基因工程药物——乙肝疫苗
基因工程法生产乙肝疫苗知识讲解
基因的表达
这是指宿主细胞在大量繁殖过程中外源DNA在 宿主细胞中的转录和翻译，表达生成的产物(蛋白 质)，最好在细胞内不被分解，而分泌到细胞外面 。表达产物若为较小的多肽，或是对细菌蛋白酶 极为敏感的蛋白质，形成后，通常即被迅速降解 。为了保证外源基因表达产物能分泌到细胞外而 不被降解，通常可以把外源基因插入在载体的某 些结构基因中间，在这种情况下，表达产物是融 合蛋白质，融合蛋白质可以抵抗内源蛋白酶的降 解，又可以在细胞信号肽的引导下分泌到细胞外 。最后，利用发酵工程培养重组与乙肝疫苗的工 程菌
综述
综上所述，用基因工程法生产乙肝疫苗要先 经过乙肝疫苗目的基因的获取、DNA的重组基因的 克隆、目的基因克隆的筛选、目的基因克隆的鉴 分离纯化、产品多项性质的初 步检测、成品化处理（如添加佐剂、抗生素、除 菌）、成品检测鉴定、包装几个步骤。对产品多 项性质的检测对于保证疫苗的安全性尤其重要。
目的基因克隆的筛选
即从大量携带有乙肝疫苗的重组体DNA分子的细胞中 分离出带目的基因的细胞。因为不是所有的细胞都能获得 重组体DNA分子，为了获得摄取了重组体DNA分子细胞，需 经筛选，才能将其与未摄取重组体DNA分子的细胞区别开 来，并作进一步鉴定。筛选含有重组体DNA分子细胞的方 法，一般都是以载体DNA及目的基因的遗传标记及分子特 征为依据，并结合受体细胞的基因表型而建立起来的。由 于许多质粒都具有抗生素等药物的抗性标记，因此，在含 有一定浓度抗生素的选择培养基上，可以很容易地把摄取 了重组体DNA分子，因同时也获得了抗生素抗性的细胞辨 认出来。但药物筛选只是一个方面，依据它只能判断质粒 载体是否进入了受体细胞，还不能确定受体细胞是否摄取 了含有目的基因的重组体DNA分子。
主讲内容
乙肝疫苗研制的发展 目的基因的获取 DNA的重组 基因的克隆 目的基因克隆的筛选 目的基因克隆的鉴定 基因的表达 综述
乙型肝炎疫苗——从预防到治疗
乙型肝炎疫苗——从预防到治疗刘义思，任姗，郑素军，陈新月首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心一科，北京 100069通信作者：陈新月，******************.cn（ORCID：0000-0001-9569-4540）摘要：乙型肝炎疫苗的接种是预防HBV感染最经济、有效的方法。
分子生物学和基因工程的进步使得疫苗的制造工艺不断完善，乙型肝炎疫苗也从最开始的血源性疫苗逐渐发展至当下所应用的重组疫苗。
预防性乙型肝炎疫苗在临床中已试用于HBsAg清除人群以提高抗-HBs水平，且具有安全性及有效性。
并且作为治疗CHB新药的多种靶点之一，基于HBsAg 的治疗性乙型肝炎疫苗已经在研发和临床试验中。
关键词：乙型肝炎，慢性；乙型肝炎疫苗；临床试验基金项目：国家重点研发计划（2023YFC2308100）；首都临床诊疗技术研究及转化应用（Z211100002921059）；北京市医院管理中心“青苗”人才计划（QML20211702）；北京市卫生健康委员会高层次公共卫生技术人才建设项目（学科带头人-02-14）Hepatitis B vaccine： From prevention to treatmentLIU Yisi， REN Shan， ZHENG Sujun， CHEN Xinyue.（First Department of Liver Disease Center， Beijing YouAn Hospital， Capital Medical University， Beijing 100069， China）Corresponding author： CHEN Xinyue，******************.cn（ORCID： 0000-0001-9569-4540）Abstract：Hepatitis B vaccination is the most economical and effective way to prevent HBV infection. The advances in molecular biology and genetic engineering have continuously improved the manufacturing process of vaccines，and hepatitis B vaccine has gradually developed from the initial plasma-derived vaccine to the currently used recombinant vaccine. Preventive hepatitis B vaccine has been clinically tested in patients with HBsAg seroclearance to increase the level of anti-HBs， with certain safety and efficacy. As one of the multiple targets for new drugs