CTDNA标本处理的标准操作程序

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DNA制片过程

DNA制片过程制片过程1.固定（宫颈标本）医生用宫颈刷刷取标本后，将宫颈刷头取下放入固定液中，使取得的宫颈细胞标本得到及时的固定保存。

2.消化将固定液瓶放于振荡器上振荡半小时，直至粘液被完全消化，标本呈细颗粒状——细胞分散成细胞悬液止。

3.离心宫颈刷取物标本或痰标本消化好的标本液使其细胞均匀分布，另取一支7ml试管，倒入标本液4~5ml，放入离心机中以2500转/分转速离心4分钟。

从离心机中取出后，倒去上清夜。

根据沉淀的标本量加入适量固定液，再用一次性吸管反复抽吸使其混合均匀备用。

浆膜腔积液1）将标本先摇匀，将浆膜腔积液标本倒入一支50ml或15ml刻度离心管，放入离心机中以3000转/分转速离心5分钟。

2）从离心机中取出后，倒入上清液。

（或用一次性滴管吸除上清液，具体操作可视沉淀物性状而定）4.制片宫颈刷取物制片将转头置入离心涂片机（兰丁高科公司）中备好，吸取混匀的标本液加入转头孔中，以1500转/分的速度离心涂片4分钟，制成薄层细胞片1-2张。

细胞片经充分干燥后，经Feulgen-THionin染色，用DNA细胞自动检测分析仪扫描。

浆膜腔积液根据标本的性质，合理选择使用离心涂片机制片或者推片。

染色过程1）将制好的标本片干燥。

2）固定：将标本片置入无水乙醇中固定30分钟，回收无水乙醇。

3）B.S液固定60分钟，回收B.S液。

4）水洗3到5次，尽量控干水分。

5）酸化水解：5N HCL 25摄氏度酸解60分钟。

6）水洗3到5次。

7）DNA染液67分钟（25摄氏度）。

8）水洗6到8次。

9）用漂洗液漂洗3次，第1次1分钟、第2次3分钟、第3次4分钟。

10）水洗3到5次。

11）脱水：分别经95%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、无水乙醇各2分钟。

12）吹干、贴条形码，中性树胶封片。

DNA定量筛查实验流程

宫颈癌DNA筛查步骤，制片标准化流程
筛查步骤
制片流程
一、接收标本，登记病人信息并编号
1. 检查是否少液、漏液
2. 标本瓶上信息是否对应清晰正确
3. 输入病人信息
二、细胞收集
1. 锥形试管编号，向内加入4ml样本密度分离液，将标本在旋涡振荡器上振荡1min
2. 锥形管倾斜45度，滴管取8ml样本加入试管中200r离心3 min，去除8ml 上清液
3. 800r离心10min，去除全部上清液
4. 加1.5ml次缓后于旋涡振荡器上1min混匀
三、常规制片
1. 振荡器上混匀，静置30s-60s后取0.75ml液体，加入常规制片套管内制片，
沉降时间10min
2. 倒去上清液，加入1ml无水乙醇
3. 取下套管，玻片放置于卧式染缸中用电吹风热风吹干，冷却然后进行DNA 染色
四、DNA染色
1. 95%酒精30min，流水洗4-5次，沥干
2. 固定液60min，流水洗4-5次，沥干
3. 分化液45min，流水洗4-5次，沥干
4. 硫堇60min，流水洗4-5次，洗涤后在水中浸泡5-10min
5. 95%酒精2min
6. 无水酒精2min
五、DNA封片（干封）。

标本前处理标准操作程序

标本前处理标准操作程序1.目的：保证标本处理标准化、规范化，使不规范操作因素对实验结果造成的影响减至最小。

2.适用待处理标本范围：线粒体DNA标本3.操作人：张英王松涛4.标准操作程序a）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和试管依次编号后，在15ml有盖离心管中加血样，以冷蒸馏水稀释至15ml，反复颠倒混匀。

室温或4℃下以3000rpm/min离心10分钟。

b）缓慢倾倒上清，注意勿将白色沉淀倒出，加0.1%Triton-X100（预冷）至15ml，混匀，如上离心，弃去手套。

c）双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出1.5ml离心管，对应标本编号，置于离心管架上，将沉淀加入1~2mlDNA抽提液（10mM Tris-Cl PH 8.0，10mM EDTA，10mM NaCl），混匀，悬浮白细胞，加10%SDS至终浓度为0.5%，剧烈震荡至无团块。

