高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇

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高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法 液相色谱常见问题解决方法

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法 液相色谱常见问题解决方法

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法液相色谱常见问题解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪紧要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统构成。

对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的紧要部位。

2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器,假如在使用过程中不依照正确操作的话,就简单导致一些问题。

其中常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

1.柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI(3.3 Bar)之间(在使用梯度洗脱时,柱压平稳缓慢的变化是允许的)。

压力过高、过低都属于柱压问题。

压力过高:这是高效液相在使用中常见的问题,指的是压力蓦地上升,一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时,我们应当分段进行检查。

(1).首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充分液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,假如液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法:用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。

假如液体自由滴下,溶剂过滤头正常,在检查;(2).打开Purge阀,使流动相不经过柱子,假如压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。

处理方法:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。

假如压力降至100PSI (6.7 Bar)以下,过滤白头正常,在检查;(3).把色谱柱出口端取下,假如压力不下降,则是柱子堵塞。

处理方法:假如是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。

假如是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。

这时,假如柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很简单造成柱效下降,所以尽量少用。

高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法

高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法

5。流通池内有赃物或者杂质,清洗杂物
6。柱后产生气泡,流通池出液口加负压调节器
7。检测器没有设定在最大吸收波长处
8。柱平衡慢,特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的心流动相对柱子进行冲洗
1.检测信号出现倒峰,检查检测器与主机相连接是否有松动,可以把下重新连接。
由气味、景象和声音可以发现的问题
你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。
A、溶剂的气味
原 因 解决方法
4、进样口漏液:可能是标准针头变形或损坏,使得进样器磨损,不好的针头应及时扔掉。
2.基线不稳,有静电,处理方法:检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大,处理方法:检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高,变粗,处理方法:检查样品池能量,若低于正常值,说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大,处理方法:多为进气泡。高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差,处理方法:更换预柱。
254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
(一)涡流扩散(Eddy diffusion)
流动相碰到较大的固体颗粒,就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀,有的部分松散或有细沟,则流动相的速度就快;有的部位结块或装直紧密则流就慢,多条流路有快有慢,就使区带变宽。因此,固相载体的颗粒要小而均匀,装柱要松紧均一,这样涡流扩散小,柱效率高。

高效液相色谱常见问题分析与对策

高效液相色谱常见问题分析与对策

高效液相色谱常见问题分析与对策液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾原因解决方法1、筛板阻塞a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷填充色谱柱3、干扰峰a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误调整PH值。

对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱B、峰前延原因解决方法1、柱温低升高柱温2、样品溶剂选择不恰当使用流动相作为样品溶剂3、样品过载降低样品含量4、色谱柱损坏见A1、A2C、峰分叉原因解决方法1、保护柱或分析柱污染取下保护柱再进行分析。

如果必要更换保护柱。

如果分析柱阻塞,拆下来清洗。

如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。

如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂。

如果可能采取流动相作为样品溶剂。

D、峰变形原因解决方法1、样品过载减少样品载量E、早出的峰变形原因解决方法1、样品溶剂选择不恰当a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1、柱外效应a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)b、使用小体积的流通池G、K’增加时,脱尾更严重原因解决方法1、二级保留效应,反相模式a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子2、二级保留效应,正相模式a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入水(或多官能团化合物)d、试用另一种方法3、二级保留效应,离子对加入三乙胺(或碱性样品)H、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法1、缓冲不合适a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰原因解决方法1、样品中有其他组份正常2、前一次进样的洗脱峰a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动原因解决方法1、温控不当调好柱温2、流动相组分变化防止变化(蒸发、反应等)3、色谱柱没有平衡在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化原因解决方法1、流速变化重新设定流速2、泵中有气泡从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移原因解决方法1、柱温波动。

高效液相色谱仪常见故障及解决方法

高效液相色谱仪常见故障及解决方法

高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象:泵无法正常启动或启动后无法正常停止。

解决方法:检查泵头是否有污物堵塞,清除污物;检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好,如有松动,重新插紧。

