上皮组织染色液
上皮组织实验
五、思考题：
1. 简述各种被覆上皮的主 要分布位置。 2.简述疏松结缔组织中各 细胞的功能。 3. 人和鱼的血细胞比较。
实验一 上皮组织和结缔组织 的微细结构观察
许星鸿 主讲
实验一 上皮组织和结缔组织的微 细结构观察
一、实验目的： 二、主要仪器设备及材料： 三、实验原理及步骤： 四、结果分析（绘图及标注）： 五、思考题：
一、实验目的：
通过观察切片，进一步加 深对上皮组织和结缔组织 结构特征的认识，熟悉其 分类及特征；掌握血涂片 的制作方法。
四、结果分析：绘图及标注(高倍镜下绘各组 织的一个局部)
1.单层立方上皮：①立方上皮细胞 ②细胞核 2.复层扁平上皮：①基底层细胞 ②多角形细胞 ③扁平细胞 3.疏松结缔组织：①胶原纤维 ②弹性纤维 ③成 纤维细胞 ④巨噬细胞 4.肌腱纵切：①腱细胞核 ②胶原纤维束 5.人血/蛙血/鱼血任选：红细胞、嗜中性粒细胞、 淋巴细胞、血小板/血栓细胞各绘一个
2.单层柱状上皮：肠横切 管腔面由单层柱状细胞组成，核卵圆形， 位于细胞的基底部。细胞的基底端有一层 极薄的膜，即基膜。面向肠腔的游离面上 有一层深红色的结构，即纹状缘（微绒 毛）。柱状细胞间有许多杯状细胞。
3.假复层柱状纤毛上皮：气管横切面 用低倍镜寻找管腔面上皮组织的部位。可见组成管 腔的上皮较厚，其中夹杂有形似高脚酒杯的细胞， 即杯状细胞。换高倍镜观察：寻找切面切得较正的 部位，可看到明显的三层细胞核：基部是一层近圆 形的小核，排列在同一平面上，这就是锥形的基细 胞的核。第二层细胞核较大，呈卵圆形，排列稀疏， 是梭形细胞的核；表面的一层细胞核椭圆形，是纤 毛柱状细胞的核。这种细胞的游离面有一层排列整 齐的纵纹，即纤毛。在纤毛柱状细胞之间，可看到 杯状细胞。杯状细胞的粘液在制片时被溶解，故呈 空泡状。在上皮细胞和结缔组织接触处有一层很厚 的基膜。
巴氏染色液EA50染色液使用说明书
剂染色
8.
95 % 乙醇（Histanol 95）冲洗
上下跌落 6-8 次
9.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
上下跌落 6-8 次
10.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
3-5 min
11.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
上下跌落 6-8 次
上下跌落 6-8 次
13.
100 %乙醇（Histanol 100）脱水
3-5 min
14.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
上下跌落 6-8 次
透明处理
15.
二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClear New）
3-5 min
透明处理
透明化处理后应立即用合适的封片剂进行封片 。如果使用二甲苯（BioClear ）透明化，对
上海科汇生物技术有限公司
EA50 染色液使用说明书 【产品名称】 EA50 染色液
【产品编号】 EA50-OT-100 ，EA50-OT-500 ，EA50-OT-1L，EA50-OT-2.5L
【包装规格】 100 ml 500 ml 1000 ml 2500 mL
【预期用途】细胞质染色试剂，用于 Papanicolaou 染色法细胞学上使用的对比
次
馏水或去离子水冲洗
2.
苏木素 HP，Pap 1A 染色
6 min
3.
蒸馏水或去离子水冲洗
上下跌落 6-8 次
4.
HCL Pap 溶液或 0.1 % HCl 溶液分化处理
5-10s
注：此步骤可去除细胞核和细胞质上过多的苏
02-上皮组织
5．复层扁平上皮 Stratified Squamous Epithelium
由多层细胞组成， 由多层细胞组成，紧靠基膜的一层基底细胞呈立方形或矮 柱状，具有较强的分裂增殖能力， 柱状，具有较强的分裂增殖能力，而表面的数层细胞为扁 平状， 平状，中间数层细胞为多边形 (图2-5A,B)。 A,B) 分布在体表的复层扁平上皮称角化的复层扁平上皮， 分布在体表的复层扁平上皮称角化的复层扁平上皮，铺衬 在口腔、食道、 在口腔、食道、肛管等处的复层扁平上皮称未角化的复层 扁平上皮。 扁平上皮。
第2章 上皮组织
Epithelial Tissue
概 述
上皮组织(epithelial tissue)由形态规则排列密集的上皮细胞 上皮组织(epithelial tissue)由形态规则排列密集的上皮细胞 和少量细胞外基质组成， 和少量细胞外基质组成，主要覆盖于人体外表面或铺衬在 (polarity) 体内各种管、 腔及囊的内表面， 具有极性(polarity) ， 体内各种管 、 腔及囊的内表面 ， 具有极性 (polarity)， 即上 皮细胞的两端在结构和功能上具有明显的差别；绝大部分 上皮组织内没有血管，有丰富的游离神经末梢。 上皮组织内没有血管，有丰富的游离神经末梢。
6．复层柱状上皮 stratified columnar epithelium
主要分布于眼睑结膜和男性尿道等处， 主要分布于眼睑结膜和男性尿道等处，深层为一层或数层 多边形细胞，浅层为一层排列较整齐的柱状细胞。 多边形细胞，浅层为一层排列较整齐的柱状细胞。
7．变移上皮 transitional epithelium
一、被 覆 上 皮
(一)被覆上皮的结构和分类 被覆上皮(covering epithelium)：根据上皮细胞的层数， 被覆上皮(covering epithelium)：根据上皮细胞的层数，将其 分 为 单 层 上 皮 (simple epithelium) 和 复 层 上 皮 (stratified epithelium)。 epithelium) 。 单层上皮又根据其细胞形状特点进一步分为 扁平上皮、立方上皮和柱状上皮， 扁平上皮、立方上皮和柱状上皮，而复层上皮根据最表层 细胞的形状特点分为复层扁平上皮和复层柱状上皮等多种 类型