in the treatment of chronic hepatitis B， a therapeutic hepatitis B vaccine based on HBsAg is already in the stages of research and development and clinical trial.Key words：Hepatitis B， Chronic； Hepatitis B Vaccines； Clinical TrialResearch funding：National Key Research and Development Program of China （2023YFC2308100）；Capital Clinical Diagnostic Techniques and Translational Application Projects （Z211100002921059）； Beijing Hospitals Authority Youth Programme （QML20211702）；High-level Public Health Technical Talents Construction Project of Beijing Municipal Health Commission （Academic Leader -02-14）接种乙型肝炎疫苗（以下简称乙肝疫苗）预防HBV 感染是目前控制其传播并大大减轻全球感染负担最经济、有效的方法［1-2］。
GSK - 乙肝疫苗(安在时成人)
名称：乙肝疫苗（安在时成人）介绍：［药品名称］通用名：重组（酵母）乙型肝炎疫苗商品名：安在时（EngerixB）英文名：Hepatitis B Vaccine Made by Recombined DNA Techniques in Yeast汉语拼音：Chongzu （Jiaomu）Yixing Ganyan Yimiao［成分和性状］主要成分1剂量（1.0ml）含有吸附的20微克重组乙肝病毒表面抗原（S蛋白）。
辅料: 氢氧化铝、聚山梨醇脂20、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、注射用水。
性状:重组（酵母）乙型肝炎疫苗装于玻璃小瓶或预充注射器内,为注射用悬液。
小瓶和预充注射器由I型中性玻璃制成,符合欧洲药曲规定。
贮存状态下的内容特呈现细微白色沉淀和无色透明上清液。
振摇后疫苗稍呈混浊。
［接种对象］重组（酵母）乙型肝炎疫苗适用于乙型肝炎病毒的易感者，进行主动免疫，预防乙肝病毒感染引起的乙型肝炎。
［作用与用途］用重组（酵母）乙型肝炎疫苗进行预防乙型肝炎的主动免疫, 预防乙肝病毒感染引起的乙型肝炎。
［规格］20微克/1.0毫升/支［免疫程序和剂量］剂量学剂量20μｇ剂量疫苗（1.0ml 悬液）：用于成人和15岁以上儿童接种。
初免程序为达到最佳免疫效果，需连续进行三次肌肉注射。
推荐有两种初免程序：加速程序，即0、1、2月免疫程序。
该程序可快速诱导保护性抗体的产生。
在12个月时应进行第4剂量加强免疫。
第2针与第3针间隔较长的程序，即0、1、6月免疫程序。
该程序提供保护所需的时间较长，但可诱导较高滴度的抗-HBs抗体。
在某些特殊情况下成人需要更快的产生保护性抗体，例如到高流行区旅行者，在出发前一个月内开始接种本品，可以使用0、7、21天3剂肌肉注射程序。
当应用这一程序时，推荐在首剂接种后12个月进行第4剂量加强免疫。
（见血清阳转率的药效学特征）。
加强剂量虽然接受全部初免程序的健康个体是否需要加强剂量尚未明确，但是应该注意到当前一些官方免疫程序推荐接种加强剂量。
乙肝疫苗的研究进展
乙肝疫苗的研究进展引言乙肝病毒是一种全球性的公共卫生问题，影响着全世界范围内的大量人口。
乙肝病毒感染会导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌等疾病，对个人健康和社会经济都产生了巨大的影响。
乙肝疫苗的研制和应用对于预防乙肝病毒感染具有重要意义，本文将围绕乙肝疫苗的研究进展进行综述。
研究现状自乙肝疫苗研制成功以来，疫苗的制备方法、接种时间、接种次数等方面都得到了不断的改进和优化。
目前，乙肝疫苗主要分为血源性疫苗和基因工程疫苗两大类。
血源性疫苗是通过收集乙型肝炎患者血清中的表面抗原（HBsAg）制备而成的，而基因工程疫苗则是通过基因工程技术将表面抗原的基因克隆到酵母或中国仓鼠卵巢细胞中表达制备而成的。
在接种时间方面，一般认为乙肝疫苗的接种应在婴儿出生后尽快进行，最好是在出生后24小时内。
同时，根据研究发现，对于乙肝表面抗原阳性母亲的新生儿，在出生后24小时内接种乙肝疫苗可以更好地保护婴儿免受乙肝病毒的感染。
在接种次数方面，根据现有资料，婴儿接种3针乙肝疫苗后，大多数接种者可以产生有效的保护性抗体，但也有部分接种者抗体水平较低，因此，对于易感人群，尤其是乙肝表面抗原阳性母亲的新生儿，建议在一定的时间间隔后进行补种。
研究方法乙肝疫苗的研究方法主要包括实验设计、数据收集和统计分析等。