2. 故障现象:泵的流量不稳定或无法调节。

解决方法:检查泵头是否有污物堵塞,清除污物;检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好,如有松动,重新插紧;检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏,如损坏,更换密封圈。

二、流动相跑空1. 故障现象:流动相液位下降至最低液位以下,导致无法正常进样。

解决方法:检查流动相的储液瓶是否已空,如已空,重新更换储液瓶;检查流动相的流速设置是否正确,如不正确,重新设置流速;检查管路是否有泄漏点,如存在泄漏点,修复泄漏点。

2. 故障现象:流动相液位迅速下降,导致无法正常进样。

解决方法:检查废液瓶是否已满,如已满,倾倒废液;检查管路是否有堵塞或弯折,如有,更换管路或调整管路布局。

三、峰面积重复性差1. 故障现象:同一色谱条件下,每次运行同一色谱图时,峰面积重复性差。

解决方法:检查进样阀的切换次数是否过多,如过多,减少切换次数;检查进样针的清洗是否彻底,如不彻底,加强清洗;检查样品前处理的稳定性是否可靠,如不可靠,重新进行样品前处理。

2. 故障现象:不同色谱条件下,每次运行同一色谱图时,峰面积重复性差。

解决方法:检查流动相的组成是否恒定,如不恒定,重新配制流动相;检查色谱柱的稳定性是否可靠,如不可靠,更换色谱柱;检查检测器的波长是否准确,如不准确,重新调整波长。

四、峰丢失1. 故障现象:在色谱图中看不到预期的峰。

解决方法:检查进样针是否堵塞或断裂,如堵塞或断裂,更换进样针;检查进样阀的切换次数是否过多,如过多,减少切换次数;检查样品前处理是否可靠,如不可靠,重新进行样品前处理。

2. 故障现象:在流动相中添加了某种物质后,出现了预期之外的峰。

解决方法:检查流动相中添加的物质是否稳定,如不稳定,重新配制流动相;检查检测器的灵敏度是否足够高,如不够高,调整灵敏度;检查色谱柱的类型是否正确,如不正确,更换色谱柱。

高效液相色谱常见故障及解决方案

高效液相色谱常见故障及解决方案

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常,清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中,操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障,并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

高效液相色谱仪故障排除指南

高效液相色谱仪故障排除指南

高效液相色谱仪故障排除指南高效液相色谱仪(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)作为一种常用的分析仪器,可以广泛应用于药物分析、环境检测、食品科学等领域。

