免疫学实验-血清学反应
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1、定义： • 颗粒性抗原（如细菌、红血球等） +抗体→凝集 现象。
• 颗粒性抗原与相应的抗体在体外结合，在电 解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块， 为凝集反应，反应中的抗原称为凝集原，抗 体称为凝集素。
18
2、分类 （1）直接凝集反应 • ①概念：天然的凝集原与相应抗体直接结合呈 现的细菌凝集或红细胞凝集现象称为直接凝集 反应。 • ②应用： • 定性检测—ABO血型鉴定、细菌鉴定 • 定量检测—诊断伤寒病的肥达试验等
清（占血清免疫球 蛋 白 总 量 的 80% ） 和组织液中。
5
二、血清学反应的特点：
1、特异性：抗原抗体在体外的结合与在体内 一样，也具有专一性，即特异性。
分子基础：Ag-AD
HVR-Ab 空间结构高度互补
VH和VL各具三个HVR与AD互补
应用： 由于抗原抗体反应具有高度特异性，故 可用已知的抗原（抗体）来检测相应未知的 抗体（或抗原）。
坐标(对数坐标)，绘制标准曲线， 求出待检样品内抗原浓度
25
③双向扩散：
可溶性抗原与相应抗体在含适量电解质的琼脂糖凝 胶板的对应孔中各自向四周自由扩散,若两者分子比 例适当,则在扩散的一定时间后在两孔之间相遇并生 成白色沉淀线.
26
(1) 沉淀线吻合：待检抗原与 标准抗原完全相同。 (2) 沉淀线相切：待检抗原中 含有与标准抗原相同的抗原， 还含有另外的抗原与抗血清 相对应。 (3) 沉淀线相交：待检抗原有 与抗血清对应的抗原，但和 标准抗原不同。 (4) 沉淀线部分吻合：待测抗 原和标准抗原性质相同，但 含量较低。 A1：待检抗原；A2：标准抗原
抗原抗体复合物
9
• 4、阶段性：抗原抗体反应分两个阶
段：
① 抗原抗体发生特异性结合的阶段，反应 快，几秒或几分钟，不可见 ② 可见阶段，短至数分、数小时，长至数 日，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现 象
10
交叉反应（cross reactions）
概念：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结 构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。
• 4. 各管加入绵羊红细胞悬液 0.5ml，于是各管血 清稀释倍数又增加了一倍。 • 5. 将各管震荡均匀，放入37℃温箱中过夜，次日 观察结果。
43
• 二、双向扩散试验——检测血清中的AFP（1份/2人）
• 【操作方法】 • 1. 双向琼脂扩散试验抗原抗体孔位置如下图所示 • 2. 用微量加样器孔中分别加抗甲胎蛋白诊断血清，周围孔 中分别加入待测血清和阳性对照血清，每孔加入25-30μl。 • 3. 将琼脂板放入密闭的盒内（内放浸有5%石炭酸的纱布以 保持湿度），置37℃温箱中，于24小时后观察结果。
7
• 3、可见性：反应体系中抗原抗体
的比例适当，就能形成较大的抗原 抗体复合物，在有一定量电解质或 适宜pH等条件下，出现肉眼可见的 凝集、沉淀等可见反应。
8
亲水胶体转化为疏水胶体
转化
NaCl
亲水胶体
疏水胶体
可见反应
在电解质作用下，中 和胶体粒子表面的电 荷，使各疏水胶体之 间靠拢，形成可见的
血清学反应条件下， 当抗原与抗体结合使表面 抗原抗体均带负电荷， 电荷减少，水化层变薄， 使极化的水分子在其 失去亲水性能，抗原抗体 周围形成水化层，成 复合物成为疏水胶体 为亲水胶体。
6
