维生素B1的测定
实验七 维生素B1片的含量测定
实验七 维生素B 1片的含量测定一、实验目的1、掌握吸收系数法测定药物含量的方法。
2、熟悉紫外-可见分光光度计的原理及操作 二、实验原理维生素B 1结构中的嘧啶环为一芳香杂环，具有紫外吸收。
因此可在其最大吸收波长处测定吸光度，进行含量测定。
三、实验仪器和试剂： 1.仪器：紫外-可见分光光度计、量瓶(100mL)、台秤、量筒(100mL)、烧杯、分析天平、漏斗、铁架台、铁圈、滤纸、剪刀等。
2. 试剂：维生素B 1片、盐酸溶液（9—>1000） 四、实验内容：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B 125mg ），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml ，振摇15分钟，使维生素B 1溶解，加盐酸（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml ，置另一100ml 量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在246nm 处测定吸光度，按C 12H 17ClN 4OS ·HCl 的吸收系数（E 1%1cm ）为421计算，即得。
五、实验数据记录及处理标示量%%1001001%11⨯⨯⨯⨯⨯⨯=-Sm W D V E A cm六、注意事项（一） 仪器的准备1. 开启电源，使仪器预热20分钟。
2. 开机前，先确认仪器样品室是否有东西挡在光路上，以免影响仪器自检。
（二）仪器的操作步骤1. 设置波长（246nm）。
2. 测定。
3. 数据记录与结果处理。
（三）将比色皿洗净装盒，关机（四）填写仪器使用记录，（五）维生素B1的紫外吸收峰随溶液pH的变化而不同，因此要严格控制溶液的pH值。
七、思考题1.单色光不纯对于测得的吸收曲线有何影响？2.利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在相同仪器上测得的吸光度有无不同，试做解释。
维生素B1(硫胺素)的荧光测定法
维生素B1（硫胺素）的荧光测定法实验原理维生素B1（硫胺素）属于水溶性维生素，在碱性高铁氰化钾通夜中，能被氧化成一种蓝色的荧光化合物－硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光。
在给定条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与硫色素的浓度成正比。
利用人造沸石对维生素B1的吸附作用去除样品中的干扰荧光测定的杂质，然后洗脱维生素B1, 测定其荧光强度。
试剂和器材一、试剂碱性高铁氰化钾：1mL 1％的高铁氰化钾溶液，用15％NaOH 稀释至15m L。
2.5 mmol/L无水NaAc溶液：205g无水NaAc用水溶解并稀释至1000mL。
25％酸性KCl溶液：8.5mL浓HCl用25％KCl溶液稀释至1000mL。
25%KCl溶液; 无水正丁醇; 15％NaOH溶液; 20％(w/v)连二亚硫酸钠（Na2S2O4）; 0.04%溴甲酚绿指示剂。
维生素B1标准液的配制：A) 维生素B1标准储备液（25μg/mL）：准确称取标准品维生素B1 100mg溶于0.01mmol/L盐酸中，稀释至1000mL，于冰箱中保存。
B) 维生素B1标准工作液：维生素B1标准储备液稀释100倍，用冰醋酸调至pH4.5。
避光，贮于4℃冰箱。
二、材料麸皮。
三、器材试管1.5×15cm（×4），移液管10mL（×1）, 5 mL（×4）；带塞锥形瓶250mL（×1），沸水浴，布氏漏斗，人造沸石，荧光分光光度计。
操作方法一、样品制备称取2~10g样品于100mL三角瓶中，加入50Ml 0.1mol/L盐酸，搅拌直到颗粒物分散均匀，在沸水浴中水解样品30min。
水解液冷却后，滴加2mol/L醋酸钠，用0.04%溴甲酚绿作外指示剂调至pH为4.5。
离心10min，3000r/min。
向上清液中加入人造沸石2－4g，振摇30min，用布氏漏斗抽滤，用蒸馏水洗涤沸石3次，洗液弃去。
然后用5mL酸性KCl搅拌，洗脱3次，洗脱液合并，并用25％酸性KCl溶液定容至25ML。
中国药典维生素b1含量的测定
中国药典维生素b1含量的测定
你想啊，维生素B1在咱身体里起着老大的作用了。
要是含量测定不准，那可咋整？在测定它的含量的时候，就像是一场探秘之旅。
那些搞测定的工作人员，就像是侦探一样。
他们得用特别精确的方法去找出维生素B1到底有多少。
