需氧革兰氏阴性杆菌鉴定流程图 -
革兰阴性需氧和兼性厌氧性杆菌鉴定—假单胞菌属(微生物检验课件)
标本
分离培养 （血平板）
血标本 增菌
涂片镜检 氧化酶 菌落特征 绿脓素 气味
可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 明胶液化＋
铜绿假单胞菌－－检验方法
❖ 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜检；鞭毛染色镜检 ❖ 培养：标本接种血平板、Mac平板分离培养，血标本先增菌，
一、假单胞菌属
❖ 假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性分为5群，其中Ⅰ群 属于假单胞菌属，共7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。
❖ 多为条件致病菌，是医院感染的主要病原菌
假单胞菌属共同点
❖ 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭 毛
❖ 专性需氧 ❖ 营养要求不高 ❖ 氧化酶：＋ ❖ O/F：O ❖ Mac生长：＋ ❖ 触酶阳性，有的产生水溶性色素
＿ ＿ ＋ ＿ ＋ ＿ ＿ ＿
斯氏假 单胞菌
＋ ＿ ＿ ＋ ＋ ＿ ＿ ＋ ＿ ＿ ＋ ＿ ＋/＿
嗜麦芽 鼻疽假 类鼻疽 假单胞 单胞菌 假单胞
＿
＋/＿
＋
＿
＿
＿
＿
＿
＿
＋
＿
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＿
＋
＋
＿
＿
＿
＋
＋
＿
＿
＋
＋
＿
＋
＋/＿
＿
＋
氧化酶试验（＋）
铜绿假单胞菌－－抗原结构和抵抗力
❖ 抗原结构 O抗原：包括外膜蛋白和脂多糖 H抗原
❖ 抵抗力： 对外界环境抵抗力强 对多种抗生素不敏感
革兰氏阴性微需氧和厌氧菌的检验
革兰氏阴性微需氧和厌氧菌的检验•本类共包括8个属和1个科：1、弯曲菌属，2、水螺菌属，3、螺菌属，4、固氮螺菌属，5、海洋螺菌属，6、蛭弧菌属，7、吸血弧菌属，8、螺杆菌属，以及拟杆菌科。
•在医学检疫上有意义的是弯曲杆菌和螺杆菌属。
一、弯曲菌属Campylobacter一类呈逗点状或S形的革兰氏阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物和人类腹泻、胃肠炎和肠道外感染。
目前弯曲菌属有18个种（含亚种），对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌的胎儿亚种，前者引起人类急性腹泻，后者在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等，其次是胎儿弯曲菌和大肠弯曲菌等。
1983年分离的幽门弯曲菌则与慢性胃炎和胃溃疡、十二指肠溃疡有关。
兽医临床上常见的有五个种（含亚种）：空肠弯曲菌、胎儿弯曲菌（胎儿亚种和性病亚种）、小肠弯曲菌、幽门弯曲菌。
其中以空肠弯菌最多见，胎儿亚种次之。
致病性（一）形态与染色1、0.2-0.4×1.5-3.0μm； G-, 呈弧形、S形或海鸥展翅状，不易着色；2、无芽孢，一端或两端各有一根鞭毛，运动活泼，形态似霍乱弧菌；3、从微需氧到厌氧，CO2有利于其生长。
（二）培养特性•微需氧，最适生长环境: 氧气5％、二氧化碳10％、氮气85％；通常42℃初分离空肠弯和大肠弯曲菌，其他菌株37℃生长良好。
•营养要求高，普通培养基不生长，常用含头孢哌酮的选择性培养基，以抑制肠道正常菌群。
•含血的Skirrow培养基、头孢哌酮-万古霉素-两性霉素琼脂培养基（CVA）和不含血的碳-头孢哌酮-去氧胆酸盐（CCDA）、碳基选择性培养基（CSM）和半固体动力培养基等常用于分离该属的细菌。
•在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落，单个菌落呈中心凸起，周边不规则，无溶血现象。
（四）抵抗力•抵抗力较弱，易被干燥、直射日光及弱消毒剂所杀灭，56℃、5min可被杀死。
但耐寒，在4℃冰箱或水中可存活4周。
革兰氏阴性需氧杆菌
鼻疽的诊断和检疫主要采用变态反应检查和血清学检查，而细菌学检 查只有在特殊病例才被应用。
1. 变态反应检查：患病动物较长时间（8-10年或终生）保持变态反应检查 阳性反应。检出急性、慢性、潜伏性等。