然而,在使用过程中,不可避免地会出现一些故障情况。

本文将介绍一些常见的HPLC故障,并提供相应的排除方法。

一、进样器故障1. 进样器漏液若观察到进样口出现漏液现象,首先可以检查密封件是否完好,如若密封件损坏应及时更换。

若密封件完好,还可以检查进样器盖上是否存在污垢,若有,则可清洗并重新安装。

2. 进样器堵塞如果在进样过程中发现进样器堵塞,可以先使用无机溶液进行冲洗,以清除可能存在的样品残留物。

如果仍然无法解决堵塞问题,可以采取拆卸进样器进行彻底清洗的方法。

二、柱温箱故障1. 温度控制不稳定若柱温箱的温度控制不稳定,可能会导致分离信号的漂移,影响分析结果的准确性。

这时,可以首先检查温度控制仪是否设置正确,如有必要,可以重新设置。

另外,也可以检查柱温箱是否存在漏气现象,若存在,应及时修复。

2. 柱温箱泄漏柱温箱泄漏可能会导致温度失控,因而影响分析结果。

检测到泄漏时,应首先检查柱温箱的密封性能,如有必要,可以更换密封圈,确保密封良好。

三、流动相泵故障1. 流量不稳定如果在使用流动相泵时,发现流量不稳定,可能是由于空气进入了系统,导致气泡形成。

这时,可以检查胶管连接是否松动,以及胶管中是否有积气现象。

如果检查后仍然无法解决问题,可以考虑更换胶管或检修流动相泵。

2. 压力异常如果HPLC系统在运行过程中压力异常,可能是由于流动相泵的压力传感器出现问题。

此时,应检查压力传感器是否损坏,如有必要,可以进行维修或更换。

四、检测器故障1. 检测器信号异常如果在分析过程中,检测器的信号异常,可能是由于光源出现故障导致。

这时,可以检查光源是否正常工作,如有必要,可以更换光源。

另外,也可以尝试调整检测器的增益或灵敏度,以改善信号异常问题。

高效液相色谱使用常见问题解决方法

高效液相色谱使用常见问题解决方法

高效液相色谱使用常见问题症状:(一)保留时间变化可能的原因 : 解决方法1.柱温变化: 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染 : 每天冲洗柱5.柱内条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命 : 采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因 : 解决方法1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速2.样品超载 : 降低样品量3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加 : 柱恒温(三)保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失 : 同前(二)34.流动相组成变化 : 同前(二)45.温度降低 : 同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏 : 更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物 : 处理样品3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大 : 同(四)12.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载 : 进小浓度小体积样品液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足,解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。

高效液相色谱使用常见问题解决方法

高效液相色谱使用常见问题解决方法

高效液相色谱使用常见问题症状:(一)保留时间变化可能的原因: 解决方法1.柱温变化 : 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡: 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够: 用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染: 每天冲洗柱5.柱条件变化: 稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命: 采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因: 解决方法1.流速增加: 检查泵,重新设定流速2.样品超载: 降低样品量3.键合相流失: 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化: 防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加: 柱恒温(三)保留时间延长可能的原因 : 解决方法1.流速下降: 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵气泡2.硅胶柱上活性点变化: 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失: 同前(二)34.流动相组成变化: 同前(二)45.温度降低: 同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因 : 解决方法1.样品体积过大: 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强: 采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道: 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱烧结不锈钢失效: 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏: 更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因 : 解决方法1.进样阀残余峰: 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物: 处理样品3.柱未平衡: 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因 : 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声: 更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡: 流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因 : 解决方法1.柱超载: 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰: 清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大: 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细径的连接管7.柱效下降: 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因 : 解决方法1.进样体积过大: 同(四)12.在进样阀中造成峰扩展: 进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢: 设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大: 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高: 增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大: 用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长: 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大: 将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载: 进小浓度小体积样品液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足,解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。

高效液相色谱常见故障及解决方案

高效液相色谱常见故障及解决方案

清洗柱或更换柱 清洗六通阀 清晰检测器
管路污染
冲洗
流动相中含有稳定剂 或稳定剂变化
使用无防腐溶剂
8.保留时间变 化
现象
保留时 间不重 复
判断
系统不问或未达 到平衡
室温波动大
柱被污染 溶剂配比不合适 进样体积太大或 样品浓度太高
故障排除
分析之前应有足够的时间 使系统平衡 使用柱温箱、将系统置于 恒温、空气对流小的环境 冲洗柱或更换柱 调节溶剂配比
检测器内有气泡
用甲醇或其他强极性的溶剂 冲洗流通池
用强极性的溶剂清洗系统
清洗检测器,在检测器后面 安装背景压力调节器
检测器灯能量不足
更换灯
12.规则基线 噪音
现象
规则基 线噪音
判断
故障排除
流动相、检测 器或泵内有气 泡
流动相脱气,冲洗系统除去检 测器或泵内的空气
室温不稳
稳定环境温度。使用柱温箱、 将系统置于恒温、空气对流小 的环境

洗脱物

注射器脏
故障排除
用标准品对照、检查样品处理过程, 换新样品
增加分析时间或梯度洗脱、提高流 速、如问题仍存在,两次进样间用 强溶剂冲洗色谱柱
清洗注射器、冲洗进样口
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
色谱图 出现鬼 峰
柱被污染 六通阀污染 检测器污染
峰变 宽
环境温度变化 漏夜
使用柱温箱 检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完 全分离的物质的峰
选择其它色谱条件以改善分 离效果
检测器时间常数太大
使用较小的时间常数
4.峰分叉

