土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究
微生物转化虎杖苷粗提物制备白藜芦醇的工艺研究的开题报告
微生物转化虎杖苷粗提物制备白藜芦醇的工艺研究的开题报告一、选题背景白藜芦醇是一种天然的多酚类化合物，拥有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
近年来，随着人们对天然药物的需求不断增加，白藜芦醇逐渐成为研究的热点。
目前，白藜芦醇的制备方法主要分为化学合成和从天然植物中提取两类。
化学合成虽然可以规模化生产，但存在工艺复杂、成本高、环境污染等缺点。
而从天然植物中提取白藜芦醇，则需要大量原料，且存在着提取效率低、纯度不高等问题。
因此，开发新型的白藜芦醇制备工艺，具有很好的应用价值。
本次选题旨在利用微生物对虎杖苷粗提物进行转化，制备高纯度白藜芦醇。
二、选题意义1. 微生物转化制备白藜芦醇与传统提取技术相比具有简单、环保、高效等优点；2. 微生物转化可以利用一些不易提取的活性成分，并且可以适用于各种原材料，具有很好的可操作性和可控性；3. 白藜芦醇具有多种生物活性，可以用于食品、保健品、医药等领域；4. 开发新型的白藜芦醇制备工艺，对于提高生产效率、节约成本具有很好的价值。
三、研究内容1. 通过筛选，选定一种适宜转化虎杖苷粗提物制备白藜芦醇的微生物；2. 优化微生物转化的反应条件，探究菌种种类、培养基、反应时间、温度、pH等因素对反应效率的影响；3. 利用高效液相色谱技术对反应产物进行分离和纯化，分析其结构和纯度，并进行定量分析；4. 对制备的白藜芦醇进行生物活性评价。
四、研究方法1. 通过文献综述、实验筛选等方式，选定适宜转化虎杖苷粗提物制备白藜芦醇的微生物，包括细菌、真菌、酵母等；2. 对微生物转化的反应条件进行优化，包括培养条件、转化反应、提取及纯化等步骤的优化；3. 利用高效液相色谱技术对转化反应产物进行分离、纯化、定量和结构分析；4. 对制备的白藜芦醇进行单体/多体的生物活性评价。
五、预期结果1. 筛选出一种适宜转化虎杖苷粗提物制备白藜芦醇的微生物；2. 优化反应条件，探究不同因素对反应效率的影响；3. 制备出高纯度的白藜芦醇，并进行结构分析和定量分析；4. 对制备的白藜芦醇进行生物活性评价。
一种土茯苓提取物的制备方法及其制备的土茯苓提取物和用途[发明专利]
![一种土茯苓提取物的制备方法及其制备的土茯苓提取物和用途[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/2af2b8807e21af45b207a89b.png)
专利名称：一种土茯苓提取物的制备方法及其制备的土茯苓提取物和用途
专利类型：发明专利
发明人：陈金印,万春鹏,陈楚英
申请号：CN201510002606.3
申请日：20150105
公开号：CN104585306A
公开日：
20150506
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种土茯苓提取物的制备方法，包括超声波辅助乙醇提取土茯苓。
本发明还提供所述制备方法得到土茯苓提取物，以及该土茯苓提取物在制备抑制柑橘采后病原菌的药物组合物中的用途。
土茯苓提取物对柑橘采后病原菌具有较强的抑制作用，用于柑橘保鲜后无化学残留，对人体无健康危害，对环境无污染，不易产生抗药性。
申请人：江西农业大学
地址：330045 江西省南昌市昌北经开区志敏大道1101号
国籍：CN
代理机构：南昌新天下专利商标代理有限公司
代理人：施秀瑾
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白藜芦醇提取工艺的研究
197※工艺技术食品科学2007, Vol. 28, No. 12收稿日期：2006-10-31 *通讯作者基金项目：陕西科技大学自然科学基金项目(ZX04-20)作者简介：陈易彬(1955-)，男，副教授，研究方向为天然物的纯化与修饰。
白藜芦醇提取工艺的研究陈易彬， 陈 奎*(陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西 西安 710021)摘 要：本研究探讨了虎杖中白藜芦醇的提取工艺和稳定性。