02上皮组织
质膜内褶 通连
半桥粒
被覆上皮 腺上皮和腺 特殊结构
微绒毛 纤毛 紧密连接 中间连接 桥粒
功能 小分子物质（＜1500D，如葡萄糖、氨 基酸、无机离子、信息分子等）可通 过，使相邻细胞的增殖分化、代谢、 功能同步化，又称通讯连接
缝隙连接 ※ 连接复合体：上述4种连接中2个或2 基 膜 个以上毗邻存在
• 腺上皮（glandular epithelium）：由腺 概 念 细胞组成的以分泌功能为主的上皮
外分泌腺 • 腺（gland）：以腺上皮为主构成的器
浆液性细胞 官 • 腺细胞分泌物：酶、糖蛋白、激素等
黏液性细胞 • 外分泌腺（exocrine gland）：分泌物
混合性腺
经导管排至体表或器官腔内，如汗腺、 唾液腺
质膜内褶
图32-34
半桥粒
被覆上皮 腺上皮和腺 特殊结构
微 绒 毛 细胞相邻面间隙狭窄，以钙黏蛋白相结 纤 毛 合，并可形成特化的细胞连接结构
紧密连接
图35、36
中间连接 • 紧密连接位于细胞侧面顶端 • 超薄切片－相邻细胞膜间断融合，非
桥 粒 融合处有极窄的间隙
缝隙连接 冷冻蚀刻复型－蛋白颗粒构成的线性结
单层扁平
• 特点：细胞为多层，细胞形状和层数
单层立方
因器官功能状态不同而异 单层柱状 空虚的膀胱－上皮厚，细胞层数增多，
假复纤柱 细胞呈大的立方形
图17-19
复层扁平 充盈扩张的膀胱－上皮薄，细胞层数
复层柱状 减少，细胞呈扁梭形
变移上皮 • 分布：肾盏、肾盂、输尿管、膀胱
被覆上皮 腺上皮和腺 特殊结构
缝隙连接
利于物质转运
基膜
质膜内褶
半桥粒
上皮组织
纹状缘 小肠腔
杯状细胞 柱状细胞
吸收能力活跃的上皮细胞有许多较长的紧密 排列的微绒毛。
功能：扩大细胞的接触面积，有利于吸收功能 上皮细胞游离面伸出的能摆动的较长突起。
光镜下可见。表面是细胞膜，内有细胞质，中有微 管（9x2+2）。 分布：呼吸道腔面等。
功能：相邻细胞牢固 的粘连在一起。
分布：易受机械损伤 或摩擦部位的复层扁 平上皮（构成细胞间 桥）
d. 缝隙连接( gap junction)又称通讯连接
1. 斑状，有2~3 nm胞间隙。。 2. 相邻胞膜上的直径8nm的柱状蛋白质颗粒 (Connexons,
由6个亚基构成) 相贴,中间留有1.5nm 的亲水性通道。 在钙离子和其他因素作用下，管道可开放或闭合.
分布：在胚胎和成体的各种细胞间均有存在。
功能：
1）信息交换: 分子量小于 1500 Da 的信息分子可 以通过该通道。
2）该处电阻低,，便于在 细胞间传递电冲动。
连接复合体(Junctional complex): 由两种或两种
以上的连接排列在一起构成。
t.j. -- 紧密连接 tight junction a.b.-- 粘着小带、中间连接
细胞组成，中央有腔。
泡状和管泡状的分泌 部常称腺泡。
导管部：由单层或复层
上皮构成。
2. 外分泌腺的结构和分类
单细胞腺
浆液性腺 分泌物性质 粘液性腺
Exocrine gland 外分泌腺
腺
分泌部
形状
体
多细胞腺
内分泌腺 Endocrine gland
是否 导管部
分支
混合性腺 管状腺 泡状腺 管泡状腺
单腺 复腺
第二章 上皮组织
黏液HID-AB染色液使用说明书
黏液HID-AB染色液使用说明书货号：G2070规格：3×25ml/3×50ml保存：4℃，避光保存，有效期6个月。
产品内容：名称3×25ml3×50ml Storage试剂(A)HID Solution A1:HID溶液A25ml50ml RT避光A2:HID溶液B 1.5ml3ml RT避光临用前，按A1:A2=50:3混合即为HID Solution，不宜提前配制。
试剂(B):Alcian染色液25ml50ml4℃避光试剂(C):核固红染色液25ml50ml RT避光产品说明：黏液HID-AB染色原理在于高铁二胺盐中的二铵盐与硫酸化酸性黏液物质结合，形成复合物而被显色。
在pH值大大低于2.5时，组织内的硫酸根电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有硫酸根的组织(如硫酸黏液物质)染色，硫酸化酸性黏液物质等形成棕紫色至棕黑色。
在黏液HID-AB染色液主要用于鉴别硫酸化酸性黏液物质和唾液酸性粘液物质，小肠上皮产生氮乙酰化唾液酸性黏液物质，大肠上皮产生氧乙酰化唾液酸性黏液物质和硫酸化酸性黏液物质。
该法可配合AB-PAS染色，对肠上皮化生的类型进行鉴定，对转移性肿瘤发生黏液的类型进行鉴定。
操作步骤(仅供参考)：1、切片脱蜡至蒸馏水。
2、入配制好的HID Solution浸泡12-24h（20～25℃）。
3、流水冲洗5min。
4、入Alcian染色液染色10-20min。
5、稍水洗。
6、入核固红染色液复染10min。
7、流水冲洗1min。
8、梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果:硫酸化酸性黏液物质(如硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白)棕紫色至棕黑色羧基化蛋白酸性黏液物质(如蛋白多糖和透明质酸)蓝色细胞核红色注意事项：1、固定液采用10%中性福尔马林。
2、HID Solution不宜提前配制。
用后可存储于4℃，仍可用1～2次，但特异性不佳。
3、HID Solution对人体有一定损害，请小心操作，避免接触人体皮肤。
第3章上皮组织-组胚学PPT课件
桥粒
(三)上皮细胞的基底面
1. 基膜
分布：上皮细胞基底面与 深部结缔组织之间
形态： LM：HE染色呈粉红 基膜 色的一薄层均质膜
1. 基膜
EM: 基板（basal lamina) 厚50~100nm 透明层(lamina lucida) 致密层(lamina densa) 成分：层粘连蛋白(laminin)