高效液相色谱使用中常见问题及对策

高效液相色谱使用中常见问题及对策

高效液相色谱使用中常见问题及对策
高效液相色谱(High-Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种常用的分离和分
析技术。

在使用HPLC的过程中,可能会遇到一些常见问题,以下是一些可能的问题及对策:
1. 峰形不对称或分离不良:可能是由于柱问题引起的。

可以尝试更换柱,确保柱的性能良好,
并尽量避免超出柱的最大推荐压力。

2. 峰形峭度低:这可能意味着分离不充分。

可以尝试调整流动相的组成、pH值或流速来改善
分离。

3. 噪音较大:可能是由于进样器或检测器的问题引起的。

可以检查进样器和检测器的状态,并
确保它们正常运行。

4. 色谱柱寿命较短:这可能是由于样品中的杂质或试剂导致的。

可以尝试优化样品的准备方法,如前处理或过滤样品,以减少对柱的损害。

5. 流动相配制错误:这可能导致峰错位或分离不良。

可以仔细检查流动相的配制方法和溶剂的
纯度,确保配制正确。

6. 峰定量不准确:可能是由于进样量不准确或方法参数设置不合适引起的。

可以检查进样量的
准确性,并根据实际情况调整仪器参数。

7. 泵压过高:可能是由于管路堵塞或柱封堵引起的。

可以检查管路是否通畅,并根据需要更换
柱或清洗柱。

8. 柱渗漏:可能是由于柱端部密封不良或柱老化引起的。

可以检查柱端部的密封情况,并确保
柱处于良好状态。

针对以上问题,及时检查、调整和维护HPLC设备,并根据具体情况进行修复或更换,可以提
高HPLC分析的效果和结果的准确性。

高效液相色谱常见问题原因及处理方法

高效液相色谱常见问题原因及处理方法

高效液相色谱法一.仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动,长时间不平稳可能原因是什么?快速解决方法:一般为仪器系统出现气泡,最好使用纯甲醇长时间冲洗系统(不少于3小时,特殊情况要12小时左右)柱压逐渐升高可能原因是什么?快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞:一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸,取出里面的筛网用水或甲醇超解(不建议采用,除非没有其他方法)另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接,先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右,然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗,根据其柱压随时调整流速。

②针座堵塞与进样针出现堵塞:情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了,若堵塞严重只有更换新的(堵塞不代表不能用,若无明显的质量损坏如:变形,滑口,开裂等,后续修好后还能做备件使用)③系统管路中有未冲洗干净的盐:用水或10%异丙醇对系统冲洗,冲洗后柱压正常,则可正常使用。

(注意不建议对系统反冲洗,会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。

)④滤芯脏了:更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么?快速判断原因:①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相,其比例阀区域有堵塞情况(流动相是按比例配置,若比例阀区域堵塞,进样第一针时,可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%,进样第二针时则会变成一个阀进入20%,另一个阀80%)快速解决方法:①流动相重新配置,并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。

1.气相检验化学残留:对照品重复性必须符合要求,但供试品重复性不做要求(上海海尼是对照品重复性必须符合要求,但配置两个供试品,各进一针不计算重复性。

目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性)液相进样针无法正常采集?解决方法:一般为仪器机械故障,若进样器显示信号一直为红色,可能是进样针损坏或机械臂故障。

高效液相色谱使用常见问题解决方法

高效液相色谱使用常见问题解决方法

高效液相色谱使用常见问题症状:(一)保留时间变化可能的原因 : 解决方法1.柱温变化: 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染 : 每天冲洗柱5.柱条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命 : 采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因 : 解决方法1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速2.样品超载 : 降低样品量3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加 : 柱恒温(三)保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵气泡2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失 : 同前(二)34.流动相组成变化 : 同前(二)45.温度降低 : 同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏 : 更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物 : 处理样品3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细径的连接管7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大 : 同(四)12.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载 : 进小浓度小体积样品液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足,解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。