在虎杖中，白藜芦醇对光、干热、湿热和氧化剂均敏感；通过实验得出回流、超声、固定床连续提取的提取率分别0.201%、0.423%、0.513%；同时利用正交设计得出固定床连续提取的最佳工艺为溶剂为30%乙醇，固定床连续提取速度为8ml/min·kg，浸泡时间为12h，溶剂用量为8倍量。
关键词：虎杖；白藜芦醇；提取Study on Extraction of ResveratrolCHEN Yi-bin，CHEN Kui*(College of Life Sciences and Engineering, Shaanxi University of Science and Technology, Xi'an 712081, China)Abstract ：The extraction processing and stability of the resveratrol from Polygonum cuspidatum were studied in this research.The resveratrol is unstable against light, heat, wet-heating and oxidant. On the base of experimental analysis, the extraction rate of reflux extraction, continuous fixed bed extraction and ultrasonic extraction were 0.201%, 0.423%, 0.513%. And continuous fixed bed extraction is optimized by orthogonal test method. The optimum conditions were obtained as follows:the concentration of the ethanol 30%, extracting speed 8 ml/min ·kg, immersion time 12 h and the solvent 9 times of the m a t e r i a l .Key words ：Polygonum cuspidatum ；resveratrol ；extraction 中图分类号：O658 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)12-0197-03白藜芦醇是活性较强的多酚类化合物，是一种重要的植物抗毒素，根据目前的报道，已经证明白藜芦醇对人体有如下的保健作用：(1)能降低血脂及冠心病的发病率，对心血管系统起特殊保护作用；(2)调节低密度脂蛋白(LDL)的比例；(3)减少血小板凝集等作用；(4)延缓衰老；(5)有望成为人类预防癌症的一种天然药物。
白藜芦醇提取工艺的研究
白藜芦醇提取工艺的研究报告研究目标本研究的目标是探索高效、可行的白藜芦醇提取工艺，以充分利用这种天然活性物质的药用价值。
具体而言，研究目标包括：1.确定最佳的提取溶剂和提取条件；2.优化提取工艺，使得白藜芦醇的提取效率和纯度达到最大化；3.研究不同原料和处理方法对白藜芦醇提取的影响；4.提出可行的工业化生产方案。
研究方法原料准备采用白藜芦芦苇为原料，在不同地理位置和季节采集多批样品，进行全面的比较研究。
提取溶剂选择在实验室中，使用多种溶剂进行初步提取试验，例如乙醇、甲醇、水等，通过比较提取效率和纯度，确定最佳的提取溶剂。
提取工艺优化基于初步试验结果，通过响应面试验（例如Box-Behnken设计）进行提取工艺的优化。
考虑到原料的特性，包括颗粒度、温度、提取时间、提取剂浓度等参数进行优化实验。
提取效果分析利用高效液相色谱法（HPLC）对提取液进行分析，测定白藜芦醇的含量和纯度，并进行各种参数的统计分析。
工业化生产方案在实验室最佳条件下，进行中试和大规模试验，验证提取工艺的可行性，并确定生产线的工艺参数、设备要求、工艺流程等。
研究发现提取溶剂选择乙醇为最佳的提取溶剂，其提取效率和纯度均较高。
提取工艺优化通过Box-Behnken设计的响应面试验，优化得到最佳条件：乙醇浓度60%，提取时间2小时，温度40℃，颗粒度为40目。
在这些条件下，白藜芦醇的提取效率可达到最大。
提取效果分析根据HPLC分析结果，白藜芦醇的纯度达到了98%，提取效率达到了86%。
这表明优化的提取工艺在白藜芦醇的提取中取得了良好的成果。