静电引力 （electrostatic forces） 范德华引力:作用最小 （van der Waals interactions） 氢键:最具特异性 （hydrogen bond ） 疏水作用力:作用最大 （hydrophobic interactions）
2、可逆性：抗原与抗体的结合是非共价键 结合，在一定条件下又可解离为游离状态， 反应具有可逆性。
溶血
31
由抗原抗体复合物结合C1q启动的途径
• 1. 激活剂 Ag-Ab复合物(IgG1,IgG2,IgG3,IgM) • 2. 参与成分 C1～C9 • 3. 激活过程（三个阶段） • 识别阶段 活化阶段 膜攻击阶段
五、现代免疫标记技术
免疫标记技术(Immuno-labelling technique) 是指将抗原或抗体用荧光素、酶、放射性同 位素和电子致密物质等加以标记，借以提高 其灵敏度的一类新技术。 • 优点：特异性强、灵敏度高、应用范围广 、反应速度快、容易观察、能定位、定量甚 至定位。
原的PI时，引起的抗原非特异性自身凝集现象。
（3）温度—影响反应速度
一般：15～40 ℃为宜，
最适温度：37℃
过高（>56）: Ag-Ab解离， Ag、Ab变性， 补体失活。 冷凝集实验：4 ℃凝集，>20解离。 （4）其他 适当的振荡、搅拌等可加速反应
只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的结合反应。
注意：盐析（salting）即电解质浓度过高
引起的非特异性蛋白质沉淀。
13
（2）酸碱度
• Ag、Ab多为蛋白质，具两性电离特性，有其故有 的PI , pH过高或过低均可影响Ag、Ab反应。
• 一般：pH6～8为宜，补体参与时pH7.2～7.4。 • 注意：自凝现象------即pH达到或接近颗粒性抗
B
抗原抗体交叉反应示意图
亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高
11
三、血清学反应的影响因素
1、反应物自身因素
*抗原：理化特性、Ag决定簇数量和种类。
*抗体：1、来源
2、特异性与亲和力
3、浓度
比例要合适
12
2、环境因素：
（1）电解质
作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层，
使Ag〃Ab聚集。
常用：0.85%NaCl溶液、缓冲液、Ca2+、Mg2+等。
抗体的两个Fab段 分别 结合两个Ag分子， 相互 交叉结合连接成巨 大的网格状立体聚 合物，（可见）。
Ab/Ag过剩 过剩方的结合价得不到饱和，大 多数游离存在，只形成小分子复 合物（不可见）。
四、传统的血清学反应
1、凝集反应
2、沉淀反应
3、补体参与的溶血反应 4、中和试验
17
（一）凝集反应
29
（四）补体溶血：红细胞与相应抗体结合，
可激活补体使红细胞溶解，称为补体溶血反 应或免疫溶血反应。 原理：补体激活的经典途径（补体的动画） 补体特点： 补体可与任何抗原抗体复合物结合，但不能 单独与抗原或抗体结合。在有特异抗体存在 时可以溶解细胞（溶菌或溶血）。
30
溶血反应
RBC
+
RBC抗体 (溶血素) 新鲜血清（补体）
23
不同病人抗原浓度测定
1.测定沉淀环直径
通过标准品绘制标准曲线
2.在标准曲线上查找相应抗原浓度
1%琼脂凝胶的孔径约85纳米，可允许各种Ag或 Ab自由扩散，由近及远形成浓度梯度。
24
②火箭免疫电泳
火箭免疫电泳是单向单 扩散和电泳技术相结合 的一种血清学试验，是 让抗原在电场的作用下， 在含有抗体的琼脂中定 向泳动，二者比例合适 时形成类似火箭样的沉 电泳完毕后，观察琼脂板上沉淀 淀峰。沉淀峰的高度与 峰，并测量从孔中心到峰尖的高 抗原的浓度成正比 。 度。以峰高为纵坐标，浓度为横