加蛋白酶K(20mg/ml)至终浓度为100μg/ml，混匀，55℃三小时或37℃过夜消化。

水浴完成后用镊子将水浴板取出。

d）在上清中加入1/5体积的5M NaCl，混匀，以1000rpm/min离心10分钟。

e）把上清转入新的管中，用2倍体积的无水乙醇（预冷）沉淀DNA，短时离心，DNA贴壁后倒掉上清，用70%乙醇清洗DNA两遍。

倒掉上清，短时离心，吸干上清后，干燥DNA，用TE溶解DNA。

f）完全溶解后的DNA经分光光度仪测定OD260/OD280比值>1.8者可用于有关的研究工作。

计算DNA含量 (1 OD260=50μg DNA)。

提取后的DNA均以1.5 ml Eppendorf管贮存，注明样品所属家系、编号等资料。

贮存的DNA样品应置于–20℃保存，长期不用者应–70℃保存。

e）PCR时取上清液1µl点样上机，收拾台面至准备状态。

DNA提取(采集)、保管、移送、检验、数据转换及垃圾数据清理工作规范

DNA提取（采集）、保管、移送、检验、数据转换及垃圾数据清理工作规范1目的全面规范现场生物物证和各类涉案人员样本的DNA提取、采集、保管、移送、检验、数据转换及垃圾数据清理工作。

2原则要遵循及时、全面、准确、客观的基本原则。

3范围适用于全省各级公安机关的现场生物物证和各类涉案人员样本的DNA提取、采集、保管、移送、检验、数据转换及垃圾数据清理工作。

4依据本规范的制定依据如下文件：GA/T382-2014《法庭科学DNA实验室建设规范》；GA/T383-2014《法庭科学DNA实验室检验规范》；GA/T1162-2014《法医生物检材的提取、保存、送检规范》；GA/T1163-2014《人类DNA荧光标记STR分型结果的分析及应用》；GA/T1161-2014《法庭科学DNA检验鉴定文书内容及格式》；GB/T21679-2008《法庭科学DNA数据库建设规范》；GA/T 965-2011《法庭科学DNA亲子鉴定规范》；《公安机关查找被拐卖儿童DNA检验技术应用规范（试行）》（公刑[2009]625号）；CNAS-CL28《司法鉴定/法庭科学机构能力认可准则在法医物证DNA鉴定领域的应用说明》。

5术语和定义5.1现场生物物证检材（以下简称“DNA检材”）来源于案（事）件现场，并可进行常规物证、DNA检验，从而能为侦查提供线索、为法庭提供证据的生物样本，或含有、承载可进行常规物证、DNA检验的生物样品的物品。

现场生物物证检材一般包括血液（斑）、唾液（斑）、精液（斑）、毛发、骨骼、脱落细胞、阴道内容物（斑）、人体组织、分泌物、排泄物以及烟头、果核、口杯、口香糖等。

5.2污染在提取、保存和送检过程中，混杂入原始检材中，导致法医遗传学检验结果异常的外源性生物物质。

5.3对照样本从生物样品在载体上的附着部位附近空白处提取的样品。

5.4比对样本已知来源的，在法医物证DNA检验中用于比对参照的样品。

比对样本一般包括被害人、嫌疑人或直系亲属的样品。

亲子鉴定DNA提取标准操作规程

DNA提取标准操作规程1. 目的：规范不同检材的DNA提取操作程序，确保DNA质量，保证STR分型结果准确性。

2. 原理：Chelex-100 是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。

在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去Chelex颗粒，使其结合的物质与DNA 分离。

磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。

反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。

3. 操作者：具有法医物证检验资格的广西区妇幼司法鉴定所技术人员。

4. 标本：5％EDTA抗凝全血、8-10ml胎儿羊水、5％EDTA抗凝脐血、FTA纸血斑、口腔拭子、5-10根带毛囊的毛发、绒毛细胞。

5 试剂：5.1 试剂的厂家及规格：5.1.1 DNA抽提试剂 Chelex-100 伯乐公司（Bio-Rad Laboratories, Inc. CA U.S.A）。