高效液相色谱常见故障的断定及解决

高效液相色谱常见故障的断定及解决

高效液相色谱常见故障的断定及解决诊状可能的原因解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温,必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分叉1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品。

高效液相色谱法常见故障排除

高效液相色谱法常见故障排除

高效液相色谱法常见故障排除所长办公室文毅日前,本人参加了高效液相色谱维修、维护及常见故障排除的培训班,现将培训内容总结如下,希望对大家的实际工作有所帮助!一、检测器常见故障排除1、基线噪声·检测池窗口污染:用强溶剂冲洗检测池;卸下检测池,拆开清洗或更换池窗石英片。

·样品池中有气泡:突然加大流量赶出气泡;在检测池出口端加一反压(0.2-0.3MPa)连一个0.3mm×1~2m的不锈钢管,以增大池内压(增加压力不要过大,防止检测池石英片碎裂)。

·检测器或数据采集系统接地不良:拆去原来的接地线,重新连接。

·检测器光源故障:检查氘灯或钨灯设定状态;检查灯使用时间、灯能量、开启次数;更换氘灯或钨灯。

·液体泄露:拧紧或更换连接件。

·很小的气泡通过检测池:流动相要仔细脱气;加大检测池的背压;系统检漏;有微粒通过检测池,清洗检测池;检查色谱柱出口筛板。

2、基线漂移·检测池窗口污染:同基线噪声描述。

·色谱柱污染或固定相流失:更换色谱柱或使用保护柱。

·检测器温度变化:系统恒温。

·光源故障:更换氘灯或钨灯。

·原先的流动相没有完全除去。

·溶剂储液瓶污染:清洗溶剂瓶,用新流动相平衡系统。

·强吸附组分从色谱柱中洗脱:在下一次分离之前用强洗脱能力的溶剂冲洗色谱柱;使用溶剂梯度。

3、工作站上出现大的尖峰·检测池内有气泡通过:溶剂脱气并彻底冲洗系统;检查连接系统是否漏液。

·记录仪或检测器接地不良:消除噪声来源;确保良好接地。

·样品溶解不彻底。

4、负峰·检测器输出信号的极性相反。

·样品的吸收小于流动相,流动相不纯。

·样品溶剂干扰。

·示差折光检测器中样品的折射率较低。

·进样中带入气泡。

5、鬼峰或假峰·进样阀或注射器污染·样品溶剂与流动相不同·样品中有空气·流动相中杂质引起·在线过滤器或过滤沉子污染·溶剂储液瓶污染6、工作站不回零⑴记录仪或工作站信号阶梯式上升·检测器的输出范围设定不当:重新设定检测器的输出范围。

高效液相常见问题及解决

高效液相常见问题及解决

高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法●高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。

对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

●常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器,如果在使用过程中不按照正确操作的话,就容易导致一些问题。

其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在345kPa 以内或在50PSI(针对Waters高效液相色谱仪)之间(在使用梯度洗脱时,柱压平稳缓慢的变化是允许的)。

压力过高、过低都属于柱压问题。

1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题,指的是压力突然升高,1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时,我们应该分段进行检查。

(1).首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法:用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。

如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,在检查;(2).打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。

处理方法:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。

如果压力降至100PSI以下,过滤白头正常,在检查;(3).把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。

处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。

如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。

这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以尽量少用。

高效液相色谱法的常见问题及解决方法

高效液相色谱法的常见问题及解决方法

高效液相色谱法的常见问题及解决方法高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法,这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题,如何解决这些问题呢?1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?关于漂移问题:①温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定;②流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等;③柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡;关于快速变化问题①流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定;②泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出;③流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合;2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?①筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子;②存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子;③可能柱超载,减少进样量;3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足,解决办法为增加样品量;②样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子;③样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器;④检测器衰减太多。

调整衰减即可;⑤检测器时间常数太大,解决办法为降低时间参数;⑥检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗;⑦检测池中有气泡。