在实验设计方面，研究者通常采用随机对照试验的方法，将受试者随机分为实验组和对照组，分别给予不同剂量的乙肝疫苗和安慰剂，并观察其效果和不良反应。
在数据收集方面，通过收集受试者的基本情况、血清学检测和病毒学检测等相关数据，了解疫苗的效果和安全性。
在统计分析方面，利用统计学原理对数据进行处理和分析，计算疫苗的保护率、抗体阳性率、抗体滴度等指标，以评估疫苗的有效性和安全性。
研究结论通过大量的研究和实验，乙肝疫苗在预防乙肝病毒感染方面显示出显著的效果。
根据现有资料，乙肝疫苗可以有效地预防婴儿和儿童感染乙肝病毒，并能够有效地降低肝硬化和肝细胞癌等疾病的发生率。
乙肝疫苗生产发展简介PPT
基因工程技术
01
利用基因工程技术，提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂，增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术，实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目，共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让， 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株，研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合，减少接种次数，提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序，提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法，通过接种疫苗可以降低 感染风险，控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生，避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群，特别是儿童和青少年，提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状
乙肝疫苗基础知识
乙肝疫苗基础知识乙肝疫苗接种预防已被列入我国计划免疫项目，但是其接种普及率并不高，许多人对于接种乙肝疫苗的接种方法和注意事项并不清楚，非常有必要在这里简要介绍一下。
一、选用怎样的乙肝疫苗?目前使用的多为基因工程乙肝疫苗，昔日使用的血源性疫苗已基本淘汰(原因是有引起血源性疾病的嫌疑和浪费大量的血浆)。
基因工程乙肝疫苗是利用现代基因工程技术，构建含有乙肝表面抗原基因的重组质粒，它可以用于预防所有已知亚型的乙肝病毒感染。
现在用的基因工程乙肝疫苗为乙肝重组脱氧核糖核酸酵母疫苗和重组牛痘病毒疫苗，剂量为每支5微克。
二、为何要打乙肝疫苗?乙肝疫苗可以成功预防乙肝病毒的感染，新生儿一出生就接种乙肝疫苗，基本可以确保将来不得乙肝。
现有的肝硬化、肝癌多从乙肝发展而来，成功地预防乙肝，实际就是防硬化、防肝癌第一针。
目前乙肝疫苗较便宜，每支几元钱，民众都能接受。
三、乙肝疫苗的正确使用方法是什么?(1)如果新生儿的父母均没有乙肝，该新生儿在出生后应尽快(8小时内)给予基因工程乙肝疫苗1支肌肉注射，注射部位为上臂三角肌(儿童、成人都一样)，1个月后，再打1支，6个月后再打1支，一共3针，此方案称为0、1、6方案；儿童和成人打疫苗前需先进行化验，如果乙肝三系统检查均为阴性，转氨酶正常，可以按0、1、6方案进行乙肝疫苗接种。
免疫成功率为90%以上，免疫成功的标志是乙肝表面抗体转为阳性，保护时间一般为2年以上，接种者可定期复查乙肝三系统，只要表面抗体依然存在，证明免疫能力依旧。
(2)对于母亲一方为单纯表面抗原阳性的新生儿，单用乙肝疫苗就可取得比较满意的效果，乙肝疫苗的使用方法依然是0、1、6方案，有报导认为第一针可打2支(10微克/l毫升)效果更好。
(3)对于母亲一方为乙肝病毒表面抗原和e抗原双阳性的新生儿最好是联合应用高效价的乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗。
具体方法是新生儿采用注射2次高效价乙肝免疫球蛋白(出生后立即及出生后1个月各注射1支，每支XXXX 年仍保持在这一水平；第3年降到74%左右，抗体滴度也下降。
基因工程药物的研究现状——乙肝疫苗
三、什么是重组乙型肝炎疫苗 （CHO细胞）
• 采用基因工程技术将无传染性的乙 肝病毒表面抗原（HBsAg）的S基因 片段克隆到载体，用重组载体转染 真核生物CHO细胞通过细胞培养、 增殖、分泌出HBsAg到培养液中， 收集分泌液，经高速离心、纯化、 除菌后，加入佐剂吸附（氢氧化铝） 而制成。
四、重组CHO细胞乙型肝炎疫苗 的生产工艺
五、重组CHO细胞乙肝疫苗的优缺点
优点：CHO细胞表达的重组HepB是高等
真核细胞表达产物，其天然结构较低等 的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适 合人体吸收，生产工程中不同于酵母使 用硫氰酸盐处理，安全性好。 »缺点：产生一些副作用，例如 红肿、疼 痛、发痒、手臂酸重等症状，或者是产 生低热、乏力、恶心、食欲不振等与一 般疫苗相似的轻微反应。