工业化生产方案在实验室最佳条件下进行中试和大规模试验，结果显示提取工艺在不同规模的生产中均具有可行性。
根据中试和大规模试验的实验数据，确定了工业化生产线的工艺参数、设备要求和工艺流程。
结论本研究通过对白藜芦醇提取工艺的深入研究，找到了最佳的提取条件，并实现了高效提取和高纯度的白藜芦醇产量。
通过中试和大规模试验验证了工艺的可行性，并确定了工业化生产方案。
中药土茯苓的现代研究进展
中药土茯苓的现代研究进展★程双 彭财英 潘玲玲 卢健 陈圣加 ［摘要］土茯苓，用药历史悠久,为中医临床常用药，化学成分、药理作用及临床应用进行了诸多报道，然而，入研究土茯苓提供参考，现对其化学成分、［关键词］土茯苓；化学成分；药理作用；临床应用中图分类号：R284.1；R285.5 文献标识码：A土茯苓（Smilax glabra Roxb.）为百合科植物光叶菝葜的干燥根状茎，性味甘、淡、平，归肝、胃、脾经，别称刺猪苓、过山龙、仙余粮等。
始载于梁·陶弘景《本草经集注》，又名禹余粮。
《本草从新》中描述其形态根大如鸡子,连缀而生,俗名冷饭团。
《中药大辞典》中记载，多生长于山坡、荒山及林边的半阴地，资源丰富，广泛分布于我国安徽、浙江、甘肃、江西等省。
具有解毒除湿，通利关节的功效，用于湿热淋浊，带下，痈肿，瘰疬，疥癣，梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛，筋骨疼痛等证［1］。
土茯苓不仅作为中药达到药用价值，也作为食材发挥食疗保健作用，如药膳龟苓膏具滋养身体和养颜作用，因其富含淀粉，可用来酿酒或制糕点。
由于其功效显著及药食两用的特点，近年来，越来越多的学者对土茯苓进行研究，有关土茯苓的化学成分、药理作用及临床应用方面进行了不断地报道。
然分离并鉴定大约190个化合物，包括黄酮、苯丙素、甾体、有机酸、挥发油类等。
1.1 黄酮类 土茯苓植物中黄酮类成分主要为黄酮醇类、二氢黄酮（醇）类、异黄酮类和黄烷醇类等，而以二氢黄酮类成分相对含量最高，其中代表成分落新妇苷含量为1~2 %左右，占总黄酮的比例最大［2］。
因此，2015年版的“中国药典”以落新妇苷为含量测定的指标成分，测定其质量分数不少于0.45 %［3］。
目前报道黄酮类化合物共计29个，名称及相关信息见表1。
基金项目：国家自然科学基金项目（81760721,81760703）；江西省自然科学基金项目（20161BAB205219,20142BCB23023）。
土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究
３ ￣ ； 测波 长 ３ ６ ｍ； 样量 ：０ 嘲 ０（ 检 ２ ０ｎ 进 ２ Ｌ 。
１２２ 对 照样 品溶 液 的制 备 。 ．． 精确 称 取 白藜 芦 醇 １ ．ｍｇ置 ０Ｏ
２２１ 提 取 温度 对 提 取 的影 响 。 ．． 由图 １可 以看 出 ， 温度 升 高 可 提 高 白藜 芦醇 的提取 率 ， 由于 白藜芦 醇 有热 敏 性 ， 但 当温
１２１ 色谱 条 件 。 谱 柱 ： ａ ｎｉＣ１ ２ ００ ． ． 色 Ｄｉ ｍｏ ｓ ８ ５ ．ｍｍｘ ． ｌ （ ４６ ｍｍ ， ５ ｍ） 流 动 相 ： 醇 ： （７： ） 流 速 ：．ｍＬ ｍｉ ； 温 ： ； 甲 水 ３ ６ ； ３ １Ｏ ／ ｎ 柱
定 单 因素 试验 和 正交 试验 中 自藜 芦醇 的含量 大小 。
标准 样 品用 分 光 光 度 计在 １ ９ ６ ０ ｍ 波 长 下扫 描 ， ９￣ ０ ｎ 得 到 白藜芦 醇在 波 长 ３ ６ ｍ 处 有最 大 吸收 峰 。 ０ｎ
以 ３ ６ ｍ 为吸 收 波 长 ， 准 样 品经 过 高 效 液 相 色谱 检 ０ｎ 标 测， 在检 出 时 间为 １ ．９ ｎ时 有吸 收峰 出现 ， 此 为参 照测 ７６ｇ ｍＬ范 围 内 ， 峰 面 积 （ 呈 良 好 ｘ） ． ０１ ／ ２ Ｏ 与 Ｙ）
线性 关 系 ， 回归方 程 为 ： ５３ ４７ １ ４ ７ ．８ Ｒ２ ０９ ９６ Ｙ＝ ． ｘ ０Ｘ一 １ ， ＝ ．９ 。 ８ ０
１ ． 供 试样 品溶 液 的制 备及 测 定 。 茯苓 预 先 干燥 粉 ．４ ２ 土
药 品 与 试 剂 ： 茯 苓 粗 粉 （Ｏ目筛 ） 白藜 芦 醇 标 准 品 土 ６ 、
