缩状态，称为钙僵。心肌的舒缩活动与肌浆 中的Ca2+ 浓度高低有关，当Ca2+ 浓度升高至105mol/l 时 ， 作 为 钙 受 体 的 肌 钙 蛋 白 结 合 了 足 够 的 Ca2+ ，这就引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而 触发肌丝滑行，肌纤维收缩。当肌浆中的Ca2+ 浓 度降至10-7mol/l时， Ca2+ 与肌钙蛋白解离，心肌 随之舒张。当用高Ca2+ 任氏液灌注蛙心，使得肌 浆中的Ca2+ 浓度不断升高， Ca2+ 与肌钙蛋白结
复正常，滴加2%CaCl2 1-2滴 4) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加
1%KCl 1-2滴 5) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加
离体蛙心灌流及某些离子-PPT精品文档
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流：
[K+ ]o↑ AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓ 收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β 1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑ 兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑
观察项目
一、描记正常心搏曲线
曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率 和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
实验对象 蟾蜍
实验仪器设备
RM6240生物采集系统 张力换能器 蛙类手术器械 蛙心插管 试管夹 缝合线 蛙心夹 铁支架 滴管
实验药品
任氏液 l％KCl 3％CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3％乳酸 2.5％NaHCO3
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏
相关理论知识
心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋 性、传导性和收缩性。 心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物 质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对 心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显 的影响。
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因 1.心肌的自动节律性
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流：
[K+ ]o↑ AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓ 收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β 1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑ 兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑
观察项目
一、描记正常心搏曲线
曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率 和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
实验对象 蟾蜍
实验仪器设备
RM6240生物采集系统 张力换能器 蛙类手术器械 蛙心插管 试管夹 缝合线 蛙心夹 铁支架 滴管
实验药品
任氏液 l％KCl 3％CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3％乳酸 2.5％NaHCO3
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏
相关理论知识
心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋 性、传导性和收缩性。 心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物 质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对 心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显 的影响。
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因 1.心肌的自动节律性
生理实验课件：蛙心灌流
(1) 除极过程：0 期(phase 0)：电压门控式Na+通道开放
达到阈电位Na+通道大量开放去极化
(2) 复极化过程：1，2，3期 (200300 ms)
• Phase 1 (快速复极初期)：快Na+通道关闭，瞬时性外向K+通 道激活(Ito) K+快速外流 跨膜电位： +20 ~ +30mv 0mv
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照
5. 1:10000E（1～2滴）
与心肌β1受体结合
cAMP
Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
自律性↑
E-C耦联↑ 收缩力↑
心率↑
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照 6. 1:10000Ach（1滴）
自律细胞：(特殊传导系统)： 窦房结P细胞(pacemaker cell) 浦肯野细胞(Purkinje cell) 有兴奋性、传导性，自律性，收缩功能基本