六、现有疫苗的发展史及存在的问题
现有疫苗存在的问题
什么是成纤维细胞？
• 定义： 普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞。 分泌前胶原、纤连蛋白和胶原酶等细胞外基质成分，伤口 愈合过程中可迁移到伤口进行增殖。 • 成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分， 细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。根据不同的功能活动 状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细 胞乃是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清 楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合 成和分泌活动；纤维细胞功能活动不活跃，细胞轮廓不明 显，核小着色深，核仁不明显，细胞质少。此二型细胞可 互相转化。 • 作用原理: 成纤维细胞摄取所需的氨基酸，如脯氨酸 和赖氨酸等，在粗面内质网的核蛋白体上合成前α 多肽链 （proalpha polypeptide chain ），多肽链输送到高尔基 复合体后，组成前胶原分子。前胶原分子由分泌囊泡带到 细胞表面，然后通过胞吐作用释放到细胞外。在前胶原肽 酶催化下，将每一前α 多肽链的尾段除去，成为原胶原分 子。许多原胶原分子成行平行排列，结合成具有周期性横 纹的胶原原纤维。由胶原原纤维互相结合形成胶原纤维。
重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞) 华北金坦
重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)【药品名称】通用名称：重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)英文名称：Diagnostic Kit for Hepatitis B e Antigen(ELISA)【成份】本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，经纯化加佐剂吸附后制成，用于预防乙型肝炎。
疫苗有轻微乳白色沉淀。
【适应证】本疫苗接种后，可刺激机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力，用于预防乙型肝炎。
【用法用量】1.一般新生儿、儿童、成年人接种乙肝疫苗10微克/支，按0、1.6月免疫，三角肌肌内注射。
2.高危人群，尤其是HBsAg阳性母亲的新生儿接种乙肝疫苗20微克/支，按0、1.6月免疫，三角肌肌内注射。
3.HBsAg和HBeAg阳性母亲的新生儿联合使用HBIG与乙肝疫苗20微克/支。
即在出生后6小时内，肌内注射1支HBIG(100IU/毫升)，2-4周后开始注射第一针乙肝疫苗，第二、三针间隔与一般新生儿相同。
【不良反应】乙肝疫苗应用已近20年，尚未见到有严重的不良反应，极个别人接种后可能会出现中、低度发热，或注射局部有轻微胀痛等，一般在24小时内即自行消失。
【禁忌】对发热、患有严重急、慢性疾病和有严重过敏史者暂时都不要接种乙肝疫苗。
【注意事项】1.接种乙肝疫苗前安瓿一定要充分摇匀，如发现安瓿有破裂、疫苗变质或有摇不散的团块时，不能使用。
2.每一接种对象必须使用单独的注射器，防止交叉感染。
【药理作用】CHO(中国仓鼠卵巢细胞)细菌产的乙肝基因工程疫苗是将编码乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的基因插入适当载体，重组到CHO细胞内，表达出HBsAg经纯化和添加佐剂制备出的疫苗。
CHO细胞属哺乳动物细胞类，它是基因工程表达系统中最高等的宿生细胞，其表达产物更接近于天然产品。
【贮藏】于2~8℃避光保存，严防冻结。
【批准文号】国药准字S2*******【生产企业】企业名称：华北制药金坦生物技术股份有限公司。
GSK-乙肝疫苗(安在时成人)
名称：乙肝疫苗（安在时成人）介绍：［药品名称］通用名：重组（酵母）乙型肝炎疫苗商品名：安在时（EngerixB）英文名：Hepatitis B Vaccine Made by Recombined DNA Techniques in Yeast汉语拼音：Chongzu （Jiaomu）Yixing Ganyan Yimiao［成分和性状］主要成分1剂量（1.0ml）含有吸附的20微克重组乙肝病毒表面抗原（S蛋白）。
辅料: 氢氧化铝、聚山梨醇脂20、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、注射用水。
性状:重组（酵母）乙型肝炎疫苗装于玻璃小瓶或预充注射器,为注射用悬液。
小瓶和预充注射器由I型中性玻璃制成,符合欧洲药曲规定。
贮存状态下的容特呈现细微白色沉淀和无色透明上清液。
