鸡新城疫灭活疫苗的制备
鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(N7a株+SZ株)说明书
鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（N7a株+SZ株）说明书【兽药名称】通用名鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（N7a株+SZ株）商品名无英文名Newcastle Disease and Avian Influenza（Subtype H9）Vaccine, Inactivated（Strain N7a+Strain SZ）汉语拼音Ji Xinchengyi Qinliugan（H9 Yaxing）Erlian Miehuoyimiao（N7a Zhu+SZ Zhu）【主要成分与含量】疫苗中含有灭活的鸡新城疫病毒N7a株，灭活前病毒含量≥108.6 EID50/0.1ml；含有灭活的禽流感（H9亚型）病毒SZ株，灭活前病毒含量≥108.5 EID50/0.1ml。
【性状】乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】用于预防鸡新城疫和H9亚型禽流感。
免后21日可产生免疫力，免疫期为6个月。
【用法与用量】皮下或肌肉注射。
7～28日龄鸡，每只0.15ml；28日龄以上鸡，每只0.3ml。
【注意事项】（1）仅用于接种健康鸡。
（2）使用前应使疫苗恢复至室温。
（3）使用前和使用中应充分摇匀。
（4）疫苗开启后，限当日用完。
（5）本品严禁冻结，破乳后切勿使用。
（6）屠宰前28日内禁止使用。
（7）接种工作完毕，双手应立即洗净并消毒，用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】（1）100ml/瓶（2）250ml/瓶（3）300ml/瓶（4）500ml/瓶【包装】【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为18个月。
【批准文号】【生产企业】仅在兽医指导下使用。
鸡新城疫灭活疫苗乳化操作规程
鸡新城疫灭活疫苗乳化操作规程1、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 90000ml（高效价）鸡新城疫158株病毒液 35000ml吐温-80 5500ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。
2、油相配制白油 25万ml司本 2.1万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。
3、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。
加完后继续初步乳化20分钟。
初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。
鸡新城疫-禽流感二联灭活疫苗乳化配苗生产规程一、配苗4、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 9万ml（高效价）禽流感WD株病毒液 7万ml吐温-80 6400ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。
5、油相配制白油 24万ml司本 1.9万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。
6、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。
加完后继续初步乳化20分钟。
初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。
实验二鸡新城疫弱毒疫苗的制备
实验二鸡新城疫弱毒疫苗的制备新城疫又称亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性传染病，其主要特征为呼吸困难、腹泻、神经紊乱及黏膜和浆膜出血，一年四季均可发生，为我国养鸡业的头号疾病。
预防和治疗所用的新城疫疫苗种类很多，大致包括灭活疫苗和弱毒疫苗两类。
下面以新城疫弱毒疫苗为例讲述其制备过程。
一、目的与要求1．掌握鸡新城疫弱毒疫苗的制备方法。
2．熟悉鸡新城疫弱毒疫苗制备的操作过程。
二、材料与试剂材料：种蛋、鸡胚孵化箱、冰箱、无菌操作台、手术镊子、注射器、蜡烛、酒精灯、酒精棉和碘酊等。
试剂：灭菌PBS液/生理盐水；青、链霉素溶液。
三、制备前准备1、种毒的选择：种毒属于弱毒力毒株，包括HB1株、F株、LaSota 株、LaSota-Clone30和N79株。
必须符合：①种毒对鸡胚的毒力。
以10倍稀释的种毒0.1ml尿囊腔接种10日龄鸡胚，鸡胚应于接种后24-120h内死亡70%以上，胎儿有明显病变，血凝价在1：640以上，胎儿有明显病变，血凝价在1：640以上。
②种毒对1月龄雏鸡滴鼻免疫的最小免疫量应不大于10-3/1滴。
③种毒对10日龄鸡胚半数感染量（EID50）应不大于10-7/0.1ml。
④种毒对初生雏鸡不致病。
2、种毒的稀释：用灭菌PBS液或0.85%生理盐水10-4～10-6稀释种毒，稀释时最好加入适当双抗溶液，并在4℃作用约4小时。
3、鸡胚的选择：最好选用SPF胚、其次选用非免疫胚，再次选用普通胚。
四、操作过程1、将购买的种蛋放于37℃温箱中孵育，加入适量水调节湿度。
2、孵育至9～11日龄时，将鸡胚置于黑暗的环境下，在照蛋器下，可观察到明显的胚体运动、丰富的血管和气室，用铅笔划出接种部位和气室部位。
