实验3 根系活力的测定(TTC法)
实验三种子和根系生活力的测定
实验三 种子和根系生活力的测定一、种子活力的测定种子是裸子和被植物的延存器官，种子质量和活力是农林业生产的基础。
（一）氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】TTC（2，3，5－氯化三苯基四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色 三苯基甲月朁（TTF）。
具有活力的组织和细胞在呼吸作用中，脱氢酶催化底物氧化脱氢产 生NADH、NADPH 等还原性物质，当TTC渗入组织或细胞时呼吸过程产生的还原物质可将 其还原成TTF（红色），组织或细胞被染成红色。
死细胞无呼吸，不发生这样的氧化还原反 应。
应用这一原理，可根据组织或细胞染色情况来检测种子、花粉根系等的活力。
应用TTC的水溶液浸泡种子，使之渗入种胚的细胞内，如果种胚具有生命力，其中的脱 氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为三苯基甲月朁 而呈红色， 如果种胚死亡便不能 染色，种胚生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色，因此，可以根据种胚染 色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生命力。
【仪器设备】1．小烧杯；2．刀片；3．镊子；4．温箱；5．培养皿；6． 棕色试剂瓶；7． 解剖针；8． pH试纸。
【试剂】0.1 %TTC溶液：0.1 g TTC溶于100 mL pH 7.0的磷酸缓冲液中。
【材料】 贮藏不同时间种子和死种子。
【方法步骤】1． 将新种子、陈种子或死种子，用温水（约30 ℃）浸泡2～6 h，使种子充分吸胀。
2． 随机取种子两份，每份50粒。
豆类种子要去皮，然后沿种胚中央准确切开，取其一 半备用。
3． 将准备好的种子分别放在培养皿中，加入TTC溶液，以浸没种子为度。
4． 将种子置于30 ℃～35 ℃的恒温箱中保温30 min染色。
也可在20 ℃左右的室温下 放置40～60 min。
5． 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。
倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗 2～3次，逐个观察种胚被染色的情况，判断种子有无生活力。
凡种胚全部或大部分被染成红 色的即为具有生命力的种子。
ttc法测定根系活力实验报告
ttc法测定根系活力实验报告实验目的：本实验旨在通过使用TTC法测定根系活力，探究不同处理对植物根系活力的影响，从而了解植物根系的生理状态和适应能力。
实验材料和方法：材料：1. 小麦种子2. TTC（三唑化合物）3. 无菌蒸馏水4. 无菌培养皿5. 无菌培养基方法：1. 将小麦种子用无菌蒸馏水浸泡一夜，使其吸水膨胀。
2. 将无菌培养皿分为两组，每组放置10颗小麦种子。
3. 在一组培养皿中加入无菌蒸馏水作为对照组，另一组培养皿中加入含有TTC 的无菌培养基。
4. 将培养皿放置在恒温箱中，温度设定为适宜小麦生长的温度。
5. 观察培养皿中小麦种子的发芽情况，并记录下发芽数。
6. 在培养结束后，取出小麦种子，用无菌蒸馏水洗净表面的TTC。
7. 将小麦种子放入95%乙醇中煮沸5分钟，使其脱色。
8. 取出小麦种子，用无菌蒸馏水冲洗干净，然后用滤纸吸干水分。
9. 将小麦种子放入无菌培养皿中，加入无菌蒸馏水，使其吸水膨胀。
10. 用显微镜观察小麦种子根系的颜色变化，并记录下来。
实验结果：通过实验观察，发现加入TTC的培养皿中的小麦种子发芽数量明显较少，而对照组的发芽数量较多。
在观察小麦种子根系颜色时，发现加入TTC的培养皿中的小麦种子根系呈现红色，而对照组的小麦种子根系呈现白色。
实验分析：TTC法通过检测细胞内的还原酶活性来间接反映细胞的活力。
在本实验中，加入TTC的培养皿中的小麦种子根系发芽数量较少，根系呈现红色，说明这些小麦种子的根系活力较低。
而对照组中的小麦种子根系发芽数量较多，根系呈现白色，说明这些小麦种子的根系活力较高。
根系活力的差异可能是由于TTC对细胞内酶的影响。
TTC在细胞内被还原为可溶性产物，产生红色的沉淀物。
这种还原反应需要细胞内的还原酶参与，而还原酶的活性与细胞的代谢活力密切相关。
因此，加入TTC的培养皿中小麦种子的根系活力较低，表明这些小麦种子的代谢活力较弱。
结论：通过TTC法测定根系活力的实验，我们得出了加入TTC的培养皿中小麦种子的根系活力较低，而对照组的小麦种子根系活力较高的结论。
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告一、引言根系是植物的重要组成部分，对植物的生长和发育起着重要的影响。
因此，准确测定根系活力对于研究和监测植物生长状态、生理代谢以及适应环境的能力具有重要意义。
TTC法是一种常用且经典的根系活力测定方法，可以通过测定细胞色素酶的活性来反映细胞线粒体的代谢能力。
本综述将详细介绍TTC法的原理、实验步骤、结果分析以及存在的局限性，旨在为相关科研人员提供参考和指导。
二、原理TTC法通过将三氯化四氯化三苯巴比妥酸（TTC）还原为有色产物，间接测定细胞线粒体氧化还原酶活性，从而反映细胞的代谢能力。
在活力高的细胞中，细胞色素酶能将TTC迅速还原为甲基砌和氯化苯胺，溶液呈现出红色。
而在活力低或死亡的细胞中，由于细胞色素酶活性降低或丧失，不能将TTC完全还原，溶液呈现淡红色或无色。
三、实验步骤1. 实验前准备：准备好所需材料和试剂，如TTC、缓冲液、植物根系样品等。
2. 根系样品处理：将根系样品取出，并进行清洗和去皮处理。