振摇后疫苗稍呈混浊。
［接种对象］重组（酵母）乙型肝炎疫苗适用于乙型肝炎病毒的易感者，进行主动免疫，预防乙肝病毒感染引起的乙型肝炎。
［作用与用途］用重组（酵母）乙型肝炎疫苗进行预防乙型肝炎的主动免疫, 预防乙肝病毒感染引起的乙型肝炎。
［规格］20微克/1.0毫升/支［免疫程序和剂量］剂量学剂量20μｇ剂量疫苗（1.0ml 悬液）：用于成人和15岁以上儿童接种。
初免程序为达到最佳免疫效果，需连续进行三次肌肉注射。
推荐有两种初免程序：加速程序，即0、1、2月免疫程序。
该程序可快速诱导保护性抗体的产生。
在12个月时应进行第4剂量加强免疫。
第2针与第3针间隔较长的程序，即0、1、6月免疫程序。
该程序提供保护所需的时间较长，但可诱导较高滴度的抗-HBs抗体。
在某些特殊情况下成人需要更快的产生保护性抗体，例如到高流行区旅行者，在出发前一个月开始接种本品，可以使用0、7、21天3剂肌肉注射程序。
当应用这一程序时，推荐在首剂接种后12个月进行第4剂量加强免疫。
（见血清阳转率的药效学特征）。
加强剂量虽然接受全部初免程序的健康个体是否需要加强剂量尚未明确，但是应该注意到当前一些官方免疫程序推荐接种加强剂量。
乙肝疫苗的生产工艺
市场需求与前景展望
01
随着人们对乙型肝炎认识的不断提高，乙肝疫苗的市场需求不 断增加。
02
同时，随着全球卫生事业的发展，乙肝疫苗的市场前景广阔，
具有巨大的发展潜力。
未来，乙肝疫苗将继续发挥重要作用，为人类健康事业做出更
03
大贡献。
02 生产工艺流程概述
原料选择与预处理
原料种类
选用高纯度、高效价的乙肝病毒表 面抗原（HBsAg）基因工程细胞株 或酵母菌作为生产原料。
数据统计与分析
对稳定性研究过程中产生的数据进行统计和分析， 评估成品的稳定性表现，为制定成品的储存和运 输方案提供依据。
05 设备选型和操作优化建议
关键设备选型依据和建议
疫苗生产工艺需求
根据乙肝疫苗的生产工艺流程，选 择能够满足工艺需求的设备，如发
酵罐、离心机、纯化设备等。
设备性能参数
考虑设备的生产能力、处理效率、 操作便捷性、自动化程度等性能参 数，确保设备能够满足生产要求。
开展资源回收利用
对生产过程中产生的可再生资源进行回收利 用，提高资源利用效率。
法规符合性检查清单
遵守国家法律法规和标准
确保乙肝疫苗生产过程符合国家相关法律法规和标准要求。
定期开展法规符合性检查
对生产过程进行全面检查，确保各项法规要求得到有效执行 。
及时整改不符合项
针对检查中发现的不符合项，制定整改措施并及时进行整改 ，确保生产过程的法规符合性。
原材料检验
对每批次的原材料进行检验，包括外观、纯度、微生物限度等指标， 确保原材料符合生产要求。
储存条件控制
对原材料的储存条件进行严格控制，避免潮湿、高温等不利因素对 原材料质量的影响。
生产过程监控指标设置
乙肝疫苗产生作用的原理
乙肝疫苗产生作用的原理乙肝疫苗是用于预防乙型肝炎的一种疫苗，其原理是通过引入乙肝病毒的表面抗原，激发人体的免疫系统产生特异性的免疫反应，从而使人体获得对乙肝病毒的保护。
乙肝疫苗的产生作用的原理主要包括：病毒提取、抗原制备、免疫应答等多个方面。
首先，在乙肝疫苗的制备过程中，乙肝病毒的表面抗原是必不可少的。
这些表面抗原主要有乙肝病毒的表面蛋白HBsAg，它是乙肝病毒的外壳蛋白，也是免疫系统辨识病毒的主要目标。
这些表面抗原可以通过多种方法从乙肝病毒颗粒中提取出来，或通过基因工程手段在细胞中合成，制备成疫苗的活性成分。
其次，在接种乙肝疫苗后，疫苗中的表面抗原会进入人体，激活免疫系统的应答过程。
这一过程主要分为两个阶段：识别和应答。
首先，免疫系统中的特异性细胞，如树突状细胞和B淋巴细胞，会识别疫苗中的表面抗原，将其转化为抗原呈递细胞。
这些抗原呈递细胞会将抗原结合到自身的表面分子上，并将其呈递给其他免疫细胞，如T淋巴细胞。
接着，T淋巴细胞通过与抗原结合，激活并扩增，进一步引发免疫应答。
这些T淋巴细胞会分化为多种类型细胞，包括CD4+辅助T细胞和CD8+细胞。
CD4+辅助T细胞会分泌细胞因子，调控其他免疫细胞的活性，促进B细胞产生抗体。
CD8+细胞则具有杀伤感染的细胞的能力，可以通过识别并击杀感染乙肝病毒的人体细胞。
最后，免疫系统对乙肝病毒产生特异性的免疫反应。
在接种乙肝疫苗后，免疫系统会对乙肝病毒的表面抗原产生特异性的抗体反应。
这些抗体主要为IgG类抗体，可以与乙肝病毒结合，阻止病毒进入和侵染人体细胞。
此外，免疫系统还会生成细胞免疫应答，即通过杀伤感染乙肝病毒的细胞来清除病毒。
这些特异性的免疫反应为乙肝病毒感染提供了保护，预防了乙型肝炎的发生和发展。
总的来说，乙肝疫苗产生作用的原理主要包括病毒提取、抗原制备和免疫应答等方面。
通过引入乙肝病毒的表面抗原，激活免疫系统的应答，产生特异性的抗体和细胞免疫反应，从而保护人体免受乙型肝炎的感染和发病。
基因工程方法生产乙肝疫苗
基因工程方法生产乙肝疫苗乙肝病毒的感染可导致慢性肝脏疾病甚至肝癌的发生。
[1] 我国乙肝感染率为60%，乙肝表面抗原携带率约为10%，有约1.2亿人携带乙肝病毒。
[2] 疫苗接种是预防乙肝的主要途径。