5.1.2 DNA抽提试剂 Promega PP18或PP21 DNA System抽提试剂盒。

5.1.3 DNA抽提试剂口腔棉签制备基因组DNA试剂盒（G&T，U.S.A）5.1.4 无水乙醇分析纯5.1.5 异丙醇分析纯5.1.6 无菌的超纯水由实验室技术人员制备。

5.2 试剂的配制：5.2.1 5％Chelex-100的配制：称取5克粉状Chelex-100于试剂瓶中，加入灭过菌的超纯水至100ml。

5.2.2 灭菌超纯水的制备：用干净的试剂瓶装超纯水1升左右，经121℃灭菌30分。

6 仪器及设备：6.1 生物安全柜。

6.2 高速离心机。

6.3 超速冷冻离心机。

肿瘤血液ctdna提取步骤

肿瘤血液ctdna提取步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：肿瘤血液ctdna提取是一种非侵入性的方法，用于分析肿瘤细胞在血液循环中释放的DNA。

这种方法可以帮助医生了解肿瘤的遗传变异情况，从而指导治疗方案的制定和调整。

下面就来详细介绍一下肿瘤血液ctdna提取的步骤。

第一步：采集血液样本肿瘤血液ctdna提取的第一步是采集患者的血液样本。

通常使用的是完全干净的血液管，确保不含有外源性DNA。

血液样本可以是患者的全血或血浆，通常采集的是静脉血样本。

第二步：离心分离DNA采集到血液样本后，需要进行离心分离以获取纯净的DNA。

离心分离一般需要在4摄氏度下进行，确保DNA的完整性和稳定性。

离心后，将上清液小心转移至新的离心管中，避免干扰物质的污染。

第三步：DNA提取提取ctdna的关键步骤是将DNA从血液样本中分离出来。

目前常用的方法有化学提取法和商业化的DNA提取试剂盒。

化学提取法主要包括蛋白酶K消化和DNA酚-氯仿提取法。

DNA提取试剂盒则是根据特定的原理和离心技术来实现DNA的提取。

第四步：纯化DNA提取到的DNA通常还会包含一些其他的杂质，因此需要进行纯化处理以获得纯净的ctdna。

纯化的方法主要包括等温扩增（PCR）法和柱式纯化法。

等温扩增法是通过PCR反应来扩增ctdna的数量，柱式纯化法则是利用大小分子筛选的原理将杂质和ctdna分离。

第五步：定量和质检提取和纯化得到的ctdna需要进行定量和质检，确保提取的质量和纯度满足后续的实验要求。

常用的定量和质检方法包括紫外分光光度测定法和琼脂糖凝胶电泳法。

根据定量和质检的结果，可以调整ctdna的用量和纯度。

第六步：保存和储存最后一步是将提取得到的ctdna保存和储存起来，以备后续的实验使用。

通常将ctdna保存在-80摄氏度的冰箱中，避免DNA的降解和损伤。

同时可以将ctdna存储在硅胶柱或硅胶棒上，以便长期保存和再提取。

通过以上的步骤，可以成功地提取肿瘤血液ctdna，并对其进行分析和研究。

临床基因扩增实验室标本前处理标准操作程序

临床基因扩增实验室标本前处理标准操作程序目的保证标本处理标准化、规范化，使不规范操作因素对实验结果造成的影响减至最小。

2 该SOP变动程序本文件的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报经室负责人决定。

如通过则公布实行。

3 适用待处理标本范围临床基因扩增实验室现行检测项目。

4 标准操作程序4.1 DNA血清类（例如HBV）⑴双手戴上手套，从冰箱取出标本，将验单和试管依次编号，收起验单，弃去手套。

⑵双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出1.5ml离心管，对应标本编号，置于离心管架上。

⑶将移液器调到50µl，先吸取50µlDNA提取液加入到编好号的离心管中。

然后吸取50µl 血清，加入离心管中混匀，注意每吸取一份血清标本应更换一次枪头。

处理全部标本，然后将离心管插到水浴板上，用镊子放入水浴锅，沸水浴10分钟。

⑷水浴完成后用镊子将水浴板取出，转至4℃静置8～12小时，然后10000转5分钟离心，取上清液2µl点样上机。

⑸收拾台面至准备状态。

4.2 RNA血清类（例如HCV）⑴双手戴上手套，从冰箱取出标本，将验单和试管依次编号，收起验单，弃去手套。

⑵双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出0.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上。

⑶先用5～40µl的移液器，吸取10µlRNA提取液A加入到编好号的离心管中，再用40～200µl 的移液器吸取50µl 血清加入，最后用200～1000 µl移液器加入200 µlRNA提取液B，在震荡器上震荡混匀，冰上放置5分钟，然后6000转1分钟离心。