复层上皮
角化的：皮肤的表皮
复层柱状上皮：睑结膜、男性尿道等的腔面
变移上皮：肾盏、肾盂、输尿管及膀胱等的腔面
（一）单层扁平上皮
组成: 一层扁平细胞 表面观：呈不规则形或多边形，核
椭圆形，位于细胞中央；细 胞边缘呈锯齿状，互相嵌合 间皮表面观（镀银染色） 切面观：细胞核椭圆形，细胞质 很薄，只有含核的部分略厚
作用：有节律性定向摆动将黏
液、尘埃颗粒和细菌等推至 咽部咳出
横切面
(二)上皮细胞的侧面
非特殊连接 细胞间隙很窄 少量的钙粘蛋白(cadherin)
特殊连接 细胞连接（cell junction） 作用：加强细胞间的连接 或相互沟通
1. 紧密连接
又称闭锁小带(zonula occludens)
分布：呈带状环绕细胞的顶部
(nonkeratinized stratified squamous epithelium)
分布于口腔、食管和阴道腔面
（六）复层柱状上皮
组成： 表层：细胞为柱状， 排列整齐 中间几层：细胞为多边形 基底层：矮柱状细胞
表层 中间层 基底层 复层柱状上皮
（七）变移上皮
特点：上皮细胞的形态和 层
数可随所在器官的收缩 和
组成：柱状细胞(有纤毛)、 纤毛 柱状细胞
梭形细胞、
实验上皮组织课件
细胞核也相应变扁。
1.扁平细胞 2.多边形细胞
3
2
3.基底细胞
实验上皮组织
图12 未角化的复实验层上皮扁组织平上皮（食管）
上皮为未角 化的复层扁 平上皮。固 有层为细密 的结缔组织， 它有较高的 乳头突入上 皮的基底部。
实验上皮组织
图 13 角 化 的 复 层 扁 平 上 皮 （ 表 皮 ）
实验上皮组织
1.纤维 2.细胞核
1 2
实验上皮组织
4 3 2
1
图3 疏松结缔组织光镜图 （腹膜铺片；醛复红与偶氮焰红染色) 1巨噬细胞 2肥大细实胞验上皮3组胶织 原纤维 4弹性纤维
高倍镜:
1、胶原纤维:染成 红色，粗细不等，互 相交织排列；
2、弹性纤维:染色 深呈紫蓝色，较细、 断端常成卷曲状态。
3、成纤维细胞:数 量多，胞质染色浅， 故轮廓不明显，看到 细胞核呈椭圆形。
1
实验上皮组织
高倍镜： 单层立方上皮由 一层立方形的细 胞组成，细胞高 度和宽度一致， 界线清楚，胞核 圆，位于中央， 染成紫蓝色，细 胞质嗜酸性。
1.立方细胞 2.细胞核
1 2
实验上皮组织
管壁由一 层大致呈 立方状细 胞构成。
细胞界线 较清楚， 胞质染色 深浅不一。
细胞核圆， 位于细胞
中央。
实验上皮组织
1
2 3
1.柱状细胞 2.细胞核 3.结缔组织
实验上皮组织
图8 单层柱状上皮（小肠） 1柱状细胞 2实杯验上状皮组细织 胞 ↑纹状缘
34
五、假复层纤毛柱状上 皮： 本片为动物气管横断面。
肉眼观：标本呈环状，其管腔面衬有假复层 纤毛柱状上皮。
实验上皮组织
低倍镜：
染色方法总结
第一节结缔组织和肌纤维染色Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)用途：VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。
原理：酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成红色，肌肉被苦味酸染成黄色。
此方法是一种优良的传统方法。
固定：10%福尔马林切片：4-6微米试剂：Weigert铁苏木精液：A液：苏木精1g，无水酒精100 ml。
一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。
B液：29%三氯化铁水溶液4 ml，蒸馏水95 ml，盐酸1 ml。
两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。
24h后失去染色能力。
Van Gieson液：1%酸性复红水溶液 10 ml苦味酸饱和水溶液 90 ml临用时1:9混合过虑后使用。
Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤：1．石蜡切片脱蜡至水。
2． Weigert苏木精液5-10 min。
3．充分水洗。
4． Van Gieson液1-5 min。
5． 95%酒精迅速分化数秒。
6．无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。
体会与说明：由于酸性复红退色较快，染色结果不能长期保存，一般只能保存3～6个月。
二 Masson三色法试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。
Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。
0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。
苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。
Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水。
2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。
肾活检病理组织染色