丧失
(一)心室肌的静息电位和动作电位 1.静息电位(resting potential)：-90mv其形成机制与骨骼肌和
神经纤维相似。 2. 动作电位(action potential)：
一、离体蟾蜍心脏制备
1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓。 2.打开胸腔，暴露心脏。
一、离体蟾蜍心脏制备
1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓 2.打开胸腔，暴露心脏。
（腹面）
（背面）
一、离体蟾蜍心脏制备
3.蛙心插管
♦ 在主A干下穿一线打 一松结；在左主A下再 穿一线结扎。
♦ 在A圆锥、左主A根部剪 口，将蛙心插管插入心室内。
达到阈电位Na+通道大量开放去极化
(2) 复极化过程：1，2，3期 (200300 ms)
• Phase 1 (快速复极初期)：快Na+通道关闭，瞬时性外向K+通 道激活(Ito) K+快速外流 跨膜电位： +20 ~ +30mv 0mv
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照
5. 1:10000E（1～2滴）
与心肌β1受体结合
cAMP
Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
自律性↑
E-C耦联↑ 收缩力↑
心率↑
【结果分析】
1. 任氏液：正常对照 6. 1:10000Ach（1滴）
自律细胞：(特殊传导系统)： 窦房结P细胞(pacemaker cell) 浦肯野细胞(Purkinje cell) 有兴奋性、传导性，自律性，收缩功能基本
丧失
(一)心室肌的静息电位和动作电位 1.静息电位(resting potential)：-90mv其形成机制与骨骼肌和
神经纤维相似。 2. 动作电位(action potential)：
一、离体蟾蜍心脏制备
1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓。 2.打开胸腔，暴露心脏。
一、离体蟾蜍心脏制备
1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓 2.打开胸腔，暴露心脏。
（腹面）
（背面）
一、离体蟾蜍心脏制备
3.蛙心插管
♦ 在主A干下穿一线打 一松结；在左主A下再 穿一线结扎。
♦ 在A圆锥、左主A根部剪 口，将蛙心插管插入心室内。
生理实验课件：蛙心灌流期前收缩和代偿间歇
• 2)加1～2滴2%CaCl2于灌流液中，观察收缩曲线 的改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲洗至曲线 恢复正常。
• 3)加1～2滴1%KCl于灌流液中，观察曲线改变。 效应明显后，用任氏液冲洗至曲线恢复正常。
• （3）递质对心脏收缩的影响 • 1)加1～2滴1：10000去甲上腺素于灌流液中，观
察收缩曲线改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲 洗至曲线恢复正常。 • 2)加1滴1：100000乙酰胆碱于灌流液中，观察收 缩曲线改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲洗至 曲线恢复正常。
• 2.实验装置
• 用试管夹将蛙心插 管固定于铁支架上。 将蛙心夹上的线连 至机械-电换能器的 着力点上（切勿让 心脏受到过度牵 拉）。将机械电换 能器连至BL-410微 机生理实验系统。
• 3.观察项目
• (1)描记心脏的正常收缩曲线
• (2)离子对心脏收缩的影响
• 1)吸出插管内全部灌流液，加入0.65%NaCl,观察 心脏收缩曲线改变。效应明显后，吸出灌流液， 用新鲜任氏液冲洗至收缩曲线恢复正常。
• 实验对象 蟾蜍
• 实验器材和药品
BL-420微机生理实验系统，机械-电换能器 （量程25克）。铁支架、双凹夹、试管夹、 蛙心插管、蛙心夹、蛙手术器械、滴管2支、 大烧杯2只、温度计、恒温水浴、棉线。任 氏液、0.65%NaCl2、1%KCL、3%乳酸、 2.5%NaHCO3、1：10000去甲肾上腺素、 1：100000乙酰胆碱等溶液。
有效不应期:心肌收缩的有效不应期 较长,整个收缩期和舒张早期都是 不应期.在此期给予任何刺激,心室 都不发生反应.
相对不应期（-60～-80mV）:在心室 相对不应期给单个阈上刺激,则产 生一次正常的节律以外的收缩反应, 称为期前收缩，或早搏.
• 3)加1～2滴1%KCl于灌流液中，观察曲线改变。 效应明显后，用任氏液冲洗至曲线恢复正常。
• （3）递质对心脏收缩的影响 • 1)加1～2滴1：10000去甲上腺素于灌流液中，观
察收缩曲线改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲 洗至曲线恢复正常。 • 2)加1滴1：100000乙酰胆碱于灌流液中，观察收 缩曲线改变。效应明显后，用新鲜任氏液冲洗至 曲线恢复正常。
• 2.实验装置
• 用试管夹将蛙心插 管固定于铁支架上。 将蛙心夹上的线连 至机械-电换能器的 着力点上（切勿让 心脏受到过度牵 拉）。将机械电换 能器连至BL-410微 机生理实验系统。
• 3.观察项目
• (1)描记心脏的正常收缩曲线
• (2)离子对心脏收缩的影响
• 1)吸出插管内全部灌流液，加入0.65%NaCl,观察 心脏收缩曲线改变。效应明显后，吸出灌流液， 用新鲜任氏液冲洗至收缩曲线恢复正常。
• 实验对象 蟾蜍
• 实验器材和药品
BL-420微机生理实验系统，机械-电换能器 （量程25克）。铁支架、双凹夹、试管夹、 蛙心插管、蛙心夹、蛙手术器械、滴管2支、 大烧杯2只、温度计、恒温水浴、棉线。任 氏液、0.65%NaCl2、1%KCL、3%乳酸、 2.5%NaHCO3、1：10000去甲肾上腺素、 1：100000乙酰胆碱等溶液。
有效不应期:心肌收缩的有效不应期 较长,整个收缩期和舒张早期都是 不应期.在此期给予任何刺激,心室 都不发生反应.
相对不应期（-60～-80mV）:在心室 相对不应期给单个阈上刺激,则产 生一次正常的节律以外的收缩反应, 称为期前收缩，或早搏.