这个过程可不
容易。
他们要准备好多仪器呢，就像给厨师准备好多锅碗瓢盆一样。
这些仪器可都是测定的得力助手。
从样品的选取开始，那都是小心翼翼的。
不能多一点，也不能少一点，就像挑水果，得刚刚好。
然后把样品处理得妥妥当当的，这就像是给维生素B1梳妆打扮一番，好让它能在测定的时候乖乖听话。
测定的时候呀，那数据就像是跳动的音符。
工作人员眼睛都不敢眨一下，紧紧盯着那些数据的变化。
每一个数据都是宝贝，可能稍微一不留神，这个数值就跑掉了。
而且这个测定也不是一个人就能搞定的事儿。
大家得像一个团队一样，互相配合。
就像一群小伙伴一起玩游戏，谁也离不开谁。
如果有人出错了，那整个测定结果可能就不准了。
这个维生素B1含量的测定啊，它关系到好多方面呢。
对药厂来说，准确的测定能保证生产出合格的药品。
对咱们老百姓来说，那就是能吃到质量靠谱的含有维生素B1的东西，像那些维生素片啥的。
这可都是实实在在关系到健康的大事。
咱就希望啊，这个测定的过程能越来越精准，就像神枪手打靶一样，百发百中。
这样咱就不用担心维生素B1的含量是多了还是少了，大家都能健健康康的，多好呀。
维生素b1片含量测定的方法验证
维生素B1在体内参与糖代谢，对维持神经系统正常 功能和防止脚气病有重要作用。
维生素B1的测定方法
荧光分光光度法
01
利用维生素B1在特定波长下的荧光特性进行定量分析。
高效液相色谱法
02
通过色谱柱将维生素B1与其他杂质分离，再通过紫外检测器进
行定量。
微生物法
03
利用含有维生素B1的微生物培养基培养微生物，通过测定微生
维生素B1片含量测 定的方法验证
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
确定维生素B1片的含量
目的
通过实验测定，确定维生素B1片 中维生素B1的含量，为生产质量 控制和药品监管提供依据。
方法
采用高效液相色谱法（HPLC）进 行测定，通过色谱柱分离、检测 器检测，计算峰面积并外标法定 量。
采用合适的统计分析方法，如平 均值、标准差、变异系数等，对 数据进行分析和比较。
实验误差分析
误差来源
分析实验过程中可能产生的误差来源，如称量误差、滴定误差、 读数误差等。
误差传递
根据误差来源，计算误差对最终结果的影响，并评估误差传递的 规律和特点。
误差控制
针对误差来源，采取相应的措施，如使用高精度天平、规范操作 流程等，以减小误差对结果的影响。
05
CATALOGUE
结论
实验结论总结
实验结果表明，采用高效液相色谱法测定维生素B1片 的含量是可行的，该方法具有较高的准确度和精密度
，能够满足药品质量控制的测定要求。
输标02入题
在实验过程中，我们发现维生素B1片在波长为 246nm处有最大吸收，因此选择该波长作为检测波长 较为合适。
维生素b1含量测定计算公式
维生素B1含量（mg/100g）= （吸光度差 × 稀释倍数）/（摩尔吸光系数 × 透射率）
其中： - 吸光度差：在测量前后，样品溶液的吸光度差值。 - 稀释倍数：如果对样品进行稀释，则需要考虑稀释倍数。 - 摩尔吸光系数：维生素B1的摩尔吸光系数，一般为4,700（L·mol^(-1)·cm^(-1)）。 - 透射率：测量时所得到的样品溶液的透射率，一般以小数形式表示。
维生素b1含量测定计算公式
请注意，这个公式是针对光度法测定维生素B1含量的一个一般公式，具体的实验操作和 计算可能会因不同的测定方法和仪器而有所不同。因此，在进行维生素B1含量测定时，建议 参考所使用的具体测定方法和仪器的操作手册，以确保准确性和一致性。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量项⽬五紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量（2学时）⼀实验⽬的1 掌握紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚含量的实验⽅法和操作技能；2 掌握⽚剂的取样⽅法，并正确计算⽚粉的取样范围；熟悉样品前处理⽅法；3 学会采⽤紫外分光光度计测定药物含量的操作⽅法和注意事项。
⼆实验原理维⽣素B1分⼦中具有共轭双键结构，在紫外光区有特征吸收。
在pH2时，最⼤吸收在246nm处,据此，可⽤紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量。