国际上先后研制出了第一代血源性乙肝疫苗和第二代基因工程乙肝疫苗。
第一代乙肝疫苗主要运用乙肝病毒携带者血清中提取纯化出的的乙肝病毒表面抗原，先后经过减毒处理和添加佐剂后注入人体预防接种。
[3] 但是由于对血源性疫苗安全性存在顾虑，人们进一步着手开发第二代乙肝疫苗。
[4]1982年, Valenzuela等人在国际上首次成功运用基因手段构建重组质粒，在酵母中表达出乙肝病毒表面抗原。
[7] 1986年，美国批准了酵母来源基因工程方法生产的乙肝疫苗投放市场。
[5] 本文主要内容是简要总结运用基因工程方法，以酵母为载体生产乙肝疫苗的流程。
乙肝病毒中决定乙肝病毒抗原性的蛋白是乙型肝炎病毒(HBV)包膜蛋白，主要包括：乙肝病毒表面抗原(HBsAg)，前S1抗原和前S2抗原。
乙肝病毒包膜相关蛋白的编码基因位于HBV基因组的S区。
S区基因有三个起始密码子和同一个终止子，从不同的起始密码子开始转录，可得到三种不同的包膜蛋白。
小蛋白（SHB,即主表面蛋白,S蛋白）包括表面抗原HBsAg（p24为非糖基化形式，gp27为糖基化形式），由226个氨基酸组成；中蛋白（MHB）除了具有S蛋白的226个氨基酸，N端多出55个氨基酸残基（前S2蛋白）；大蛋白（LHB）除了具有S蛋白和前S2蛋白还具有前S1蛋白。
在完整的乙肝病毒Dane毒粒中，小蛋白、中蛋白与大蛋白通过各自S蛋白之间的二硫键共价连接，外包脂膜形成完整颗粒。
由于三种蛋白中均包括S蛋白区域，故含有HBsAg的疫苗可以在机体中引发针对乙肝病毒的免疫反应。
[2]基因工程技术生产乙肝疫苗首先要选择表达HBsAg的载体系统。
在之前的研究中发现，若选用细菌为基因表达载体，即使使用强启动子，也不能得到大量具有免疫原性的基因表达产物。
乙肝疫苗接种常识
适用于特定人群，如医务人员、接触乙肝病毒的高危人群等。接种程序根据具体疫苗种类而定。
优点与不足
灭活或减毒活疫苗具有较强的免疫原性和较长的免疫保护期。但制备过程复杂，成本较高，且存在潜在的安 全风险。
不同厂家产品比较
疫苗品牌与种类
目前市场上有多家厂家生产乙肝 疫苗，包括国产和进口品牌。不 同厂家生产的疫苗在成分、制备 工艺、免疫原性和安全性等方面
在完成三剂乙肝疫苗接种后，需要提醒接种 对象或其监护人按照免疫程序完成后续接种 。
04 不良反应与预防措施
常见不良反应类型
局部反应
接种部位可能出现红肿、疼痛、 硬结等症状，一般较轻微，可在
几天内自行消退。
全身反应
部分人可能出现发热、头痛、乏力、 恶心等全身不适症状，通常无需特 殊处理，注意休息和观察即可。
注意观察身体反应
在接种乙肝疫苗后，应留意观察身体反应情况，如出现不适症状应及 时就医。
05 免疫效果评价方法及标准
免疫效果评价指标
01
02
03
抗体滴度
接种疫苗后产生的抗体水 平，是评价免疫效果的重 要指标。
保护率
指接种疫苗后，在一定时 间内防止感染乙肝病毒的 比例。
持久性
抗体在人体内持续存在的 时间，也是评价疫苗效果 的重要指标之一。
加强免疫
对于抗体水平下降的人群，可以通过加强免疫接种来提高 抗体水平，以维持长期的免疫保护。
06 乙肝疫苗接种策略及推广 应用
国家政策支持情况
乙肝疫苗纳入国家免疫规划
政府免费提供乙肝疫苗，确保所有新生儿都能及时接种。
加强疫苗监管
国家对疫苗生产、流通、接种等环节实施严格监管，确保疫苗质量 和安全。
基因工程乙肝疫苗
②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化;
③具有重组基因的高效 扩增和表达能力;
④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可 以进行悬浮培养 ,表达 水平较高;
⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内 源蛋白 ,利于外源蛋白的后分离
目的基因的表达
其四，在血源乙肝疫苗的生产过程中，虽采用三步灭活工艺，但
三步灭活不足以将血源中所有已知和未知的潜在致病因子全部灭活，
难以最大限度地保证血源乙肝疫苗受种者绝对安全；
其五，如上所述，为了灭活乙肝病毒，需采用三步灭活工艺，但
三步灭活对疫苗的免疫原性有影响。因此，由于血源乙肝疫苗的内部
矛盾性，决定了血源乙肝疫苗只能作为一种过渡性疫苗，1997年卫生
应用学科
免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学 科）；免疫预防（三级学科）
.
3
发展概况
重组酵母乙肝疫苗首先在美国默克公司研制成功，并 于1986年被美国FDA批准通过。1991年，我国自行研制的 第一个基因工程疫苗—哺乳动物细胞生产乙肝疫苗获准生 产。我国当前已能大规模生产乙型肝炎表面抗原重组疫苗， 分别称酵母重组和CHO（中国仓鼠卵巢细胞）重组疫苗， 免疫效果比同剂量的血源疫苗优良，并且十分安全，可以 放心使用。
高
3、乙肝患者和乙肝病毒携带者不需要接种乙肝疫苗
答敏感性不同，所以有的人打疫
苗容易产生抗体，而部分人不会
产生抗体。乙肝疫苗第一针后大
概有30%左右的人产生抗体，而
第二针后有50%～70%左右，第三
针后90%左右产生抗体。
.