课件蛙心灌流
3次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢复正常后方能进行下一
步实验，以形成前后对照。
滴加药品和换取新鲜林格溶液时，须及时标记，以便观 察分析。
化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂 量添加后的实验结果。
随时用林格溶液润湿蛙心表面。
第18页，共20页。
◆ 思考与探索
设计一个新的、更简单的离体心脏插管方法。 设计一个兔心离体灌流的方法。 设计一个实验，用于了解某种药物对心房肌收缩力与
林格溶液， 4％CaCl2，4％KCl，0.01％肾上腺素，0.01％乙酰 胆碱（Ach），0.1%普萘洛尔， 0.1%阿托品
八木氏套管
万能滑轮
第6页，共20页。
◆ 实验步骤
离体蛙心的制备 暴露心脏：
取一只蟾蜍，双毁髓后背位固定于蛙板上。剪开 胸腹部皮肤、肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨。将 整个胸腔暴露。
第10页，共20页。
◆ 实验步骤
* 标本与仪器连接：
用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部 ，蛙心夹上的棉线通过万能滑轮转 换后与张力换能器相连。
第11页，共20页。
斯氏插管法
斯氏插管法 仪器连接
第12页，共20页。
◆ 实验步骤
观察离子对心脏活动的影响： 打开软件→选择实验（实验→循环→蛙心灌流）→开始示 波 →开始记录 →记录正常心搏曲线。 向静脉插管内林格溶液中滴加4％CaCl2 2滴，观察心搏出现 变化后立即将灌流液全部吸出，用新鲜林格溶液换洗2－3
↓
正常心搏曲线
↓
4％CaCl2， 6滴 ↓一旦出现现象
立即换洗，2-3次
↓ 正常心搏曲线
↓
4％KCl， 1-2滴
↓一旦出现现象
立即换洗，2-3次
步实验，以形成前后对照。
滴加药品和换取新鲜林格溶液时，须及时标记，以便观 察分析。
化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂 量添加后的实验结果。
随时用林格溶液润湿蛙心表面。
第18页，共20页。
◆ 思考与探索
设计一个新的、更简单的离体心脏插管方法。 设计一个兔心离体灌流的方法。 设计一个实验，用于了解某种药物对心房肌收缩力与
林格溶液， 4％CaCl2，4％KCl，0.01％肾上腺素，0.01％乙酰 胆碱（Ach），0.1%普萘洛尔， 0.1%阿托品
八木氏套管
万能滑轮
第6页，共20页。
◆ 实验步骤
离体蛙心的制备 暴露心脏：
取一只蟾蜍，双毁髓后背位固定于蛙板上。剪开 胸腹部皮肤、肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨。将 整个胸腔暴露。
第10页，共20页。
◆ 实验步骤
* 标本与仪器连接：
用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部 ，蛙心夹上的棉线通过万能滑轮转 换后与张力换能器相连。
第11页，共20页。
斯氏插管法
斯氏插管法 仪器连接
第12页，共20页。
◆ 实验步骤
观察离子对心脏活动的影响： 打开软件→选择实验（实验→循环→蛙心灌流）→开始示 波 →开始记录 →记录正常心搏曲线。 向静脉插管内林格溶液中滴加4％CaCl2 2滴，观察心搏出现 变化后立即将灌流液全部吸出，用新鲜林格溶液换洗2－3
↓
正常心搏曲线
↓
4％CaCl2， 6滴 ↓一旦出现现象
立即换洗，2-3次
↓ 正常心搏曲线
↓
4％KCl， 1-2滴
↓一旦出现现象
立即换洗，2-3次
蛙类离体心脏灌流PPT课件
直接引用
直接引用参考文献中的原文或数据，需要在文中注明出处，并在末尾列出相应的参考文献 。
THANKS
感谢观看
使用蛙心夹夹住心脏，确保心脏保持一定的张力， 便于插管。
实验方法与步骤
插管
将蛙心插管插入心脏， 确保插管与心脏紧密 连接，无漏液现象。
灌流
将灌流装置与插管连 接，打开灌流装置， 使生理盐水或其他实 验试剂流入心脏。
观察与记录
观察心脏的跳动情况， 记录相关数据，如心 率、收缩压等。
实验结束
实验结束后，断开灌 流装置与插管的连接， 取出插管，用生理盐 水冲洗心脏，取出蛙 心夹，取出心脏。
实验的局限性
我们指出了实验的局限性， 包括实验条件、样本量等 方面的问题。
04
实验结论与展望
实验结论
实验表明，蛙类离体心脏灌流实 验是一种可靠的生物学实验方法， 可用于研究心脏生理和药理机制。
在实验过程中，我们观察到了心 脏的收缩和舒张过程，以及药物 对心脏功能的影响，证明了该实
