体内药物分析复习题

一、简述与常规药物分析相比，体内药物分析有哪些特点。

体内药物分析，是一门新兴学科，是药物分析的重要分支，也是现代药学的创新、延伸和发展。体内药物分析旨在通过各种分析手段，了解药物在体内的数量与质量变化，获得药物动力学的各种参数、药物在体内的生物转化、代谢方式和途径等信息。与常规药物分析相比，体内药物分析有以下特点：

1、干扰杂质多，样品一般需经过分离、净化才能进行分析。

2、样品量少（ng/ml-ug/ml），不易重新获得，在测定前需要浓缩、富集。

3、药物浓度低，对分析方法的灵敏度和专属性要求高。

4、要求较快提供结果（临床用药监护，中毒解救等）

5、要有可以进行复杂样品分析的设备如GC-MS、HPLC等。

6、工作量大，测定数据的处理和结果的阐明不太容易。

二、简述常用生物样本的种类及采集、储存方式。简述生物样品测定前除蛋白质的原因及常用方法。

1、血液

采集：待药物在血液中分布均匀后取样，从静脉采血。

制备：血浆(plasma)：全血+抗凝剂（肝素等）—离心—上清液（淡黄色）血清(serum)：全血静置一段时间—离心—上清液（淡黄色）

全血(whole blood)：全血 + 抗凝剂（肝素等）—混合

储存：采血后即使分离，不超过2h，分离后置于冰箱或冷冻柜中保存；若不予先分离，血凝后冰冻保存；短期4℃，长期-20℃。

2、尿液：尿中药物以原型、代谢物或缀合物形式存在。

采集：自然排尿，常用涂蜡的一次性纸杯或玻璃杯

制备：尿液加入适当的防腐剂于储尿瓶

储存：主要成分是水、尿素、盐类，易长细菌，短期可置4℃冷藏或加防腐剂，若保存时间长则需冷冻（-20℃）保存。

3、唾液

采集：漱口15min后，用插入漏斗的试管收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液采集时间至少10min 制备：唾液除去泡沫部分—放置分

层—离心—上清液。

制备：唾液出去泡沫部分—放置分层—离心—上清液

储存：4℃以下保存冷冻的样品测定时需解冻冷冻，最好一次性测定完毕，不要反复冷冻--解冻--冷冻--解冻，以免药物含量下降。

样品的贮存除了上述的冷冻贮存，还包括：

1、加稳定剂：酶抑制剂：NaF，四氢尿苷，三氯醋酸；

抗氧剂：维生素C 等

2、防腐剂、改变pH 值

尿样中可加入的防腐剂有：甲苯、氯仿等或加无机酸、碱等调节尿液pH 值。

除蛋白质的原因：

1、使结合型药物释放出来，以测定总浓度。

2、得到较“干净”的提取液，减少乳化。

3、消除对测定的干扰。

4、保护仪器，延长使用期限。

常用去蛋白质方法：

1、蛋白质沉淀法——生成不溶性盐或盐析和脱水作用。包括：加酸类、重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等，如：三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等。

2、组织酶消化法——蛋白水解酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。

三、简述体内药物分析方法的确证的内容。阐述定量限与检测限的

定义及区别、表示方法。

分析方法的验证，就是对药品分析实验所采用的分析方法是否完全达到了

预期目的，或证明由分析方法误差而导致试验结果判断错误的概率是否在允许范围之内，而进行的科学证明。分析方法的验证以验证参数表示：

1、专属性（Specificity）：专属性是指在一些可能存在的组分如杂质、降解

产物、基质等的存在下，对被分析物质的准确可靠的测定。

2、准确性(Accuracy)：准确性指的是真实值或认可的参考值与测量值之间相

近程度。

3、精密度(Precision)：精密度指的是规定条件下对同一匀质样品多次取样进

行一系列检测结果的一致程度（离散程度）。精密度可以从三方面考虑：重复性、中间精密度、重现性。分析方法的精密度通常以测量法的变异性、标准偏差或变异系数来表达。

4、重复性(Repeatability)：重复性是指在同样的操作条件下较短时间间隔的

精密度，也称为日内差(Intra-assay precision)。

5、中间精密度(Intermediate Precision)：中间精密度指的是试验室内部条

件改变（如：不同天、不同分析测试者、不同仪器等）情况下的精密度。6、重现性（Reproducibility ）：指不同试验室之间的精密度，常用于合作

试验研究(collaborative studies)中的方法学的标准化研究。

7、检测限度(Detection limit)：检测限度指的是样品中的被分析物质能够被

检测到的最低量，通常无需定量。

8、定量限度(Quantitation limit)：某种分析方法的定量限度是指具有合适准

确性和精密度的条件下，能够定量测定分析组分的最低限量。它是样品中含量低的化合物定量分析的参数，特别适用于杂质和（或）降解产物的测定。

9、线性(Linearity)：分析方法的线性是指所得检测结果与样品中被分析物的

浓度（含量）成比例关系的性能。

10、范围(Range)：析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度(量)和较低

浓度(量)之间的区间、已证实区间内具有合适的准确性、精密度、线性。11、耐用性(Robustness)：分析方法的耐用性是指试验参数适当地发生细小改

变时，测量能力保持不受影响，可用于说明正常使用时的可靠性。

定量限：是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其结果应具有一定的准确

度和精密度。

检测限：是指分析方法在规定的实验条件下试样中被测物能够被检测出的最低量。

区别：定量限所规定的最低浓度应满足一定的精密度和准确度的要求。

定量限：信噪比3:1

检测限：信噪比10:1

四、简述基质效应产生的原因、影响、确认方法以及消除。

原因：标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响，引起基质效应的因素相当复杂，涉及实验的多个部分：仪器设计、试剂组成、方法原理，以及质控物、定标物和PT 材料的成分和处理技术。

与标准样品和QC 样品相比，生物样品在进行液相色谱-电喷雾电离-质谱法分析时，会产生明显的基质效应。

产生于生物样品中的内源性物质、代谢产物或一同服用的其它药物，因在色谱分析中与目标化合物分离不完全或未被检测到而进入质谱后产生基质效应。

影响：基质效应会使分析物的测定值发生改变，数值或偏大或偏小。

而在生物样品（以血浆为例）中，引起基质效应的主要是磷脂、胆固醇等内源性物质。他们随同待测物从色谱柱上一起被洗脱出来，经离子源气化，进入质谱进行检测分析。而就在液滴气化、发生库伦爆炸变成小液滴直至产生气体离子的过程中，这些内源性的物质由于极性较大，会同待测物离子竞相竞争液滴表面，从而导致待测物的离子化效率降低或增强，引起响应降低或增高，这就产生所谓的基质抑制或基质增强效应

基质效应的确认方法：

1、标准曲线法

2、柱后灌注法