27
④免疫电泳 ⑤对流免疫电泳
在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白泳向负极；而 一般抗原蛋白质泳向正极
抗原和抗体将在两孔之间相遇，
28
• （三）中和反应：特异性抗体抑制多
种抗原的生物学活性（细菌外毒素的毒 性、酶的活性、病毒的感染性等）的反 应。 • 主要用于毒素的鉴定、病毒感染性疾病 的诊断以及病毒的鉴定。例如在临床实 验诊断中测定风湿病患者体内的抗链球 菌 O抗体的反应。
此时自第一管至第七管血清的稀释倍数分别是1:10， 1:20，1:40……1:320，具体稀释方法可参阅下图。 42
血清０.１ml
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
生理盐水 血清稀释度
０.９
０.５
０.５
０.５
０ .５
０.５
０.５
1：10
1：20
1：40
1：80
1：160
1：320
弃 之
微生物学与免疫学教研室
【基本要求】
• 1. 上实验课时，把个人的书包和衣物放在衣 柜内，穿好白大衣。随身只带必要的实习指导 、笔记本和文具。实验室内禁止饮食。 • 2. 用过的实验材料，放于指定地点，不得随 意抛置。 • 3. 注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏 器材时，应立即报告指导教师，听候处理。 • 4. 实验结束后，将实验台整理清洁，方可离 开实验室。值日同学打扫好室内卫生并检查水 、电、等开关是否关好，防止意外事故发生。
39
实验内容
直接凝集试验
双向扩散试验 补体溶血试验 观看细胞免疫的示教片
40
教材P299
• 一、直接凝集试验——试管法（1份/人）
• 试管法凝集试验是一种半定量的试验方法，是在 试管内将抗原或抗体稀释不同倍数后加入等量的 待检抗体或抗原，根据每管内的凝集程度，判定 待检样品中相应抗原或抗体的有无及其效价。 • 试验中可能由于电解质浓度或pH 值不适宜等原 因，而引起抗原非特异性凝集，出现假阳性反应 ，所以应设立阴性对照管。
35
1、酶免疫测定（Enzyme immunoassay,EIA)
• 用酶标记的抗体或抗抗体来进行的抗原抗 体反应。 • 用酶作标记物 • 由于酶的催化作用可使原来无色的底物通 过水解、氧化或还原反应而显示颜色。
原Hale Waihona Puke Baidu（以间接性ELISA为例）：
显色
37
2、放射免疫测定法（RIA）：
38
3、免疫荧光技术
19
血型鉴定
20
（2）间接凝集反应（3）间接凝集抑制试验
21
（二）沉淀反应
• 1、概念：可溶性抗原+抗体→沉淀现象。
• 可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、 菌体裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电 解质存在下，形成肉眼可见的细微的白色沉 淀。
22
2、分类 （1）液相中的沉淀反应： 环状沉淀、絮状沉淀 （2）凝胶扩散： ①单向扩散：
46
2、试验管从第一管看起，管底有凝集块，边缘不 整或卷起等现象，均为阳性反应，分别用（ ++++）、（+++）、（++）、（+）表示凝集程 度。 • （++++）表示血球100% 凝集，红细胞形成片层 凝集，均匀布满管底或边缘皱缩如花环状； • （+++）表示血球75% 凝集，红细胞形成片层凝 集，面积略多于（++）； • （++）表示血球50% 凝集，红细胞形成片层凝 集，面积较小，边缘较松散； • （+）表示血球25%凝集，红细胞沉于管底，周 围有散在的少量凝集。
AFP-Ag