划线时要尽量避开胚头和血管（尤其是大血管）。
3、将划好的鸡胚置于经紫外线消毒过的超净台中，先用碘酊消毒，再用酒精棉脱碘；4、用手术镊子在标记部位打孔，打孔时要在接种部位和气室各打一孔。
5、用灭菌注射器吸取0.1ml～0.2ml稀释病毒液，经接种孔注入鸡胚尿囊腔中；6、用石蜡先将接种孔封口后，在将气室孔封口；7、做好标记（时间，名称），置37℃温箱中继续孵育，增殖病毒。
鸡新城疫灭活疫苗乳化操作规程
鸡新城疫灭活疫苗乳化操作规程1、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 90000ml（高效价）鸡新城疫158株病毒液 35000ml吐温-80 5500ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。
2、油相配制白油 25万ml司本 2.1万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。
3、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。
加完后继续初步乳化20分钟。
初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。
鸡新城疫-禽流感二联灭活疫苗乳化配苗生产规程一、配苗4、水相配制鸡新城疫Lasota株病毒液 9万ml（高效价）禽流感WD株病毒液 7万ml吐温-80 6400ml 121℃高压蒸汽灭菌后备用将吐温-80缓慢加入胚液中，边加边搅拌，用约20分钟将吐温-80加完，加完后再搅拌20分钟。
5、油相配制白油 24万ml司本 1.9万ml(8%)白油加热到116℃-118℃，保持20分钟后，缓慢加入司本，边加边搅拌，加完后继续搅拌20分钟，然后通冷水降温。
6、乳化打开阀门将水相缓慢加入到油相中，开启批次乳化机边加边搅拌，用时约20分钟加完。
加完后继续初步乳化20分钟。
初步乳化完成后，打开阀门并开启连续乳化机进行自循环乳化30分钟，然后通过连续乳化机，从A罐导入B罐，由B罐导入A，再由罐A罐导入B罐，乳化结束准备分装。
生物制品学实验指导
生物制品技术实验指导生物工程系目录实验规则⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 2 实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 3 实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒⋯⋯⋯⋯ 4实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价⋯⋯ 5 实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备⋯⋯⋯⋯ 6实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7 实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8 实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯9 实验八、兔瘟灭活苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10 实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11 实验十、动物实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12 实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15 实验十二、免疫血清的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16 实验十二、细菌冷冻真空干燥实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18实验规则实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。
必须遵守以下各项。
1、实验前必须预习实验指导书。
若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。
、进实验室不得将书包、衣物等放在实验1台上，不必需的物品勿携入室内。
2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。
5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。
实验进行时不准随意进出。
实验室中物品未经许可不准带出室外。
6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。
7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。
不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。
实验一 鸡新城疫疫苗(一)
尿囊膜贴在卵壳内壁上，用镊子夹住将其撕脱下来即
可。
胚胎：消毒、打开气室卵壳后，用镊子撕破卵壳膜和
绒毛尿囊膜，夹起胚胎，用剪刀剪断卵黄带，将胎儿
放灭菌容器内即可。
8.鸡胚接种注意事项
（1）接种材料一般都应按每毫升1000ＩＵ或μg加入 青、链霉素。
（2）接种位点应避开鸡胚、血管和胚头，以免针头 刺伤鸡胚而造成接种后的损伤性死亡。
