动物蛋白酶解研究

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酶解制备吉尾鱼水解蛋白粉的工艺研究

（ｏｅｅｆｏｄｅｎＣｌｇｏＦｏＳｉ￣＆ＴｃｎｌｙＧａｇｏｇｅｎＵｉｅｉ，ｈｎｉｇ５４２）ｌｅｅｈｏｇ，ｕｎｄｎＯｃａｎｖｒｔＺａｊｎ２０５ｏｓｙａ
ＡｓａｔＴｅｎｙａｉｈｄｏｓｏＴａｈｒｓａｏｉｓｒｔｉｂｐｐ￣ｎｕｒｌｒｔｉｓ，ｋｌｐｏ￣ａａｄｃｍｐｓｅｎｙｂｔｃｈｅｚｍｔｙｒｌｉｆｒｃｕｕｊｐｎｕｐｏｅｙａａｅｔｐｏｅａ￣ａａｒｔｎ￣ｎｏｏｉｅｚｍｅｒ：ｃｙｓｃｎａｎｌｉｉｔ
和社会效益。１材料与方法１原料．１
２结果与讨论２１原料一般营养成分分析．
吉尾鱼一般营养成分如表ｌ所示，原料水分含量最高，达７．４Ｏ总糖含量最低，为０８ ‰ ．％。按照干基计２算，原料粗蛋白的含量最高，达到７．１％；粗脂肪含２量也比较高，为２－％。根据对吉尾鱼成分分析，对２３其加工利用时，主要考虑其蛋白质的利用率。在加工蛋白粉时，要对脂肪进行分离，这样一则可以将吉尾鱼中的脂肪利用起来，提高经济效益；而且可以减轻
ＥｚｍｔｙｒｌｉｏＡｉａＰｏｅｏｄｒｒｍＴａｈｒｓａｏｉｓｎｙａｉＨｄｏｓｎｍｌｒｔｎｐｗｅｏｒｃｕｕｊｐｎｕｃｙｓｆｉｆｃ
ＨＡＯｉｉｇｚＨＡＮＧｉｇＪｎ－，ＪＪ－ｎ，ＪｍＪｎ，ｌＨｏｇｗｕｚＨＡＮＧａ－ｕＣｈｏｈａ
味的粉末。

面筋蛋白酶解物调节肉鸡免疫器官及ND抗体水平的研究

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动物医学进展．０６２（）６ —８２０，７３：５６
ＰｏｒｓｅｅｉａｙＭｅｉｉｅｒｇｅｓｉＶｔｒｒｄｃｎｎｎ
面筋蛋白酶解物调节肉鸡免疫器官及ＮＤ抗体水平的研究
基金项目：南京晚庄学院科研项目（Ｏ５Ｙ８（２ＯＮｘ４）青年专项）作者简介：用业飞（９７，江苏沭阳人，１７一）男，助教，硕士，主要从事动物免疫与言禽饲料添加荆的研宛。
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６６
同时进行新城疫疫苗免疫接种Ｌｏａ活疫苗，ａＳｔ由
（Ｐ＜ＯＯ）各试验组的胰岛素、４．１；Ｔ水平与对
照组差异不显著（＞００）结果表明肌Ｐ．５。
肉注射弹性蛋白胃蛋白酶酶解物能够增强肉
鸡免疫功能，且这种作用与肉鸡内分泌的并
试验１组和３组也有所提高，差异不显著但
（Ｐ＞００）．５。试验２组胸腺比对照组提高了２．（６４Ｐ＜Ｏ０）各试验组的ＧＨ浓度都．５；比对照组高（＜００，Ｐ＜００Ｐ．５．１或Ｐ＜０ｏ１；验２组Ｔ３平比对照组高１．．ｏ）试水８７
活性［。１该酶还对酪蛋白、］纤维蛋白、胶原蛋白、面筋蛋白等多种蛋白质具有水解活性嘲。故弹性蛋白酶是
一
１２面筋蛋白胃蛋白酶水解物的制备．
根据文献［］５的方法略加改进。取面筋蛋白。按

全蛋液酶解条件的优化研究

全蛋液酶解条件的优化研究蛋液是一种具有重要生物活性的动物细胞凝结液，它包含大量结构复杂的蛋白质和以醣质为主体的高分子复合物。

由于蛋液中蛋白质和特定糖质有多种功能，因此，利用酶解技术是必不可少的，以实现蛋液的有机分解，从而获取单体蛋白质和单元糖质的纯化物。

优化酶解条件的目的是获得最佳的酶解效率和产物纯度，以满足蛋液研究和应用的需要。

对于优化酶解条件，应考虑三个主要因素：蛋白酶、葡萄糖水解酶和缓冲液pH。

首先，要取得最佳的蛋白质酶解效果，需要选择最佳的酶类型并保持相应活性，常用的酶有胰蛋白酶、胆碱蛋白酶、蛋白酶B和蛋白酶K等。

其次，葡萄糖水解酶则可用于对蛋液中的葡萄糖蛋白质的水解研究，常用的葡萄糖水解酶有葡萄糖水解酶F、葡萄糖水解酶G和多糖水解酶A等。

最后，采用正交试验的方法来评估pH的最佳值，以确定最佳的酶解缓冲液pH。

除了蛋白质酶、葡萄糖水解酶和缓冲液pH三个主要因素外，还需要考虑温度、离子强度等因素来优化酶解条件，一般而言，温度可以调节在30-50℃，离子强度因不同酶可以进行调节。

此外，酶蛋白质解合成也是必不可少的，在这方面，确定保护剂、蛋白质浓度、酶用量等，也可以有效地优化酶解条件。

基于以上，本研究采用全蛋液酶解的方法，结合正交试验的方法，考察了不同的酶解条件对蛋液结构物质成分的影响，并探讨了各酶解条件之间的关系，研究结果表明：通过合理调节蛋液酶解条件，可以有效提高蛋液结构物质分离的效率，有效地优化蛋液酶解过程，从而获得最佳的酶解效率和产物的纯度。