⑷去上清，留沉淀。

加入450µl 用DEPC水配制的75﹪的预冷乙醇洗涤沉淀，然后6000转1分钟离心，去上清。

相同方法再洗一次，吸干上清，65℃10分钟烘干。

⑸给烘干的沉淀中加入18 µl的反应液I，混匀，再加入2 µl逆转录酶，充分混匀，瞬时离心（3秒），放入温箱，37℃45分钟逆转录。

ctdna质控方案

ctdna质控方案I. 简介CTDNA（循环肿瘤DNA）是一种在血液中存在的肿瘤特异性DNA，它可以提供肿瘤的遗传信息和突变情况。

为了确保准确性和可靠性，制定CTDNA质控方案至关重要。

本文将介绍一个综合的CTDNA质控方案，旨在确保实验过程及结果的准确性和一致性。

II. CTDNA样本采集与存储准确和可靠的CTDNA质控必须从样本采集和储存过程开始。

以下是一系列的步骤来确保高质量的CTDNA样本：1. 采集：使用合适的采集管和方法采集新鲜的血液样品，避免溶血和外来污染。

2. 预处理：对采集的样本进行标准处理，如离心、血清分离等。

确保预处理的一致性以减少功效差异。

3. 存储：将预处理后的样本在-80℃低温冰箱中存储，并避免多次冻融循环，以减少DNA降解的可能性。

III. CTDNA提取与富集为了提取和富集目标DNA，下面的步骤是CTDNA质控方案中的关键环节：1. 提取：使用优质的DNA提取试剂盒，根据厂商说明书进行提取步骤，并严格控制实验条件和操作手法的一致性。

2. 富集：采用合适的CTDNA富集方法，如磁珠、抗体、PCR等，确保富集效率高、选择性好，并有效地去除干扰物质。

IV. CTDNA质量评估为了评估CTDNA的质量，以下是几种常见的质量评估方法：1. 摄影图分析：使用电泳或定量PCR等技术，观察和测定样本中的DNA片段长度分布和浓度。

2. 质控样品：建立一组已知基因突变和拷贝数变异的质控样品，通过分析这些样品并对比结果来确保实验准确性和一致性。

3. 重复检测：对同一样本进行多次检测，检查结果的一致性和重复性。

V. 数据分析与解释CTDNA质控方案的最后一步是数据分析和解释。

以下是几个关键环节：1. 引物设计：使用合适的引物设计软件，确保引物的特异性和灵敏度，有效避免假阳性或假阴性结果。

2. 扩增反应：选择适当的PCR条件、酶和试剂，优化扩增反应的效率和准确性。

3. 数据解读：使用可靠的数据解读工具和数据库，对测序结果进行生物信息学分析，识别突变、拷贝数变异等。

血浆游离DNA(ctDNA)提取标准操作规程

血浆游离DNA提取标准操作规程1.目的：制定DNA提取标准操作规程，使尽可能多提取到血浆游离DNA。

2.适用范围：血浆提取。

3.术语及定义：无。

4.职责：4.1 文件编写：高通量实验室技术员。

4.2 文件审核：高通量实验室组长。

4.3 文件审批：实验室主任。

4.4 执行：高通量实验室的所有工作人员。

5.操作规程：5.1准备工作5.1.1紫外杀菌：打开超净工作台内的紫外灯，杀菌30 min，关闭紫外灯，打开抽风机，通风10 min。

5.1.2实验前准备：通风结束后，根据《实验室安全防护规程》中的相关规定，换好洁净服、洁净帽、防护镜等进入实验室；将恒温金属浴打开至56℃，将恒温水浴锅打开至60℃。

5.1.3准备物品：准备1.5 mL及2.0 mL的EP管，50mL离心管，96孔双面板，1000μL、200μL、100μL、20μL、和10μL移液枪和枪头，游离核酸提取试剂盒（离心柱法）。

5.1.4试剂准备及配制：5.1.4.1无水乙醇，异丙醇。

5.1.4.2每管Carrier RNA（干粉）中各加入1550μL的洗脱液（A VE），充分混匀，溶解。

-20℃保存（Carrier RNA为白色或半透明物质，请确保其完全溶解；反复冻融不可超过三次，可分装保存避免反复冻融）。

5.1.4.3每瓶AW1加入25mL的无水乙醇，并在管盖及瓶身打勾，室温保存。

5.1.4.4每瓶AW2加入30mL的无水乙醇，并在管盖及瓶身打勾，室温保存。

5.1.4.5每瓶ACB加入200mL的异丙醇，并在管盖及瓶身打勾，室温保存。

5.1.4.6 Buffer AL与Carrier RNA进行混合，配制成裂解工作液(现配现用)5.1.5真空泵准备依次将Luer slot of the QIAvac 24 Plus (closed with luer plug)、开关阀、连接器、吸附柱、扩展管装到真空泵底座上（装紧以防止漏气）。