验方法的可行性和有效性。
通过深入研究蛙类心脏的生理和 药理机制，可以为人类心脏相关 疾病的防治提供更多有益的思路
和方法。
未来发展方向
我们计划进一步优化实验条件和方法， 提高实验的准确性和可靠性，为更多 的科研工作者提供更好的服务。
在未来的发展中，我们将不断更新实 验技术和方法，加强与其他科研机构 的合作与交流，共同推动相关领域的 发展和进步。
实验注意事项
实验前应仔细检查所有实 验材料是否完好，如有损 坏应及时更换。
在实验过程中要保持安静， 避免干扰到心脏的正常跳 动。
插管时要小心操作，避免 损伤心脏组织。
在灌流过程中要保持恒温， 以免影响实验结果。
直接引用参考文献中的原文或数据，需要在文中注明出处，并在末尾列出相应的参考文献 。
THANKS
感谢观看
使用蛙心夹夹住心脏，确保心脏保持一定的张力， 便于插管。
实验方法与步骤
插管
将蛙心插管插入心脏， 确保插管与心脏紧密 连接，无漏液现象。
灌流
将灌流装置与插管连 接，打开灌流装置， 使生理盐水或其他实 验试剂流入心脏。
观察与记录
观察心脏的跳动情况， 记录相关数据，如心 率、收缩压等。
实验结束
实验结束后，断开灌 流装置与插管的连接， 取出插管，用生理盐 水冲洗心脏，取出蛙 心夹，取出心脏。
实验的局限性
我们指出了实验的局限性， 包括实验条件、样本量等 方面的问题。
04
实验结论与展望
实验结论
实验表明，蛙类离体心脏灌流实 验是一种可靠的生物学实验方法， 可用于研究心脏生理和药理机制。
在实验过程中，我们观察到了心 脏的收缩和舒张过程，以及药物 对心脏功能的影响，证明了该实
验方法的可行性和有效性。
通过深入研究蛙类心脏的生理和 药理机制，可以为人类心脏相关 疾病的防治提供更多有益的思路
和方法。
未来发展方向
我们计划进一步优化实验条件和方法， 提高实验的准确性和可靠性，为更多 的科研工作者提供更好的服务。
在未来的发展中，我们将不断更新实 验技术和方法，加强与其他科研机构 的合作与交流，共同推动相关领域的 发展和进步。
实验注意事项
实验前应仔细检查所有实 验材料是否完好，如有损 坏应及时更换。
在实验过程中要保持安静， 避免干扰到心脏的正常跳 动。
插管时要小心操作，避免 损伤心脏组织。
在灌流过程中要保持恒温， 以免影响实验结果。
蟾蜍离体心脏灌流PPT课件
实验四
蟾蜍离体心脏灌流
实验目的
学习离体蛙心灌流方法 观察K+、Ca2+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离
体心脏活动的影响。
实验原理
心肌具有自动节律性、传导性和兴奋性。 离体和脱离神经支配的动物心脏,保持在适当的
环境中,在一定的时间内,仍然能够有节律性地 产生兴奋和收缩。 利用心肌细胞的这一特性,可用来制作离体心脏 模型, 来观察药物和电解质水平对心肌活动的 影响。
第3次结扎：左\右肝静脉\后腔静脉
5. 第四次结扎：
在左主动脉下穿线→在动脉上剪一斜口→蛙心套管 动脉插管插入动脉（不要插入动脉球内）→结扎固 定
在静脉插管中灌入任氏液，可见液体从动脉插管端泵出， 并且直至心脏颜色变成黄白浅色，血液全部泵出后进行离体。
6. 蛙心离体：
剪断右主动脉—剪断左主动脉—剪断静脉插管— 再将多余的长线头剪断—提起第二次结扎的线头、 动脉插管、静脉插管及心脏 小心将蛙心离体。 将与蛙心套管静脉插管和动脉插管的离体蛙心固定在铁架台上
4 2%KCl
注意事项
每次换液时液面应保持一定的高度。 每次换液或滴加试剂时应打标记。 每个试剂瓶的滴管不能混淆。 心脏表面随时滴加任氏液。 待心跳恢复正常后进行下一项实验。
注意事项
同学最容易犯的错误是第二次结扎:要让一个同 学将蛙心提起来，然后另一个同学进行结扎， 以免将蛙的静脉窦结扎进去。
实验要求
每一项实验记录出一段有代表性的曲线，包 括连续三部分: (1)正常对照 (2)加药后的反应 (3)更换灌流液后恢复至正常状态。
实验项目
1 正常曲线
心收缩力
心输出量
最大 波谷值 心率 记录滴 心输出 每搏输出
收缩力 （g） （g）
蟾蜍离体心脏灌流
实验目的
学习离体蛙心灌流方法 观察K+、Ca2+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离
体心脏活动的影响。
实验原理
心肌具有自动节律性、传导性和兴奋性。 离体和脱离神经支配的动物心脏,保持在适当的
环境中,在一定的时间内,仍然能够有节律性地 产生兴奋和收缩。 利用心肌细胞的这一特性,可用来制作离体心脏 模型, 来观察药物和电解质水平对心肌活动的 影响。
第3次结扎：左\右肝静脉\后腔静脉
5. 第四次结扎：