综上所述，本研究以全蛋液酶解条件的优化为研究目的，综合考察了不同酶解条件对蛋液结构物质成分的影响，提出了改进的蛋液酶解条件，从而获得最佳的酶解效率和产物纯度。

本研究对今后对蛋液酶解过程的优化和研究具有一定的指导意义，可以为蛋白质和糖质分解技术的应用提供参考。

胶原蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白的动力学研究

近年来，随着我国养殖业迅猛发展，宰所产生屠
本文以牛骨制备得到的胶原蛋白为原料，用采
从蜡样芽孢杆菌中提取的胶原蛋白酶进行酶解，研
的副产物增多。以牛骨为例，其约占牛体重的１％～２
２％，０即每生产１０ｇ牛肉就会有ｌ２ｋ０ｋ２～０ｇ的牛骨产
１２试验设备．
紫外分光光度仪；超速冷冻离心机；ＹＤＹ一１２电
复杂的反应过程，水解动力学对于了解其水解机其理、确定水解过程的关键影响因素、择适宜的控制选参数范围以及制备性能优异的胶原多肽产品等，具均有重要意义 ¨ 。然而，文献中对牛骨胶原蛋白水解
针对从细菌中提取的胶原蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白的动力学性质进行研究。通过全波长扫描和
ＳＳＡＥ电泳，Ｄ —ＰＧ对酶解的动态变化及其多肽分子量的变化进行了研究，考察了温度、酶用量、底物浓度等因素对酶解动态的影响，并对酶解的过程动力学进行了分析。结果说明：胶原蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白得到的多肽分子量分布不均匀，分子量大小随反应时间的增大而减小；在一定范围内，增大酶浓度、高温度可使酶解反应更彻底。提关键词胶原蛋白酶牛骨胶原蛋白胶原多肽酶解动力学 ’
Ｅｎｙｏｙｉｉｔｃｆｂｏｉｅｂｏｅｃｌａｅｄｒｌｚｄｂｏｌｅｓｚｍｌｓｓｋｎｅｉｓｏｖｎｎｏｌｇｎｈｙｏｙｅｙｃｌａｇｎａｅ

猪肠道中产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究

猪肠道中产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究宁豫昌;张晓静;乔宏兴【摘要】试验从健康猪肠道中筛选得到一株高产蛋白酶的芽孢杆菌MY-6菌株,通过形态学观察、生理生化试验和糖醇发酵试验、16S rDNA序列扩增与比对、Biolog鉴定等方法鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌.并研究了蛋白酶活力与细菌生活周期的动态关系,pH、温度、金属离子和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响及蛋白酶对不同底物的水解性能.结果显示,MY-6菌株蛋白酶的合成与其芽孢形成同步,均开始于对数生长期的前期,该菌株所产蛋白酶的最适作用条件为:40 ℃、pH7.0,Ca2+和Mn2+对蛋白酶活力有明显的促进作用,PMSF能够完全抑制该蛋白酶的活力,说明该蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,蛋白酶对鱼粉蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、酪蛋白的酶解物TCA可溶性肽含量分别为0.83、0.67、0.58和0.38 μmol/g.结果提示,解淀粉芽孢杆菌MY-6菌株可作为改善蛋白质消化的益生性芽孢杆菌的初步选择.%A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation,biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison,biolog identification.In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease,the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle,effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated.The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation whichbegan in the early stage of the exponential growth phase.The optimum conditions for the protease was 40 ℃ and pH 7.0,Ca2+ and Mn2+ had a intensive effects on the protease activity,PMSF could completely inhibit the activity of protease,indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fishprotein,soybean protein,corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively.In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)008【总页数】10页(P2398-2407)【关键词】猪;解淀粉芽孢杆菌;蛋白酶;酶学性质【作者】宁豫昌;张晓静;乔宏兴【作者单位】河南牧业经济学院,郑州 450046;河南牧业经济学院,郑州 450046;河南牧业经济学院,郑州 450046【正文语种】中文【中图分类】S828猪属于杂食性单胃动物，营养物质消化主要依靠胃内的化学消化，其消化道中微生物消化作用比反刍动物弱，对饲料中蛋白质的消化吸收率较低[1]。

酶解动物蛋白制备抗氧化多肽研究进展

５０～５％，底物浓度比（／）０Ｕｇ水解８。５酶ＥＳ８００／、ｈ在此条件下，解率（Ｈ）２．０，溶解指数水Ｄ达４５％氮
１动物血液蛋白
Ｃａｇ２０）２将猪血红蛋白先用碱性蛋白酶ｈｎ（０７［３Ａｃｌｅ再用复合风味蛋白酶（ｌｖｕｚｍｅ进行水ｌａ，ａｓＦａｏｒｙ）
除能力４．４。根据蛋白构成的分析结果，水解１９％将产物分成３类。高分子量、巾分子量和低分子量。还原能力和铁离子清除能力与高分子量的比例呈正
相关，与低分子量负相关。研究显示，解产物的抗水
是最早研究中使用的制取原料。我国动物蛋白资源丰富，酶法水解动物蛋白不仅能够丰富抗氧化多肽的种类，同时也有利于充分利用畜禽副产品，加其增
附加值。
氧化能力依赖于水解产物的蛋白质构成。于美娟（０７Ｅ用精制木瓜蛋白酶（得活力２０）３３测为３０万个单位）Ａ１３８中性蛋白酶两酶复合水和Ｓ．９解猪血红蛋白的最适条件为：Ｈ值为７５温度为ｐ．，
ＲｅｅｒｈｒｇｅｓｏｆａｉｘｄａｉｅｉｅｒｄｓａｃｐｏｒｓｎｔｏｉｔｖｅｐｐｔｄｅｐｒｐａｅｆｏｎｉａｏｅｎｓｂｙｅｚｍａｃｈｙｏｙｓｓｒｍａｍｌｐｒｔｉｎｙｉｔｄｒｌｉＡｂｓｒｃＡｎｍａｒｔｉｓａｅｒｃｎＣｈｉ．Ｂｅａｓｆｈｖｎｕｔｐｅｐｙｉｌｇｃｌｆｃｉｎ，ｔｅｔａｔｉｌｐｏｅｎｒｉｈｉｎａｃｕｅｏａｉｇｍｌｌｈｓｏｏｉａｕｎｔｏｓｈｉａｔｘｄｔｖｅｔｄｒｍｎｍａｒｔｉｓｂｎｚｍａｉｙｒｌｓｓｈｓｂｅｈｅｅｒｈｈｔｐｔｆｒｍａｙｎｉｉａｉｅｐｐｉｅｆｏａｉｌｐｏｅｎｙｅｙｔｃｈｄｏｙｉａｅｎｔｅｒｓａｃｏｓｏｏｎｏｙａｓＩｈｓａｔｃｅ，ｔｅａｏｅ — ｍｅｔｏｅｎｔｘｄａｉｅｐｅｔｄｓｒｖｅｄｔｏｉｅｔｅｒｔａａｉｅｒ．ｎｔｉｒｉｌｈｂｖｎｉｎｄａｉｉｔｖｐｉｅｗａｅｉｗｅｏｐｒｖｄｈｏｅｉｌｂｓｓｏｃｏｎｒａｉｇｔｅｖｌｅｏｎｍｌｂｆｒｉｃｅｓｎｈａｕｆａｉａｙ —ｐｒｄｃｓｏｕｔ．Ｋｅｏｄａｔｏｉａｉｅｐｐｉｅ；ａｍａｒｔｉｙｗｒｓｎｉｘｄｔｖｅｔｄｎｉｌｐｏｅｎ；ｅｚｍａｉｙｒｌｓｓｎｙｔｃｈｄｏｙｉ