5.2 DNA提取流程5.2.1在50mL的离心管内加入100μL的蛋白酶K。

临床基因扩增检验实验室HBVDNA标本处理的标准操作程序

临床基因扩增检验实验室HBV-DNA标本处理的标准操作程
序
一、目的：
规范临床基因扩增检验实验室对临床标本的处理，提高检测结果的准确率。

二、适用范围：
中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒。

三、职责：
由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。

四、程序：
1、打开加热器，设定温度100℃。

2、从试剂盒中取出DNA提取液、阴性对照、阳性对照，让其在室温下完全融化。

3、将DNA提取液、强阳性对照、临界阳性对照、阴性对照
于振荡混匀器振荡5s，6000—8000rpm离心5s。

4、取40ulDNA提取液，分别加到1.5ml离心管中。

5、再加入待测样本血清或试剂盒中的阳性对照品40ul，振荡混匀。

6、放入100℃干浴或沸水浴10min。

7、转至4℃静置8～12小时，10000rpm离心5min，保留上
清4℃保存备用（如需长期保存请放置于-20℃）。

8、离心管取出转移至加样区，取上清液2ul加样进行PCR 扩增。

此标准操作变更程序：如果本操作程序使用者在实际工作中发现其存在问题，则应向科室负责人提出，科室负责人则召集所有与本程序有关的人员讨论，以决定是否需要变更本程序。

HBV样本处理流程图。

临床样本DNA模板的常规制备方法

临床样本DNA模板的常规制备方法一、病毒标本中提取DNA(支原体、腺病毒)处理方法（1）将擦拭过的咽拭纸放入1.5ml装有1ml生理盐水的eppendorf管中。

（2）以10,000r/min离心5分钟，去上清液。

（3）沉淀物加入30 ml TE液混匀后煮沸10分钟，4℃保存备用。

二、从细菌中提取DNA1．NG（淋球菌）DNA的提取标本可取自尿道、生殖道或结膜分泌物。

（1）取男性尿道口或女性宫颈处分泌物于事先加有1ml生理盐水的eppendorf管内。

（2）振荡棉签或拭纸使NG释放出来。

（8）加入2倍体积无水乙醇沉淀DNA。

（9）去乙醇，空气干燥后加入30μl的TE液，置4℃冰箱保存备用。

2．TB（结核杆菌）DNA的提取临床标本可来源于痰、尿、支气管灌洗液、胸水、腹水、心包积液等。

处理方法也不尽相同，除痰标本外，其他标本大致相同。

注意痰标本的留取一定要取次日早上的晨痰，留存器皿要无菌消毒，避免污染。

（1）痰标本TB DNA的提取①挑少许痰液放入1.5ml的eppendorf管中，加入5mo1/L NaOH 500μl混匀，使痰液变稀，室温中摇动20分钟。

②加入1mo1/L NaH2PO4600μl混匀（起中和作用），10,000r/min离心5分钟。

③去上清液，补加TE至500μl混匀，加少许溶菌酶。

④置37℃消化30分钟。

⑤加等体积的酚、氯仿、异戊醇（25：24：1）混合液，摇匀20分钟。

⑥10,000r/min离心5分钟，将上清液移至另一干净eppendorf管中，加入等体积的酚、氯仿、异戊醇混合液，继续摇匀20分钟。

⑦10,000r/min离心5分钟，移上清液于另一小管中，加入等体积异丙醇摇匀。

⑧10,000r/min离心5分钟，去上清液，置空气中干燥，加入30μlTE溶解沉淀物，置4℃冰箱备用。

（2）胸水、腹水、支气管灌洗液、尿液、心包积液标本TB DNA的提取①将上述液体3ml，经反复离心，去上清液，留沉淀物。

肿瘤血液ctdna提取步骤-概述说明以及解释

肿瘤血液ctdna提取步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述肿瘤血液ctDNA（循环肿瘤DNA）提取是一项关键的实验步骤，它可以为肿瘤诊断、治疗和监测提供重要的信息。