定 位 标 记 孔
待测1
待测2
AFP-Ab
注意：加样量力求准确，勿使样品外溢或在孔缘上 残存小汽泡，以免影响扩散结果。 44 原则：满而不溢
免疫学实验 二
——————— 续血清学反应
微生物学与免疫学教研室
45
一、分析上次结果
（一）血球凝集（直接凝集试管法）：观察结果
并分析 1、从温箱中轻轻取出试管架， 不要摇动试管。先观察对照管 （第7管），此管血球不出现凝 集现象，红细胞在管底自然沉 降呈现点状结构，上层液基本 清澈透亮，管底可见红细胞沉 积物，呈圆形，边缘整齐，轻 轻振摇试管后，可见红细胞浮 起又分散仍呈悬液。
47
• 3. 按下列标准判定，记录结果。 • ++++：凝集特别显著，红细胞均匀地铺于管底，呈一薄 层边缘有折迭状。 • +++：凝集显著，红细胞均匀地铺于管底呈一薄层，但 周边红细胞凝集较疏松。 • ++：凝集清楚可见，红细胞平铺于管底呈一薄层，中央 可明显见到一疏松的红点。 • +：红细胞大部分沉集于管底成圆点状，周围有少量凝集 的红细胞。 • —：红细胞全部沉集于管底呈圆点状，四周液体清晰。 • 4. 判断效价：能见到明显凝集现象（++）的血清最高稀 释度为该血清对1%绵羊红细胞的凝集效价（或滴度）。 一般以出现 ++ 凝集反应的最高血清稀释倍数作为血清中 所含凝集抗体的效价。
2
一、抗原抗体反应的定义及用途
指抗原Ag与相应抗体Ab之间所发生 的特异性结合反应。可发生于体内，也 可发生于体外。
一定条件
Ag + Ab
解离
Ag · Ab （动态平衡）
3
体内反应可介导杀菌、溶菌、调理、中和毒 素等作用 免疫病理损伤—超敏反应、免疫性疾病等
4
3D模型 IgG1
IgA
IgM
Ig Ｇ ： 存 在 于 血
41
•材料：1% 新鲜绵羊红细胞悬液、羊红细胞凝集素（兔抗绵羊红
细胞免疫血清）等
•方法：（理解对倍稀释法） 1. 取小试管7支，置于试管架上，编号。 2. 用 1ml 刻度吸管吸生理盐水，第一管加0.9ml，其余 管各加0.5ml。 3. 用 1ml 刻度吸管吸取兔抗羊红细胞血清0.1ml 加入 第一管 中，反复吹吸三次，使之与盐水混匀，吸出 0.5ml注入第二管。同样混匀后吸取0.5ml 注入第三管， 依此类推。自第6管吸出0.5ml 弃掉。第八管不加血清作 为对照。
• 颗粒性抗原与相应的抗体在体外结合，在电 解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块， 为凝集反应，反应中的抗原称为凝集原，抗 体称为凝集素。
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2、分类 （1）直接凝集反应 • ①概念：天然的凝集原与相应抗体直接结合呈 现的细菌凝集或红细胞凝集现象称为直接凝集 反应。 • ②应用： • 定性检测—ABO血型鉴定、细菌鉴定 • 定量检测—诊断伤寒病的肥达试验等
清（占血清免疫球 蛋 白 总 量 的 80% ） 和组织液中。
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二、血清学反应的特点：
1、特异性：抗原抗体在体外的结合与在体内 一样，也具有专一性，即特异性。
分子基础：Ag-AD
HVR-Ab 空间结构高度互补
VH和VL各具三个HVR与AD互补
应用： 由于抗原抗体反应具有高度特异性，故 可用已知的抗原（抗体）来检测相应未知的 抗体（或抗原）。
坐标(对数坐标)，绘制标准曲线， 求出待检样品内抗原浓度
25
③双向扩散：
可溶性抗原与相应抗体在含适量电解质的琼脂糖凝 胶板的对应孔中各自向四周自由扩散,若两者分子比 例适当,则在扩散的一定时间后在两孔之间相遇并生 成白色沉淀线.
