基因工程药物质量控制
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⒊ 应提供宿主细胞的名称、来源、 传代历史、检定结果及其生物学特 性；
⒋须阐明载体引入宿主细胞的方法 及载体在宿主细胞与载体结合后的 遗传稳定性；
⒌提供插入基因与表达载体两侧端 控制区内的核苷酸序列，详细叙述 在生产过程中启动与控制基因在宿 主细胞中表达的方法及水平等。
二、培养过程的质量控制
在工程菌的贮存中，要求种子 克隆纯而稳定；
⒌产品一致性的保证
五、产品的保存 ⒈液态保存 ⑴低温保存 ⑵在稳定的下保存 ⑶高浓度保存 ⑷加保护剂保存 ⒉固态保存
第十节 基因工程药物制造实例
干扰素（interferon，IFN）是人体细胞分泌的一种 活性蛋白质，具有广泛的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性， 是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构和抗原性 的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰素在分 为α1b α2a α2b等亚型。
对生产种子，应详细叙述细 胞生长与产品生成的方法和材料， 并控制微生物污染；提供培养生 产浓度与产量恒定性数据，依据 宿主细胞-载体系统稳定性，确定 最高允许传种代数；
在培养过程中，应测定被表 达基因分子的完整性及宿主细 胞长期培养后的基因型特征； 依宿主细胞-载体稳定性与产品 恒定性，规定持续培养时间， 并定期评价细胞系统和产品。
杂质和污染物
单克隆抗体 氨基酸取代 微生物 支原体 病毒
检测方法
SDS-PAGE、免疫分析 氨基酸分析、肽谱、质 谱、CE 微生物学检查 微生物学检查 微生物学检查
⒊生物学活性测定 需通过动物体内试验和通过细胞培养 进行体外效来自百度文库测定。
⒋稳定性考查 是药品有效性安全性的重要指标，是药 品贮藏条件和使用期限的主要依据。
四、目标产品的质量控制
基因工程药物的质量控制主要 包括以下几项要求:产品的鉴别、纯 度、活性、安全性、稳定性和一致 性。它需要利用生物化学、免疫学、 微生物学、细胞生物学和分子生物 学等多学科的理论与技术所建立的 鉴定方法。
⒈产品的鉴别
常用的鉴定方法:
电泳方法: SDS-PAGE、等电聚焦、 免疫电泳
⒉ 纯度分析
⑴蛋白质含量测定 SDS-PAGE、等电聚焦、各种HPLC、 毛 细管电泳
⑵杂质 ①蛋白类杂质 残留宿主细胞蛋白 采 用免疫分析的方法 ②非蛋白类杂质
②非蛋白类杂质 非蛋白类杂质主要有: 病毒、细菌等微生物、热原、 内毒素、致敏源及DNA。
常用检测方法：
杂质和污染物
内毒素 宿主细胞蛋白 其它蛋白杂质 残余DNA 蛋白变异 甲酰蛋氨酸 蛋氨酸氧化 产物变性或聚和脱氨基
⑵ 氨基酸成分分析 50个氨基酸较理想
⑶ 部分氨基酸序列分析 N端15个氨基酸可作为重 组蛋白质和多肽的重要鉴 定指标。
⑷ 重组蛋白质浓度测定和相对分 子量的测定
蛋白质浓度测定方法有:福林-酚 法、双缩脲法
蛋白相对分子量的测定:凝胶过滤 法、SD-SPAGE法
⑸ 蛋白质二硫键分析 测定方法有: 对氯汞苯甲酸法等 5，5’-二硫基双-2-硝基苯甲酸法
一、基因工程菌的组建
诱生的白细胞
提取全RNA
通过寡dT-纤维素柱 获得寡A的mRNA
逆转录成cDNA
双链cDNA接上dT或dG尾
蔗糖密度梯度 离心提取12s
的 mRNA
pBR322质粒
pBR322质粒加上dA或dC
第十节 基因工程药物制造 实例
干扰素（interferon，IFN）是人体细 胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛 的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性，是 人体防御系统的重要组成部分。根据 分子结构和抗原性的差异分为α、β、 γ、ω等4个类型。α型干扰素在分为 α1b α2a α2b等亚型。
免疫学方法: 放射免疫(RIA)、酶联 免疫(ELISA)
受体结合试验
高效液相色谱(HPLC)、肽图分析法、 末端序列分 析、圆二色谱、核磁 共振
⑴ 肽图分析 肽图分析是用酶法或化学法降解