在左主动脉下穿线→在动脉上剪一斜口→蛙心套管 动脉插管插入动脉（不要插入动脉球内）→结扎固 定
在静脉插管中灌入任氏液，可见液体从动脉插管端泵出， 并且直至心脏颜色变成黄白浅色，血液全部泵出后进行离体。
6. 蛙心离体：
剪断右主动脉—剪断左主动脉—剪断静脉插管— 再将多余的长线头剪断—提起第二次结扎的线头、 动脉插管、静脉插管及心脏 小心将蛙心离体。 将与蛙心套管静脉插管和动脉插管的离体蛙心固定在铁架台上
4 2%KCl
注意事项
每次换液时液面应保持一定的高度。 每次换液或滴加试剂时应打标记。 每个试剂瓶的滴管不能混淆。 心脏表面随时滴加任氏液。 待心跳恢复正常后进行下一项实验。
注意事项
同学最容易犯的错误是第二次结扎:要让一个同 学将蛙心提起来，然后另一个同学进行结扎， 以免将蛙的静脉窦结扎进去。
实验要求
每一项实验记录出一段有代表性的曲线，包 括连续三部分: (1)正常对照 (2)加药后的反应 (3)更换灌流液后恢复至正常状态。
实验项目
1 正常曲线
心收缩力
心输出量
最大 波谷值 心率 记录滴 心输出 每搏输出
收缩力 （g） （g）
离体蛙心灌注及药物的影响PPT幻灯片课件
32
图3 0.65%NaCl对蛙心收缩活动的影响 的影响
图4 2%CaCl2对蛙心收缩活动
图5 1%KCl对蛙心收缩活动的影响 响
图6 NA对蛙心收缩活动的影
33
图7 Ach对蛙心收缩活动的影响 动的影响
图8 先加阿托品再加Ach对蛙心收缩活
图9 强心甙对蛙心收缩活动的影响 动的影响
图10 4℃冷林格液对蛙心收缩活
+1:100000Ach （1滴）
25
实验步骤
4) 应用强心甙类药
0.025%毒毛幻花苷K溶液（1~2滴）
5）观察温度的影响
换入等量4℃的冷林格液
6）观察酸碱的影响
① 1～2滴 2.5% NaHCO3 ② 1～2滴 3% 乳酸， 出现变化后，再加1-2滴 2.5% NaHCO3
26
5.实验后处理
NA与心肌β 受体结合后，激活AC，Ca2+通道 开放增加，正性变力、变时、变传导
30
Ach与心肌细胞膜上M-R结合，抑制钙通道，同 时激活GK蛋白， K+外流增加，负性变力、变时、 变传导
6.阿托品+Ach，无明显变化 阿托品为M胆碱受体拮抗剂，但离体蛙心无神
经支配，无ACh释放，加入阿托品后无明显作用； 再加入Ach，由于阿托品已将M胆碱受体阻 断，故Ach无作用。
9
【实验后处理】
打印结果 写实验报告
10
【注意事项】
勿伤静脉窦，插管时注意方向和手法 保持心脏湿润 保持液面高度一致 滴管勿混用，勿碰蛙心插管，加药勿过量 做好标记，出现作用立即换新鲜林格液
11
12
13
14
2、连接实验装置
15
蛙心结构图
右主动脉弓 右心房 动脉圆锥
图3 0.65%NaCl对蛙心收缩活动的影响 的影响
图4 2%CaCl2对蛙心收缩活动
图5 1%KCl对蛙心收缩活动的影响 响
图6 NA对蛙心收缩活动的影
33
图7 Ach对蛙心收缩活动的影响 动的影响
图8 先加阿托品再加Ach对蛙心收缩活
图9 强心甙对蛙心收缩活动的影响 动的影响
图10 4℃冷林格液对蛙心收缩活
+1:100000Ach （1滴）
25
实验步骤
4) 应用强心甙类药
0.025%毒毛幻花苷K溶液（1~2滴）
5）观察温度的影响
换入等量4℃的冷林格液
6）观察酸碱的影响
① 1～2滴 2.5% NaHCO3 ② 1～2滴 3% 乳酸， 出现变化后，再加1-2滴 2.5% NaHCO3
26
5.实验后处理
NA与心肌β 受体结合后，激活AC，Ca2+通道 开放增加，正性变力、变时、变传导
30
Ach与心肌细胞膜上M-R结合，抑制钙通道，同 时激活GK蛋白， K+外流增加，负性变力、变时、 变传导
6.阿托品+Ach，无明显变化 阿托品为M胆碱受体拮抗剂，但离体蛙心无神
经支配，无ACh释放，加入阿托品后无明显作用； 再加入Ach，由于阿托品已将M胆碱受体阻 断，故Ach无作用。
9
【实验后处理】
打印结果 写实验报告
10
【注意事项】
勿伤静脉窦，插管时注意方向和手法 保持心脏湿润 保持液面高度一致 滴管勿混用，勿碰蛙心插管，加药勿过量 做好标记，出现作用立即换新鲜林格液
11
12
13
14
2、连接实验装置
15
蛙心结构图
右主动脉弓 右心房 动脉圆锥
离体蛙心灌流实习课件
离体蛙心灌流实习课件
CONTENTS
• 实验原理 • 实验材料与器具 • 实验步骤与方法 • 实验结果分析 • 实验注意事项与安全防护
01
实验原理
蛙心灌流实和生理学研究中的经典 实验，用于研究心脏的生 理功能和药物作用机制。
历史背景
该实验方法自19世纪中叶 以来一直被广泛应用于学
术研究和教学。
实验目的
通过离体蛙心灌流实验， 观察心脏的收缩活动和药 物对心脏的影响，了解心 脏的生理功能和药物作用