解决办法为排气;⑧记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可;⑨流动相流量不合适。

调整流速即可;⑩检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。

4.做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?①泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;②比例阀失效,更换比例阀即可;③泵密封垫损坏,更换密封垫即可;④溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;⑤系统检漏,找出漏点,密封即可;⑥梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇

高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇

高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、没有压力显示,没有流动相流动原因解决方法1、电源问题1、接通电源,开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足6、a、补充流动相b、更换入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀8、漏液8、拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常,但没有压力显示原因解决方法1、仪表损坏1、更换仪表2、压力传感器损坏2、更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a、在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板c、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低原因解决方法1、流速设定过低1、调整流速2、系统漏液2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低温度5、控制器失常5、维修或更换控制器E、压力不断上升原因解决方法1、见列表C 1、见列表CF、压力降为零原因解决方法1、见列表A、B 1、见列表A、BG、压力不断下降,但不回零原因解决方法1、见列表D 1、见列表DH、压力波动原因解决方法1、泵中有气体1、a、溶剂脱气b、从泵中除去气体2、单向阀损坏2、更换单向阀3、泵密封损坏3、更换泵密封4、脱气不充分4、a、溶剂脱气b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)5、系统漏液5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修

高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修

高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修液相色谱仪器是一种广泛应用于化学、生物和医药等领域的分离和分析仪器。

然而,由于长期使用或操作不当等原因,液相色谱仪器可能会出现故障。

本文将介绍一些常见的液相色谱仪器故障,并提供诊断和维修方法。

1. 压力异常当液相色谱仪器出现压力异常时,可能是由于柱堵塞或柱压力不足等原因引起的。

首先,可以检查柱是否堵塞,可以通过更换柱或者清洗柱来解决。

另外,也需要检查柱前的过滤器是否堵塞,如果是,则需要更换过滤器。

2. 泵故障液相色谱仪器的泵可能会出现泵头堵塞或密封件损坏等故障。

当出现这种情况时,需要检查泵头是否堵塞,并清洗或更换泵头。

另外,也需要检查泵的密封件是否完好,如果密封件损坏,则需要更换密封件。

3. 检测器信号异常检测器信号异常可能是由于检测器灯管老化或污染、检测器电路故障等原因引起的。

当出现这种情况时,可以先清洗检测器灯管或更换灯管;同时,也需要检查检测器电路是否正常,如果电路故障,则需要修复或更换电路。

总的来说,液相色谱仪器的故障诊断和维修需要具备一定的专业知识和技能。

在进行维修前,建议先查阅液相色谱仪器的使用说明书,了解其工作原理和结构,以便更好地诊断和解决故障。

同时,定期对液相色谱仪器进行维护和保养,可以有效地减少故障的发生,延长仪器的使用寿命。

液相色谱仪器(HPLC)是一种高效、精确的分析仪器,在化学、生物、药学等领域都有着广泛的应用。

然而,由于长期使用、操作不当或者设备老化等原因,液相色谱仪器也会出现各种故障。

在这种情况下,对仪器进行准确的故障诊断,并采取适当的维修措施,是保障仪器正常运行的关键之一。

4. 色谱柱问题液相色谱仪器中的色谱柱是重要的部件,若出现问题则会导致分离效果下降。

柱子可能会发生堵塞、损坏或老化,而影响分离效果。

如果怀疑柱子的问题导致了色谱仪器的故障,第一步就是检查柱子的状态。

可以通过更换柱子或者清洗柱子来解决这一问题。

此外,也要检查柱前的过滤器是否正常运行,如果过滤器故障,也会影响色谱仪器的运行。

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高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、没有压力显示,没有流动相流动原因解决方法1、电源问题1、接通电源,开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足6、a、补充流动相b、更换入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀8、漏液8、拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常,但没有压力显示原因解决方法1、仪表损坏1、更换仪表2、压力传感器损坏2、更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a、在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板c、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低原因解决方法1、流速设定过低1、调整流速2、系统漏液2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低温度5、控制器失常5、维修或更换控制器E、压力不断上升原因解决方法1、见列表C 1、见列表CF、压力降为零原因解决方法1、见列表A、B 1、见列表A、BG、压力不断下降,但不回零原因解决方法1、见列表D 1、见列表DH、压力波动原因解决方法1、泵中有气体1、a、溶剂脱气b、从泵中除去气体2、单向阀损坏2、更换单向阀3、泵密封损坏3、更换泵密封4、脱气不充分4、a、溶剂脱气b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)5、系统漏液5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。