酶法提取烤鳗下脚料中水解动物蛋白的研究

量蛋白质并未得到充分利用。本文试验用酶法从生产
２结果与讨论
２％及含有大量钙质，３有很大的利用价值 …。目前，对２１原料的基本成分分析．按分析方法对烤鳗下脚料的基本成分进行测定，钙，取后的残渣较难进一步利用，提下脚料中含有的大结果如表１示。所烤鳗的下脚料中提取水解动物蛋白（Ｐ的方法，ＨＡ）以
购于厦门市杏林烤鳗加工厂的新鲜鳗鱼下脚料，理想原料。外，鱼废弃物中还含有较多的优质鱼油此鳗包括鳗头、骨，脚料清洗后装盘速冻，鳗下脱盘后包装和含钙等矿物质元素。因此对烤鳗生产中鳗鱼下脚料并于一１ ℃冷藏备用。８１２水解动物蛋白（Ａ）．ＨＰ的制备取一定数量的鳗头和鳗骨，剁碎，组织捣碎机捣用
ｈｄｏｙｉｇＡ．ｈｅｒｅｆｙｒｌｓ（Ｈ）ｙｈａａｉｕｒｔｓａ２６ｕｄｒｈｐｉｍｙｒｌｚＰＴｅｄｇｅｄｏｉＤｂｅｙｂｃｌｓｏｅｅｓ．％ｎｅｅｔｎＨｏｈｙｓｔｈｌｐａｗ８ｔｏｍｕ
ｓｒｐｙｐｏｅｓ．Ｔｈｏｈｔｅｏｈｏｏａｔｓｓｏｙｒｌｚｔｏｔｈｈｅｎｙｓｎａｅｙｐｐｉｃａｓｂｒｔａｅｒｕｇｈｆｇｎｌｅｔｆｈｄｏｉａｉｎｗｉｈｔｅｔｒｅｅｚｍｅ，ｌｍｌａａｎ，