一、惯例染色技能（HE 染色）之阳早格格创做苏木素-伊黑染色简称HE 染色，是最时常使用的染色要领，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核战细胞内核糖体染成蓝紫色，伊黑是一种酸性染料，能将细胞量染成黑色或者浓黑色.HE 染色不妨隐现肾小球的细胞删死、炎细胞浸润.还能很佳的隐现肾小管上皮细胞的益伤战肾间量火肿情况.（一）需要试剂①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨火；④ 1% 伊黑液.（两）简直染色步调1.切片惯例脱蜡进火.2.苏木素染细胞核1 ～2 min，火洗.3.进1% 盐酸乙醇瓦解数秒，火洗.4.氨火返蓝数秒.5.流火浑洗，镜下瞅察细胞核成蓝色.6.1% 伊黑染数秒，火洗.7.梯度乙醇脱火，两甲苯透明，树胶启片.染色截止：胞核呈蓝色，胞浆呈黑色，黑细胞呈橘黑色，其余身分呈深浅分歧黑色.（三）注意事项1.构造切片的脱蜡步调应实足，可则构造无法着色，做用瞅察.2.伊黑染色的时间需庄重统造.过少胞浆染色黑色过深.3.染色后的构造切片要将构造四面的传染物痕迹揩掉.两、特殊染色技能（一）过碘酸- 希妇氏染色（PAS 染色）PAS 染色不妨隐现肾小球内的细胞删死、浸润战系膜基量等，并能很佳天隐现基底膜，是隐现糖本战糖蛋黑的基础染色.1.需要试剂① 1% 过碘酸；②schiff氏液染；③苏木素染液；④氨火.（1）切片惯例脱蜡进火.（2）进1% 过碘酸氧化10 ～15 min，火洗.（3）进schiff氏液染10 ～30 min，火洗.（4）苏木素染细胞核1 ～2 min，火洗.（5）进1% 盐酸乙醇瓦解数秒，火洗.（6）氨火返蓝数秒.（7）流火浑洗，镜下瞅察细胞核成蓝色，基底膜染成粉黑色.（8）梯度乙醇脱火、两甲苯透明、树胶启片.3.染色截止PAS 阳性物量（多糖战糖本）呈黑色，核呈蓝色.（1）构造切片的脱蜡步调应实足，可则构造无法着色.（2）Schiff 氏液染色的时间需庄重统造.时间过少标本基底膜着色过深，时间过短标本基底膜着色浓.（3）进1% 盐酸乙醇瓦解时间要短，时间少简单使标本退色.（4）染色后的构造切片要将构造四面的传染物痕迹揩掉.（两）六胺银- 马紧染色（PAM-Masson 染色）PAM-Masson 染色能更浑晰天隐现基底膜、免疫复合物战胶本纤维，免疫复合物的定位更为透彻.① 1% 过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨火；⑤Masson 液；⑥ 1% 明绿液.（1）切片惯例脱蜡进火.（2）进1% 过碘酸氧化10 ～15 min，火洗5 min.（3）进六胺银液72℃染30 ～50 min，以隐微镜下睹基底膜呈乌色即可.（4）加2% 氯化金数滴于构造，5% 硫代硫酸钠洗.（5）苏木素染细胞核1 ～2 min，1% 盐酸乙醇瓦解，氨火返蓝.（6）进Masson 液约10 min，1% 醋酸洗.（7）进1% 明绿5 ～8 min，1% 醋酸洗.（8）梯度乙醇脱火、两甲苯透明、树胶启片.3.染色截止基底膜及系膜基量乌色，免疫复合物黑色.（1）构造切片的脱蜡步调应实足，可则构造无法着色.（2）染色时间取室温战切片薄度有闭，室温矮、切片薄需染色时间少，反则需染色时间短.进六胺银液染色的时间需庄重统造.时间过少基底膜着色过深，时间过短基底膜着色浓.（3）2% 氯化金瓦解时间要短，时间少简单使银染退色.（4）染色后的构造切片要将构造四面的传染物痕迹揩掉.（三）马紧染色（Masson 染色）Masson 染色能隐现各部位的免疫复合物，肾小球软化战肾间量纤维化程度.1.需要试剂①苏木素染液；②氨火；③ Masson 液；④ 1% 明绿液.（1）切片惯例脱蜡进火.（2）媒染剂（10% 沉铬酸钾、10% 三氯醋酸等量混同）染10 ～30 min，火洗.（3）苏木素染细胞核1 ～2 min，火洗.（4）进1% 盐酸乙醇瓦解数秒，火洗，氨火返蓝数秒，火洗.（5）进Masson 液约10 min，火洗，1% 醋酸洗.（6）进2.5% 磷钨酸约30 s，火洗，1% 醋酸洗.（7）进2% 橘黄G 约2 min，火洗，1% 醋酸洗.（8）进1% 明绿5 ～8 min，1% 醋酸洗.（9）进100% 乙醇脱火、两甲苯透明、树胶启片.3.染色截止细胞核黑色，胶本纤维绿色，免疫复合物黑色.（1）构造切片的脱蜡步调应实足，可则构造无法着色.（2）进Masson 液染色的时间需庄重统造.时间过少着色过深，时间过短着色浓.（3）进1% 明绿染色时间需要镜下统造，时间少简单覆盖Masson 液黑色.（4）染色后的构造切片要将构造四面的传染物痕迹揩掉.（四）刚刚果黑染色正在肾净病理染色中，刚刚果黑染色不妨将淀粉样物量染成砖黑色，是诊疗淀粉样变肾病的时常使用染色要领之一.1．需要试剂①下锰酸钾—硫酸液；②苏木素染液；③氨火；④碱性刚刚果黑液.2．简直染色步调（1）切片惯例脱蜡进火.（2）下锰酸钾- 硫酸混同处理3 min，火洗.（3）5% 草酸处理3 min，火洗.（4）苏木素染核2 min，火洗，蓝化.（5）碱性刚刚果黑液染10 ～30 min.（6）进100% 乙醇脱火、两甲苯透明、树胶启片.3．染色截止细胞核蓝色，淀粉样物量呈砖黑色（图3-12）. 4．注意事项（1）构造切片的脱蜡步调应实足，可则构造无法着色.（2）碱性刚刚果黑液染色时间该当镜下统造，染色液现配现用着色佳.（4）染色后的构造切片要将构造四面的传染物痕迹揩掉.。
上皮组织实验小结
上皮组织实验小结实验一、上皮组织一、实验目的：⒈了解组织学实验目的，内容和实习规则。
⒉通过复习显微镜的构造和使用规则，进一步正确掌握显微镜的使用。
⒊参观组织切片的制作, 了解一般石蜡切片制作过程, 以及苏木素—伊红(HE) 染色法的过程。
4. 通过看电视录像掌握上皮组织的分类，各类上皮的特点及分布。
在此基础上总结出上皮组织的一般特征；熟悉上皮组织的特殊结构。
二、实验内容：（一）显微镜的构造及使用规则１．显微镜的构造２．显微镜的使用规则：（1）拿显微镜时，必须一手握住镜臂，另一只手托住镜座，避免脱落。
（2）使用前的检查和准备，用前必须检查零件有无缺损，粗细螺旋是否松紧适宜，镜头有无污物，推进器是否灵活，发现问题及时报告，以免影响学习。
（3）对光; 将显微镜放置座位左侧，打开光圈，上升聚光器，转动转换器使低倍（10×）接物镜正对下方。
从侧方目视，调粗螺旋，上升载物台使其与物镜相距约0.5cm，然后移左眼到接目镜（双眼自然睁开），使光线反射入聚光器，达整个视野最明亮。