三材料与仪器盐酸溶液（9→1000）、电⼦天平、紫外分光光度计、研钵、维⽣素B1⽚四实验内容取本品20⽚，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维⽣素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约7ml，振摇15分钟使维⽣素B1溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，⽤⼲燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另⼀100ml量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）。
在 246nm的波长处测定吸光度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系数（E1cm1%）为421计算，即得。
本品含维⽣素B1应为标⽰量的90.0%~110.0%。
五注意事项1 ⽚剂取样量的计算：取样量=（1±10%）×主药规定量×平均⽚重/每⽚标⽰量2 结果计算式中 A-------供试品溶液的吸光度；E 1cm 1%-------供试品溶液的百分吸收系数；标⽰量（%）=W×100%标⽰量A ×1%×D ×VE1cm 1%×L×WL--------吸收池的厚度；D--------供试品的稀释倍数；V--------供试品溶液的体积；W--------供试品的取样量；W--------⽚剂的平均⽚重。
2 ⽚剂中不溶性辅料对测定有⼲扰，需滤过消除辅料的⼲扰；3 本法采⽤吸收系数法定量，所⽤的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进⾏校正。
《维生素B1的测定》课件
05
维生素B1的测定注意事项
测定前的准备
确保实验室环境符合要求
01
保持实验室清洁、干燥，确保无尘、无污染，温度和湿度应适
详细描述
谷类食物，如糙米、全麦面包等，含 有丰富的维生素B1。相较于精制谷物 ，全谷类食物保留了更多的维生素B1 ，因此是更佳的选择。
动物性食物
总结词
动物性食物也是维生素B1的重要来源，尤其是肉类和蛋类。
详细描述
肉类，如猪肉、牛肉和羊肉，以及蛋类都含有一定量的维生 素B1。适量摄入动物性食物可以补充人体所需的维生素B1。
微生物法
总结词
一种基于生物活性的测定方法。
详细描述
微生物法利用某些微生物对维生素B1的依赖性进行测定。该方法通过培养微生物 ，观察其生长情况，从而确定样品中维生素B1的含量。
色谱法
总结词
一种分离和测定相结合的方法。
详细描述
色谱法利用不同物质在固定相和流动相之间的分配差异进行分离，通过检测分离后的维生素B1的量来计算其浓度 。常见的色谱法有高效液相色谱法和气相色谱法。
中。
准备实验器材
02
准备好所需的实验器材，如试管、滴定管、容量瓶等，确保其
清洁、干燥、准确。
试剂配制
03
根据实验要求，准确配制意事项
操作规范
按照实验操作规程进行测 定，确保每一步操作准确 无误。
防止干扰
在测定过程中，应避免外 界因素的干扰，如电磁波 、震动等。
维生素B1能够维持胃肠道的正常蠕动和分泌功能，缺乏维生素B1 可能导致消化不良、便秘等症状。
维生素b1的鉴别方法
维生素 B1 的鉴别方法维生素 B1 是一种水溶性维生素，对人体的神经系统和心血管系统具有重要的生理作用。
在食品、药品和营养保健品中，维生素 B1 的含量检测是非常重要的。
下面，本文将介绍维生素 B1 的鉴别方法，包括化学法和仪器分析法。
1. 化学法化学法是通过化学反应来鉴别维生素 B1。
该方法基于维生素 B1 与某些化学试剂的特异性反应，通过观察反应产物的颜色、沉淀等特征来判断样品中是否含有维生素 B1。
常用的化学法包括:(1) 硫酸铈法：该方法利用维生素 B1 与硫酸铈的反应，生成橙黄色的硫酸铈 - 维生素 B1 复合物。
具体操作步骤为：将样品溶解于水中，加入硫酸铈溶液，观察是否出现橙黄色沉淀。
若出现，则说明样品中含有维生素 B1。
(2) 硝酸汞法：该方法利用维生素 B1 与硝酸汞的反应，生成红色的硝酸汞 - 维生素 B1 复合物。
具体操作步骤为：将样品溶解于水中，加入硝酸汞溶液，观察是否出现红色沉淀。
若出现，则说明样品中含有维生素 B1。
2. 仪器分析法仪器分析法是通过先进的分析仪器来检测维生素 B1 的含量。
常用的仪器分析法包括:(1) 高效液相色谱法：该方法利用高效液相色谱仪对维生素 B1 进行分离和检测。
具体操作步骤为：将样品溶解于水中，用高效液相色谱仪进行分离，检测器检测维生素 B1 的峰面积，计算其含量。
(2) 紫外分光光度法：该方法利用紫外分光光度计对维生素 B1 进行检测。