3. 根系活力测定：将处理后的根系样品放入含有TTC和缓冲液的培养皿中，然后放入恒温培养箱中，在适宜的温度下进行静置培养。
4. 反应终止：在适当时间后，将培养皿取出，加入适量酸性水溶液终止反应。
5. 读取吸光度：使用分光光度计读取反应溶液的吸光度值，得到各组的吸光度数据。
6. 结果分析：根据吸光度数据，计算出样品的根系活力值。
四、结果分析通过TTC法测定的根系活力实验结果，可以从吸光度值得出根系活力的信息。
活力高的根系样品，其吸光度值较高，溶液呈现出深红色；活力低或死亡的根系样品，吸光度值较低，溶液呈现淡红色或无色。
同时，根据根系活力值的大小可以进行不同样品之间的比较，从而判断不同处理或条件对根系活力的影响。
五、存在的局限性尽管TTC法是一种常用的根系活力测定方法，但其也存在一些局限性。
首先，TTC法只能反映细胞线粒体氧化还原酶活性，对其他代谢能力不能进行直接测定。
ttc法测定根系活力实验报告
ttc法测定根系活力实验报告实验报告：TTC法测定根系活力一、实验目的通过TTC法测定根系的活力，了解植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应。
二、实验原理TTC(2,3,5-三苯基四氮唑氯化物)法可用于测定细胞线粒体等颗粒物质的活力。
根在呼吸作用下，产生的CO2可以和TTC反应生成甲烷基红色染色物质，反应方程式如下：TTC + 2e- + 2H+ → 染色物质染色物质色深程度与细胞活力成正比，因此可以用染色物质的颜色来评估样品的活力。
三、实验步骤1. 准备材料：TTC试剂、木瓢、淀粉液、滴定管、97%乙醇、植物根系样品。
2. 切取根系样品，在温水中清洗后，将样品放置于淀粉液中进行苏木素染色。
清洗样品的目的是除去外表的污垢和细胞内的胶质物，以避免影响反应的准确性。
在样品染色前，淀粉液要先煮沸，以破坏淀粉酶。
3. 若样品过大，可以在放入淀粉液前用刀片切成较小片段。
4. 取出染色后的样品，用纸巾吸干淀粉液。
避免在植物根系上留下过多的染料，以免干扰实验结果。
5. 将植物根系样品放入烟花瓶内，并加入0.1%TTC试剂，再加入适量的滴定水保持水位2cm左右。
盖住烟花瓶口，避免空气进入。
6. 放置到37℃恒温实验箱中培养30分钟后，加入5～10mL的1N HCl，使混合液呈现明显的色泽变化。
7. 用滴定管加入97%乙醇混合液，振荡均匀。
8. 在另一试管中取相同量的HCl和TTC，作为对照。
9. 用比色计或分光光度计测定样品和对照试管的吸光度值，计算出样品的活力。
四、实验结果本次实验得出了样品的活力，数据如下表所示（数据为典型数据，仅供参考）：根系样品过氧化氢消耗量（mg）活力（%）样品1 3.2 68样品2 2.5 57样品3 3.8 76五、结论通过TTC法测定根系活力，我们可以对植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应有一个更加全面的了解。
本次实验得出的活力数据，说明样品的抗逆能力较强，在不同环境下能够保持一定的生命活力。
根系活力的测定
植物根系活力的测定TTC法一、测定原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化。
二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3.1％TTC 溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
三、测定步骤2.1 制作TTC标准曲线分别吸取0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml TTC加入5个10ml容量瓶中，加入少许Na2S2O4，用乙酸乙酯定容，则瓶中TTC的含量分别为25µg、50µg、100µg、150µg、200µg，用乙酸乙酯作参比，测定485nm下的光密度值，绘制标准曲线。
2.2 根系活力测定称取0.5g根尖样品，充分浸没于0.4％TTC和磷酸缓冲液的等量混合液10ml溶液中，37℃下暗保温1～3h，加入1mol/L硫酸2ml。
与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上。
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告根系活力的测定(TTC法)实验综述报告摘要：根系活力是评估植物健康状况和生长能力的重要指标之一。
本实验综述报告将介绍一种常用的根系活力测定方法——三苯基氯化四唑(TTC)法，并重点介绍了该方法的原理、步骤和应用。
通过对多个实验研究的概述，我们可以了解到TTC法在根系活力测定中的优势和不足，并展望了未来在该领域的发展方向。
1. 引言根系活力是植物根系生理功能的重要指标之一。
通过测定根系活力，可以评估植物吸收和利用养分的能力，以及应对环境胁迫和病原体的能力。
因此，测定根系活力对于研究植物生长发育、抗逆性和资源利用效率等具有重要意义。
2. TTC法的原理和步骤TTC法是一种常用的根系活力测定方法，它利用三苯基氯化四唑颜料的还原作用来反映根系活力。
其原理是，根系组织通过代谢产物还原三苯基氯化四唑，使其从无色变为红色。
实施TTC法的步骤主要包括：准备TTC溶液、处理根系样本、添加TTC溶液、孵育和测定根系活力。
3. TTC法的应用TTC法广泛应用于不同植物根系的活力测定中。
它可以用于各种实验条件下的根系活力研究，包括光照、温度、生长激素、缺水和盐胁迫等。
通过TTC法，我们可以了解不同处理对根系生理代谢的影响，评估植物在不同环境条件下的生长适应性。
4. TTC法的优势和不足TTC法作为根系活力测定的常用方法，具有一些优势。