ctDNA是从肿瘤细胞中释放出来的DNA片段，可以在患者的血液中被检测到。

通过提取血液中的ctDNA，我们可以了解肿瘤的基因突变、病情进展以及对治疗的应答情况。

在本文中，我们将介绍肿瘤血液ctDNA提取的步骤及其重要性，希望能帮助研究者和临床医生更好地了解和应用这一技术。

通过深入了解ctDNA提取的关键步骤和操作技巧，我们可以提高提取效率，减少错误，从而为肿瘤患者的个性化治疗和预后评估提供更可靠的依据。

1.2 文章结构文章结构部分主要是指整篇文章的组织结构和内容安排。

在本篇长文中，文章结构包括引言、正文和结论三个主要部分。

- 引言部分（Introduction）：在引言部分，首先概述了肿瘤血液ctdna 提取步骤的重要性和背景信息，介绍了文章的主题和研究意义。

通过引言部分，读者可以了解到本文的主题和研究方向，引起读者的兴趣和注意。

- 正文部分（Main Body）：正文部分是整篇文章的核心内容，主要介绍了肿瘤血液ctdna提取的重要性、提取步骤的详细介绍以及实验操作技巧等内容。

这部分主要展开讨论和分析，对相关内容进行详细阐述和说明，以便读者更深入地了解和掌握肿瘤血液ctdna提取步骤的相关知识。

- 结论部分（Conclusion）：结论部分对整篇文章的内容进行总结和归纳，总结提取步骤的重点和要点，展望肿瘤血液ctdna提取技术的应用前景，并提出作者自己的结论和看法。

通过结论部分，读者可以得到作者对肿瘤血液ctdna提取步骤的总体评价和建议。

1.3 目的在这篇文章中，我们的主要目的是介绍肿瘤血液ctdna提取的步骤，解释其重要性，并提供实验操作技巧。

通过本文的阐述，我们希望读者能够了解到肿瘤血液ctdna提取的方法和原理，掌握提取过程中的关键步骤，从而为肿瘤ctDNA的检测和研究提供参考。

CT-DNA样本处理

CT-DNA样本处理标准操作规程1.目的规范沙眼衣原体DNA样本制备操作。

2.范围CT - DNA 定量检测实验的样本制备操作。

3.操作人员PCR室在岗工作人员。

4. 操作步骤4.1 打开金属浴，调至37℃；4.2 从传递窗中取出已配好的PCR 反应液管、定量参考品、DNA提取液及阴、阳性质控。

PCR 反应液管立即放入样本准备区4 ℃冰箱。

4.3 定量参考品A 一D 及阴、阳性质控置37 ℃金属浴中复融，振荡混匀5 秒然后低速离心6000rpm，使管盖不沾带试剂。

4.4 将金属浴调至100℃备用。

4.5 样本处理4.5.1 向拭子管中加入1mL灭菌生理盐水，高速震荡1min，挤干拭子；4.5.2 将处理后的全部液体转移到1.5mL离心管中（如分泌物过多，只取200μL），10000rpm 离心5分钟；4.5.3 弃上清，向沉淀中加入1mL灭菌生理盐水，振荡混匀3 min，10000rpm离心5分钟；4.5.4 弃上清，向沉淀中加入50μL DNA提取液（DNA提取液使用时边颠倒混匀边迅速打开管盖吸取颗粒和液体一起加入沉淀中），盖上管盖，振荡混匀3 min，低速离心至5000rpm 使颗粒和液体集中在管底，至管壁上无液体，取出置于加热至100 ℃的金属浴中温浴10 分钟。

4.5.5 10 分钟后从金属浴中取出离心管放至4 ℃冰箱冷却3 分钟,10000rpm离心5分钟，上清液用于PCR反应。

4.6 阴性、阳性质控品样本处理4.6.1 取出阴性、阳性质控品各50μL加到1.5mL离心管中，各加入50μL DNA提取液（提取液内含不溶于水的物质，应充分混匀后吸取），充分混匀，100℃恒温处理10分钟；。