具体操作步骤为：将样品溶解于水中，用紫外分光光度计测定其吸光度，根据吸光度与维生素 B1 含量的关系计算其含量。
以上就是维生素 B1 的鉴别方法，包括化学法和仪器分析法。
维生素b1检测方法国标
维生素b1检测方法国标
维生素B1，也被称为硫胺素或是胡萝卜素B1，是人体内必不可少的维
生素之一。
它可以协助人体内的葡萄糖代谢、神经系统运作、以及产
生能量。
然而，如果人体内的维生素B1不足，就可能导致多种疾病，
如心脏衰竭、神经系统疾病等。
因此，维生素B1的检测对于人体健康
至关重要。
一、血清维生素B1检测方法国标
国家食品药品监督管理局发布的《食品、保健食品中维生素B1的检测》（GB/T 5009.4-2016）规定了血清维生素B1的检测方法和范围。
该规
定基于高效液相色谱法和荧光法进行检测。
它可以检测出食品、保健
食品和人体内的维生素B1含量。
二、高效液相色谱法
高效液相色谱法是维生素B1检测的常用方法之一。
该方法使用高灵敏
度的液相色谱仪来分离、检测维生素B1。
该检测方法具有检测速度快、精度高、灵敏度强等优点。
同时，该方法仍然是国际上最常用的检测
方法之一。
三、荧光法
荧光法是另一种常用的维生素B1检测方法。
它是在高效液相色谱法的
基础上开发出的。
该方法利用特殊的化学荧光染料检测样品中的维生
素B1水平。
该方法具有操作简单、精度高、灵敏度强等优点。
综上所述，维生素B1的检测对于人体的健康非常重要。
目前，高效液
相色谱法和荧光法均是常用的检测方法。
此外，《食品、保健食品中
维生素B1的检测》规范了检测方法和范围，对于保障人们的健康具有重要意义。
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证一、实验目的1.验证维生素B1含量测定的方法的准确性和可靠性。
2.了解高效液相色谱法对于短波紫外检测器的适应性。
二、实验原理1.高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种高效分离、快速分析的方法。
它与用计算机控制的仪器联用，可以进行定量、半定量和定性分析。
本实验中，采用HPLC法测定维生素B1的含量。
2.短波紫外检测器短波紫外检测器是一种用于分析有机物的光谱仪器。
它在紫外光谱的200~400nm范围内进行检测，可以检测吸收较大的分子。
在本实验中，采用短波紫外检测器测定维生素B1的含量。
三、实验步骤1.样品的准备取维生素B1片0.2g，加入250mL量瓶中，加入10mL0.1mol/L盐酸溶液，加水至刻度线，摇匀，称取100mL筛滤取滤液5mL，加入5mL4%磷酸溶液中，用向后溯流液相色谱（HPLC）法测定。
2.试剂的准备（1）0.1mol/L盐酸溶液取盐酸100mL，加水至1000mL，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液调节pH，使溶液处于酸性状态。
（2）4%磷酸溶液取磷酸15mL，加水至250mL，摇匀。
（3）乙腈甲醇（2:1）将乙腈甲醇配制成2:1比例。
3.测定方法（1）样品注射量为20μL。
（2）柱温为35℃。
（4）短波紫外检测器的检测波长为266nm。
4.数据处理及结果分析四、实验结果样品编号维生素B1标准品质量（mg）峰面积（mv∙s）维生素B1含量（mg）1 0.006 8898 0.0062 0.008 11956 0.0083 0.010 15576 0.0104 0.012 18960 0.0125 0.014 22004 0.0146 0.016 25597 0.0167 0.018 28887 0.0188 0.020 32295 0.0202.维生素B1含量的平均值：五、实验分析通过本实验，我们验证了测定维生素B1含量的方法的准确性和可靠性。
荧光法测维生素B1
十、.荧光分析法测定维生素B1;
1.原理：维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，用异丁醇提取后，在紫外光（λex＝365nm）照射下呈现蓝色荧光（λem＝435nm），通过与对照品比较荧光强度，即可测得供试品含量。
2.方法
（1）氧化剂的制备：取新鲜配制（当天配制）的1.0％铁氰化钾溶液4.0ml，加3.5mol/L氢氧化钠溶液制成100ml，于4h内使用。
（2）对照品溶液的制备：精密称取维生素B1对照品约25mg，溶于300ml稀醇溶液，用3mol/L盐酸调节pH为4.0，加稀醇稀释至1000ml 作为储备液，避光冷藏，每月配制一次。
取储备液适量，用0.2mol/L 盐酸溶液逐步定量稀释至0.2ug/ml的溶液。
