离体蛙心灌流及药物对心脏的影响

离体蛙心灌流及药物对心脏的影响
一、实验目的：
1、学习蛙心灌流方法。

2、了解离体心脏的自律性与环境中各因素变化的关系，观察理化因素
对蛙心活动的影响。

二、实验对象：蟾蜍
三、实验方法：
1、标本制备：
取蟾蜍→破坏CNS→固定→剪皮→打开胸腔（暴露胸骨柄，用镊子把胸骨柄捏起来，用粗剪刀剪断，沿胸骨将锁骨剪断，去除多余的骨头，注意勿将心脏剪破）→用眼科剪小心剪开心包膜→暴露心脏→在主动脉叉下方穿一根丝线备用→用蛙心夹在心舒张期夹住心尖部→在左侧主动脉分叉处2-3mm处剪一剪口→将盛有一定量任氏液的蛙心插管插入到主动脉球→将插入到主动脉球的套管稍向后退，再向左下逆时针旋转90°，插入心室→结扎固定→剪断血管和背面静脉窦以下组织，游离标本
2、连接装置：
蛙心管内保持2ml灌流液，用木夹夹住蛙心套管，蛙心夹的线与张力换能器相连，换能器与电脑的相应通道相连。

3、运行电脑：
打开电脑→Medlab→实验/常用生理实验→离体蛙心灌流
四、实验结果：
分别观察正常心脏活动曲线及加入不同溶液后的心脏活动曲线的变化。

曲线规律：心脏节律；
曲线疏密：心率
曲线基线：心室舒张最大程度
顺序观察项目药量心肌(率、力)变化
正常任氏液灌流正常
1 0.65%NaCl 灌流
1~2d
2 2% CaCl
2
3 1%KCl 1~2d
4 1:10000 NA 1~2d
5 1:100000 ACh 1~2d
6 3% LH 1~2d
2.5% NaHCO3 2~4d
7 1:100000 Isop 1ml +任氏液1ml
8 1:1000 prop 0.2ml+任氏液1.8ml
出现效应后，抽出一半液体后
立即加入Isop1ml
五、实验讨论：
心肌细胞兴奋时，通过兴奋-收缩耦联机制，触发心肌细胞收缩。

心肌收缩的特点是：1.对细胞外Ca2+浓度的依赖性高；2.“全或无”式收缩
1、 0.65%NaCl灌流与正常任氏液相比[Ca2+]↓→ Ca2+内流↓→兴奋-收缩耦联
↓→收缩力↓
（1～2滴）→[Ca2+]↑→Ca2+内流↑→兴奋-收缩耦联↑→收缩力↑2、2%CaCl
2
舒张期Ca2+与肌钙蛋白不完全解离，产生Ca2+强直，基线上移。

3、1%KCl（1滴）→AP平台期缩短 Ca2+内流↓；竞争性结合肌钙蛋白→兴奋-收
缩耦联↓→收缩力↓
受体结合→激活腺苷酸环化酶→细胞内cAMP↑→激活蛋白激酶4、NA与心肌β
1
和细胞内蛋白质的磷酸化过程→心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率增加→Ca2+内流↑肌浆网释放Ca2+↑→兴奋-收缩耦联↑→收缩力↑
离体： NA→（+）β
-R→HR↑；整体：BP↑→反射性HR↓
1
5、ACh→与心肌M受体结合→抑制腺苷酸环化酶→细胞内cAMP↓→抑制蛋白激酶
和细胞内蛋白质的磷酸化过程→心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率减少→Ca2+内流↓肌浆网释放Ca2+↓→兴奋-收缩耦联↓→收缩力↓
ACh→与心肌M受体结合→K+外流↑, Ca2+内流↓→细胞内[Ca2+]↓→兴奋-收缩耦联↓→收缩力↓
6、3%乳酸→H+与Ca2+竞争肌钙蛋白，Ca2+不能与肌钙蛋白结合→收缩力↓
→中和H+，Ca2+与肌钙蛋白结合增加，收缩力恢复。

2.5％NaHCO
3
7、Isop1ml +任氏液1ml与心肌β
受体结合→激活腺苷酸环化酶→细胞内cAMP
1
↑→激活蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程→心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率增加→Ca2+内流↑肌浆网释放Ca2+↑→兴奋-收缩耦联↑→收缩力↑Prop0.2ml+任氏液1.8ml抑制腺苷酸环化酶→细胞内cAMP↓→抑制蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程→心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率减少→Ca2+内流↓肌浆网释放Ca2+↓→兴奋-收缩耦联↓→收缩力↓
出现效应后，抽出一半液体后立即加入Isop，与Prop竞争性拮抗→收缩力↑但较前次幅度小。

六、实验结论：
1、心肌的生理功能依靠内环境稳态；
2、各种因素对心肌收缩力的影响主要通过Ca2+实现；
3、K+、H+、ACh、prop可使心肌收缩力降低；
4、Ca2+、NA、Isop、OH-可使心收缩力增强；
5、Prop可竞争性拮抗Isop的作用。

【注意事项】
1、套管插入动脉球后，应及时进行换液，分别用两个吸管专管专用，防止蛙心
套管下端被凝血块堵塞。

2、插入到心室内后，若没有血液喷出，可将蛙心套管稍向后退，因为有时插入
太深抵在心室壁上也会看不到现象。

3、结扎固定时，一定要扎牢，尤其第一道线，扎好以后再在侧面的侧钩上结扎
固定一下，防止滑脱。

4、游离标本时注意切勿损伤静脉窦，尽量远离心脏剪。

5、连接时，换能器的连线应与插管中轴在同一直线上，即与地面垂直。

6、做的过程中，随时用面纸吸去渗出的任氏液，以防滴在换能器上，损坏换能
器。

7、每次实验观察前，应使蛙心插管内的液面保持在同一高度。

8、药物作用明显后，应立即换洗，直至心脏曲线恢复正常，再进行下一项实验。