（4）放置标本低倍镜观察：认出切片正反面，将正面（有盖玻片的一面）朝上放于载物台上用片夹固定好，使用推进器使有组织的部分对准接物镜中心。
左眼回到接目镜，调粗螺旋使载物台下降，动作缓慢，仔细观察直至视野中出现清晰物像为止。
利用推进器前后左右推动标本以全面观察组织器官的一般结构。
（5）转换高倍镜（或油镜）：对某个需详细观察其结构的部分须在低倍镜下找到并调清晰后，移至视野中心，转换高倍镜头，调节细螺旋至清晰物象（切记禁用粗螺旋)。
需用油镜观察时，必须在低、高倍镜调清楚后，将高倍物镜转离，加一滴镜油于玻片上，再将油镜头转正，细心地调细螺旋至物象清晰即可。
（6）用完后处理：转动转换器，取走切片（用油镜后，必须用二甲苯擦净镜头及切片），（二）组织切片的制作为了在显微镜下能够看到组织的微细结构，必须把组织切成很薄的薄片，并染色，为此，须将组织器官进行以下处理：1、取材固定，将新鲜动物或尸体的组织器官切下一小块，通常置于10%福尔马林液中固定，以保持原来的结构，一般固定24～40小时。
酶组织化学染色诊断使用方法及判读指导
酶组织化学染色诊断使用方法及判读指导
使用方法
1.先使用小棉签，伸入宫颈管级棉签部分进入旋转1--2圈不宜过多，预防出血；拉出小棉签蘸取上皮组织染色液，浸泡至饱和（2秒左右）立即观察棉签颜色。
2.再使用大棉签，在宫颈口旋转2--3圈，按压5秒取出，蘸取上皮组织染色液，浸泡至饱和（约3秒）立即观察棉签颜色变化。
判读方法
1、棉签未显示色泽差异，或出现淡黄色，提示上皮组织正常
2、棉签显示颜色均一，浅蓝色或浅褐色或浅紫色（每个人对颜色的描述有差异）颜色均一怀疑炎症出现蓝色或绿色色班怀疑炎症
3、底色基础上出现明显色差的斑块状条纹状小圆点状针尖状的黑色或黑褐色色斑怀疑癌前病变需进一步三阶梯检测（阴道镜病例切片）。
宫颈特殊染色法上皮组织染色技术用于宫颈癌前病变检测的临床价值
Ｍａ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｉ ｌ ｄ Ｈｅ ａ ｌ ｔ ｈ Ｃ ａ ｒ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ． Ｎ ｏ ｖ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ６， Ｖｏ １ ． ３ １ ， Ｎ ｏ ． ２ ２
１ 资料 与 方法
１ ． １ 资料 来源
选取 ２ ０ １ ４年 １ ０月 一 ２ ０ １ ５年 １ ０月 在
本院就诊 的 ２ ６ ２ ７例 患 者 ，年 龄 ２ ０～７ ０岁 ，平 均 （ ４ ０ ． ２ ＋ ９ ． １ ） 岁 。入 选 条 件 ：已婚 或 者 有 性 经 历 者 ， 无 子宫 切除 、宫 颈锥 切 及 盆 腔放 疗 史 、非 Ｃ Ｉ Ｎ患者； 受 检时 无 妊 娠 、非 月 经 期 、３个 月 内未 使 用 过 性 激 素 、４ ８ ｈ内无性 生活史 及 阴道 冲洗或 用药 等处 理 。 １ ． ２ 方法 所 有 患者 均 接 受 Ｆ Ｒ Ｄ、Ｔ Ｃ Ｔ检 查 及 ＨＰ Ｖ 检 测 ，３者 任 一 项 提 示 异 常 （ Ｆ Ｒ Ｄ 提 示 阳性 和／ 或
月一 ２ ０ １ ５ 年１ ０ 月在英德市人 民医院就诊的 ２ ６ ２ ７例患者进行检查 ，所有 患者均接受宫颈 口及宫颈管同时染色 （ Ｆ Ｒ Ｄ ） 、宫颈液基
细胞学检查 （ Ｔ Ｃ Ｔ ）及人乳头瘤病毒 （ Ｈ Ｐ Ｖ）检测 ，３者任一项提示异常者行 阴道镜检查 ，以阴道镜取材 、组织病理学 结果为诊
关键词 ：宫颈病变 ；敏感性 ；细胞学检查 ；特异性
中国图书分 类号 ： １ １ ７ １ １ ． ７ ４ 文献标识码 ： Ａ 文章 编号： １ ０ ０ １ － ４ ４ １ １ （ ２ ０ １ ６ ） ２ ２ ４７ － ２ ４ － ０ ３ ； ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ７ ６ ２ ０ ／ ｚ ｇ ｆ ｙ ￣． ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ １ — ４ ４ １ １ ． ２ ０ １ ６ ． ２ ２ ． ４ ５
瑞氏-姬姆萨染色液（Wright Giemsa Stain）使用说明书
使用说明书【产品名称】染色液【产品型号】瑞氏-姬姆萨染色液（Wright Giemsa Stain）【产品规格】瑞氏-姬姆萨染色液中每种染液单瓶（桶）包装规格为：20ml、250ml、5000ml，整组染液包装规格为：6×20ml、3×250ml、4×250ml。
【预期用途】主要用于血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物（妇科白带）涂片、脱落细胞涂片染色。
【检验原理】瑞氏-姬姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成的。
细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。
各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料(曙红)和碱性染料（亚甲蓝）的亲和力也不一样。
因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。
【主要组成成份】试剂组成主要成份瑞氏-姬姆萨A液瑞氏染料、姬姆萨染料瑞氏-姬姆萨B液磷酸盐【储存条件及有效期】有效期：原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
储存条件：本试剂盒应贮存在相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的5℃～30℃室温环境。