（3）供试品溶液的配制
取供试品适量，用0.2mol/L盐酸溶液溶解配制成100ug/ml的溶液，精密量取5ml，逐步定量稀释至0.2ug/mL的溶液。
（4）测定方法：取40ml具塞试管3支或3支以上，各精密加入对照品溶液5ml，于其中两支试管中迅速加入氧化剂各3.0ml，在30s内再加入异丁醇20.0ml，密塞，剧烈振摇90s，于另一支试管中加入3.5mol/L氢氧化钠溶液3.0ml以替代氧化试剂，并照上述方法操作，作为空白。
另取3支相同试管，各精密加入供试品溶液5ml，按照对照品溶液的方法处理。
于上述6支试管中各加入无水乙醇2ml，旋摇数秒，待分层后，取上
层澄清的异丁醇液约10ml ，测定其荧光强度。
5ml 供试品溶液中维生素B1的ug 数
52.0⨯⨯--=d
S b A 式中A 和S 分别为供试品溶液和对照品溶液测得的平均荧光读数，；b 和d 则分别为其相应的空白读数，。
食品中维生素B1的测定
食品中维生素B1的测定1又名，自然维生素B1多存在于麸皮及胚芽中；谷类、豆类、坚果类、瘦猪肉等食物中，通常以游离态或以焦磷酸酯的形式存在于自然界中。
食品中维生素B1的定量分析，可利用游离型维生素B1可与多种重氮盐耦合呈各种不同的色彩而举行分光光度测定。
这种办法适用于测定维生素B1含量较高的食品。
此外，也可将游离型维生素B1氧化成硫色素，测定其荧光强度。
此荧光法和高效液相色谱法均适用于微量测定，其中荧光法应用最为普遍，也是GB/T5009.84-2003规定的食品中维生素B1的测定唯一办法。
1.原理样品经热的稀酸处理后，提取维生素B1。
假如样品中所含维生素B1均为游离态，可在碱性溶液中挺直将硫胺素氧化成噻嘧色素，在紫外线照耀下，噻嘧色素发出荧光。
在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光强度与噻嘧色素量呈正比，即与溶液中硫胺素量呈正比。
按下式计算：式中x——样品中硫胺素含量，mg/100g U——试样荧光强度 Ub——试样空白荧光强度 S ——标准荧光强度 Sb——标准空白荧光强度 p——硫胺素标准用法液浓度，ug/mL V——用于净化的硫胺素标准用法液体积，mL V1——试样水解后定容之体积，mL V2——试样用于净化的提取液体积，mL m ——试样质量，g——试样含量由微克每克(ug/g)换算成毫克每百克(mg/100g)的系数计算结果保留两位有效数字。
在重复性条件下获得的两次自立测定结果的肯定差值不得超过算术平均值的10%。
2.要点提醒 (1)普通样品中的维生素B1有游离型的，也有结合型的，需要用酸和酶水解，使结合型转化为游离型的，然后再用本法测定。
如样品中含杂质过多，应经过离子交换剂处理，使硫胺素与杂质分别，然后以所得溶液作测定。
(2)样品净化时需用人造浮石，其用量要视取样量而定。
普通每克人造浮石能吸附30ug，量过大，回收率下降。
食品中的杂质也会降低人造浮石对硫胺素的吸附力，所以人造浮石用量也不能过少。
维生素b1的紫外测定含量实验小结
维生素b1的紫外测定含量实验小结
（原创实用版）
目录
1.维生素 B1 的概述
2.紫外分光光度法的原理
3.维生素 B1 紫外分光光度法含量测定的实验过程
4.实验结果及分析
5.结论
正文
一、维生素 B1 的概述
维生素 B1，又称硫胺素，是人体重要的辅酶之一。
其在人体中分布
广泛，具有促进代谢、保护神经、调节情绪等多种功能。
维生素 B1 在十几块钱就可以买到 100 片，非常便宜，但这并不意味着可以随意服用，
过度服用依然会引起不良反应。
因此，如何科学使用维生素 B1 是非常重要的。
二、紫外分光光度法的原理
紫外分光光度法是一种常用的分析化学方法，其原理是利用物质在紫外光区域对光的吸收程度来定量物质的含量。
在该方法中，通过测定吸光度，可以计算出物质的浓度。
三、维生素 B1 紫外分光光度法含量测定的实验过程
实验过程中，首先采用紫外分光光度法，在 361nm 处测定维生素 B1 的含量。
实验结果显示，复方制剂中其他组分及辅料不干扰测定，维生素
B1 在 120-3201gml 浓度范围内与吸收度有良好的线性关系（r0.9992），高、中、低 3 种浓度的平均回收率为 9953％-10040％（n5），ilsd 为 023％-086％。
四、实验结果及分析
实验结果表明，该方法简便、快速、准确，适用于本品的质量控制。
维生素 B1 的含量可以通过紫外分光光度法进行测定，且具有较高的准确度和精密度。
五、结论
总之，维生素 B1 是人体中重要的营养物质，我们需要科学地使用它。
维生素b1表观油水分配系数测定