实验一 鸡新城疫油乳剂灭活苗的制备技术（一）
新城疫病毒可以在鸡胚中大量增殖，收获的鸡胚
尿囊液中即含有新城疫活病毒，将收获的尿囊液经过
灭活，并加入佐剂，便制成了新城疫灭活疫苗。
目的和要求：
1.掌握鸡胚的孵化过程和鸡胚的接种途径、接 种方法； 2.掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔的增殖过程， 掌握接毒和收毒的方法。
头约1cm左右。
4.病料接种：
若用鸡胚分离、培养病毒，则应选9～12日龄之
间的发育鸡胚。许多病毒，特别是大多数禽病毒都能
在鸡胚或鸭胚中生长繁殖。接种时应先在照蛋器下检 查鸡胚是否健康、活泼，并划出气室和接种部位。然 后严格消毒接种部位和气室（先用碘酊消毒，再用 70%酒精消毒），用打孔器打孔后，每胚接种处理好
水瓶中，使两种抗生素在生理盐水中的含量均
达到1000-2000 IU(μg)/ml。将注射用生理盐
水3-4ml注入一瓶新城疫Ⅳ系弱毒疫苗中，稀释。
3.照蛋定位 ： 接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚 和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室 位臵，再于胚胎侧画出接种位点（进针点）， 接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚
此法适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣
原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法：
气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用
不同佐剂制备鸡新城疫、禽流感二联灭活苗免疫效果评价试验
摘要 基于对市场现 有佐 剂产 品的了解取不同佐剂产品作比较 ，以禽 类疫 苗为例。选取鸡新城疫、禽 流感（Ｈ９亚型） 二 联 灭 活 （Ｌａｓｏｔａ株 ＋ＷＤ株 ）灭 活后 抗 原 液 ， 按 不 同佐 剖 的配 苗 比 例 分 别配 制 灭 活 苗 ，验 证 其 免疫 效 果 。 将 添 加 不 同 佐 剂配制的灭 活苗分别 免疫７日龄 商品肉鸡，分６组 ，每 ．￣ｇ３０Ｚ ，其 中１～５组 分别免疫５种不 同佐 剂配 制的禽流 感灭活疫苗， ６组为空 白对照，各 免疫０．３ｍｌ／只。分别于 免疫 后１４、２１、２８、３５ｄ采血 。离心后取血 清，利 用血凝抑 制方法分 别检测 鸡 新城疫和Ｈ９亚 型禽 流感血清抗体 。计算抗 体平均滴度 。试验结 果显示，ＭＦ５９、ＧＥＬ０２和ＩＳＡ７０ＶＧ等新型佐 刺较 传统佐 剂均能产生较 高的抗 体水平且 能使机体在短期 内快速产生 免疫应答反应并能很好的维持其抗体水平。
规 方 法 养 铕 。
１．１．２ 试 验 灭活抗原 鸡新城疫病毒（Ｌａｓｏｔａ株）、Ｈ９亚型 禽流感病 毒（ｗｏ株）二联灭活抗 原液 ：青 岛蔚蓝生物 制品
有 限 公 司 ， 产 。
１．１．３ 检测 试剂 鸡新城疫 ＨＩ实验标 准抗原 和阳性 血清
均购 自中国 兽医药品监察所 ？Ｈ９亚 型禽流感ＨＩ标准抗 原
关键 词 灭 活 苗 佐 剂 免疫 效 果
中图分类号 ：￥８５１．３ 文献标识码 ：Ａ 文章编 号 ：１００７—１７３３（２０１９）０１—０００８—０３
鸡新城疫 Ｄ）是 由新城疫病毒 ＤＶ）引起 的一种急性 高 度接 触性传 染病 ，其 发病 率和 死ｒ＿率 极高 Ｄｌ。禽 流感
表 １ 实 验 分组情 况
新城疫油苗和冻干苗疫苗的 生产工艺流程
加塞 压盖 物理性状 安全检验 无菌检验 外源病毒检验 效力检验 *后孵化及照蛋
*冷ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ蛋
铝盖 分装瓶
纯化水粗洗 注射水洗 照蛋时间 培养温湿度 冷蛋时间 冷蛋温度
*隧道烘箱灭菌
清洗 *灭菌
新城疫灭活疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭活生理盐水作适当稀释（如10-4或10-5），尿 囊腔内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml。选接种后72～120小时之间死 亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液（尿囊液及羊水），装于灭菌容 器内。将检验无菌，且对1%鸡红细胞凝集价在1：640（微量法1： 512）以上的鸡胚液混合，定量分装于安瓿瓶中，冷冻保存。注明收获 日期、毒种代次等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取 10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚 0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在 48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出 所有活胚,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感 染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存，应不超过6个月。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好9～10日龄的易感鸡胚作为制苗材料。