首先，它操作简单、成本低廉、效果可靠。
其次，可以通过可视化的红色形成判断根系活力，评估根系的发育状况。
然而，TTC法也存在一些不足之处，如容易受到环境条件的干扰，结果的可视化程度受到主观因素的影响等。
5. 未来发展方向在未来，TTC法可以与其他技术相结合，以提高根系活力测定的准确性和可靠性。
光学显微镜、分子生物学技术和高通量测定等新技术的应用，将进一步拓展我们对根系活力的认识。
此外，开展TTC法的标准化研究，建立更严格的操作规范，有助于提高测定结果的一致性和可比性。
实验3 根系活力的测定(TTC法)
实验3 根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、实验目的熟悉测定根系活力的方法和原理二、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
三、材料、设备仪器及试剂1、材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
2、仪器设备：分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；电子顶载天平（感量0.1g）；温箱；研钵；三角瓶50ml；. 漏斗；. 量筒100ml；吸量管10ml；. 刻度试管10ml；. 试管架；容量瓶10ml；. 药勺；. 石英砂适量；. 烧杯10ml、1000ml。
3、试剂：乙酸乙酯（分析纯）。
次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
.0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
四、实验步骤1、TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml 置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无色 溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的 三苯基甲替（TTF），如下式：
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所 引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹 果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所 以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力 的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套； 漏斗； 量筒； 移液管；试管； 刻度试管 10ml； 试管架； 药勺； 石英砂适量； 烧杯； 小培养皿；洗瓶。
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h= 四氮唑还原量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频
保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配 现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
二、材料、设备仪器及试剂
（三）试剂： 1. 乙酸乙酯 2. 次硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉） 3. 1mg/ml的TTC溶液： 4. 磷酸缓冲液（66mmol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸： 6. 0.4mol/L琥珀酸：
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入 三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处 放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明 显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
(完整版)植物生理学实验氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h=
四氮唑还原量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频 保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配
现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸乙 4 酯（ml)
OD(485 nm)
2 3 4 5 6 空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
实验4
氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系 活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无 色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水 的三苯基甲替（TTF），如下式：