目的蛋白质,对生成的肽段进行分离分 析。它是检测蛋白质一级结构最有效 的方法，该技术灵敏高效是对基因工 程药物的分子结构和遗传稳定性进行 评价和验证的首选方法。常用HPLC、 毛细管电泳。
原材料的质量控制是确保编码 药品的DNA序列的正确性，重组微 生物来自单一克隆，所用质粒纯而 稳定，以保证产品质量的安全性和 一致性。
根据质量控制要求应了解以下 特性： ⒈明确目的基因的来源、克隆经过， 并以限制性内切酶酶切图谱 和核苷酸序列予以确证；
⒉应提供表达载体的名称、结构、遗 传特性及各组成部分（如复制子、 启动子）的来源与功能，构建中所 用位点的酶切图谱，抗生素抗性标 记物；
在培养过程中，要求工程菌所 含的质粒稳定，始终无突变；
在重复生产发酵中，工程菌表 达稳定；
始终能排除外源微生物污染。
生产基因工程产品应有种子 批系统，并证明种子批不含有致 癌因子，无细菌、病毒、真菌和 支原体等污染，并由原始种子批 建立生产用工作细胞库。
原始种子批须确证克隆基因 DNA序列，详细叙述种子批来源、 方式、保存及预计使用期，保存 与复苏时宿主载体表达系统的稳 定性。
基因工程药物的质量控制
是利用活细胞作为表达系统，产 物的分子量较大，并有复杂的结 构，还参与生理功能的调节，用 量极微，任何质和量的偏差都可 贻误病情造成严重危害。
宿主细胞中表达的外源基因， 在转录翻译精制工艺放大过程 中都可能发生变化，故从原料 以及制备全过程都必须严格控 制条件和鉴定质量。
一、 原材料的质量控制
检测方法
鲎试剂、家兔热原法 免疫分析、SDS-PAGE、CE 免疫分析、SDS-PAGE、 HPLC、CE DNA杂交、紫外光谱、蛋白结合 肽谱、HPLC、 IEF、 CE 肽谱、HPLC、 IEF、 CE 肽谱、HPLC、 质谱、氨基酸分析 SDS-PAGE、IEF、HPLC、 CE、质谱、 凝胶过滤
培养周期结束时，应监测 宿主细胞-载体系统的特性， 如质粒拷贝数、宿主细胞中表 达载体存留程度，含插入基因 载体的酶切图谱等。
三、纯化工艺过程的质量控制
产品要有足够的生理和生 物学试验数据，确证提纯物分 子批间保持一致性；外源蛋白 质、DNA与热源质控制在规定 限度以下。
在精制过程中能清除宿主 细胞蛋白质、核酸、糖类、病 毒、培养基成分及精制工序本 身引入的化学物质，并有检测 方法。
⒋须阐明载体引入宿主细胞的方法 及载体在宿主细胞与载体结合后的 遗传稳定性；
⒌提供插入基因与表达载体两侧端 控制区内的核苷酸序列，详细叙述 在生产过程中启动与控制基因在宿 主细胞中表达的方法及水平等。
二、培养过程的质量控制
在工程菌的贮存中，要求种子 克隆纯而稳定；
⒌产品一致性的保证
五、产品的保存 ⒈液态保存 ⑴低温保存 ⑵在稳定的下保存 ⑶高浓度保存 ⑷加保护剂保存 ⒉固态保存
第十节 基因工程药物制造实例
干扰素（interferon，IFN）是人体细胞分泌的一种 活性蛋白质，具有广泛的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性， 是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构和抗原性 的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰素在分 为α1b α2a α2b等亚型。
对生产种子，应详细叙述细 胞生长与产品生成的方法和材料， 并控制微生物污染；提供培养生 产浓度与产量恒定性数据，依据 宿主细胞-载体系统稳定性，确定 最高允许传种代数；
在培养过程中，应测定被表 达基因分子的完整性及宿主细 胞长期培养后的基因型特征； 依宿主细胞-载体稳定性与产品 恒定性，规定持续培养时间， 并定期评价细胞系统和产品。
杂质和污染物
单克隆抗体 氨基酸取代 微生物 支原体 病毒
检测方法
SDS-PAGE、免疫分析 氨基酸分析、肽谱、质 谱、CE 微生物学检查 微生物学检查 微生物学检查
⒊生物学活性测定 需通过动物体内试验和通过细胞培养 进行体外效来自百度文库测定。
⒋稳定性考查 是药品有效性安全性的重要指标，是药 品贮藏条件和使用期限的主要依据。
四、目标产品的质量控制
基因工程药物的质量控制主要 包括以下几项要求:产品的鉴别、纯 度、活性、安全性、稳定性和一致 性。它需要利用生物化学、免疫学、 微生物学、细胞生物学和分子生物 学等多学科的理论与技术所建立的 鉴定方法。