新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔 内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕 明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。将检验无 菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分 装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取 10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚 0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在 48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出 所有活胚,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感 染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检 验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外 源病毒检验标准操作规程》进行。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。 3 制苗用毒液的制备 3.1接种 取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿 囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。 3.2 孵育和观察 鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚 弃去。60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120 小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。
鸡新城疫疫苗种类及其使用方法
鸡新城疫疫苗种类及其使用方法一、鸡新城疫疫苗种类目前市场上常见的鸡新城疫疫苗主要有灭活疫苗和活疫苗两种。
1.灭活疫苗：灭活疫苗是将鸡新城疫病毒进行体外培养，经过特殊处理使其失去活性，然后注射给鸡只。
这种疫苗具有良好的稳定性和持久的免疫效果，被广泛应用于鸡新城疫疫苗的预防控制中。
2.活疫苗：活疫苗则是将鸡新城疫病毒进行制备、分离和纯化，保留其活性后接种给鸡只。
这种疫苗具有较强的活性和易于制备的特点，但其免疫效果不如灭活疫苗持久。
二、鸡新城疫疫苗的使用方法1.疫苗制备：对于灭活疫苗，需要将疫苗从冻存状态解冻，然后充分均匀摇匀。
对于活疫苗，则需要按照疫苗说明书的要求配制。
2.接种工具准备：接种时需要准备好接种枪、离心管、注射器、消毒液等工具。
确保这些工具已经彻底清洗和消毒，以免引入新的细菌感染。
3.接种操作：在接种前，要先判定羊群或鸡只的免疫状态，确保接种的时机合适。
然后，注射接种者必须保持手和工具的清洁卫生。
将疫苗注射到离心管中，然后用注射器抽取相应的疫苗。
接种时需要密切观察注射器针头的位置，确保将疫苗注射到鸡只的肌肉或皮下组织中，而不是血管内。
如果接种的是活疫苗，还需要注意避免交叉感染，避免污染。
4.接种注意事项：鸡新城疫疫苗需要在规定的温度条件下存储，接种前要检查疫苗是否过期。
在接种后，鸡只需要在观察期内进行观察，并及时处理接种后的不良反应，如发热、食欲减退等。
并且，接种后的鸡只需要根据疫苗的要求进行补种或者加强免疫。
总结：鸡新城疫疫苗种类主要有灭活疫苗和活疫苗两种。
使用方法包括疫苗制备、接种工具准备、接种操作以及接种注意事项。
鸡新城疫疫苗的正确使用可以有效预防和控制鸡新城疫疫情的发生。
鸡新城疫灭活疫苗乳化工艺优化
shi yan yan jiu我国于1935年发现鸡新城疫，目前在全国范围内仍普遍存在，并且是我国养鸡业危害最大、经济损失最严重的禽病之一。
该病是由新城疫病毒引起的一种主要侵害鸡的急性高度接触传染性疾病。
鸡新城疫疫苗现今应用广泛的是油乳剂灭活疫苗。
而佐剂是一种非特异性免疫增强剂，可增强机体的免疫应答能力或改变免疫应答的类型。
为提高疫苗免疫效果，增强动物机体对疾病的抵抗能力，选择合适的佐剂尤为重要，通过对生物制品企业的调研了解到，目前一些生物制品企业大部分选择进口疫苗，虽然免疫效果相对与国产佐剂疫苗要好，但成本相对较高，影响企业产品在市场上的竞争力。
鸡新城疫疫苗的研究主要集中在不同类型的佐剂疫苗和不同厂家的佐剂疫苗对鸡新城疫疫苗抗体水平的影响，而对国产矿物油佐剂乳化条件优化方面的文章近几年未见报道。
结合实际生产中成本问题和实验室的条件，本研究将新城疫病毒与国产的矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗，并通过调节乳化因素（水相和油相的比例、乳化剂搅拌转数、乳化时间）进行单因素试验，通过理化相关试验确定最佳乳化条件，从而制备出稳定性更高的油乳剂灭活疫苗，从而为生物制品企业提供成本相对较低、免疫效果好、副反应小的油佐剂乳化方案。
1材料与方法1.1材料与设备1.1.1主要材料国产矿物油佐剂司本80（法国梅里亚公司）、摘要：目的：探索出应用国产矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗的最优方案。