【样本要求】1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA（2K）抗凝血。
2、阴道分泌物（妇科白带）涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。
3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或因空气潮湿而溶血，绝对不能用高温或火烤。
4、脱落细胞涂片染色：采取检体并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定液固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行)。
一般情况下若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳。
上皮组织染色液技术要求
上皮组织染色液技术要求皮组织染色液技术是一种用于染色皮肤组织样本的方法，它能够使细胞和组织结构清晰可见。
本文将介绍皮组织染色液技术的要求和步骤。
一、选择合适的染色液皮组织染色液的选择是关键。
根据需要染色的目标结构和染色方法的要求，选择合适的染色液。
常用的染色液有伊红染色液、酸性伊红染色液、苏木精染色液等。
不同的染色液对不同的组织结构有不同的染色效果，因此选择合适的染色液对于获取高质量的染色结果至关重要。
二、调整染色液的浓度和pH值染色液的浓度和pH值也是影响染色效果的重要因素。
一般来说，染色液的浓度过高会导致染色过度，浓度过低则会导致染色不均匀。
因此，在使用染色液之前，需要进行浓度的调整。
此外，pH值的调整也十分重要，不同的染色方法对pH值的要求不同，需要根据具体的染色方法进行调整。
三、适当延长染色时间染色时间的长短也会影响染色效果。
如果染色时间太短，组织结构可能没有被完全染色，导致染色结果不清晰；而染色时间过长，则可能导致组织结构过度染色，影响观察结果的准确性。
因此，在进行染色时，需要根据具体情况适当延长或缩短染色时间，以获得最佳的染色效果。
四、注意染色液的温度染色液的温度也会影响染色效果。
一般来说，温度过高会导致染色液的挥发，使染色结果不均匀；温度过低则会影响染色液的渗透性。
因此，在进行染色时，需要注意控制染色液的温度，一般室温即可。
五、严格控制染色液的接触时间染色液的接触时间也是影响染色效果的重要因素。
接触时间过短会导致染色液不能充分渗透到组织结构中，影响染色效果；接触时间过长则会导致过度染色。
因此，在进行染色时，需要严格控制染色液的接触时间，确保染色液能够充分渗透到组织结构中，同时避免过度染色。
六、注意染色液的保存和使用染色液的保存和使用也需要注意。
染色液一般需要保存在阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温。
在使用染色液时，需要注意避免染色液的污染，可以使用无菌技术进行操作，以确保染色液的纯净度和有效性。
FRD上皮组织特殊染色液在宫颈病变筛查中的应用
FRD上皮组织特殊染色液在宫颈病变筛查中的应用黄彩平;李日红;邓惠宜;陈光元;谢家滨;黄平【摘要】Objective To explore the clinical value of the folate receptor-mediated tumor diagnosis (FRD) for the special staining of the epithelial tissue of the cervical. Methods One hundred patients with screening of cervical le-sions, who admitted to Department of Obstetrics and Gynecology of Songgang People's Hospital of Baoan District of Shenzhen from May 2014 to November 2015, were selected as research objects. FRD cervical special staining detection and liquid based cytology test (TCT) detection were performed at the same time. Colposcopy and cervical biopsy was carried out at any abnormality, and the detection results were compared with pathological results. Results Compared with the pathologic diagnosis, the sensitivity, specificity, positive predictive rate, negative predictive rate, the rate of mis-diagnosis and missed diagnosis rate were respectively 80.72%, 84.21%, 75.00%, 90.14%, 26.88%, 20.00% of FRD de-tection, and 83.12%, 83.12%, 73.47%, 87.67%, 25.79%, 19.28%for TCT. There was no significant difference between two detection methods in these aspects (P>0.05). Conclusion FRD epithelial tissue special staining solution and TCT in cervical disease screening have almost the same clinical significance. However, FRD epithelial tissue special staining solution detection has the advantages of simple operation, comprehensive diagnosis, low cost and fast results etc., which is worth for clinical promotion.%目的：探讨叶酸受体介导的宫颈特殊染色法(FRD)上皮组织特殊染色液在宫颈病变检查中的临床价值。