机制。
实验的基本原理
蛙心离体
将蛙类的心脏取出并置于适宜的灌流液中 ，保持其生理活性。
灌流系统
建立有效的灌流系统，确保心脏得到足够 的氧气和营养物质，同时排除代谢废物。
观察指标
通过心电图机或心脏张力记录仪等设备， 观察和记录心脏的收缩活动。
实验安全注意事项
01 7
实验操作前应熟悉实验步骤和
操作规程，确保实验过程的安
全性。
7
02
7
实验过程中应佩戴适当的防护
用具，如实验服、手套、护目
7
镜等，以防止意外伤害。
03
避免使用未经消毒的器具直接 接触实验对象，以免引起感染 。
04
在操作过程中，应保持安静， 避免干扰和影响实验结果。
实验废弃物处理
记录仪
用于记录蛙心活动 数据。
试剂与药品
肾上腺素
用于增强心肌收缩力，提高心 率。
CaCl2
用于提高灌流液中的Ca2+浓 度，增强心肌收缩力。
任氏液
常用的灌流液，维持蛙心离体 状态下的生理功能。
乙酰胆碱
用于降低心肌收缩力，减缓心 率。
MgSO4
用于降低灌流液中的Mg2+浓 度，增强心肌收缩力。
CONTENTS
• 实验原理 • 实验材料与器具 • 实验步骤与方法 • 实验结果分析 • 实验注意事项与安全防护
01
实验原理
蛙心灌流实和生理学研究中的经典 实验，用于研究心脏的生 理功能和药物作用机制。
历史背景
该实验方法自19世纪中叶 以来一直被广泛应用于学
术研究和教学。
实验目的
通过离体蛙心灌流实验， 观察心脏的收缩活动和药 物对心脏的影响，了解心 脏的生理功能和药物作用
机制。
实验的基本原理
蛙心离体
将蛙类的心脏取出并置于适宜的灌流液中 ，保持其生理活性。
灌流系统
建立有效的灌流系统，确保心脏得到足够 的氧气和营养物质，同时排除代谢废物。
观察指标
通过心电图机或心脏张力记录仪等设备， 观察和记录心脏的收缩活动。
实验安全注意事项
01 7
实验操作前应熟悉实验步骤和
操作规程，确保实验过程的安
全性。
7
02
7
实验过程中应佩戴适当的防护
用具，如实验服、手套、护目
7
镜等，以防止意外伤害。
03
避免使用未经消毒的器具直接 接触实验对象，以免引起感染 。
04
在操作过程中，应保持安静， 避免干扰和影响实验结果。
实验废弃物处理
记录仪
用于记录蛙心活动 数据。
试剂与药品
肾上腺素
用于增强心肌收缩力，提高心 率。
CaCl2
用于提高灌流液中的Ca2+浓 度，增强心肌收缩力。
任氏液
常用的灌流液，维持蛙心离体 状态下的生理功能。
乙酰胆碱
用于降低心肌收缩力，减缓心 率。
MgSO4
用于降低灌流液中的Mg2+浓 度，增强心肌收缩力。
心脏灌流ppt课件
离体心脏灌流方法
两栖类动物： 蟾蜍、青蛙等 Straub法、八木法
哺乳类动物：大鼠、家兔、猫等
Langendroff 法
经典的离体蛙心灌流——Straub法
特点：
灌流途径与正常循环途径不同，蛙心插管
通过主动脉瓣直接插入心室腔内，灌流液通过 同一蛙心插管进入心室腔和流出，前负荷和后 负荷相等。
方
将插有蛙心插管的心脏取出与记录装置连接。
注
意
① 不能损伤或结扎静脉窦；
② 主动脉内的插管不要过深以免抵住主动脉瓣
③ 两根插管有一定相对位置，插管前要考虑好方 向，插管后应避免血管扭曲，保证灌流畅通 ④ 避免气泡进人心脏。
哺乳类动物离体心脏灌流 ——Langendorff 法
Langendorff首次描述了保持哺乳动物离体心脏存活的方法，采用恒
优缺点
优点： 1.排除在整体情况下体内各种复杂因素的干扰，直接观测离 体心脏标本的各项指标。
2.易于严格控制实验环境，方法简便精确，有利于分析作用 机制及对药物的药效作定量研究。
3.易于获得准确、精细的结果。
4.缺点和局限性：
5. 失去了机体完整统一的内环境和神经体液调控作用， 失去了体内各种组织、细胞之间的相互关系，不能完全反映 心脏在整体情况下的活动规律与正常整体情况。
滑肌灌流用的恒温浴槽或麦氏浴槽）中，浴槽内加入Ringer’s液或Krebs— Henseheit缓冲液，利用恒温水浴使这一装置保持在 37℃。经主动脉插管
灌 注 氧 饱 和 的 Ringer’s 液或 Krebs—Henseheit 缓冲液 ， 并持续保持 400
mmHg灌注压。
4. 连接记录装置：将一特制的金属小钩固定在心尖部， 利用张力传感器与多导记录仪相连并描记心脏收缩曲线和测 定收缩力等指标。 Langendorff 离体心脏灌流装置可用于测 定不同种生理学试剂和药物的直接效应，以及对这些药物的 拮抗作用。还可观察冠脉流量的变化。
离体蛙心灌流及某些离子幻灯片PPT
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.观察心脏的解剖结构