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打乙肝疫苗前的注意事项有以下几点
1、有支气管哮喘和血清病的人、对青霉素等药物过敏者和过敏性荨麻疹
乙肝疫苗
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家 美国默克公司 Merck 比利时史克公司 Smith kline 法国巴斯德研究所 Pasteur Merieux 德国莱茵公司下属的 韩国绿十字疫苗公司 Green Cross 疫苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组CHO细胞乙肝疫 苗 重组汉逊酵母乙肝疫 苗
• 北京天坛的 弱项和不足：表达水平低，
抗原数量少，每剂疫苗只含5微克或 10微克的抗原，比华兰疫苗抗原含量 少一倍，所以抗体滴度低和抗体持续 时间较短。
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
表达水平
北京天坛 新乡华兰 50微克 300微克
抗原产量
低 高
北京天坛和新乡华兰疫苗 抗原含量和抗体反应的比较
每剂疫苗 抗原含量 抗体滴度 抗体持续时间
北京 天坛
华兰 公司
5微克（儿童） 低 10微克（成人）
10微克（儿童） 高 20微克（成人）
短
长
大连汉信和新乡华兰 纯化步骤和纯化收率的比较
纯化步骤
大连汉信 新乡华兰 多 少
纯化收率
低于20% 高于20%
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
的乙肝疫苗的基本情况： • 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
母总蛋白） • 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量： 50mg/Lх500L=25g • 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量 5,000,000/5=1,000,000支
乙肝疫苗的制备
向运新 李凯 周永斌
彭博 王伟杰
朱晓东
资料提供者：
刘珍
鞠林
基因工程
定义：又称为重组DNA技术，指将某些特定的基因或DNA片断，通过 载体或其它手段送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表达的一 种遗传学操作。是生产出符合人类需要的产品或创造出生物的新性状 并能稳定遗传。
作用：可把来自任何生物的基因转移到与其毫无关系的任何其他受体 细胞中，可以任意改造生物的遗传特性，创造出生物的新性状。某一 段DNA可在受体细胞内进行复制，为制备大量纯化的DNA片段提供了 可能.
抗病毒抗肿瘤
• 白细胞介素(interleukin)
治疗癌症
• 基因重组乙肝疫苗
用基因重组技术把乙型肝炎病毒的表面抗原 （HbsAg）基因片段插入酵母细胞或哺乳动物 细胞的基因中，在体外培养增殖过程中组装或 分泌出乙型肝炎表面抗原，然后把表面抗原收 集起来提纯之后做成乙型肝炎疫苗。
乙肝疫苗的制备
获得目的基因
表达载体
重组的表达载体
酶切、连接
转化、转染等
宿主细胞
原核生物细胞
转基因 微生物
基因工 程药物
植物细胞
动物细胞
人类细胞
转基因植物 培养的动 物细胞
卵细胞
胚胎 发育
基因 治疗
药物、疫苗 转基因动 物
• 蛋白质名称
用途
• 促肾上腺皮质激素（adrenocorticotrophic hormone） 治疗风湿（rheumatic disease）
固液 分离 细胞 破碎
浓缩 与初 步纯 化
高度 纯化
成品 加工
• 浓缩与初步纯化
• 离子交换层析 • 疏水层析 • 亲和层析
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不良反应
• 乙肝疫苗自1979年问世以来，经过20多年的大规模 应用和观察，至今尚未见到有关注射后引起严重不 良反应的报道，只有少数人出现接种部位红肿、硬 结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕吐、乏力、 皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反应，多于 1-3天内不治自愈。 由于乙肝疫苗属血源性的，在 制备过程中纯化与灭活程序十分严密，故不会产生 像破伤风等动物血清疫苗可能造成的过敏反应，也 不会感染上乙肝、艾滋病及其他传染性疾病。与其 他疫苗同时接种亦未出现相互干扰作用。因此，可 以说，乙肝疫苗是安全可靠的预防疫苗，注射前也 不必皮试。
基因工程药物—— 乙肝疫苗的制备
一、什么是基因工程药物
• 基因工程药物是先确定对某种疾病有预防 和治疗作用的蛋白质，然后将控制该蛋白 质合成过程的基因取出来，经过一系列基 因操作，最后将该基因放入可以大量生产 的受体细胞中去，这些受体细胞包括细菌、 酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细 胞，在受体细胞不断繁殖过程中，大规模 生产具有预防和治疗这些疾病的蛋白质， 即基因疫苗或药物。 在医学和兽医学中应 用正逐步推广。
二、乙肝疫苗
• 中文名称： 乙肝疫苗 • 英文名称： hepatitis B vaccine • 定义： 一种预防乙型肝炎的 疫苗。即从乙型肝炎病毒携 带者血浆中分离乙肝表面抗 原(HbsAg)，经处理后而制成。 • 应用学科： 免疫学（一级学 科）；应用免疫（二级学 科）；免疫预防（三级学科）
