TB法制备高效感受态细胞
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2.11 大肠杆菌感受态细胞的制备
1．划线接种保存于液氮中的菌种于LB培养平板，37℃培养以活化菌种；
2．接种经活化的大肠杆菌单菌落于SOC液体培养基中，18℃，200~250rpm培养；
3．当OD600 = 0.5~0.8时，取出培养物并以冰预冷的50ml离心管收集，于4℃，2500g离心10min，收集菌体；
4．以冰预冷的TB buffer重悬菌体，4℃，2500rpm离心10min，去上清；
5．重复步骤4一次；
6．以8ml 预冷的TB buffer重悬菌体，并逐滴加入DMSO至终浓度为7%；
7．冰浴10min后，分装保存于液氮中。
附：
1、SOC培养基：0.5% Yeast extract，2% Tryptone，10mmol/L NaCl，2.5mmol/L KCl，
10mmol/L MgCl2，20mmol/L MgSO4，20mmol/L Glucose，
121℃灭菌20分钟
2、TB buffer：10mmol/l Pipes, 55mmol/l MnCl2, 15mmol/l CaCl2, 250mmol/l KCl , pH6.7 （膜过滤除菌）
3、LB培养基（液体）：1% Tryptone，0.5% Yeast extract，1% NaCl，pH7.0，
121℃灭菌20分钟
4、LB(固)：1% Tryptone，0.5% Yeast extract，1% NaCl，pH7.0，1.5% Agar，
121℃灭菌20分钟。