⒈产品的鉴别
常用的鉴定方法:
电泳方法: SDS-PAGE、等电聚焦、 免疫电泳
⒉ 纯度分析
⑴蛋白质含量测定 SDS-PAGE、等电聚焦、各种HPLC、 毛 细管电泳
⑵杂质 ①蛋白类杂质 残留宿主细胞蛋白 采 用免疫分析的方法 ②非蛋白类杂质
②非蛋白类杂质 非蛋白类杂质主要有: 病毒、细菌等微生物、热原、 内毒素、致敏源及DNA。
常用检测方法：
杂质和污染物
内毒素 宿主细胞蛋白 其它蛋白杂质 残余DNA 蛋白变异 甲酰蛋氨酸 蛋氨酸氧化 产物变性或聚和脱氨基
⑵ 氨基酸成分分析 50个氨基酸较理想
⑶ 部分氨基酸序列分析 N端15个氨基酸可作为重 组蛋白质和多肽的重要鉴 定指标。
⑷ 重组蛋白质浓度测定和相对分 子量的测定
蛋白质浓度测定方法有:福林-酚 法、双缩脲法
蛋白相对分子量的测定:凝胶过滤 法、SD-SPAGE法
⑸ 蛋白质二硫键分析 测定方法有: 对氯汞苯甲酸法等 5，5’-二硫基双-2-硝基苯甲酸法
一、基因工程菌的组建
诱生的白细胞
提取全RNA
通过寡dT-纤维素柱 获得寡A的mRNA
逆转录成cDNA
双链cDNA接上dT或dG尾
蔗糖密度梯度 离心提取12s
的 mRNA
pBR322质粒
pBR322质粒加上dA或dC
第十节 基因工程药物制造 实例
干扰素（interferon，IFN）是人体细 胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛 的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性，是 人体防御系统的重要组成部分。根据 分子结构和抗原性的差异分为α、β、 γ、ω等4个类型。α型干扰素在分为 α1b α2a α2b等亚型。
免疫学方法: 放射免疫(RIA)、酶联 免疫(ELISA)
受体结合试验
高效液相色谱(HPLC)、肽图分析法、 末端序列分 析、圆二色谱、核磁 共振
⑴ 肽图分析 肽图分析是用酶法或化学法降解
目的蛋白质,对生成的肽段进行分离分 析。它是检测蛋白质一级结构最有效 的方法，该技术灵敏高效是对基因工 程药物的分子结构和遗传稳定性进行 评价和验证的首选方法。常用HPLC、 毛细管电泳。
原材料的质量控制是确保编码 药品的DNA序列的正确性，重组微 生物来自单一克隆，所用质粒纯而 稳定，以保证产品质量的安全性和 一致性。
根据质量控制要求应了解以下 特性： ⒈明确目的基因的来源、克隆经过， 并以限制性内切酶酶切图谱 和核苷酸序列予以确证；
⒉应提供表达载体的名称、结构、遗 传特性及各组成部分（如复制子、 启动子）的来源与功能，构建中所 用位点的酶切图谱，抗生素抗性标 记物；
在培养过程中，要求工程菌所 含的质粒稳定，始终无突变；
在重复生产发酵中，工程菌表 达稳定；
始终能排除外源微生物污染。
生产基因工程产品应有种子 批系统，并证明种子批不含有致 癌因子，无细菌、病毒、真菌和 支原体等污染，并由原始种子批 建立生产用工作细胞库。
原始种子批须确证克隆基因 DNA序列，详细叙述种子批来源、 方式、保存及预计使用期，保存 与复苏时宿主载体表达系统的稳 定性。
基因工程药物的质量控制
是利用活细胞作为表达系统，产 物的分子量较大，并有复杂的结 构，还参与生理功能的调节，用 量极微，任何质和量的偏差都可 贻误病情造成严重危害。
宿主细胞中表达的外源基因， 在转录翻译精制工艺放大过程 中都可能发生变化，故从原料 以及制备全过程都必须严格控 制条件和鉴定质量。
一、 原材料的质量控制
检测方法
鲎试剂、家兔热原法 免疫分析、SDS-PAGE、CE 免疫分析、SDS-PAGE、 HPLC、CE DNA杂交、紫外光谱、蛋白结合 肽谱、HPLC、 IEF、 CE 肽谱、HPLC、 IEF、 CE 肽谱、HPLC、 质谱、氨基酸分析 SDS-PAGE、IEF、HPLC、 CE、质谱、 凝胶过滤
培养周期结束时，应监测 宿主细胞-载体系统的特性， 如质粒拷贝数、宿主细胞中表 达载体存留程度，含插入基因 载体的酶切图谱等。
三、纯化工艺过程的质量控制
产品要有足够的生理和生 物学试验数据，确证提纯物分 子批间保持一致性；外源蛋白 质、DNA与热源质控制在规定 限度以下。
在精制过程中能清除宿主 细胞蛋白质、核酸、糖类、病 毒、培养基成分及精制工序本 身引入的化学物质，并有检测 方法。