（腹面）
（背面）
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一
松结；在左主A下再穿一 线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管 1.2 在主动脉根部剪一 斜口，将插管插入动脉 圆锥， 在心室收缩时 将插管插入心室，结扎 固定。
实验对象 蟾蜍
实验仪器设备
RM6240生物采集系统 张力换能器 蛙类手术器械 蛙心插管 试管夹 缝合线 蛙心夹 铁支架 滴管
实验药品
任氏液 l％KCl 3％CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3％乳酸 2.5％NaHCO3
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏
心交感神经与去甲肾上腺素
心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上 腺素，激动心肌细胞膜上的ß受体，产生正性变 力、正性传导、正性变时等效应。
实验目的
1.本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。
2.用离体蛙心灌流的方法观察：
① K+、Ca2+ ② 酸、碱度 ③ 肾上腺素（E）
乙酰胆碱（Ach）
对心脏活动的影响
7. 3%乳酸灌流
H+与Ca2+竞争肌钙蛋白， Ca2+不能与肌钙蛋白结
合，心肌收缩力↓。
思考题
通过本次实验结果，分析离子、药物和递对 心搏曲线有什么影响？为什么？
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流： [K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
实验4 离体蛙心灌流共30页PPT
1、不要轻言放弃，否则对不起自己。
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
实验4
离体蛙心灌流4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
实验4
离体蛙心灌流4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
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4.加入肾上腺后，曲线幅度明显加大，可见蛙心收 缩增强，基线下降，说明心脏舒张完全，从而提 高心输出量。肾上腺具有正性变力，正性变时， 正性变传导作用。
机理为：肾上腺与心肌细胞上的β受体相结合， 激活腺甘酸环化酶，使胞内cAMP浓度增加，通过 下游的信号转导机制使得钙通道开放的概率增加， 平台期钙内流增加，心肌收缩能力增强。 另外，肾上腺还有促使肌钙蛋白与Ca2+的释放， 提高肌浆网膜对Ca2+的回收，使心肌舒张速度增 快，舒张完全。
正常蛙心收缩曲线
• 曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。 • 曲线密度：代表心跳频率。 • 曲线的规律性：代表心跳的节律性。 • 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 • 曲1. 心肌的收缩活动是由钙离子触发的，由于心肌细胞 的肌浆网不发达，故心肌收缩的强弱与细胞外钙离 子的浓度成正比。任氏液中含有0.65%的NaCl，也 含有Ca离子，但全部换成0.65%NaCl，没有Ca离 子，造成灌流液中缺少钙离子，以致心肌细胞动作 电位2期内流的钙离子减少，胞浆内Ca离子浓度减 少，所以心肌的收缩活动减弱。如果长时间用0.65 ％的NaCl溶液灌注蛙心，心脏最终会停止收缩，但 心肌仍能产生动作电位，这种现象称为兴奋－收缩 脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca离子的表现。
目的
学习离体蛙心的灌流方法
观察钠、钾、钙三种离子、肾上腺素、乙 酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
操作步骤：
• 破坏脑和脊髓 • 开胸，暴露心脏 • 穿两根线，一线在两根主动脉下方，另外一
根线穿在左主动脉下方，接扎左主动脉
• 左主动脉根部剪口，插管：先入主动脉圆锥， 插管稍稍后退，旋转90度，在心室收缩期 将插管插入心室，此时瓣膜打开，容易进入。 如插好，插管内的任氏液面会随心室的舒缩 而上下波动。还会喷到插管内血液