维生素b1表观油水分配系数测定
维生素B1的表观油水分配系数测定方法如下：
实验材料：
1、高纯度的维生素B1样品
2、石油醚、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、纯水等溶剂
3、紫外可见分光光度计，可调温水浴器，离心机等实验器材
实验步骤：
1、准备样品：取少量维生素B1配制成标准品溶液
2、准备试剂：按照一定比例将石油醚和正己烷/乙醚／乙酸乙酯三者混合，得到不同比例的表观分配系数试剂
3、将溶液和试剂按比例混合，振荡混匀，并离心分离液相和沉淀相。
4、取上层液相，在紫外可见分光光度计下测定其最大吸收波长和吸光度。
5、利用不同比例试剂得到的吸光度值计算表观油水分配系数。
6、重复多次以上步骤，取平均值。
注意事项：
1、实验过程中应注意方管或离心管中的分清液体和沉淀，防止其中带有其他杂质。
2、应根据实验条件和资料要求选择最佳的试剂组合，保证实验准确性。
3、实验过程中应注意对操作人员和环境进行有效防护，保证安全和卫生。
实验_维生素b1片含量测定的方法验证
• 5，掌握考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或
参考值接近的程度
实验原理
• 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
N
NH2 H2 C N+
•RSD < 2.0% ……仪器分析
重现性试验
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
稳定性试验
•要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min
时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分 别测定样品的峰面积。
含量测定
精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置
100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml
摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇 匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液1.0ml置于 25ml量瓶中，共两份盐酸溶液（9→1000）定容至 刻度，摇匀 → 测用吸光系数计算浓度。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
加样回收率试验
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
撰写方法学验证论文
•线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 •精密度试验
• 稳定性试验
根据实验测定数值进行计算
测定食品中的维生素B1
测定食品中的维生素B1一、案例维生素B1，又称硫胺素或抗神经炎素，是维生素中发觉最早的一种，由嘧啶环和噻唑环结合而成，为无色结晶体，溶于水，在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化和受热破坏，人体内，维生素B，以辅酶形式参加糖的分解代谢，有庇护神经系统的作用；还能促进肠胃蠕动，增强食欲。
维生素B，主要存在于种子的外皮和胚芽中，如在米糠和麸皮中含量很丰盛，酵母菌、瘦肉中含量也较丰盛。
目前所用的维生素B1大多数属于化学合成品。
二、选用的国家标准 GB ／T 9695．27—2008肉与肉制品维生素B1含量测定。
三、测定办法1．试样处理样品采集后用匀浆机打成匀浆(或者将样品尽量粉碎)，避开温度超过25℃，将试样装于密封容器中，防止变幻或成分转变，试样应在24h内尽快分析。
2．水解称取4～6g试样(精确至O.001g)，置于150mL具塞锥形瓶中，加人0.1mol／L盐酸50mL，摇匀，于沸水浴中水解30min，取出，冷却至室温。
3．酶解用0.5mol／L乙酸钠溶液调整试样水解液，使pH值为4.0～4.5，加入高峰氏淀粉酶溶液(100g／L)5mL，混匀，置于45～50℃恒温箱或水浴中保温3h，取出冷却后用O.1mol／L盐酸调pH值约为3.5，将溶液所有转移至100mL 容量瓶中，用水定容，混匀，用滤纸过滤，取滤液备用。
4．净化吸取酶解滤液25.OOmL，注入人造沸石玻璃色谱柱，控制色谱柱流速约为1mL／min，弃去流出液。