蛋白质饲料的酶解工艺及酶解蛋白在畜牧生产中的应用

动物营养学报２０１９，３１（４）：１５４７⁃１５５３ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１９．０４．０１１蛋白质饲料的酶解工艺及酶解蛋白在畜牧生产中的应用王诗琦㊀刘显军∗㊀陈㊀静㊀李建涛（沈阳农业大学畜牧兽医学院，沈阳１１０８６６）摘㊀要：酶解工艺是指通过各种分解酶的作用，将蛋白质原料中一部分大分子蛋白质降解成活性小分子肽和游离氨基酸的过程㊂酶解蛋白具有提高动物生产性能和免疫性能㊁促进蛋白质消化吸收的作用㊂本文简单介绍了酶解工艺过程，并且总结了酶解蛋白在畜牧生产中的应用㊂关键词：酶解工艺；酶解蛋白；畜牧生产中图分类号：Ｓ８１６．４㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１９）０４⁃１５４７⁃０７收稿日期：２０１８－０９－２９基金项目：辽宁省高等学校基本科研项目（ＬＳＮＺＤ２０１７０３，ＬＳＮＦＷ２０１７０１）；辽宁省科技厅重大项目（２０１５１０３０３４）作者简介：王诗琦（１９９５），女，辽宁锦州人，硕士研究生，从事动物营养与饲料科学研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：１０３３０２６４６５＠ｑｑ．ｃｏｍ∗通信作者：刘显军，副教授，硕士生导师，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｌｃｈｅｎｊ＠１６３．ｃｏｍ㊀㊀近几十年，我国畜牧业发展越来越好，当前饲料产销量已跃升世界首位，可即便如此，仍然存在着不可忽视的原料短缺问题，而且原料供给和所需之间的矛盾问题更是日益突出㊂特别是以进口为主要来源的蛋白质资源，供给不足将会严重影响我国畜牧业和饲料行业的效益和发展㊂这使学者们不得不思考如何有效利用现有原料㊁开发新资源以缓解当前蛋白质原料不足的问题㊂酶解工艺近些年逐渐被人们熟知，尤其是在食品行业的应用更是屡见不鲜，而利用酶解工艺来提高蛋白质饲料原料利用率的方法也已经被大多数学者关注和肯定㊂与普通蛋白质饲料相比，酶解蛋白具有促进蛋白质合成和消化道发育㊁提高动物生长和免疫性能的作用㊂这种酶解蛋白得到了广大饲料企业的认可，被列为最有效发挥蛋白质营养生理效用的方式之一，并逐渐成为部分替代饲料中鱼粉㊁豆粕的重要原料㊂１㊀酶解工艺㊀㊀酶解工艺是指通过各种分解酶的作用，将蛋白质原料中一部分大分子蛋白质降解成活性小分子肽和游离氨基酸的过程［１］㊂酶解蛋白产品含有更易被吸收的小肽分子和丰富的益生菌㊁酶类和酸类等生物活性因子，不仅能使养分更丰富，还可以使动物肠道内的菌群结构得到一定程度地完善，提高动物的免疫性能，也提高了原料吸收利用率和饲用价值［２］㊂Ｒｏｊａｓ⁃Ｇａｒｃíａ等［３］给大西洋比目鱼同时饲喂牛血清蛋白和酶解蛋白，研究显示酶解蛋白的吸收速度比血清蛋白快了约１．３倍㊂这也是目前企业为加速蛋白质原料转化㊁提高营养物质利用率采用的创新工艺㊂与酸碱法相比，酶解工艺具有效率高㊁过程环保安全㊁操作简单㊁营养成分损失少㊁酶解程度容易控制等优点［４］，因此在生产实践中越来越受到企业的欢迎和重视㊂１．１㊀酶解原料㊀㊀大部分情况下，常选择植物源蛋白质作为酶解原料，如豆粕㊁棉籽粕这类植物饼粕［５］㊂另外动物源蛋白质也是一类重要的蛋白质资源，之前就有研究曾将诸如动物血液等一些屠宰业废弃物酶解制备某些小肽［６］㊂例如，李艳伟等［７］就曾尝试利用胰蛋白酶通过层析㊁超滤等方法水解猪血，最终成功获得了一种小肽纯品产物㊂但血粉产品细菌含量较高且易腐败，具有一定的危险性，尤其是将其应用到动物饲料中时会对动物生长造成不利㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷影响，因此以后可能会限制甚至禁止动物血液酶解产品的使用㊂而作为世界大豆的主产国之一，我国具有丰富的大豆资源，大豆中不仅蛋白质含量高且氨基酸平衡性能较好，其酶解产物大豆活性肽更是具有抗氧化㊁降血脂㊁抗血栓㊁易于吸收的优势，因此大豆酶解蛋白备受食品保健品行业的青睐，其在饲料行业也表现出重要价值［８］，具有极佳的发展前景㊂１．２㊀酶解技术１．２．１㊀单一酶解技术㊀㊀酶解技术中最简单最基础的就是单一酶解，单一酶解只能对大分子蛋白质进行简单地分解，得到功能多样的小肽，促进动物对蛋白质的吸收㊂常选择的是胃－胰蛋白酶［９］㊁番木瓜蛋白水解酶［１０］和菠萝蛋白水解酶［１１］，另外还有一些商业化蛋白酶也比较受欢迎，比如Ａｌｃａｌａｓｅ碱性酶㊁Ｎｅｕ⁃ｔｒａｓｅ中性酶㊁Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ风味酶和Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合酶等㊂即便是在对同一种原料进行酶解时，使用不同种蛋白酶产生的效果也各不相同［１２］㊂刘春娥等［１３］尝试选择不同种类蛋白酶水解鱿鱼内脏蛋白，将氨基酸得率作为评价因子，最终结果显示碱性蛋白酶效果最好，中性蛋白酶和胰蛋白酶水解后氨基酸得率也都达到５０％以上，而胃蛋白酶的作用效果最不理想㊂单一酶解法虽然操作简单，但酶解效率低㊁所得产物单一，因此目前该方法正被复合酶酶解技术逐步替代㊂１．２．２㊀复合酶解技术㊀㊀与单一酶解技术相比，复合酶解技术采用多种蛋白酶协同作用提高蛋白质水溶性，高效降解蛋白质原料中大分子蛋白质㊂Ｂｅａｌ等［１４］早在２０世纪就尝试选择复合酶解技术来酶解豆粕和生大豆，结果发现该方法明显提高了氮的消化率，而且酶解后产物蛋白质分子中分子质量大于６６ｋｕ的含量和比例也有所减少，这表明通过复合酶解技术已经达到使部分高分子蛋白质降解的目的㊂周乃继［１５］㊁蒋金津等［１６］都选择结合Ａｌｃａｌａｓｅ碱性酶和Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ风味酶的复合酶酶解体系，通过酶解饼粕生产小肽，结果表明利用复合酶酶解技术大大提高了棉籽粕原料的水解度，同时制备的小分子肽含量也显著升高㊂何东平等［１７］采用超声辅助，以大豆多肽获得率作为评判标准，采用复合酶解技术研究出大豆分离蛋白质原料酶解工艺的适宜条件㊂然而若采用酶制剂对某些蛋白质原料进行酶解，其中含有的有毒有害成分和某些抗营养因子会影响酶解效果，导致结果并不理想［１８］㊂针对这一现象，学者们研究发现微生物发酵酶解技术有显著效果㊂１．２．