点眼反应最常用。 方法：鼻疽菌素3-4滴滴入被检动物一侧眼结膜囊内，分别于点眼后，3、 6、9、及24h观察反应。如眼结膜红肿并排除脓性分泌物，
布鲁氏菌染色照片
二、培养及生化特性
* 细菌专性需氧，初代分离（5-10％ CO2） * 初分离生长缓慢（7-14天），传代（2-3天） * 血清、血液、肝汤、葡萄糖—促进生长 * 菌落有光滑(S)型、粗糙（R）型和黏液(M)型
肝汤肉汤：轻度混浊、粘稠沉淀物
血液肝汤琼脂：形成灰白色菌落，不溶血
血清肝汤琼脂：无色透明、湿润、闪光的小菌落
即为 阳性反应。
2. 细菌学检查： 被检材料：未破溃脓肿采取的穿刺物、鼻汁、皮肤溃疡分泌物、病变组
织 和 器官等。
分离培养：病料接种于1%血液甘油琼脂上分离培养；甘油肉汤增菌培养。 获纯培养物进一步鉴定。应注意该菌与类鼻疽杆
菌相区别。 3. 血清动学物检试查验：：接种于雄性豚鼠腹腔后，可引起典型的睾丸炎和睾丸周围炎，
第十章 革兰氏阴性需养杆菌
内容提要 * 第一节 布氏杆菌属
第二节 假单胞菌属 第三节 波氏菌属 第四节 军团菌属 第五节 弗朗西斯菌属 第六节 摩拉菌属 第七节 不动杆菌属
第一节 布氏杆菌属(Brucella)
布氏杆菌（布鲁氏菌）—布氏杆菌病（人兽共患病）
一、形态及染色特性
* 呈球杆形或短杆形，单在，革兰氏阴性菌 * 柯兹罗夫斯基或改良Z-N、改良K氏染色—红色 * 染料（沙黄、孔雀绿）—迟染的特性
第八章革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定ppt课件
-临床意义 O抗体（IgM）， H抗体（IgG）
• O 、H抗体均升高，患伤寒的可能性大 • O 、H抗体不升高，患伤寒的可能性小 • 只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应 • 只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交
叉反应
三、志贺菌（痢疾杆菌）
志贺菌形态特征
（一）生物学性状
• 微生物学检查 –分离鉴定 –毒力实验 –快速诊断
志贺菌检验程序
四、克雷伯菌属（7个种）
(一）生物学特性
– 肺炎克雷伯菌（3个亚种）的肺炎亚种，与人类感染有关 – G-球杆菌，无动力，有较厚的荚膜，多有菌毛 – 普通平板呈M型菌落（易拉成丝） – 存在正常人体，目前为除大肠埃希菌以外最重要的条件致病菌
快速诊断微生物学检验志贺菌检验程序微生物学检验四克雷伯菌属7肺炎克雷伯菌3个亚种的肺炎亚种与人类感染有关存在正常人体目前为除大肠埃希菌以外最重要的条件致病菌微生物学检验肺炎克雷伯菌革兰染色阴性杆菌无动力荚膜肿胀试验阳性微生物学检验肺炎克雷伯菌的菌落特征左血琼脂平板右mac克雷伯菌属鉴别菌落较大黏稠挑取时易拉成丝微生物学检验肺炎克雷伯菌黏丝试验微生物学检验肺炎克雷伯菌kia肺炎克雷伯菌黏丝试验微生物学检验肺炎克雷伯菌imvic试验肺炎克雷伯菌粘丝试验微生物学检验克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群是医院感染中最重要的条件致病菌肺炎克雷伯菌是临床标本中常见的细菌可引起典型的原发性肺炎该菌在正常人口咽部的带菌率为16在住院患者中可高达20是酒精中毒者糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在的危险因素二临床意义微生物学检验肺炎克雷伯菌肺炎亚种还能引起各种肺外感染包括肠炎和脑膜炎婴儿泌尿道感染儿童和成人及菌血症近年在一些亚洲地区特别是台湾和韩国由肺炎克雷伯菌引起的肝脓肿等严重社区获得性侵袭性感染有上升的趋势二临床意义微生物学检验肺炎克雷伯菌易产生超广谱内酰胺酶esbl代头孢菌素及单环内酰胺类抗生素均产生耐药而仅对头霉素类碳青霉烯类及酶抑制剂敏感esbl检测现已作为医院细菌室常规检测项目二临床意义微生物学检验五变形杆菌属变形杆菌的周身鞭毛迁徙生长革兰阴性杆菌有多形性周身鞭毛运动活泼在普通培养基上呈扩散性生长称为迁徙生长现象微生物学检验变形杆菌kia结果迅速分解尿素尿素为本菌特征乳糖变形杆菌某些特殊菌株如x19x2xk原与某些立克次氏体有共同抗原成分临床上应用ox19ox2oxk代替立克次氏体抗原与斑疹伤寒或恙虫病患者血清做凝集试验以辅助诊断立克次体病微生物学检验