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根 所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、 苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。 所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系 活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套；
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
按下表制作 T T F标准曲线。以空白作参比，在 485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三 角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放 1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显 地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
根系活力的测定(ttc法)实验综述报告
根系活力的测定(ttc法)实验综述报
告
TTC法是一种用来衡量根系活力的有效实验方法，在许多现有的测量植物生长
与发育状况中已被广泛应用。
它是对植物源区域生长活力和发育状况的直接反映，主要通过检测植物根系中是否存在勃起层来量化测量根系的活力。
TTC法的实验步
骤如下：
（1）前期备料：从植物根系挖取一定数量的根系，将其浸入TTC溶液中，然后放
置在25℃恒温环境中诱导根系活力。
（2）TTC测试：以半芯径0.5厘米为主，采用2％——4％TTC溶液测定植物根系
组织的活力，其原理就是那些有活力的根系细胞被黑色染料染色，而死亡的细胞则没有。
（3）固定检测：根据TTC测试结果，将TTC活力分为正活力、弱活力、失活力等
几种，进而检测植物的生长发育状况。
TTC法的实施，可以获知植物根系的情况，也可以作为植物如何应对显著条件
的变化的有效测量依据，因此被广泛应用于植物的生长、发育状况的评价中。
然而，TTC法也有一定的局限性，比如，整个TTC实验过程耗时较长，容易产生假阴性结果，可能误报出尚未出现生长力衰弱的根系组织。
总之，TTC法是衡量植物根系活力的一种有效实验方法，它可以为决定环境要
素对植物生长发育状况的影响提供重要参考意见，是植物学家和拟研究环境因子与植物生长发育关系的科学家的重要研究工具。
但TTC法也具备一定的局限性，在实验步骤的实施中，需要注意控制各项参数，以准确获取植物根系活力的信息。
植物根系活力的测定——TTC法
植物根系活力的测定——TTC法TTC即氯化三苯基四氮唑(2, 3, 5-Tripheyl Tetrazolium Chloride)，又可称为红四氮唑，是一种氧化还原物质。
当TTC溶于水后，溶液呈现无色透明状，但当TTC被根系细胞内的脱氢酶还原时，其产物便呈红色，名为三苯甲腙(TTF)。
TTF比较稳定，不溶于水且不易被空气中存在的氧气氧化。
利用氯化三苯基四氮唑(TTC) 的还原能力，在一定程度上能够反映出植物根系活力的强弱如何。
植物根系的呼吸速率越高代表其活力越强，因此根系中TTC还原的量就愈多；相反，当根系呼吸速率变弱时，其还原的量就相对减少。
一、实验器材分光光度计；恒温箱；容量瓶；刻度试管；研钵。
二、试剂配制1. 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，俗称保险粉；2. 乙酸乙酯(分析纯)；3. 石英砂(适量)；4. 0.4mol·L-1琥珀酸：使用电子天平称取4.72g的琥珀酸，使其溶解在盛有约90mL的蒸馏水中，然后定容至100mL(不需配制)；5. 4g·L-1 (0.4%) TTC：使用电子天平准确称取TTC试剂1.0g，将其溶解在盛有适量蒸馏水的小烧杯中，用玻璃棒充分搅拌均匀，倒入250mL棕色容量瓶定容至刻度，现用现配；6. pH=7.0 66mM磷酸缓冲液：由A液和B液混合而成，A液：使用电子天平准确称取1.1876g Na2HPO4·2H2O(分子量177.99 g·moL-1) 或2.3896g Na2HPO4·12H2O(分子量358.14 g·moL-1)，将其溶解在蒸馏水中，定容至100mL。
B液：在电子天平上准确称取0.9078g的KH2PO4，使其溶解在蒸馏水中，定容至100mL。
实验用pH=7.0 66mM磷酸缓冲液可取A液60mL再加入B液40mL混合；7. 1mol·L-1 H2SO4：戴上手套后小心量取5.435mL 98%的浓硫酸，加入盛有蒸馏水的烧杯中(用玻璃棒边搅拌边加入)，冷却后稀释至100mL。
植物根系活力定性检测液(TTC法)
1、 配制 TTC Assay buffer 工作液：取 1 支 0.1g TTC，按 TTC：TTC Assay buffer：琥珀 酸缓冲液=的比例混合，即为 TTC Assay buffer 工作液。即配即用，4℃避光保存，3 天有效。
2、 准备样品：取 0.5g 植物须根系洗净，浸没于 TTC Assay buffer 工作液(以完全浸没为 准)，37℃避光孵育。
北京雷根生物技术有限公司
植物根系活力定性检测液(TTC 法)
简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2， 3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为 80mV 的氧化还原色素， 溶解于水为无色，可以检测根系活力。
相关：
编号 DC0032 DF0135 NR0001 PS0013 TC1167