方法：将新城疫病毒与国产的矿物油佐剂配制鸡新城疫疫苗，通过调节乳化因素（水相和油相的比例、乳化剂搅拌转数、乳化时间）进行单因素试验制备疫苗，并确定最佳乳化条件，从而制备出稳定性更高的油乳剂灭活疫苗。
结果：鸡新城疫油乳剂灭活疫苗稳定性，受乳化制备中乳化时间、搅拌转数、水相和油相比例的影响。
结论：试验结果表明，最佳的乳化时间是45分钟，最佳的搅拌转数是6000转/分，最佳油相和水相比例为7∶3。
关键词：鸡新城疫；疫苗；乳化因素；稳定性基金项目：大学生科技创新科研项目，吉农院合字［2016］第053号中图分类号：S852.5文献标识码：ADOI 编号：10.14025/ki.jlny.2017.11.020鸡新城疫灭活疫苗乳化工艺优化刘欣愿，王强，杨祥波*（吉林农业科技学院生物工程学院，吉林吉林132101）收获。
鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法[发明专利]
![鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a4238a6f84868762cbaed547.png)
专利名称：鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：张毓金,谢秉超,严悌昆
申请号：CN201710135704.3
申请日：20170308
公开号：CN106729690A
公开日：
20170531
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种鸡新城疫、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗的制备方法，其包括以下步骤：1)将禽腺病毒4型病毒接种于LMH细胞，经培养、冻融、离心、浓缩等步骤得到制苗病毒液；
2)将鸡新城疫病毒La Sota株和禽流感H9亚型分别接种于鸡胚尿囊腔，经培养，收获鸡胚病毒尿囊液，然后进行离心、浓缩，分别得到鸡新城疫、禽流感H9亚型制苗病毒液；3)将三种病毒的制苗病毒液进行灭活后，等体积混合，乳化制成乳剂型灭活疫苗。
本发明提供的三联疫苗效价高，对鸡新城疫病毒、禽流感病毒H9亚型和禽腺病毒4型病毒具有完全的免疫保护作用，安全性良好，稳定有效，保护期长。
申请人：广州博恒生物科技有限公司
地址：510530 广东省广州市萝岗区永和经济区田园西路35号办公楼201房
国籍：CN
代理机构：北京精金石专利代理事务所(普通合伙)
代理人：刘晔
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鸡新城疫灭活疫苗的制备
制备油佐剂灭活苗
1 材料
1.1毒种：鸡新城疫病毒弱毒La sota株。
1.2实验动物：9-10日龄鸡胚若干。
1.3主要试剂：碘酊，1%硫柳汞溶液，7号白油，司盘-80，硬脂酸铝，吐温-80，甲醛等。
主要仪器：孵化箱、1ml注射器、蛋架、打孔器、蜡烛、胶体。
2.实验步骤
2.1种毒繁殖：将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释，尿囊内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1mol.选种后72-120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液，装于灭菌器内定量分装于安领瓶，冷冻保存。
2.2接种前准备；种毒稀释，照蛋，打孔。
2.3接种；取生产用毒种，用灭火理盐水适当稀释（10-4或10-5），每胚尿囊内接种0.1ml.接种。
后密封针孔，置36-37继续孵育。
2.4孵育和观察；鸡胚接种后，每日照室1次，将24小时内死亡的鸡胚弃去，此后，每天照蛋2次，死亡的鸡胚随时取出，4摄氏度保存，冷却24小时。
2.5收获：将冷却的鸡胚取出，用碘酐消毒气室部位，然后以无菌手
术剥除气室部卵壳，捐去卵壳膜。
剪破绒毛尿至膜及羊膜(谨防卵黄破裂)。
吸取胚液。
对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查、凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者，弃去不用。
吸取胚液放于同一灭菌的容器内。
（凝集试验和无菌试验）
2.6 灭活：可以过滤，再加甲醛溶液，甲醛溶液的最终浓度为0.1％。
然后在37℃灭活16小时，期间振摇3~4次，在4℃保存，应不超过1个月。
（无菌检验和灭活检验）
2.7 制苗
2.7.1 油相制备：将7号白油与司盘- 80 ( Span - 80)按94 ∶6比例混合再加总量2%的硬脂酸铝溶液混匀后,121 ℃高压灭菌15 min即为油相。
2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合，充分搅拌，使吐温-80完全溶解为止，作为水相。
2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合，充分搅拌，使吐温-80完全溶解为止，作为水相。
2.7.4
检验：乳化后，取3~5ml以3000r／min离心15分钟，若有分层现象，应重复搅拌。
同时徐徐加入水相l份。
以10000r／min
搅拌2~5分钟，在终止混拌前加入1％硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01％。
2.7.4 检验：乳化后，取3~5ml以3000r／min离心15分钟，若有分层现象，应重复搅拌1次。
2.7.5分装：定量分装，加盖密封，成品。
3 疫苗质量的鉴定
3.1 物理性状
3.2 无菌检验、安全检验、效力检验等。