（ 宁省 药 品 检 验所 ） 仪 器 与 设 备 ： 效 液 相 色 谱 仪 、 转 辽 。 高 旋 蒸发 仪 、 外分 析仪 、 显 恒温 水浴 锅 。 紫 数
白藜芦醇的提取工艺
白藜芦醇的提取工艺专业:化学工程与技术学号:2010001220班级:生研1004班姓名:刘珊珊摘要:从虎杖等植物中提取的白藜芦醇具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、保护肝脏、保护心血管等功能，鉴于白藜芦醇的多种重要的应用价值，本文综述了白藜芦醇的提取方法，其中包括有机溶剂提取法、超声波及微波辅助萃取法等。
通过对各种方法的综合比较，找出了最佳优化条件。
关键词：白藜芦醇；提取；正交实验1.1白藜芦醇的理化性质白藜芦醇分子式是C14H12O3，相对分子质量为228.25，化学名称为3，4，5’—三羟基—1，2—二苯乙烯，是一种蒽醌萜类化合物，熔点为256~257℃。
它主要存在于葡萄、虎杖、花生、朝鲜槐等植物中，尤其在种皮中含量较高[1]。
白藜芦醇易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂中。
其存在形式主要有四种，分别是顺式-白藜芦醇、反式-白藜芦醇、反式-白藜芦醇糖苷及顺式-白藜芦醇糖苷，但只有反式异构体具有生物活性[2]。
图1反式白藜芦醇的结构式白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用。
抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。
它既是肿瘤疾病的化学预防剂，也是对降低血小板聚集，预防、治疗动脉粥样硬化，心脑血管疾病的化学预防剂。
20世纪90年代，我国科技工作者对白藜芦醇的研究不断深入，并揭示其药理作用：抑制血小板非正常凝聚，预防心肌硬塞、脑栓塞，对缺氧心脏有保护作用，对烧伤或失血性休克引起的心输出量下降有效恢复，并能够扩张动脉血管及改善微循环。
1.2白藜芦醇的提取方法1.2.1溶剂提取法溶剂法是国内外最广泛应用的提取方法。
常用溶剂主要有水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等。
溶剂法对设备要求简单，产品得率较高，但缺点是成本高，杂质含量也高。
常见报道的溶剂法有三种：浸提法、渗漉法、回流法[3]。
白藜芦醇提取技术方案
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
一、喂送料系统---储料：
型式： 料斗 。 用途和要求：
批次性盛装提取原料，保证定量控制喂料器的供给。 – 起到缓冲作用，减轻喂料操作工人的劳动强度。
–
流程和操作：
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人工将粉碎好的物料批次性地加入到料斗中。 料斗中的提取原料连续、自动、均匀地进入定量控制喂料 器中。
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–
– – –
PLC电脑编程，实现程序控制。 配备在线检测仪，实现工艺参数（进料量、进液量、温度、 浓度等）的实时监控及自动化控制。 显示屏幕，直观显示整套工艺路线及各个电气运行状况。 电脑实时自动记录各个工艺参数实际运行值。 动力设备过载保护。 故障报警装置。 急停开关。 现场开关。
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
九、密封性能及材料
– – – –
全套设备密封连接，无泄漏，保证生产过程的安 全性。 静密封全部采用 硅橡胶 材料密封垫，动密封采 用公司特制机械密封。 整套设备可使用多种溶剂，包括水，以及甲醇、 乙醇等易燃易爆有机溶剂。 说明：可根据用户要求选择 聚四氟 材料，就可 使用各种有机溶剂，包括乙酸乙酯、石油醚等。
六、提取液浓缩系统---加热蒸发/冷凝回收：
–
蒸发浓缩工艺：
蒸发温度：≤60℃。 加热介质：
– –
热水循环加热，热水由蒸汽加热。 加热温度：≤ 80 ℃。 冷却塔循环水。 冷却水循环温度：依照夏天进水温度 25 ℃，回水 30 ℃计算。
冷却介质：
– –
–
流程和操作：
进液：液位自动控制进液。 排液：根据人工设定浓度值，自动控制浓缩液排出。说明：浓度值的 设定，需根据用户对浓缩液乙醇残留量的要求，现场取样检测，得出 合格浓缩液的浓度值。