各种组织染色方法大全主要内容结缔组织多色染色法胶原纤维染色
各种组织染色方法大全主要内容：结缔组织多色染色法胶原纤维染色法网状纤维染色法弹力纤维染色法第一节结缔组织多色染色法一、Mallory三色染色法1. 试剂配制（1）重铬酸钾液重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml （2）苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml（3）酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（2）重铬酸钾液10min。
（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。
（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。
（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。
（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。
（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。
（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。
二、Masson三色染色法1.试剂配制（1）Masson复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。
（2）亮绿染色液高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。
2.染色步骤中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（1）Masson复合染色液5min。
（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。
（3）5%磷钨酸5-10min。
（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。
（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。
（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。
4.注意事项（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。
实验室常用染色液
他用来染细胞质时， 能把 胶 胚胎材料等。
刚果红 可以跟苏 所以洗涤和脱水 处理要迅速。
三、常用染料介绍 （一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木 （热带豆科植物） 干枝中用乙醚浸制出来的一种色素， 是最常用的染 料之 一。
苏木精不能直接染色， 必须暴露在通气的地方， 使他变成氧化苏木精 （又叫苏木素） 后才能 使用，这叫做“成熟” 。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力 愈强。
被染材 料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒 染剂。
常用的媒染剂 有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体， 易溶于酒精， 微溶于水和甘油， 是染细胞核的优良 材 料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情 况而异， 用酸性溶液 （如盐酸—酒精） 分化后呈红色， 水洗后仍恢复青蓝色， 用碱性溶液 （如 氨水）分 化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末， 提取出虫红，再用明 矾处 理，除去其中杂质， 就制成洋红。
单纯的洋红不能染色， 要经酸性或碱性溶液溶解后才 能染色。
常 用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料， 染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜， 尤其适宜于 小型 材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后 再用。
（二）人工染料人工染料， 即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多， 应用极广。
它们的缺点是经日光照射容易 褪 色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也 能经几年不 褪色。
1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
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FRD作用机理