用15mL近沸热水分3次洗涤色谱柱，弃去流出液。
用20mL 60～80℃热的酸性氯化钾溶液，分5次洗脱维生素B1，收集于25mL容量瓶中，冷却后用酸性氯化钾溶液定容，混匀备用。
5．氧化取两支50mL具塞比色管，各加入1.5g氯化钾或氯化钠，再加入5.OmL试样溶液，一支加入3.OmL氧化剂，立刻旋摇试管，混匀，随即加入10mL异丁醇萃取，塞上塞子振摇90s，静置分层。
维生素B1的测定
维生素B1的测定(一)原理硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线照耀下发出荧光。
没有其他物质干扰时，此荧光相对强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。
如试样中含杂质过多，应用经过离子交换剂使硫胺素与杂质分别岳的溶液测定。
(二)仪器与主要试剂荧光分光光度计；电热恒温培养箱；Maizel—Gerson反应瓶9～1所示；淀粉酶和蛋白酶；0．1mol／L，0．3mol／L盐酸；2mol／L乙酸钠溶液；氯化钾溶液(250g／L)；酸性氯化钾溶液(250g／L)(8．5mL浓盐酸用25％氯化钾溶液稀释至1000mL)；1％铁氰化钾溶液(10g／L)(1g铁氰化钾溶于水中稀释至100mL，放于棕色瓶内保存)；碱性铁氰化钾溶液(取4mL 10g／L铁氰化钾溶液，用150g／L氢氧化钠溶液稀释至60mL。
用时现配，避光用法)。
活性人造浮石：称200g 40～60目人造浮石，以10倍于其容积的热乙酸溶液搅洗两次，每次10min；再用5倍于其容积的250g／L热氯化钾溶液搅洗15min；然后再用稀乙酸溶液搅洗10min；最后用热蒸馏水洗至没有氯离子，于蒸馏水中保存。
硫胺素标准储备溶液(0．1g／mL)：精确称取100mg经氯化钙干燥24h的硫胺素，溶于0.0lmol/L盐酸中，并稀释至1000mL。
于冰箱中避光保存。
用时用0.01mol／L盐酸逐级稀释为0.1μg／mL的硫胺素标准用法液。
溴甲酚绿溶液(0．4g／L)：称取0.1g溴甲酚绿，置于小研钵中，加入1.4mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液研磨片刻，再加入少许水继续研磨至彻低溶解，用水稀释至250mL。
(三)测定试样采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存，用时将其解冻后混匀用法。
干燥试样要将其尽量粉碎后备用。
精确称取一定量试样(估量其硫胺素养量约为10～30μg，普通称取2～10g试样)，置于l00mL三角瓶中，加入50mL0.1mol／L或0.3mol／L盐酸使其溶解，放人高压锅中加热水解，121℃30rain，凉后取出。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
做空白试验 重复上述操作，将20ml维生素B1标准使用液加入盐 基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。
4.氧化
将5ml试样净 化液分别加入 A、B两个反 应瓶； 同时将5ml标 准净化液分别 加入A1、B1 两个反应瓶中。
Maizel-Gerson 反应瓶
氧化流程
% NaOH ( 3ml)溶液 A、A1瓶 15 振摇
维生素B1的测定方法：
分光光度法; HPLC法; 荧光分光光度法等。
分光光度法
分光光度法是将维生素B1生成游离型后，与重氮化试剂对氨基 苯乙酮反应，生成紫红色色素，移至二甲苯中测定其浓度。 本法灵敏度差，只适用于食品中维生素B1含量高的试样。
高效液相色谱法
把维生素B1衍生化后导入高效液相色谱仪，经柱分离，通荧光 检测器测定。 本法适用于体系复杂的样品，干扰严重时采用此法。
白酶 100 ml 按比例加入淀粉酶和蛋 定容至 混匀过滤 提取液
3.净化
a.脱脂棉铺于盐基交换管的交换 柱底部，再加约1g活性人造浮 石使之达到交换柱的1/3高度。 b.用移液管加入提取液20~60ml。 c.加入约10ml热蒸馏水冲洗交换 柱，弃去洗液，重复三次。 d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此 液于25ml刻度试管内。凉至室 温，用250g/L酸性Kcl定容至 25ml，即为净化液。
ml碱性K 3 Fe（CN） 6 B、B1瓶 3 振摇约 15s
硫色素 蓝色荧光
正丁醇（10ml）
反应瓶要同时振摇，准确计时90s.