高效液相法同时测定土茯苓中五种多酚成分
（ １ ． 江西农业大学食品科学与工程学院，江西省 高等学校天然产物开发与利用重点实验室，江西南昌 ３ ３ ０ ０ ４ ５ ） （ ２ ． 香港城市大学生物与化学系， 香港 ）
摘要 ：本文建立了土茯苓中五种 多酚成分：５ － ０ ． 咖啡酰莽草酸、落新妇苷 、花旗松素 、黄杞苷及 白藜芦醇的 高效液相 色谱分析
ＨＰ ＬＣ
Ｚ ＨＡ ＮＧ Ｑｉ ｎ ｇ － ｆ ｅ ｎ ｇ ， Ｚ ＨＥ ＮＧ Ｈａ ｎ － ｙ ａ ｎ ｇ ２ ， Ｓ ＨＡ Ｎ Ｇ ＧＵＡ Ｎ Ｘ ｉ ｎ ． ｃ ｈ ｅ ｎ ｇ ， Ｚ ＨＥ ＮＧ Ｇ ｕ ｏ ． ｄ ｏ ｎ ｇ
（ １ ． Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｅ ｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｎａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ａ ｎ ｄ Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｎａ ｎ ｃ ｈ ｎｇ ａ ３ ３ ０ ０ ４ ５ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） （ ２ ． Ｒ ｅ ｓ ｅ ｒ ａ ｃ ｈ Ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｆ ｏ ｒ Ｂ ｉ ｏ ａ ｃ ｉ ｆ ｖ ｅ ｒｏ Ｐ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ ， Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ， Ｃ ｉ ｔ ｙＵ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙｏ ｆ Ｈｏ ｎ ｇ Ｋｏ ｎ ｇ ， ８ ３ Ｔ ａ ｔ Ｃ ｈ ｅ ｅ Ａ ｖ ｅ ｎ ｕ ｅ ， Ｈｏ ｎ ｇ Ｋｏ ｎ ｇＳ Ａ Ｒ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
高效液相色谱法测定土茯苓中落新妇苷、阿魏酸、白藜芦醇含量
高效液相色谱法测定土茯苓中落新妇苷、阿魏酸、白藜芦醇含量孙兢喆【摘要】目的：确立土茯苓药材中阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇三种指标成分的含量。
方法：应用高效液相色谱法（HPLC）测定，色谱条件为ODS‐C18色谱柱（5μm ，150x4．6mm ），流动相为乙腈‐0．05％磷酸水溶液（18：82），流速1．0mL／min ，测定波长290 nm。
结果：阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇分别在0．02088～0．1044 ug、0．4284～2．142 ug、0．0432～0．216ug范围内线性关系良好；样品中阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇评价含量分别为0．05964 m g／g、0．01455 m g／g、0．01839 m g／g。
结论：该方法操作简单、准确，可作为土茯苓质量控制方法。
【期刊名称】《陕西中医》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】2页(P103-104)【关键词】落新妇/分析;阿魏酸/分析;土茯苓;色谱法 ,高压液相【作者】孙兢喆【作者单位】沈阳市第二中医医院沈阳110100【正文语种】中文【中图分类】R284土茯苓来源是百合科植物光叶菝葜(Smilax glabra Roxb)的干燥根茎，始载于《名医别录》名禹余粮，《本草纲目》始称土茯苓。
近年来有关土茯苓对心血管系统、利尿、抗炎、抑菌及解毒等方面药理作用研究较多[1]；临床中多用来治疗慢性胃炎、急性睾丸炎、滴虫性阴道炎、梅毒、咳喘、流行性腮腺炎和小儿疳积[2，3]；在成分测定方面，多以落新妇苷或白藜芦醇为指标建立相应高效液相色谱法(HPLC)检测方法[4-9]。