３㊀微生物发酵酶解技术㊀㊀随着学者们不断探索尝试，微生物发酵酶解技术逐渐受到各大企业的青睐㊂微生物发酵酶解技术即利用微生物菌种，人为使环境达到某特定条件，经各菌种发酵后产生某些分解酶，直接使蛋白质原料降解㊂通过这种方法不但可以得到酶解蛋白，还可以了解蛋白质原料中的抗营养因子成分及含量㊂同时，微生物发酵时也会产生一些有机酸和抗菌肽等物质，可以降低某些疾病的发病率［１９］；产生的芳香物质可以提高适口性［２０］；而某些菌株甚至还可以增加产物小肽中的甜味，从而刺激动物采食［２１］㊂像黑曲霉㊁米曲霉和枯草芽孢杆菌等菌种都是进行微生物发酵酶解时常用的选择㊂万琦等［２２］挑选了１株枯草芽孢杆菌株，结合产羧肽酶的某曲霉菌发酵酶解豆粕粉制备大豆多肽，经济高效且口味绝佳㊂王文娟等［２３］选择微生物发酵酶解技术，以豆粕为蛋白质原料酶解制备大豆肽，最终获得的小肽不光是苦味减少了许多，而且生理特性也有很大改善㊂２㊀酶解蛋白肽㊀㊀几十年前，学者们普遍认为要想蛋白质被充分利用，唯一选择就是将其水解，由高分子蛋白质变成游离氨基酸，这使人们有了一种误解，认为蛋白质并不存在其他的吸收方式㊂这是忽略了除了氨基酸平衡以外，氨基酸和蛋白质酶解产生的小肽协同作用也是动物生长过程中所需要的㊂钱利纯［５］对小肽应用的探究中发现，动物的低蛋白质饲粮中不该只是添加必需氨基酸，还应该补充一部分小肽，由此才能最大程度地提高动物的生长性能㊂优质蛋白质饲粮经动物采食消化后，其最终产物大多为小肽的形式，而实践证明以小肽形式作为氮源时，蛋白质在消化道的沉积量明显比以氨基酸以及蛋白质分子的形式作为氮源时高㊂有研究报道，酶解蛋白肽能够促进氨基酸和矿物元素的吸收，加速蛋白质合成［２４］，促进肠道生长发育，维持肠道健康［３］，提高免疫力［２５］和生长速度，降低料重比，增大企业收益［２６］㊂８４５１４期王诗琦等：蛋白质饲料的酶解工艺及酶解蛋白在畜牧生产中的应用２．１㊀提高风味㊀㊀酶解蛋白肽有助于提高产品风味，因此在食品行业尤其受到各生产企业的欢迎，很多食品及饮料的制作过程中都利用酶解工艺来提高感官评分㊂段春红等［２７］以大豆为原料，在中性蛋白酶和胰蛋白酶作用下酶解得到大豆１１Ｓ球酶解蛋白，将其以２．３％的比例添加到猪肉肠制作中，显著提高了风味和品质㊂曾文燕等［２８］利用风味蛋白酶酶解扇贝后得到的含活性肽的改良物无苦腥味，且色泽明亮，味道鲜美，可作为海鲜调味品㊂２．２㊀促进矿物元素吸收㊀㊀某些酶解蛋白肽还能够促进矿物质元素的吸收，比如乳清蛋白酶解后能得到一种促矿物元素吸收肽，与矿物元素鳌合后可在机体需要时缓慢释放金属离子㊂郭丽丽等［２９］以乳清蛋白为原料，利用胰蛋白酶酶解可制备一种促钙离子吸收肽，特别是当水解液中氨基氮含量达到０．２７２ｍｇ／ｍＬ时，能够显著促进钙离子吸收㊂２．３㊀抗氧化作用㊀㊀抗氧化肽能够作为供电子体或供氢体，促进过氧化物分解和清除自由基，从而起到抗氧化的作用［３０］㊂除了来源自然界生物或通过化学方法合成得到，某些蛋白质酶解后得到的活性肽也具有抗氧化作用㊂从自然界生物提取成本高且获得率低，化学合成抗氧化肽安全性差，因此通过酶解技术制备抗氧化肽不失为一个好方法，比如乳清蛋白㊁碎米蛋白㊁苦荞蛋白等经酶解后得到的小肽都有抗氧化作用㊂吴伟菁等［３１］研究也显示，利用碱性蛋白酶酶解苦荞蛋白后得到的小肽，其抗氧化作用得到显著提高，可作为天然的抗氧化剂㊂２．４㊀医药作用㊀㊀新兴的高效无毒的酶解蛋白肽在保健方面也有很多积极作用㊂许多蛋白质酶解物所含的活性肽都可以降低胆固醇水平，如大豆蛋白㊁酪蛋白㊁花生蛋白等㊂宋玲钰［３２］以花生粕为原料，利用木瓜蛋白酶进行酶解，其小肽产物具有较高的降胆固醇活性㊂血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）是广泛存在各种组织中的膜结合蛋白，它对血压有一定调节作用㊂一些酶解蛋白肽可以抑制ＡＣＥ活性，从而起到降血压作用，比如核桃多肽［３３］和乳清蛋白肽［３４］等㊂因此，若能将酶解蛋白肽进一步处理使其发挥功效，对医药行业也有重要意义㊂３㊀酶解蛋白在畜牧生产中的应用３．１㊀在水产养殖中的应用㊀㊀作为水产养殖大国，我国鱼粉消耗量巨大，鱼粉资源的匮乏迫使学者和企业寻求一种高效替代品，酶解蛋白就这样在畜牧行业崭露头角㊂近些年，酶解蛋白在水产养殖方面的研究报道越发广泛，结果普遍显示酶解蛋白有提高水产动物生长性能㊁增强免疫力㊁提高营养物质利用率的效果㊂王铵静等［３５］针对凡纳滨对虾幼虾的试验表明，饲料中添加质量分数为０．１％的大豆酶解蛋白可一定程度提高其抗病力㊂于辉等［３６］报道，用添加一定量小肽的饲料饲喂草鱼，结果显示饲料表观消化率㊁生长速度和蛋白质消化率都有显著提高㊂赵处杰等［３７］研究表明，给异育银鲫饲喂添加了２％４％酶解蛋白肽的饲料，不仅有益于改善鱼体的生长指标，使增重显著升高，还有利于增强其免疫力㊂桂丹［３８］研究酶解棉籽粕蛋白肽在异育银卿饲养中的影响，结果表明饲料中添加适宜的酶解蛋白肽对鱼体的生长指标和饲料利用率都有积极的改善作用，同时还能够促进饲料中锌㊁铁和粗蛋白质的吸收㊂夏薇等［３９］报道，在建鲤的饲料中，以棉籽粕酶解蛋白肽分别等质量替换原有的鱼粉和植物蛋白质原料后分组饲养，结果表明棉籽粕酶解蛋白肽显著提高了鱼体增重率和粗蛋白质含量㊂Ｓｏｎｇ等［４０］通过向比目鱼幼鱼饲料中添加不同水平大豆肽（粗蛋白质含量约６６％）发现，鱼体的日增重㊁日采食量及蛋白质功效比率都得到显著提高，且胰蛋白酶㊁淀粉酶等酶活性也显著升高㊂３．２㊀在家禽生产中的应用㊀㊀随着酶解蛋白在水产行业的应用获得了显著成效，许多学者尝试在家禽饲粮中添加适量酶解蛋白，最终也得到了可观效果㊂于会民等［４１］以不同比例酶解蛋白替代饲粮中豆粕饲喂肉仔鸡，结果显示酶解蛋白可以改善仔鸡增重速度和饲料转化效率，降低饲料消耗㊂翁洋［４２］在黄羽肉鸡饲粮中添加酶解产物复合小肽，结果发现添加了小肽的试验组总增重显著升高，料重比和腹泻率也有显著降低，同时观察肠道菌群结构，最终证实复合小肽可以改善肉鸡肠道菌群结构，丰富肠道菌群种类，促进肉鸡消化㊂禚梅等［４３］分别以５％棉仁蛋白㊁５％发酵棉籽粕㊁５％发酵棉籽粕＋２％的能量饲料来替换饲粮中豆粕，探究其对罗曼褐壳蛋鸡９４５１㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷生长指标的作用效果，结果显示５％棉仁蛋白和５％发酵棉籽粕组蛋鸡的产蛋率㊁料蛋比和增重都有显著的升高㊂黄艺伟［４４］在樱桃谷肉鸭的基础饲粮中，将普通豆粕换成酶解豆粕，结果表明酶解豆粕可维持肠道结构，提高抗氧化和免疫功能，促进消化吸收，加速肉鸭生长，同时还能使排泄物中氮㊁磷含量显著减少㊂沈一茹等［４５］研究饲粮中添加不同含量大豆酶解蛋白对肉鸡的影响，结果表明添加大豆酶解蛋白能够提高肉鸡生长性能和肉品质，并改善其肠道发育和免疫机能㊂３．３㊀在养猪生产中的应用㊀㊀目前，已经有很多有关在家畜饲粮中添加酶解蛋白的研究，在养猪生产中，酶解蛋白的应用也取得了明显的经济效益㊂胡文娥［２６］研究报道，小肽制品能使生长肥育猪的生长指标有明显改善，提高养殖场收益㊂陈秋梅等［４６］报道，给早期断奶仔猪饲喂含有小肽类营养素的饲粮，有助于血清免疫球蛋白Ｇ含量升高，提高免疫性能，减少腹泻发生，改善仔猪生长性能并提高饲料转化率㊂张常明等［４７］在仔猪饲粮中添加不同水平小肽复合制剂，结果显示适宜水平的小肽复合制剂有利于降低仔猪腹泻率，并提高蛋白质利用率㊂闻爱友等［４８］设计给断奶仔猪饲喂以不同比例酶解豆粕代替饲粮中普通豆粕的试验，研究了酶解豆粕对早期断奶仔猪生长性能㊁肠道微生物菌群及腹泻的影响，结果表明仔猪肠道微生物结构有明显改善，生长速度加快，腹泻率降低㊂付瑞珍等［４９］尝试在饲喂生长育肥猪的基础饲粮中，以发酵蛋白替代原有蛋白质原料，最终结果显示酶解豆粕㊁棉籽粕有利于提高育肥猪的抗氧化能力和免疫能力，抑制疾病的发生㊂崔家军等［５０］最近的试验研究中，将加入酶解蛋白肽Ｔ３０的饲粮用于生长育肥猪的日常饲养，结果显示试验猪在酶解蛋白肽作用下采食量和增重都有明显增长，同时血液总蛋白和球蛋白含量也有提高㊂张迪等［５１］用酶解毛血蛋白肽代替饲粮中肠膜蛋白粉㊁鱼粉饲喂保育猪，结果表明酶解毛血蛋白肽完全可以替代以上二者，并且有效降低了饲料成本㊂３．