FRD上皮组织特殊染色液中的叶 酸衍生物（叶酸二氢呋喃）与肿 瘤细胞表面的叶酸受体结合，内 吞胞浆后，将共价连接的还原态 亚甲蓝带入细胞，亚甲蓝在肿瘤 细胞内Fe2+的催化下，快速与细 胞内活性氧发生氧化反应，使黄 色的底物变色，从而判断是否具 有肿瘤组织。
陕西高源医疗器械服务有限公司出品
临床应用
用于妇科内诊常规检查
提供宫颈异常病变的客观信息，及时检测,科学分流病 人，提高病人的依从性，降低假阴性，提高诊断符合率。
（1）FRD染色阴性，提示宫颈无异常病变，建议患者定 期检查或细胞学、HPV检查；
（2）FRD染色阳性，提示宫颈异常病变，建议阴道镜检 查。
使用操作流程
宫颈：用蘸取FRD上皮组织特殊染色液的妇科大棉签，在宫 颈表面用力涂抹5圈，再在宫颈外口用力按压10秒，取出观察 颜色。
宫颈管：用蘸取FRD上皮组织特殊染色液的小棉签插入宫颈 管（1.5 cm-3.0 cm），沿颈管内壁旋转5圈逐步下拉棉签 ， 进行颈管内特殊染色。
阴性：棉签棕黄色，提示上皮组织无病变； 阴性：棉签绿色，提示上皮组织无异常病变； 阳性：棉签蓝色、蓝黑色、黑色，提示上皮组
FRD+细胞学（同时阳性， 50.0% 98.6% 检查即为阳性）
39.0% 89.3%
93.0% 89.1%
北京多中心研究
项目基本情况： 牵头单位-北京大学人民医院 联合参研单位-天坛医院、301医院、北京安贞医院、 北京朝阳医院、北京大学第三医院、北京妇产医院、 北京复兴医院、北京世纪坛医院、北京同仁医院、北 京宣武医院、北京医院、协和医院。
方案：FRD染色检查→TCT取样→阴道镜检查→活检。
结论
检查方法 FRD特殊染色阳性
敏感性 特异性 阳性 预测值
75.0% 81.6% 48.6%
阴性 预测值
93.3%
细胞学（≥ASC-H） 56.0% 87.9% 52.8% 89.2%
FRD+细胞学（任一为阳 78.0% 70.7% 性，检查即为阳性）
技术
细胞学检查
样本采集及制片： 细胞采集 （是否完整） 脱落细胞 （是否脱落） 腺体病变（是否敏感）
阅片： 观察细胞形态的改变（是否特异） 专业阅片医生（是否足够）
巴氏涂片 液基细胞学
HPV-DNA检测
临床指导意义：
可进行性消退； 单次HPV感染有多大风险； 持续高危型感染导致风险增加；
高标准实验室、专业人员 检查费用
主要内容
现有宫颈癌筛查技术 FRD上皮组织特殊染色液作用原理 FRD特殊染色操作规范及注意事项 临床研究结论
背景—宫颈癌流行病学
宫颈癌是危及妇女生命健康的第二大杀手，仅次于乳腺癌； 全世界每年新增病例数超过50万， 25万人因其死亡。发展
中国家每年有20万人因此死亡，占全球死亡人数的80％； 我国每年新增病例数超过13万人，超过全球总数的1/4，
研究方案：TCT和/或HPV异常；有临床指症需要做阴道镜 检查→FRD染色→阴道镜检查→活检
共收集到有活检结果的病例1926例。
人群背景信息
年龄：平均年龄40.98(±10.33)
研究人群的年龄分段情况
项目 20-29 30-39
40-49 50-65 合计 missing
例数 256( 13.39%) 685( 35.83%)
肉眼检查(VIA/VILI)
阳性预测值低; 绝经后及宫颈萎缩妇女能否
使用；
临床需要什么？
及时诊断，科学分流； 诊断颈管病变； 降低漏诊率，提高诊断符合率； 宫颈的肿瘤属性的客观信息。
一种新技术
叶酸受体介导的肿瘤细胞 靶向检测技术
一个新产品
FRD上皮组织特殊染色液
成分：叶酸衍生物、亚甲蓝等。
7( 0.40%) 7( 0.40%) 2( 0.11%)
1742
184
研究人群的产次情况
产次 0 1 2 3 4 5
合计 Missing
例数 455( 26.12%) 944( 54.19%) 263( 15.10%) 57( 3.27%) 16( 0.92%)
7( 0.40%) 1742 184
FRD的主要特点
特点一 : 灵敏
已有的研究显示FRD检测CIN2例）
人群：2012年10月至2013年12月在西安市高陵县的子宫 颈癌筛查门诊和陕西省人民医院妇科门诊就诊的9949名 已婚女性患者。进入研究的对象均符合以下条件：年龄21 岁以上，此前6个月未接受过宫颈手术。未在经期和孕期。 所有9949名受检者年龄区间22-78岁。平均49.51岁，3065岁占98.5%。
总数据情况
病理诊断结果
炎症 CIN1 CIN2 CIN3 宫颈癌 合计
总研究入组人群情况
已完成病例数
计划完成病例数
750 ( 38.94%) 521 ( 27.05%) 289 ( 15.01%) 295 ( 15.32%)
71 ( 3.69%) 1926
500 600
600
300 2000
HPV检测情况-（未区分检测方法）
死亡人数约为3万人。
背景-宫颈癌筛查的必要性
死亡的主要原因：很少筛查或从不筛查； 美国 50％宫颈癌发生于从不筛查 10％宫颈癌发生于近5年未接受筛查
有明确的癌前病变阶段，发展缓慢，有足 够的时机来重复进行筛查；
癌前病变的治疗效果较好。
目前用于宫颈癌检查的技术
宫颈细胞学检查 HPV-DNA检测 醋白试验/碘试验 FRD上皮组织特殊染色
病理结果
HPV结果
阴性
阳性
合计 Missing
CIN2+
28( 4.49%)
595( 95.51%) 623
32
CIN1与炎症 178( 14.52%) 1048( 85.48%) 1226 45
524( 27.41%) 447( 23.38%)
1912 14
研究人群的孕次情况
孕次 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
合计
Missing
病例数 229( 13.15%) 331( 19.00%) 466( 26.75%) 377( 21.64%) 198( 11.37%) 84( 4.82%) 41( 2.35%)