我国颁布的药典中，仅对土茯苓中的落新妇苷进行含量测定，并为优化土茯苓质量评价的方法，本试验采用HPLC法测定本药阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇的含量，现报道如下。
1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司)，超声波提取器(AS3120A，上海)，电热恒温鼓风干燥箱(GZX-GF40X45，上海)，电子天平(ALC-110.4，上海)。
土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究
土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究摘要对土茯苓中白藜芦醇的提取进行了研究。
通过单因素和正交试验，以白藜芦醇的提取量为指标，高效液相法测含量，优选提取工艺。
结果表明：在70℃下，用12倍量95％乙醇回流提取2h效果最佳，其中提取温度和乙醇浓度为主要影响因素。
关键词土茯苓；白藜芦醇；提取；高效液相法白藜芦醇（resveratrol，简称Res），又名芪三酚，是植物体中产生的一种次生代谢产物二苯乙烯类多酚物质。
近年研究发现，白藜芦醇具有诱导肿瘤细胞凋亡、抗菌、抗心肌炎以及免疫调节等多种生物学活性和药理作用[1]。
目前已至少在12科31属的72种植物中发现白藜芦醇，其中研究较多的是葡萄和虎杖等[2，3]。
也有一些关于百合科植物菝葜中白藜芦醇存在的研究报道[4]，但对其中白藜芦醇具体提取方法研究的报道很少。
本试验旨在开发利用百合科植物光叶菝葜的干燥根茎，即土茯苓，对土茯苓中白藜芦醇的提取条件及含量测定进行初步研究。
1材料与方法1.1试验材料药品与试剂：土茯苓粗粉（60目筛）、白藜芦醇标准品（辽宁省药品检验所）。
仪器与设备：高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、紫外分析仪、数显恒温水浴锅。
1.2白藜芦醇含量的测定1.2.1色谱条件。
色谱柱：Diamonsil C18（250.0mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶水（37∶63）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长306nm；进样量：20μL[5]。
1.2.2对照样品溶液的制备。
精确称取白藜芦醇10.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度、摇匀，即得白藜芦醇的对照样品储备液。
1.2.3标准曲线的制备。
精密吸取白藜芦醇对照样品储备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，备用。
分别吸取上述系列溶液各20μL，按上述色谱条件测得峰面积进行分析。
结果表明：白藜芦醇浓度（X）在0.02～0.10mg/mL范围内，与峰面积（Y）呈良好线性关系，回归方程为：Y=5.384 7×104X-71.08，R2=0.999 6。
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土茯苓中白藜芦醇提取工艺的研究
摘要对土茯苓中白藜芦醇的提取进行了研究。
通过单因素和正交试验，以白藜芦醇的提取量为指标，高效液相法测含量，优选提取工艺。
结果表明：在70℃下，用12倍量95％乙醇回流提取2h 效果最佳，其中提取温度和乙醇浓度为主要影响因素。
关键词土茯苓；白藜芦醇；提取；高效液相法
中图分类号 o658 文献标识码a文章编号1007-5739（2008）19-0013-02
白藜芦醇（resveratrol，简称res），又名芪三酚，是植物体中产生的一种次生代谢产物二苯乙烯类多酚物质。
近年研究发现，白藜芦醇具有诱导肿瘤细胞凋亡、抗菌、抗心肌炎以及免疫调节等多种生物学活性和药理作用[1]。
目前已至少在12科31属的72种植物中发现白藜芦醇，其中研究较多的是葡萄和虎杖等[2，3]。
也有一些关于百合科植物菝葜中白藜芦醇存在的研究报道[4]，但对其中白藜芦醇具体提取方法研究的报道很少。