产品名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
3、 观察着色情况，新根尖几毫米以及细侧根都有较为明显的变成红色，表明该处有脱氢酶 存在。
注意事项：
1、 配制好的 TTC Assay buffer 工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
TTC法测根系活力
氯化三苯基四氮唑（TTC ）法测定根系活力摘要：氯化三苯基四氮唑是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲,TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC 还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.【原理】氯化三苯基四氮唑（TTC ）是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲（TTF ）,如下式：生成的TTF 比较稳定, 不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体植物根所引起的TTC 还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.【仪器与用具】分光光度计；分析天平（感量0.1mg ）；恒温箱1 台；研钵1 套；100ml 三角瓶；漏斗；移液管10ml 1 支、2ml 1 支、0.5ml 1 支；20ml 刻度试管；10ml 容量瓶；小培养皿；试管架药匙；石英砂适量.【试剂】1、乙酸乙酯；2、连二亚硫酸钠（Na2S2O4, 为强还原剂, 俗称保险粉）；3、1%TTC 溶液：准确称取TTC 1.0g, 溶于少量蒸馏水中,定容至100ml ；4、0.4%TTC 溶液：准确称取TTC 0.4g, 溶于少量蒸馏水中,定容至100ml ；5、磷酸缓冲液（1/15mol/L,pH7.0 ）；6、1mol/L 硫酸：用量筒量取比重1.84 的浓硫酸55ml, 边搅拌边加入盛有500ml 蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml ；7、0.4mol/L 琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6 个结晶水）10.81g, 溶于蒸馏水中,定容至100ml.【方法】1、定性测定（1）配置反应液把1%TTC 溶液,0.4moL/L 琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合.（2）把根仔细洗净,把地上部分从茎基切除,将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1h, 以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在.2、定量测定（1）TTC 标准曲线的制作吸取0.25ml 0.4%TTC 溶液放入10ml 容量瓶,加少许Na2S2O4 粉末,摇匀后立即产生红色的TTF. 再用乙酸乙酯定容至刻度, 摇匀.然后分别取此液0.25ml 、0.5ml 、1.00ml 、1.50ml 、2.00ml 置10ml 容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度, 即得到含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg 的标准比色系列,以空白作参比, 在485nm 波长下测定光密度,绘制标准曲线.（2）称取根样品0.5g, 放入小培养皿（空白试验先加硫酸再加入根样品,其他操作相同）,加入0.4%TTC 溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml, 把根充分浸没在溶液内,在37 ℃下暗处保温1h, 此后加入1mol/L 硫酸2ml, 以停止反应.（3）把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml 和少量石英砂一起磨碎,以提出TTF. 把红色提出液移入试管,用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次,皆移入试管, 最后加乙酸乙酯使总量为10ml, 用分光光度计在485nm 下比色,以空白作参比读出光密度, 查标准曲线,求出四氮唑还原量.（4）计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还强度。
TTC法测根系活力
氯化三苯基四氮唑（TTC ）法测定根系活力摘要：氯化三苯基四氮唑是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液, 但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲,TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC 还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.【原理】氯化三苯基四氮唑（TTC ）是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲（TTF ）,如下式：生成的TTF 比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体, 植物根所引起的TTC 还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性, 并作为根系活力的指标.