六肠杆菌属产气肠杆菌eaerogenes阴沟肠杆菌ecloacea中间型肠杆菌eintermedium泰洛肠杆菌etaylorac微生物学检验阴沟肠杆菌革兰染色革兰阴性粗短杆菌有周身鞭毛无芽胞有些菌株有荚膜一生物学特性微生物学检验阴沟肠杆菌菌落特征mac兼性厌氧营养要求不高在普通培养基上能够生长形成大而湿润的黏液状菌落在血琼脂上不溶血在肠道选择培养基上形成乳糖发酵呈红色的菌落一生物学特性微生物学检验生化特征imvic试验大肠埃希菌为肠杆菌属细菌大多为动力和鸟氨酸脱羧酶试验肺炎克雷伯菌为阴性肠杆菌属多数为阳性微生物学检验二临床意义肠杆菌属是肠杆菌科中最常见的环
致病菌的检验革兰氏阴性微需氧和厌氧菌ppt课件
目前弯曲菌属有18个种（含亚种），对人类致病的主要是空肠弯 曲菌和胎儿弯曲菌的胎儿亚种，前者引起人类急性腹泻，后者 在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等，其次是胎儿弯曲 菌和大肠弯曲菌等。 1983年分离的幽门弯曲菌则与慢性胃炎和 胃溃疡、十二指肠溃疡有关。
兽医临床上常见的有五个种（含亚种）：空肠弯曲杆菌、胎儿弯 曲杆菌（胎儿亚种和性病亚种）、小肠弯曲杆菌、幽门弯曲菌 。其中以空肠弯杆菌最多见，胎儿亚种次之。
本属细菌最早根据形态染色、培养条件等归于弯曲菌属 ，1989年Goodwin根据其超微结构、酶活性、脂肪酸序 列、生长特性等的不同，建议将其从弯曲菌属中划分出 来而成立一个新的属Hilicobacter（螺杆菌属）。
本属中现已鉴定的有19个种，研究得最多、最常见的是
幽门螺杆菌(H. pylori，Hp)。
（3）母畜感染：上呼吸道症状、肺炎、发热及菌血症；死胎 或流产；新生畜败血症及脑脊髓膜炎。
.
7
七 微生物学检查
1. 标本采集
采集粪便及剩余食物 ，立即送检，或将 标本接种于卡-布运 送培养基中送检；
对于高烧和脑膜炎者 ，于用药前抽取静 脉血或脑脊液，注 入布氏肉汤送检。
.
8
2. 细菌检验
（1）显微镜检查
普通培养基不生长，需补充血、血清、淀粉、活性炭等 。常用心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂等。
选择性培养基：改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉 素、两性霉素和头孢磺啶。
血平板：经3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶
血环，革兰氏染色浅。
.
14
三 生化反应
生化反应不活泼，氧化酶和触酶阳性，不分解任何糖类 ，脲酶强阳性，可与本属其他细菌区别，也是检测HP 的快速诊断方法之一。
革兰氏阴性杆菌微生物学检验的标准操作程序
革兰氏阴性杆菌微生物学检验的标准操作程序
1 检验目的
做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2 原理
使用梅里埃ATB微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程。
3 标本要求
（1）标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。
（2）标本采集：见标本采集手册
（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。
（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。
4 容器和添加剂类型
均使用灭菌器皿盛放标本
5 试剂
（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、中国蓝平板、SS平板、柯玛嘉平板、相关生化试剂等。
6仪器设备：
（1）接种针、接种环、酒精灯
（2）梅里埃ATB药敏鉴定仪
（3）显微镜、SPX-150B型生化培养箱、超净工作台、台式离心机、天平
7 校准程序
(送市计量质量检测研究所校准)
8 操作步骤
9质量控制：
参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动10患者检验结果的可报告区间
细菌鉴定到种或属，同时报告药物敏感试验结果。
11 临床意义：
为医生提供感染的病原学诊断。