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(1) 沉淀线吻合：待检抗原与 标准抗原完全相同。 (2) 沉淀线相切：待检抗原中 含有与标准抗原相同的抗原， 还含有另外的抗原与抗血清 相对应。 (3) 沉淀线相交：待检抗原有 与抗血清对应的抗原，但和 标准抗原不同。 (4) 沉淀线部分吻合：待测抗 原和标准抗原性质相同，但 含量较低。 A1：待检抗原；A2：标准抗原
抗原抗体复合物
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• 4、阶段性：抗原抗体反应分两个阶
段：
① 抗原抗体发生特异性结合的阶段，反应 快，几秒或几分钟，不可见 ② 可见阶段，短至数分、数小时，长至数 日，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现 象
10
交叉反应（cross reactions）
概念：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结 构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。
• 4. 各管加入绵羊红细胞悬液 0.5ml，于是各管血 清稀释倍数又增加了一倍。 • 5. 将各管震荡均匀，放入37℃温箱中过夜，次日 观察结果。
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• 二、双向扩散试验——检测血清中的AFP（1份/2人）
• 【操作方法】 • 1. 双向琼脂扩散试验抗原抗体孔位置如下图所示 • 2. 用微量加样器孔中分别加抗甲胎蛋白诊断血清，周围孔 中分别加入待测血清和阳性对照血清，每孔加入25-30μl。 • 3. 将琼脂板放入密闭的盒内（内放浸有5%石炭酸的纱布以 保持湿度），置37℃温箱中，于24小时后观察结果。
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• 3、可见性：反应体系中抗原抗体
的比例适当，就能形成较大的抗原 抗体复合物，在有一定量电解质或 适宜pH等条件下，出现肉眼可见的 凝集、沉淀等可见反应。
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亲水胶体转化为疏水胶体
转化
NaCl
亲水胶体
疏水胶体
可见反应
在电解质作用下，中 和胶体粒子表面的电 荷，使各疏水胶体之 间靠拢，形成可见的
血清学反应条件下， 当抗原与抗体结合使表面 抗原抗体均带负电荷， 电荷减少，水化层变薄， 使极化的水分子在其 失去亲水性能，抗原抗体 周围形成水化层，成 复合物成为疏水胶体 为亲水胶体。
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静电引力 （electrostatic forces） 范德华引力:作用最小 （van der Waals interactions） 氢键:最具特异性 （hydrogen bond ） 疏水作用力:作用最大 （hydrophobic interactions）
2、可逆性：抗原与抗体的结合是非共价键 结合，在一定条件下又可解离为游离状态， 反应具有可逆性。
溶血
31
由抗原抗体复合物结合C1q启动的途径
• 1. 激活剂 Ag-Ab复合物(IgG1,IgG2,IgG3,IgM) • 2. 参与成分 C1～C9 • 3. 激活过程（三个阶段） • 识别阶段 活化阶段 膜攻击阶段
五、现代免疫标记技术
免疫标记技术(Immuno-labelling technique) 是指将抗原或抗体用荧光素、酶、放射性同 位素和电子致密物质等加以标记，借以提高 其灵敏度的一类新技术。 • 优点：特异性强、灵敏度高、应用范围广 、反应速度快、容易观察、能定位、定量甚 至定位。
原的PI时，引起的抗原非特异性自身凝集现象。
（3）温度—影响反应速度
一般：15～40 ℃为宜，
最适温度：37℃
过高（>56）: Ag-Ab解离， Ag、Ab变性， 补体失活。 冷凝集实验：4 ℃凝集，>20解离。 （4）其他 适当的振荡、搅拌等可加速反应
只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的结合反应。
注意：盐析（salting）即电解质浓度过高
引起的非特异性蛋白质沉淀。
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（2）酸碱度
• Ag、Ab多为蛋白质，具两性电离特性，有其故有 的PI , pH过高或过低均可影响Ag、Ab反应。
• 一般：pH6～8为宜，补体参与时pH7.2～7.4。 • 注意：自凝现象------即pH达到或接近颗粒性抗
B
抗原抗体交叉反应示意图
亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高