• 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫 苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝 病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清 除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使 人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到 预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预 防乙肝病毒感染的最有效方法。
3、乙肝疫苗的药理作用、临床应用、不良反应
Байду номын сангаас
药理作用
临床应用
• • 目前临床上应用的乙肝疫苗主要有以下几种： （1）血源性乙肝疫苗：此疫苗是用无症状的HBsAg携带者的血液制成，故称血源性乙肝疫 苗。它的制备步骤大致是：采用高滴度HBsAg阳性携带者血液，分离出血浆并除去其中有感 染的HBV颗粒后，再将HBsAg予以浓缩与纯化，充分灭活，以消灭其中可能存在的一切已知病 毒和消除HBsAg表面可能存在的全部宿主蛋白，然后添加佐剂及防腐剂而成。为确保疫苗的 安全，每一阶段均取样做无菌试验、热源试验及动物安全试验等，以检查疫苗中有无其他病 原体及血液中的抗原物质。此种疫苗的免疫原性与安全性均已获得解决，但尚有一些缺点： ① 为防止可能存在的某些病原体在制备过程中逃避灭活，采用了严格、复杂且费时的物理与 化学方法纯化HBsAg抗原与灭活措施，使制备成本提高而疫苗产量不高；②随着乙肝疫苗长 HBsAg 期而广泛的使用，无症状HBsAg携带的数目势必逐渐 减少，最终将难以再用他们的血液制备 疫苗。 （2）基因工程疫苗：利用基因工程研制重组DNA乙肝疫苗，曾先后研制过大肠杆菌系统、 啤酒酵母细胞系统、哺乳动物细胞系统和牛痘病毒系统的重组乙肝疫苗。目前多用酵母基因 的重组疫苗。其具有良好的免疫原性，免疫应答特点与血源性乙肝疫苗基本相似，且多无严 重的不良反应。尽管它含酵母蛋白不超过1%，但对其产生变态反应的担忧尚未完全排除。 （3）含前S蛋白的乙肝疫苗：目前临床上应用的血源性疫苗与基因工程疫苗，均只含 HBsAg蛋白，当证实S蛋白能增强HBsAg的免疫应答后，又注意到单纯只含HBsAg蛋白的疫苗对 血液透析病人与新生儿免疫效果较差时，遂生产出添加前S蛋白的酵母源性重组乙肝疫苗， 它确能明显地增强免疫应答。
1、乙肝疫苗的发现发展历程
• Blumberg教授在报告中指出, HBV的发现以及随后HBV疫苗的研制最初 都来源于有关血清蛋白质的基础研究,而事实上当时并没有预料到这一 研究与乙肝领域有如此大的相关性。在Blumberg教授之前,许多科学家 都试图找到引起肝炎的病原微生物,但均无结果。 Blumberg当时主要研究血清抗原的遗传多态性与疾病易感性的关 系。他们采用免疫扩散技术,对曾多次接受输血的患者(如血友病、白 血病患者)的血液样本进行研究。1963年他发现,1例住在纽约的血友病 患者的血清可与一位澳大利亚土著人血清中的抗原发生反应。由于这 种抗原是首先在澳大利亚人中发现的,因此Blumberg称其为澳大利亚抗 原。后来Blumberg又在许多人群中对此进行了研究,发现这种抗原在亚 洲和非洲人群中阳性率较高,而在欧美健康人群中阳性率较低,但在有 肝病特征的欧美人群中阳性率也较高。Blumberg等还研究了澳大利亚 抗原与白血病和唐氏综合征的关系,发现唐氏综合征患儿中澳大利亚抗 原阳性率较高,而且如果患儿父母澳大利亚抗原阳性,患儿还会发生无 黄疸性肝炎。根据这些线索,Blumberg等假设澳大利亚抗原与肝炎有关, 后来的研究确实证实了澳大利亚抗原就是HBV的一部分,即HBsAg。后 来通过电子显微镜观察和传染实验证实,与澳大利亚抗原有关的病毒确 实能引起肝炎。由此来看,HBV的整个发现过程并不是事先设计好的,而 是多次偶然发现的结果。
• 后来研究发现,人的血清中HBsAg很少与HBsAb同时存在,而且 HBsAb阳性者确实对HBV有免疫作用。Blumberg和Millman教授采用特 定技术将HBsAg与病毒分开,并将HBsAg进行减毒灭活,这就是疫苗的最 初制作过程,当然,现在在预防接种中广泛应用的乙肝疫苗是采用基因 重组方法表达的乙肝表面抗原。 目前,HBV已成为世界范围内最常见的感染源之一,每年因HBV相关 疾病死亡的人数约60~100万,虽然HBV感染病死率(15%~25%)低于HIV感 染(100%),但由于HBV感染者人数众多,因此死亡总数(5570~9280万)远远 高于死于HIV感染者(3400万)。令人欣喜的是,随着乙肝疫苗免疫接种 计划的推广,HBV感染发生率已显著下降。 中国自1986年开始实行婴儿HBV疫苗免疫接种计划至今,曾接种乙 肝疫苗者HBsAg血清阳性率已由历史对照的16.3%(879/5397例)降至 1.43%(横向研究)和1.81%(队列研究)。接种人群中HBsAg阳性率的下降 也会间接影响未接种者和易感人群。意大利的研究表明,大部分成员未 接种疫苗的群体HBsAg血清阳性率也有所下降,提示疫苗接种的预防效 果有放大作用。此外,HBV疫苗接种还能预防肝细胞癌的发生,中国台湾、 韩国和加拿大的研究均证实了这一点。 Blumberg教授最后呼吁,根据目前情况,不但要继续推广乙肝疫苗 接种,以预防乙肝的发生,还要采取有效的抗乙肝病毒的治疗,如果我们 能强有力地抑制HBV DNA水平,就可以降低其传染性,最终乙肝传染人 数将会进一步减少。