•进行各观察项目时，作用明显后应立即 用新鲜任氏液换洗，以免心肌受损，心跳 难以恢复。待心跳恢复正常频率和幅度后， 方能进行下一步实验。 • 滴加药品时，要及时标记，以方便观察 分析
➢蛙心插管
➢蛙心插管
➢蛙心插管
➢蛙心插管
➢结扎静脉窦
➢ 连接装置
观察项目
• 1) 描记正常曲线，观察收缩与舒张相 • 2) 蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65％的NaCl，
• 任氏液简单换洗（防止血凝，产生小的血 块堵塞插管）
• 结扎，绕侧勾，剪断两根主动脉
• 在静脉窦下方穿第3根线，结扎，剪断静脉。 换洗数次，直至蛙心变黄。蛙心插管内的 任氏液面保持在合适的高度。
• 连接装置。蛙心夹在舒张期夹住心尖，线 绕过滑轮连接换能器（可防止损坏换能器， 还可防止蛙心不被拉穿，拉破）
蛙心灌流
实验原理
作为两栖类动物蟾蜍或蛙心起搏点的静脉 窦能自动产生节律性兴奋。将失去神经支 配的离体蛙心保持在适宜的理化环境中 （用任氏液灌流），在一定时间内仍能保 持节律性兴奋，产生节律性收缩。蛙心没 有营养性血管，心肌的营养是通过心脏内 膜液体直接渗透而获得的。
心脏正常的节律性活动依赖于内环境理化 因素的相对稳定。改变灌流液的成份，可 以引起心脏活动的改变。
5. 乙酰胆碱使得蛙心收缩减弱，收缩曲线基线下
移，心率减慢。
乙酰胆碱
ATP 心肌细胞膜上M型受
体结合
[cAMP]
激活细胞膜上的一种 K+通道，促进胞内K+
心肌膜上Ca通道开放概率 降低
外流，最大复极电位
慢反应细胞0
更负。窦房结自律性 肌浆中Ca2+浓度 期 动 作 电 位
频率降低，心率减慢。降低
的上升幅度 减少，上升
只结合而不解离的程度，于是，心肌将持续收缩， 出现钙僵。
3.高K+，心跳明显减弱，甚至出现心脏停止于舒张状 态的现象。 一：细胞外K＋浓度升高时，K+与Ca2+有竞争 性结抗作用， K+可以抑制细胞膜对Ca2+的转运， 使进入细胞内的Ca2+减少，心肌的兴奋－收缩耦联 过程减弱，心肌收缩力降低。 二：细胞外K+浓度升高时，膜内外的K+浓度 梯度减小，静息电位的绝对值减小，当轻微的高K+ 时，细胞的静息电位抬高，使得容易达到阈电位， 兴奋性提高。但当细胞外K+浓度显著升高时，静息 电位的绝对值过渡减小，Na+离子通道失活，心肌 的兴奋性完全丧失，心肌的兴奋性完全丧失，心肌 不能兴奋和收缩，停止于舒张状态。
（低钙）
• 3) 全部更换为新鲜任氏液，反复换洗数次，待曲线 恢复正常，滴加2%CaCl 1-2滴
• 4) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴 加1%KCl 1-2滴，
• 5) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴 加1:10000肾上腺素(Adr)1-2滴
• 6) 任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴 加1:10000乙酰胆碱(Ach)1-2滴
2. 高Ca离子，蛙心收缩力增强，但舒张不完全，收 缩基线上移。在Ca离子浓度较高的情况下，心脏
会停止在收缩状态，称为钙僵。心肌的舒缩活动 与肌浆中的Ca离子浓度高低有关，当Ca离子浓度 升高至10-5mol/l时，作为钙受体的肌钙蛋白结合 了足够的Ca离子，这就引起肌钙蛋白分子构型的
改变，从而触发肌丝滑行，肌纤维收缩。当肌浆 中的Ca离子浓度降至10-7mol/l时，Ca离子与肌钙 蛋白解离，心肌随之舒张。当用高Ca离子任氏液 灌注蛙心，使得肌浆中的Ca离子浓度不断升高， Ca离子与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到
注意事项
• 插管切忌用力过大，和插管过深，插入肌 肉。
• 第3根结扎线尽量下压，以免伤及静脉窦。
• 游离蛙心时，勿伤及静脉窦，要连静脉窦一 起取下。
•在心脏收缩期插入插管 •在心脏舒张期夹蛙心夹 •蛙心插管中的液面应保持恒定，以免影响实 验结果。
•吸新鲜任氏液的滴管要与吸插管内液体的滴 管要分开，以免影响实验现象的观察和结果分 析
并且抑制4期的内向电 心肌收缩减弱 速 率 减 慢 ，
流也导致心率减慢。
房室传导速
率减慢
思考与探讨
1. 正常的蛙心搏动曲线各部分代表的生理意义 2. 用0.65％ NaCl替换任氏液后曲线发生的变化及生理机
制 3. 在任氏液中滴加2％ CaCl2后曲线发生的变化及生理机制 4. 在任氏液中滴加1% KCl后曲线发生的变化及生理机制 5. 在任氏液中滴加1:10000 肾上腺素后曲线发生的变化及