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三、血清学反应的影响因素
1、反应物自身因素
*抗原：理化特性、Ag决定簇数量和种类。
*抗体：1、来源
2、特异性与亲和力
3、浓度
比例要合适
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2、环境因素：
（1）电解质
作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层，
使Ag〃Ab聚集。
常用：0.85%NaCl溶液、缓冲液、Ca2+、Mg2+等。
抗体的两个Fab段 分别 结合两个Ag分子， 相互 交叉结合连接成巨 大的网格状立体聚 合物，（可见）。
Ab/Ag过剩 过剩方的结合价得不到饱和，大 多数游离存在，只形成小分子复 合物（不可见）。
四、传统的血清学反应
1、凝集反应
2、沉淀反应
3、补体参与的溶血反应 4、中和试验
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（一）凝集反应
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（四）补体溶血：红细胞与相应抗体结合，
可激活补体使红细胞溶解，称为补体溶血反 应或免疫溶血反应。 原理：补体激活的经典途径（补体的动画） 补体特点： 补体可与任何抗原抗体复合物结合，但不能 单独与抗原或抗体结合。在有特异抗体存在 时可以溶解细胞（溶菌或溶血）。
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溶血反应
RBC
+
RBC抗体 (溶血素) 新鲜血清（补体）
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不同病人抗原浓度测定
1.测定沉淀环直径
通过标准品绘制标准曲线
2.在标准曲线上查找相应抗原浓度
1%琼脂凝胶的孔径约85纳米，可允许各种Ag或 Ab自由扩散，由近及远形成浓度梯度。
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②火箭免疫电泳
火箭免疫电泳是单向单 扩散和电泳技术相结合 的一种血清学试验，是 让抗原在电场的作用下， 在含有抗体的琼脂中定 向泳动，二者比例合适 时形成类似火箭样的沉 电泳完毕后，观察琼脂板上沉淀 淀峰。沉淀峰的高度与 峰，并测量从孔中心到峰尖的高 抗原的浓度成正比 。 度。以峰高为纵坐标，浓度为横
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④免疫电泳 ⑤对流免疫电泳
在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白泳向负极；而 一般抗原蛋白质泳向正极
抗原和抗体将在两孔之间相遇，
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• （三）中和反应：特异性抗体抑制多
种抗原的生物学活性（细菌外毒素的毒 性、酶的活性、病毒的感染性等）的反 应。 • 主要用于毒素的鉴定、病毒感染性疾病 的诊断以及病毒的鉴定。例如在临床实 验诊断中测定风湿病患者体内的抗链球 菌 O抗体的反应。
此时自第一管至第七管血清的稀释倍数分别是1:10， 1:20，1:40……1:320，具体稀释方法可参阅下图。 42
血清０.１ml
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
生理盐水 血清稀释度
０.９
０.５
０.５
０.５
０ .５
０.５
０.５
1：10
1：20
1：40
1：80
1：160
1：320
弃 之
微生物学与免疫学教研室
【基本要求】
• 1. 上实验课时，把个人的书包和衣物放在衣 柜内，穿好白大衣。随身只带必要的实习指导 、笔记本和文具。实验室内禁止饮食。 • 2. 用过的实验材料，放于指定地点，不得随 意抛置。 • 3. 注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏 器材时，应立即报告指导教师，听候处理。 • 4. 实验结束后，将实验台整理清洁，方可离 开实验室。值日同学打扫好室内卫生并检查水 、电、等开关是否关好，防止意外事故发生。
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实验内容
直接凝集试验
双向扩散试验 补体溶血试验 观看细胞免疫的示教片
40
教材P299
• 一、直接凝集试验——试管法（1份/人）
• 试管法凝集试验是一种半定量的试验方法，是在 试管内将抗原或抗体稀释不同倍数后加入等量的 待检抗体或抗原，根据每管内的凝集程度，判定 待检样品中相应抗原或抗体的有无及其效价。 • 试验中可能由于电解质浓度或pH 值不适宜等原 因，而引起抗原非特异性凝集，出现假阳性反应 ，所以应设立阴性对照管。