４㊀在反刍动物生产中的应用㊀㊀酶解蛋白在反刍动物生产中的应用研究目前还比较少，其效果还需学者们不断试验和探索㊂李莉［５２］试验结果表明，饲粮中添加肽将会影响瘤胃发酵环境㊁养分消化率，且不同微生物种群对肽的营养需要不同㊂Ｇｉｌｌｉｓ等［５３］设计给肉牛饲喂添加不同比例发酵豆粕的饲粮，最终结果却显示试验肉牛的胴体重㊁眼肌面积和组织脂肪含量等指标都没有显著变化㊂方飞等［５４］在黄淮白山羊公羔饲粮中分别以不同比例共轭亚油酸酶解豆粕等量替代普通豆粕，结果表明添加酶解豆粕有利于提高胴体骨重和骨肉比㊂李萍等［５５］利用体外发酵试验，研究含有不同比例棉籽酶解蛋白的饲粮在奶牛瘤胃中的消化情况，发现棉籽酶解蛋白能够改善瘤胃微生物环境，提高饲料原料中氮源和碳水化合物的吸收利用率㊂４㊀小㊀结㊀㊀针对当前我国畜牧业和饲料行业的现状，动物蛋白质原料依赖进口资源不足且昂贵，植物性蛋白质原料不能得到高效利用的问题，选择酶解工艺处理蛋白质原料，利用产物酶解蛋白无疑是个很好的解决方案㊂当前在家禽家畜生产，特别是水产养殖方面经常能看到有关酶解工艺和酶解蛋白的相关研究试验㊂不论是从绿色环保㊁经济安全的酶解工艺上看，还是从酶解蛋白对动物生长性能和免疫性能等各方面的正面影响看，都对畜牧行业未来的发展百利而无一害㊂但是其在生产实践中的应用其实还处于初步试水㊁稍见成效的阶段，尤其是在反刍动物方面的研究更是屈指可数，而且暂时市场对其也没有统一的规定和标准，因此酶解蛋白的更多效用和影响还需要学者们进一步的探索和扩展㊂不过相信未来的不久，酶解蛋白定会在畜牧业和饲料行业发挥重要且独特的作用，被更多人肯定和认可㊂参考文献：［１］㊀张宇婷，张荣飞，晨光．酶解蛋白在畜牧生产中的应用及发展趋势［Ｊ］．饲料广角，２０１５（２３）：４２－４５．［２］㊀李猛．浒苔生物饲料的制备工艺及在刺参养殖中的应用研究［Ｄ］．硕士学位论文．上海：上海海洋大学，２０１６．［３］㊀ＲＯＪＡＳ⁃ＧＡＲＣÍＡＣ，ＲØＮＮＥＳＴＡＤＩ．Ａｓｓｉｍｉｌａｔｉｏｎｏｆｄｉｅｔａｒｙｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ｐｅｐｔｉｄｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎｐｏｓｔ⁃ｌａｒｖａｌＡｔｌａｎｔｉｃｈａｌｉｂｕｔ（Ｈｉｐｐｏｇｌｏｓｓｕｓｈｉｐｐｏｇｌｏｓｓｕｓ）［Ｊ］．ＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙ，２００３，１４２（４）：８０１－８０８．［４］㊀ＬＩＵＱ，ＫＯＮＧＢＨ，ＸＩＯＮＧＹＬ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐｏｒｃｉｎｅｐｌａｓｍａｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅａｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｈｙ⁃０５５１４期王诗琦等：蛋白质饲料的酶解工艺及酶解蛋白在畜牧生产中的应用ｄｒｏｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，１１８（２）：４０３－４１０．［５］㊀钱利纯．小肽的营养研究进展［Ｊ］．饲料博览，１９９８，１０（１）：１０－１１．［６］㊀金菲．酶解猪血球蛋白粉的制备及饲喂效果的研究［Ｄ］．硕士学位论文．武汉：武汉工业学院，２００８：５６－５９．［７］㊀李艳伟，江波，佟祥山．酶解猪血蛋白中活性肽的纯化和功能研究［Ｊ］．高等学校化学学报，２００５，２６（１）：６１－６３．［８］㊀沈峰，王恬，张莉莉，等．小肽制剂对肥育猪生产性能㊁屠宰性能及血清生化指标的影响［Ｊ］．中国饲料，２００６（２）：３０－３２．［９］㊀王雪铭，许程剑，牛博楠，等．胃－胰蛋白酶联合酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽［Ｊ］．食品研究与开发，２０１５，３６（６）：２２－２７．［１０］㊀贾志春，张珍，张盛贵，等．木瓜蛋白酶酶解牦牛血红蛋白制备氯化血红素关键工艺研究［Ｊ］．食品工业科技，２０１６，３７（３）：２０６－２１０，２１５．［１１］㊀李莹，周剑忠，王维权，等．菠萝蛋白酶酶解小麦降低过敏性［Ｊ］．中国粮油学报，２０１６，３１（５）：５６－６０．［１２］㊀李婷，赵沙沙，阮奇珺，等．碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白的酶解研究［Ｊ］．中国油脂，２０１４，３９（４）：３５－３７，３８．［１３］㊀刘春娥，林洪，单俊伟，等．鱿鱼内脏蛋白质酶解工艺的研究［Ｊ］．食品工业科技，２００４，２５（９）：８３－８５，８２．［１４］㊀ＢＥＡＬＪＤ，ＢＲＯＯＫＳＰＨ，ＳＣＨＵＬＺＥＨ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆａｐｒｏｔｅａｓｅｅｎｚｙｍｅｔｏｒａｗｏｒａｕｔｏｃｌａｖｅｄｓｏｙｂｅａｎｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｌｉｑｕｉｄｆｅｄｇｒｏｗｅｒ／ｆｉｎｉｓｈｅｒｐｉｇｓ［Ｃ］／／Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｂｒｉｔｉｓｈｓｏｃｉ⁃ｅｔｙｏｆａｎｉｍａｌｓｃｉｅｎｃｅ．Ｓｃａｒｂｏｒｏｕ：ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９９８：１６７．［１５］㊀周乃继．棉籽肽饲料开发与小肽的检测［Ｄ］．硕士学位论文．合肥：安徽农业大学，２００９：５３－５４．［１６］㊀蒋金津，李爱科，陈香，等．不同处理的棉菜籽粕在肉鸡消化道小肽释放特性的研究［Ｃ］／／２０１０中国畜牧兽医学会动物营养学分会第六次全国饲料营养学术研讨会论文集．杨凌：中国畜牧兽医学会，２０１０：３８０－３８６．［１７］㊀何东平，程雪，马军，等．超声辅助复合酶酶解制备大豆多肽工艺的优化［Ｊ］．中国油脂，２０１８，４３（７）：７２－７６．［１８］㊀魏炳栋，党修利，邱玉朗，等．乳酸菌固态发酵酶解对豆粕㊁棉籽粕和菜籽粕粗蛋白质㊁ｐＨ㊁酸度及抗营养因子含量的影响［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１４，４１（１１）：１０７－１１４．［１９］㊀田刚，陈代文，余冰，等．酶解鸡蛋清小肽混合物对小鼠免疫功能的影响［Ｊ］．中国畜牧杂志，２００５，４１（５）：１４－１７．［２０］㊀孟凌玉．虾头酶解产物微生物混合发酵工艺及其风味成分的变化［Ｄ］．硕士学位论文．湛江：广东海洋大学，２０１３．［２１］㊀俞卓科，陈瑶瑶，陈婷婷，等．微生物发酵缢蛏酶解液工艺研究［Ｊ］．食品科技，２０１４，３９（５）：２５１－２５４．［２２］㊀万琦，陆兆新，高宏．脱苦大豆多肽产生菌的筛选及其水解条件的优化［Ｊ］．食品科学，２００３，２４（２）：２９－３２．［２３］㊀王文娟，潘海涛，于磊娟．豆粕发酵制备大豆肽的研究［Ｊ］．粮食加工，２００７，３２（２）：５５－５６．［２４］㊀ＢＯＺＡＪＪ，ＭＡＲＴÍＮＥＺ⁃ＡＵＧＵＳＴＩＮＯ，ＢＡＲÓＬ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎｖ．ｅｎｚｙｍｉｃｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ．Ｎｉｔｒｏｇｅｎｕ⁃ｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｓｔａｒｖｅｄｒａｔｓ［Ｊ］．ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｔｒｉ⁃ｔｉｏｎ，１９９５，７３（１）：６５－７１．［２５］㊀邓红，黄健．小肽营养及其在养猪生产中的应用［Ｊ］．饲料工业，２００５，２６（２１）：３０－３３．［２６］㊀胡文娥．小肽制品对生长肥育猪生产性能和猪肉品质的影响［Ｄ］．硕士学位论文．长沙：湖南农业大学，２００３．［２７］㊀段春红，胡秀钏，赖成德．不同分子量１１Ｓ酶解蛋白在猪肉肠中的应用［Ｊ］．食品科技，２０１８，４３（１）：１２２－１２８．［２８］㊀曾文燕，刘璐，王贺，等．华贵栉孔扇贝肉的酶解工艺优化及其产物风味的美拉德改良研究［Ｊ］．食品科技，２０１８，４３（９）：１９７－２０３．［２９］㊀郭丽丽，潘道东．乳清蛋白酶解制备促钙离子吸收肽条件的优化［Ｊ］．食品科学，２００８，２９（５）：３３２－３３６．［３０］㊀许柳．乳清蛋白酶解物抗氧化活性及其在冷却鸭肉保鲜中的应用研究［Ｄ］．硕士学位论文．雅安：四川农业大学，２０１０．［３１］㊀吴伟菁，纪美茹，李再贵．不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究［Ｊ］．粮油食品科技，２０１８，２６（５）：６－１０．［３２］㊀宋玲钰．花生降胆固醇肽的制备及饮料开发［Ｄ］．硕士学位论文．泰安：山东农业大学，２０１６．［３３］㊀李艳伏．核桃粕多肽提取分离及功能特性研究［Ｄ］．硕士学位论文．杨凌：西北农林科技大学，２００８．［３４］㊀徐思源．乳清蛋白降压肽的制备及其功能研究［Ｄ］．硕士学位论文．哈尔滨：东北林业大学，２００７．［３５］㊀王铵静，杨奇慧，谭北平，等．大豆酶解蛋白对凡纳滨对虾幼虾生长性能㊁血清生化指标㊁非特异性免疫力和抗病力的影响［Ｊ］．广东海洋大学学报，２０１８，３８（１）：１４－２１．［３６］㊀于辉，冯健，刘栋辉，等．酪蛋白小肽对幼龄草鱼生长和饲料利用的影响［Ｊ］．水生生物学报，２００４，２８１５５１㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷（５）：５２６－５３０．［３７］㊀赵处杰，杨峰．日粮中酶解蛋白肽替代鱼粉对异育银鲫产生的影响［Ｊ］．科学养鱼，２００７（５）：６５－６６．［３８］㊀桂丹．酶解棉粕蛋白肽对异育银鲫的营养调控作用及抗应激能力的研究［Ｄ］．硕士学位论文．南京：南京农业大学，２００９．［３９］㊀夏薇，刘文斌，乔秋实，等．棉粕酶解蛋白肽对建鲤生产性能和生化指标的影响［Ｊ］．淡水渔业，２０１２，４２（１）：４６－５１．［４０］㊀ＳＯＮＧＺＤ，ＬＩＨＹ，ＷＡＮＧＪＹ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｉｓｈ⁃ｍｅａｌｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｗｉｔｈｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｏｎｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｂｌｏｏｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉ⁃ｎａｌｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｍｕｓｃｌｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｊｕｖｅｎｉｌｅｓｔａｒｒｙｆｌｏｕｎｄｅｒ（Ｐｌａｔｉｃｈｔｈｙｓｓｔｅｌｌａｔｕｓ）［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２０１４，４２６－４２７：９６－１０４．［４１］㊀于会民，蔡辉益，陈宝江，等．酶解蛋白对肉仔鸡生长性能及血清生理生化指标的影响［Ｊ］．饲料工业，２００６，２７（１）：３７－３９．［４２］㊀翁洋．微生物发酵法酶解蛋白及其对黄羽肉鸡生产性能和肠道菌群的影响［Ｄ］．硕士学位论文．雅安：四川农业大学，２００８：４２－４８．［４３］㊀禚梅，郭鹏举，马贵军．发酵棉粕代替豆粕对蛋鸡产蛋后期生产性能的影响［Ｊ］．饲料与畜牧，２０１２（１）：１４－１５．［４４］㊀黄艺伟．蛋白水平㊁发酵豆粕对樱桃谷肉鸭生产性能影响及作用机理［Ｄ］．硕士学位论文．福州：福建农林大学，２０１２：３８－４０．［４５］㊀沈一茹，张珊，赵旭，等．大豆酶解蛋白对肉鸡生产性能㊁肉品质㊁肠道和免疫器官发育的影响［Ｊ］．中国家禽，２０１６，３８（８）：３０－３５．［４６］㊀陈秋梅，张爱忠，杨跃刚．小肽制剂对生长育肥猪生产性能的影响［Ｊ］．河南畜牧兽医，２００４，２５（２）：７－８．［４７］㊀张常明，高萍，李莉，等．小肽复合制剂对断奶仔猪生产性能及血液相关指标的影响［Ｊ］．华南农业大学学报，２００７，２８（３）：８０－８４．［４８］㊀闻爱友，柳卫国，何邦国，等．发酵豆粕对早期断奶仔猪生长㊁肠道微生物菌群及腹泻的影响［Ｊ］．安徽科技学院学报，２００９，２３（５）：１－６．［４９］㊀付瑞珍，陈如水，黄元林，等．发酵蛋白饲料对生长育肥猪抗氧化能力和免疫能力的影响［Ｊ］．现代畜牧兽医，２０１４（２）：２１－２４．［５０］㊀崔家军，张鹤亮，张维金，等．酶解蛋白肽对生长育肥猪生长性能㊁血液生化指标及养分表观消化率的影响［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１７，４４（８）：２３４２－２３４７．［５１］㊀张迪，张春亭，崔家军，等．酶解毛血蛋白肽代替肠膜蛋白粉㊁鱼粉对保育猪生产性能的影响［Ｊ］．黑龙江畜牧兽医，２０１７（２０）：２０３－２０５．［５２］㊀李莉．体外法研究肽对瘤胃液ｐＨ㊁氨氮浓度㊁菌体蛋白氮浓度㊁中性洗涤纤维降解率及其产气量的影响［Ｄ］．硕士学位论文．呼和浩特：内蒙古农业大学，２００１．［５３］㊀ＧＩＬＬＩＳＭＨ，ＤＵＣＫＥＴＴＳＫ，ＳＡＣＫＭＡＮＮＪＲ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｒｕｍｅｎ⁃ｐｒｏｔｅｃｔｅｄｃｏｎｊｕｇａｔｅｄｌｉｎｏｌｅｉｃａｃｉｄｏｒｃｏｒｎｏｉｌｏｎｌｉｐｉｄｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｐａｌａｔａｂｉｌｉ⁃ｔｙｉｎｂｅｅｆｃａｔｔｌｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２００７，８５（６）：１５０４－１５１０．［５４］㊀方飞，王力生，陈芳，等．ＣＬＡ发酵豆粕对羔羊生长性能㊁胴体性能和肉品质的影响［Ｊ］．中国饲料，２０１２（４）：４０－４３．［５５］㊀李萍，肖伟伟．棉籽酶解蛋白对奶牛体外瘤胃液发酵参数的影响［Ｊ］．中国奶牛，２０１６（１２）：４－８．２５５１。