人民医院基因扩增实验室临床标本保存操作规程

人民医院基因扩增实验室临床标本保存操作规程
1 目的
临床标本正确保存，以便必要时复查。

2 操作程序
2.1 检测前标本保存
2.1.1 HBV：全血标本可4℃下短期（24h内）保存，长期保存则需分离出血清（血浆），保存于-20℃下。

2.1.2 HCV：在1小时内分离血清，吸取200µl，加入20u RNAsin，保存于-20℃。

尽可能快的提取RNA。

2.1.3 TB：痰或胸腹水、脑脊液、脓液标本用于TB检测的短期保存可置于4℃下，长期保存则于-20℃下。

2.1.4 CT：标本短期（24h内）保存置于4℃下，长期保存则需在-20℃下。

2.2 完成检测后标本保存
2.2.1 提取的核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-20℃保存。

报告发出后第二天丢弃。

2.2.2 原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-20℃保存3个月，以备复查。

超过3个月保存期的标本由实验室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品交医院统一处理。

3 相关表格
标本保存记录表，编号PCR(N)-SOP-213-01。

4 批准记录。

标本处理(核酸纯化)程序

1 目的：保证标本处理标准化、规X化，使不规X操作因素对实验结果造成的影响减至最小。

2 适用X围：乙型肝炎病毒核酸提取、解尿支原体核酸提取、沙眼衣原体核酸提取、HPV核酸提取、HCV核酸提取、结核杆菌核酸提取、淋球菌核酸提取。

3 操作人：李成庭、李丽蒙、高子文李华娇 X国华4 标准操作程序4.1乙型肝炎病毒〔DNA血清〕1〕双手戴上手套，从冰箱取出标本，将离心管依次编号。

2〕取出1.5ml离心管，对应标本编号，置于离心管架上。

3〕将移液器调到70µl，先混匀DNA提取液，再吸取70µl加入到已编号的离心管中。

然后吸取30µl血清，加入离心管中混匀，注意每吸取一份血清标本应更换一次枪头。

处理全部标本，然后将离心管插到金属浴孔内，100℃加热10分钟。

4〕裂解完成后将离心管取出，然后10000rpm离心5分钟，取上清液20µl加样上机。

5〕收拾台面至准备状态。

4.2 CT、UU、NGHDNA〔分泌物〕1〕双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和离心管依次编号。

2〕双手换上新手套，取出1.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上。

3〕向有棉拭子的离心管中加入2ml无菌生理盐水，振荡混匀，将混悬液用移液器吸取1.0ml 加入到已编号的离心管中。

10000rpm离心5分钟，弃上清液，留取沉淀加50微升DNA提取液混匀，金属浴100℃加热10分钟。

4〕裂解完成后取出离心管，然后10000rpm离心5分钟，取上清液2µl 加样上机。

5〕收拾台面至准备状态。

4.3结核杆菌〔DNA 痰液、胸腹水等〕1〕双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和离心管依次编号。

2〕双手换上新手套，取出1.5ml灭菌离心管，对应标本编号，置于离心管架上。

3〕用移液器吸取4倍体积4%NaOH到痰液容器，液化30分钟，用移液器调吸取1ml加入到已编号的离心管中，然后10000rpm离心5分钟，弃上清，留取沉淀，用无菌生理盐水洗涤两次，沉淀加50ulDNA 提取液，充分震荡混匀。

ctDNA怎么做？有哪些注意事项？ESMO超全指导来了

ctDNA怎么做？有哪些注意事项？ESMO超全指导来了*仅供医学专业人士阅读参考ESMO精准医学工作组支持ctDNA可常规用于指导晚期肿瘤临床实践。

当前，液体活检技术呈现快速发展的态势，而循环肿瘤DNA （ctDNA）检测就是其中的检测靶标之一。

尽管ctDNA的临床实用性证据日趋增多，但若要在临床实践中常规开展，则需要证实分析结果与临床具备相关性，并且在检测质量方面需要具备相关的具备证据支持的标准。

近日，在国际权威杂志ANNALS OF ONCOLOGY上，欧洲肿瘤内科学会（ESMO）精准医学工作组的专家就出具了一份ctDNA应用于肿瘤临床实践的报告，并且进行了相关的推荐。

论文封面截图ctDNA检测报告的内容取决于ctDNA检测类型和检测的预期用途。

除了一般临床分子实验室的报告建议之外，ctDNA检测报告的要素已在表1中列出，并且可以在以下网址查询：/10.1016/j.annonc.2022.05.520表1：ctDNA检测报告规范ctDNA检测的采血时间应根据临床情况谨慎选择，因为不同的因素会影响ctDNA的释放（例如，正在接受的治疗、并发炎症过程及手术）。