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1、酶免疫测定（Enzyme immunoassay,EIA)
• 用酶标记的抗体或抗抗体来进行的抗原抗 体反应。 • 用酶作标记物 • 由于酶的催化作用可使原来无色的底物通 过水解、氧化或还原反应而显示颜色。
原Hale Waihona Puke Baidu（以间接性ELISA为例）：
显色
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2、放射免疫测定法（RIA）：
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3、免疫荧光技术
19
血型鉴定
20
（2）间接凝集反应（3）间接凝集抑制试验
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（二）沉淀反应
• 1、概念：可溶性抗原+抗体→沉淀现象。
• 可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、 菌体裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电 解质存在下，形成肉眼可见的细微的白色沉 淀。
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2、分类 （1）液相中的沉淀反应： 环状沉淀、絮状沉淀 （2）凝胶扩散： ①单向扩散：
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2、试验管从第一管看起，管底有凝集块，边缘不 整或卷起等现象，均为阳性反应，分别用（ ++++）、（+++）、（++）、（+）表示凝集程 度。 • （++++）表示血球100% 凝集，红细胞形成片层 凝集，均匀布满管底或边缘皱缩如花环状； • （+++）表示血球75% 凝集，红细胞形成片层凝 集，面积略多于（++）； • （++）表示血球50% 凝集，红细胞形成片层凝 集，面积较小，边缘较松散； • （+）表示血球25%凝集，红细胞沉于管底，周 围有散在的少量凝集。
AFP-Ag
定 位 标 记 孔
待测1
待测2
AFP-Ab
注意：加样量力求准确，勿使样品外溢或在孔缘上 残存小汽泡，以免影响扩散结果。 44 原则：满而不溢
免疫学实验 二
——————— 续血清学反应
微生物学与免疫学教研室
45
一、分析上次结果
（一）血球凝集（直接凝集试管法）：观察结果
并分析 1、从温箱中轻轻取出试管架， 不要摇动试管。先观察对照管 （第7管），此管血球不出现凝 集现象，红细胞在管底自然沉 降呈现点状结构，上层液基本 清澈透亮，管底可见红细胞沉 积物，呈圆形，边缘整齐，轻 轻振摇试管后，可见红细胞浮 起又分散仍呈悬液。
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• 3. 按下列标准判定，记录结果。 • ++++：凝集特别显著，红细胞均匀地铺于管底，呈一薄 层边缘有折迭状。 • +++：凝集显著，红细胞均匀地铺于管底呈一薄层，但 周边红细胞凝集较疏松。 • ++：凝集清楚可见，红细胞平铺于管底呈一薄层，中央 可明显见到一疏松的红点。 • +：红细胞大部分沉集于管底成圆点状，周围有少量凝集 的红细胞。 • —：红细胞全部沉集于管底呈圆点状，四周液体清晰。 • 4. 判断效价：能见到明显凝集现象（++）的血清最高稀 释度为该血清对1%绵羊红细胞的凝集效价（或滴度）。 一般以出现 ++ 凝集反应的最高血清稀释倍数作为血清中 所含凝集抗体的效价。
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一、抗原抗体反应的定义及用途
指抗原Ag与相应抗体Ab之间所发生 的特异性结合反应。可发生于体内，也 可发生于体外。
一定条件
Ag + Ab
解离
Ag · Ab （动态平衡）
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体内反应可介导杀菌、溶菌、调理、中和毒 素等作用 免疫病理损伤—超敏反应、免疫性疾病等
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3D模型 IgG1
IgA
IgM
Ig Ｇ ： 存 在 于 血
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•材料：1% 新鲜绵羊红细胞悬液、羊红细胞凝集素（兔抗绵羊红
细胞免疫血清）等
•方法：（理解对倍稀释法） 1. 取小试管7支，置于试管架上，编号。 2. 用 1ml 刻度吸管吸生理盐水，第一管加0.9ml，其余 管各加0.5ml。 3. 用 1ml 刻度吸管吸取兔抗羊红细胞血清0.1ml 加入 第一管 中，反复吹吸三次，使之与盐水混匀，吸出 0.5ml注入第二管。同样混匀后吸取0.5ml 注入第三管， 依此类推。自第6管吸出0.5ml 弃掉。第八管不加血清作 为对照。