如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。

A、接头处漏液原因解决方法1、接头松动1、拧紧2、接头磨损2、更换3、接头过紧3、a、拧松,再重新拧紧b、更换4、接头被污染4、a、拆下清洗b、更换5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、泵漏液原因解决方法1、单向阀松动1、a、拧紧单向阀(不必拧的过紧)b、更换单向阀2、接头松动2、拧紧接头(不必拧的过紧)3、混合器密封损坏3、a、更换混合器密封b、更换混合器4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻尼器损坏6、更换脉冲阻尼器7、比例阀损坏7、a、检查隔膜,如漏液立即更换b、检查手紧接头,损坏的立即更换8、放空阀的损坏8、a、拧紧放空阀b、更换放空阀C、进样阀漏液原因解决方法1、转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞2、更换定量环3、进样口密封松动3、调整4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸5、保持废液管高于废液液面6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管D、色谱柱漏液原因解决方法1、尾端接头松动1、拧紧接头2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板(参考下表)筛板选择指导物质粒径筛板孔径3-4u 0.5u5-20u 2uE、检测器漏液原因解决方法1、流通池垫片损坏1、a、避免过大的背景压力(压力降)b、更换垫片2、流通池窗破碎2、更换窗口3、手紧接头漏液3、拧紧或更换4、废液管阻塞4、更换废液管5、流通池阻塞5、重新安装或更换液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾原因解决方法1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误4、调整PH值。

对于碱性化合物,低PH值更有利得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应图5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱B、峰前延原因解决方法1、柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见A1、A2C、峰分叉原因解决方法1、保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱再进行分析。

如果必要更换保护柱。

如果分析柱阻塞,拆下来清洗。

如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。

如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。

如果可能采取流动相作为样品溶剂。

D、峰变形原因解决方法1、样品过载1、减少样品载量E、早出的峰变形原因解决方法1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1、柱外效应1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)b、使用小体积的流通池G、K’增加时,脱尾更严重原因解决方法1、二级保留效应,反相模式1、a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子2、二级保留效应,正相模式2、a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入水(或多官能团化合物)d、试用另一种方法3、二级保留效应,离子对3、加入三乙胺(或碱性样品)H、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰原因解决方法1、样品中有其他组份1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动原因解决方法1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化(蒸发、反应等)3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化原因解决方法1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移原因解决方法1、柱温波动。

(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

)1、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。

(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

)2、使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要,可以用1N的硝酸。

(不要用盐酸)4、检测器出口阻塞。

(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)4、取出阻塞物或更换管子。

参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。

为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。

使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。

8、使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂,但检测器未调整。

9、重新设定基线。

当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

10、将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音(规则的)原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。

冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液图2、见第三部分。

检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要,更换泵密封。

3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。

6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器N、基线噪音(不规则的)原因解决方法1、漏液图1、见第三部分。

检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要,更换密封。

检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。

5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。

)7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池8、检测器灯能量不足8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置O、宽峰原因解决方法1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)3、见section 3。

检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。

如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确4、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长图5、a、小体积进样(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小的流通池c、使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低6、增加浓度7、保护柱污染或失效7、更换保护柱8、色谱柱污染或失效,塔板数较低8、更换同样类型的色谱柱。

如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷9、打开柱入口,填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低11、提高柱温。

除非特殊情况,温度不宜超过75℃12、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数P、分离度降低原因解决方法1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)1、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞图2、去掉保护柱进行分析。

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