对于术后ctDNA-微小残留病（MRD）的检测，在理想情况下应该在术后至少1周进行，对于愈合时间较长的大手术，可能需要2周或更长时间。

对于以晚期癌症基因分型为目的的ctDNA检测，在积极治疗有效或无进展时应避免采血，以尽量减少假阴性结果。

血样采集管的选择主要基于样本处理时间和检测方法，因此，应该慎重选择。

如果血浆样本暂时不提取ctDNA，则应在-80℃下长期储存，应将温度变化控制至最小，并尽可能减少反复冻融。

假阴性（实际存在于肿瘤中但未检测出的变异）是ctDNA检测的一个重要问题，可能是血浆ctDNA水平低、检测灵敏度不足或“非脱落”肿瘤（non-shedding tumor，即肿瘤本身不释放ctDNA）所致。

CHIP是ctDNA检测中假阳性的常见原因，因此建议在进行肿瘤抑制基因如DNA修复基因的可靶向性检测时，应对血浆ctDNA和白细胞DNA进行同步检测分析，进而排除CHIP突变。

标本处理流程

标本处理流程
1.血清-DNA：100ul未知样本与100ulDNA浓缩液混匀→12000rpm/10min→弃上清→加30ul DNA 提取液，充分振荡混匀→100℃沸水浴10±1 min→12，000rpm/5min备用。

2.阴性对照品、临界阳性对照、阳性对照处理：吸取50ul→加入50ul DNA 提取液混匀→100℃沸水浴10±1min→12，000rpm/5min 备用。

阳性定量参考品处理：振荡，8000rpm/数秒，备用。

4.分泌物棉拭子或咽拭子-DNA ：标本加1ml生理盐水→震荡吸取液体转至1.5mlEP管中→12000rpm/5min→去上清，沉淀加1ml生理盐水在洗一次→弃上清加50ulDNA提取液混匀→以下同血清-DNA。

5.全血-DNA ：500μl全血与500μl生理盐水轻摇混匀→干燥玻璃试管加入500μl 淋巴细胞分离液→稀释好的全血用移液器缓慢加入加有淋巴细胞分离液的试管中（注意沿着管壁，速度要慢）→2000rpm/20分钟→吸取白细胞层（从上往下的第二层）到新管→12000rpm/5分钟→弃上清加50ulDNA提取液混匀→以下同血清-DNA。

6.血清-RNA：10μl 充分混匀的RNA 提取液A+100ul血清+200ul RNA提取液充分混匀→8000rpm/1min→弃上清，200ul提取液B 洗一次→8000rpm/1min→弃上清，75%的预冷乙醇→8000rpm离心1min→75%的预冷乙醇→8000rpm/1min→65℃干燥沉淀10 min →2μl逆转录酶+18μlRNA反应液→37℃孵育45 min→95℃灭活3 min→8000rpm/1min备用。

CT操作程序

•操作程序：
1、填写新病人的姓名、所做部位和所需protocol
2、开始扫描se1（先按扫描钮，然后移动床位，然后开始扫描）
3、在定位像上确定扫描范围
4、顺序扫描下面的序列
5、照相
browser：找到待照相的患者和序列
film composer：组织待照的图像
f1:照1张
f2:照全屏
按其他f键调整窗宽和窗位
image＋－：加减图像
series＋－：加减序列
xr空格2:给定位像加上定位线（2-代表se2）
增强扫描：共注射造影剂110ml，3.0ml/min，如果血管条件不好可以减慢速度，注意要相应调整延迟时间。

•扫描厚度：
头颅CT平扫＋增强：层厚、层间隔5-10mm
胸部CT平扫：层厚、层间隔7.5mm
胸部HRCT：层厚、层间隔1.25mm，20mm
胸部CT增强：层厚、层间隔5mm
腹部CT平扫＋增强：层厚、层间隔7.5mm
盆腔CT平扫＋增强：层厚、层间隔7.5mm
副鼻窦CT平扫：层厚、层间隔2.5mm
颞骨CT薄扫：层厚、层间隔1.25mm
椎体平扫：层厚、层间隔3.75mm（理论上应该平行于每个椎体的上下缘进行扫描）
•关于CT扫描的序列：
胸部扫描：se1-定位像、se2－平扫、se3-HRCT、se4-增强
其他部位：se1-定位像、se2－平扫、se3-增强
对于肝血管瘤和肝癌，有时需要延迟2分钟再扫描一遍
对于CTU，延迟20-30分钟再扫描一遍，嘱患者憋尿。