5、测定
荧光测定条件： 激发波长365nm；发射波长435nm；激发波狭缝5nm；发射 波狭缝5nm。 依次测定下列荧光强度： a. 样品空白荧光强度（样品反应瓶A）； b. 标准空白荧光强度（标准反应瓶A1）； c. 样品荧光强度（样品反应瓶B）； d. 标准荧光强度（标准反应瓶B1）；
试剂作用
1、蛋白分解酶：用于试样的蛋白分解。 2、盐酸：水解样品。 3、氯化钾：该热溶液可从盐基交换管中的浮石里解析出维生 素B1。 4、铁氰化钾碱性溶液：氧化游离的维生素B1，生成硫色素。 5、正丁醇：溶解紫外荧光物质——硫色素试剂。
注意事项
1 、加热酸性Kcl时不能使其沸腾，热Kcl滤速较快，而不沸 则是使其不至因过饱和而在洗涤中结晶析出阻塞交换柱。 2、 紫外线会分解破坏维生素B1，所以维生素B1形成后要快 速测定。 3、 氧化中加铁氰化钾是整个实验的关键，对每个样品所加 试剂的次序、快慢、振摇时间等都必须尽量一致，尤其是用 正丁醇提取硫色素时必须保证准确振摇90s。
6.计算
式中：X──样品中硫胺素含量，mg/100g； U──样品荧光强度； Ub──样品空白荧光强度； S──标准荧光强度； Sb──标准空白荧光强度； c──硫胺素标准工作液浓度，μg/ml； V──用于净化的硫胺素标准工作液体积，ml； V1──样品水解后定容之体积，ml； V2──样品用于净化的提取液体积，ml； m──样品质量，g；
操作步骤
1.样品处理
样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻 保存，用时将其解冻后使用。
2.样品提取
.1或 0.3mol / L盐酸加热 样品（2.00 ~ 10.00g试样） 0 mol / L乙酸钠 样品水解 2
调节PH为4.5 （以溴甲酚绿为外指示 剂）
谢谢！
荧光法
这里我们主要介绍荧光法 参考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(维生素B1)的测定
方法原理
试样在酸性溶液中加热，提取维生素B1，经蛋白分 解酶处理，使维生素B1成为游离型。再经层析柱 纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性铁 氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，硫 色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他物 质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即与 溶液中维生素B1量成正比。
测定意义
由于人体不能自行合成维生素B1，必须从食物中摄取。因此， 人体需依赖食物提供足够的维生素B1，测定各种食品维生素B1 含量多少将对食品营养价值评价十分重要。如果由于食物摄入 量不足，或因食物的加工、运输、储存、烹饪不当，使维生素 B1受到破坏或损失，都会造成维生素B1的缺乏。因此，食品中 的维生素B1测定对指导食品加工、保存、膳食营养配比等都有 一定的意义。
维生素B1的测定
——营养0901 徐燕萍 张晶荧 赵莎莎 赵小娟
１. 结构与性质
H3C N
嘧啶
N
NH2 CH2
亚甲基
S N+
噻唑
· CH2C的季铵盐化合物
维生素B1，又称硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人体必需 的13种维生素之一，是一种水溶性维生素，属于维生素B族， 为无色结晶体，溶于水，在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液 中不稳定，易被氧化和受热破坏。
维生素B1是人体能量代谢，特别是糖代谢所必需的，故 人体对它的需要量通常与摄取的热量有关。当人体的能量主 要来源于糖类时，维生素B1的需要量最大。 成人的建议每日摄取量是1．0～1．5mg。妊娠、哺乳 期每天摄取1．5～1．6mg；在生病、生活紧张、接受手术 时，要增加必要用量。
来源简介
维生素B1广泛存在于天然食物中，含量较丰富的有：动物内 脏(肝、心及肾)、肉类、豆类、花生及精细加工的谷物类。 谷物类是我国人民的主食，也是维生素B1的主要来源。但过 分去除麸皮与糠，维生素B1损失很多，烹调加碱可使维生素 B1损失增高。