土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究

土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究

摘要对土茯苓中白藜芦醇的提取进行了研究。通过单因素和正交试验，以白藜芦醇的提取量为指标，高效液相法测含量，优选提取工艺。结果表明：在70℃下，用12倍量95％乙醇回流提取2h 效果最佳，其中提取温度和乙醇浓度为主要影响因素。

关键词土茯苓；白藜芦醇；提取；高效液相法

中图分类号 o658 文献标识码a文章编号1007-5739（2008）19-0013-02

白藜芦醇（resveratrol，简称res），又名芪三酚，是植物体中产生的一种次生代谢产物二苯乙烯类多酚物质。近年研究发现，白藜芦醇具有诱导肿瘤细胞凋亡、抗菌、抗心肌炎以及免疫调节等多种生物学活性和药理作用[1]。目前已至少在12科31属的72种植物中发现白藜芦醇，其中研究较多的是葡萄和虎杖等[2，3]。也有一些关于百合科植物菝葜中白藜芦醇存在的研究报道[4]，但对其中白藜芦醇具体提取方法研究的报道很少。本试验旨在开发利用百合科植物光叶菝葜的干燥根茎，即土茯苓，对土茯苓中白藜芦醇的提取条件及含量测定进行初步研究。

1材料与方法

1.1试验材料

药品与试剂：土茯苓粗粉（60目筛）、白藜芦醇标准品（辽宁省药品检验所）。仪器与设备：高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、紫外分析仪、数显恒温水浴锅。

1.2白藜芦醇含量的测定

1.2.1色谱条件。色谱柱：diamonsil c18（250.0mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶水（37∶63）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长306nm；进样量：20μl[5]。

1.2.2对照样品溶液的制备。精确称取白藜芦醇10.0mg置50ml 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度、摇匀，即得白藜芦醇的对照样品储备液。

1.2.3标准曲线的制备。精密吸取白藜芦醇对照样品储备液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，备用。分别吸取上述系列溶液各20μl，按上述色谱条件测得峰面积进行分析。结果表明：白藜芦醇浓度（x）在0.02～

0.10mg/ml范围内，与峰面积（y）呈良好线性关系，回归方程为：y=5.384 7×104x-71.08，r2=0.999 6。

1.2.4供试样品溶液的制备及测定[6-8]。土茯苓预先干燥粉碎过60目筛，称取1g，按试验安排提取，提取液经减压浓缩后，用甲醇定容至10ml，用0.45μm微孔滤膜过滤后即为供试样品溶液。吸取供试样品溶液20μl，按上述色谱条件测峰面积。

1.3白藜芦醇提取条件优化

1.3.1单因素试验。根据白藜芦醇的性质与预试验结果，选择提取温度（a）、乙醇浓度（b）、提取时间（c）、料液比（d）为参考因素，每个因素各取3水平，以白藜芦醇的含量为评价指标研究各因素对提取的影响。

1.3.2正交试验工艺优选。根据单因素试验的结论，按表1设计因素水平，选用l9（34）正交设计表安排正交试验。

2结果与分析

2.1检测结果

标准样品用分光光度计在199～600nm波长下扫描，得到白藜芦醇在波长306nm处有最大吸收峰。

以306nm为吸收波长，标准样品经过高效液相色谱检测，在检出时间为17.69min时有吸收峰出现，以此为参照测定单因素试验和正交试验中白藜芦醇的含量大小。

2.2单因素试验

2.2.1提取温度对提取的影响。由图1可以看出，温度升高可提高白藜芦醇的提取率，但由于白藜芦醇有热敏性，当温度达到90℃时，提取率下降。综合考虑，70℃为白藜芦醇提取的适宜温度。2.2.2乙醇浓度对提取的影响。由图2可以看出，乙醇浓度对白藜芦醇的提取有一定影响，这是由于白藜芦醇易溶于乙醇不易溶于水，所以提取率会随乙醇浓度增大而提高，但在乙醇浓度达80%后，提取率没有增长趋势，故80％为乙醇的有效提取浓度。

2.2.3提取时间对提取的影响。由图3可以看出，提取时间为1h 时白藜芦醇提取率很低，提取时间在1～3h提取率增长明显。在提取时间大于3h后，提取液中白藜芦醇的含量变化甚微，故3h为最佳提取时间。

2.2.4料液比对提取的影响。由图4可以看出，在料液比为1∶

12之后，提取量变化较小且有下降趋势，故料液比控制在1∶12为宜。

2.3正交试验

以白藜芦醇提取量为考察指标，正交试验数据见表2和表3。

根据极差r的大小，可判断出影响白藜芦醇提取率的因素顺序为a＞b＞c=d，即提取温度＞乙醇浓度＞提取时间=料液比。直观分析可知，最佳提取工艺为a2b3c1d2，即温度70℃，95％的乙醇为提取溶剂，提取时间为2h，料液比为1∶12。由方差分析也可知，提取温度对提取的影响最为显著，其次为乙醇浓度。

3结论

本试验结合白藜芦醇的理化性质，以安全无毒的乙醇作为提取剂，通过单因素及正交试验对提取温度、乙醇浓度、提取时间及料液比等因素对提取的影响进行了考察，并对提取工艺进行了优化。得到的最优条件为：温度70℃，95％的乙醇为提取溶剂，料液比1∶12，提取时间2h。

4参考文献

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[2] 姚宝书，齐崴.从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的研究[j].天津轻工业学院学报，1999（4）：8-15．

[3] 张敏，曹庸，于华忠，等.虎杖白藜芦醇提取工艺的初步研究[j].林产化工通讯，2004，38（3）：6-9．

[4] 王光忠，徐淑珍，于国平，等.不同产地菝葜中白藜芦醇的含量比较[j].中国中药杂志，2006，31（13）：1054.

[5] 曹庸，于华忠，张敏，等.hplc法测定虎仗白藜芦醇的含量及其稳定性研究[j].林产化学与工业，2004，24（2）：61-64. [6] 孟昭仁，奚洪民，刘进帮.白藜芦醇的提取及分析方法研究进展[j].化学世界，2002（16）：511-513．

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