本试验旨在开发利用百合科植物光叶菝葜的干燥根茎，即土茯苓，对土茯苓中白藜芦醇的提取条件及含量测定进行初步研究。
1材料与方法
1.1试验材料
药品与试剂：土茯苓粗粉（60目筛）、白藜芦醇标准品（辽宁省药品检验所）。
仪器与设备：高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、紫外分析仪、数显恒温水浴锅。
1.2白藜芦醇含量的测定
1.2.1色谱条件。
色谱柱：diamonsil c18（250.0mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶水（37∶63）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长306nm；进样量：20μl[5]。
1.2.2对照样品溶液的制备。
精确称取白藜芦醇10.0mg置50ml 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度、摇匀，即得白藜芦醇的对照样品储备液。
1.2.3标准曲线的制备。
精密吸取白藜芦醇对照样品储备液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，备用。
分别吸取上述系列溶液各20μl，按上述色谱条件测得峰面积进行分析。
结果表明：白藜芦醇浓度（x）在0.02～
0.10mg/ml范围内，与峰面积（y）呈良好线性关系，回归方程为：y=5.384 7×104x-71.08，r2=0.999 6。
1.2.4供试样品溶液的制备及测定[6-8]。
土茯苓预先干燥粉碎过60目筛，称取1g，按试验安排提取，提取液经减压浓缩后，用甲醇定容至10ml，用0.45μm微孔滤膜过滤后即为供试样品溶液。
吸取供试样品溶液20μl，按上述色谱条件测峰面积。
1.3白藜芦醇提取条件优化
1.3.1单因素试验。
根据白藜芦醇的性质与预试验结果，选择提取温度（a）、乙醇浓度（b）、提取时间（c）、料液比（d）为参考因素，每个因素各取3水平，以白藜芦醇的含量为评价指标研究各因素对提取的影响。
1.3.2正交试验工艺优选。
根据单因素试验的结论，按表1设计因素水平，选用l9（34）正交设计表安排正交试验。
2结果与分析
2.1检测结果
标准样品用分光光度计在199～600nm波长下扫描，得到白藜芦醇在波长306nm处有最大吸收峰。
以306nm为吸收波长，标准样品经过高效液相色谱检测，在检出时间为17.69min时有吸收峰出现，以此为参照测定单因素试验和正交试验中白藜芦醇的含量大小。
2.2单因素试验
2.2.1提取温度对提取的影响。
由图1可以看出，温度升高可提高白藜芦醇的提取率，但由于白藜芦醇有热敏性，当温度达到90℃时，提取率下降。
综合考虑，70℃为白藜芦醇提取的适宜温度。
2.2.2乙醇浓度对提取的影响。
由图2可以看出，乙醇浓度对白藜芦醇的提取有一定影响，这是由于白藜芦醇易溶于乙醇不易溶于水，所以提取率会随乙醇浓度增大而提高，但在乙醇浓度达80%后，提取率没有增长趋势，故80％为乙醇的有效提取浓度。
2.2.3提取时间对提取的影响。
由图3可以看出，提取时间为1h 时白藜芦醇提取率很低，提取时间在1～3h提取率增长明显。
在提取时间大于3h后，提取液中白藜芦醇的含量变化甚微，故3h为最佳提取时间。
2.2.4料液比对提取的影响。
由图4可以看出，在料液比为1∶
12之后，提取量变化较小且有下降趋势，故料液比控制在1∶12为宜。
2.3正交试验
以白藜芦醇提取量为考察指标，正交试验数据见表2和表3。
根据极差r的大小，可判断出影响白藜芦醇提取率的因素顺序为a＞b＞c=d，即提取温度＞乙醇浓度＞提取时间=料液比。
直观分析可知，最佳提取工艺为a2b3c1d2，即温度70℃，95％的乙醇为提取溶剂，提取时间为2h，料液比为1∶12。
由方差分析也可知，提取温度对提取的影响最为显著，其次为乙醇浓度。
3结论
本试验结合白藜芦醇的理化性质，以安全无毒的乙醇作为提取剂，通过单因素及正交试验对提取温度、乙醇浓度、提取时间及料液比等因素对提取的影响进行了考察，并对提取工艺进行了优化。
得到的最优条件为：温度70℃，95％的乙醇为提取溶剂，料液比1∶12，提取时间2h。
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