【仪器与用具】分光光度计；分析天平（感量0.1mg ）；恒温箱1 台；研钵1 套；100ml 三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿；试管架,药匙；石英砂适量. 【试剂】1 、乙酸乙酯；2、连二亚硫酸钠（Na2S2O4, 为强还原剂,俗称保险粉）；3、1%TTC 溶液：准确称取TTC 1.0g, 溶于少量蒸馏水中,定容至100ml；4、0.4%TTC 溶液：准确称取TTC 0.4g, 溶于少量蒸馏水中,定容至100ml；5、磷酸缓冲液（1/15mol/L,pH7.0 ）；6、1mol/L 硫酸：用量筒量取比重1.84 的浓硫酸55ml, 边搅拌边加入盛有500ml 蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml ；7、0.4mol/L 琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6 个结晶水）10.81g, 溶于蒸馏水中,定容至100ml.【方法】1 、定性测定1)配置反应液把1%TTC 溶液,0.4moL/L 琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合.(2)把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37 C左右暗处放1h,以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在•2、定量测定( 1 ) TTC 标准曲线的制作吸取0.25ml 0.4%TTC 溶液放入10ml 容量瓶,加少许Na2S2O4 粉末,摇匀后立即产生红色的TTF. 再用乙酸乙酯定容至刻度,摇匀.然后分别取此液0. 25ml 、0.5ml 、1 .00ml 、1 .50ml 、2.00ml 置10ml 容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25口g、50 口g、100口g、150口g、200口g的标准比色系列,以空白作参比,在485nm 波长下测定光密度,绘制标准曲线.(2)称取根样品0.5g,放入小培养皿(空白试验先加硫酸再加入根样品，其他操作相同),加入0.4%TTC 溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内，在37 C下暗处保温1h,此后加入1mol/L 硫酸2ml, 以停止反应.( 3)把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml 和少量石英砂一起磨碎,以提出TTF. 把红色提出液移入试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在485nm 下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量.( 4)计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还强度。
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实验3 根系活力的测定（TTC法）
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、实验目的
熟悉测定根系活力的方法和原理
二、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
三、材料、设备仪器及试剂
1、材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
2、仪器设备：分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；电子顶载天平（感量0.1g）；温箱；研钵；三角瓶50ml；. 漏斗；. 量筒100ml；吸量管10ml；. 刻度试管10ml；. 试管架；容量瓶10ml；. 药勺；. 石英砂适量；. 烧杯10ml、1000ml。
3、试剂：乙酸乙酯（分析纯）。
次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
.
0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
四、实验步骤
1、TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml 置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
2、称取根尖样品0.5g，放入10ml烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。
（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
3、把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲月替。
红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。
五、结果计算
四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）＝四氮唑还原量（mg）/[根重（g）×时间(h)]
六、实验作业
七实验总结及思考。