膜分离金枪鱼头蛋白酶解液的效果研究

关键词：孔过滤；滤；枪鱼；解液微超金酶
ＳｕｄｎｆｃｆＭｅｂｒｎｐａｉｎｏｔｙｏＥｆｅｔｏｍａｅＳｅａｒｔｏｆＴｕｎｅｄＰｒｔｉｙｏｙａｅａＨａｏｅｎＨｄｒｌｓｔｓ
Ａｂｓｒｃ：ＴｈｓｓｕｙｕｅｈｃｏｏｏｌｅｓａｄｕｌａｌｒｔｎｔｌｒｔｅｔｎａｄｒｔｉｙｒｌｓｔｓｔａｔｉｔｄｓｄｔｅｍｉｒｐｒｕｓｆｔｒｎｔｆｔａｉｏｆｔｈｕａｈｅｐｏｅｎｈｄｏｙａｅｉｒｉｏｉｅａｄｃｍｐｒｄｔｅｐｏｅｔｓａｄｔｒｓａｉｉｅｗｅｎｏｉｉａｌｉｎｗｏｆｌｒｔｓＴｈｅｕｔｉｄｃｔｄｎｏａｅｈｒｐｒｉｎｈｅｍｏｔｂｌｙｂｔｅｒｇｎｌｆｕｄａｄｔｔａｅ．ｅｒｓｌｎｉａｅｅｔｉｔａｅｏｏｏｓｍｅｒｎｌｒｎｌｒｆｔａｉｎｗｅｅｇｏｏｌｒｆｉｇｄｏｏｉｉｇａｄｔｅｔｒｓａｉｉｈｔｍｉｒｐｒｕｍｂａｅｆｔｓａｄｕｔａｌｒｔｒｏｄｆｒｃａｉｙｎ，ｅｄｒｚｎｎｈｅｍｏｔｂｌｉｅｉｏｈ－ｔｆｔｎａｄｐｏｅｎｈｄｏｙａｅｎｔｈｐｒｕｅｒｄｃｓｔｅｒｅｆｃｎａｃｄＴｅｐｏｅｎｃｎｅｔｆｙｏａｈｅｒｔｉｙｒｌｓｔｓａｄｗｉｔｅａｅｔｒｅｕｅｈｉｆｅｔｅｈｎｅ．ｈｒｔｉｏｔｎｓｏｕｈｆｒｎｅｉｍｆｔｅｍｉｒｐｒｕｌａｉｎｏ．５Ｉｍｎ２ｍｎ０００Ｕｕａｈａｉｎａｌｔｅｉｉｇｍｄｕｏｈｃｏｏｏｓｆｔｔｏｆ０４ｘａｄ０．２ｉａｄ１０ｈｒｆｒｔｏｉｌｒ－ｈｅｉｒｘｉｔｅｄｃｄａｄｈｄｎｆｅｔｎａｎｉｒｇｎｕｅｎａＯｅｆｃｍｉｏｎｔｏｅ．ｏＫｅｏｄｓｆｅｏｏｏｓｍｅｒｎ；ｌａｌａｉｎｔｎ；ｎｙｔｙｒｌｓｓｙｗｒ：ｎｒｐｒｕｍｂａｅｕｔｆｔｔ；ｕａｅｚｍａｉｈｄｏｙｉｉｒｉｒｏｃ

酶解法提取虾壳中蛋白质

酶解法提取小龙虾副产物中的蛋白质摘要：本文对酶解法从小龙虾副产物中提取蛋白质的工艺条件进行了研究。

通过单因素实验和正交实验确定酶解法制备小龙虾副产物中蛋白质的最佳水解条件为：酶解温度50℃，酶解时间3h，酶与底物比9300u/g，PH=7。

此条件下蛋白质的提取率为94.02%。

关键词：龙虾；副产物；蛋白质；酶解。

LI Ya-nan，WANG Hai-bin*，WANG Qi(College of Food Science and Engineering，Wuhan Polytechnic University，Wuhan 430023，China) Abstract:Key words:chicken lobster; coproduct; enzymatic; protein.小龙虾是生长在淡水中的甲壳类动物，学名克氏原螯虾，广泛分布于我国湖北、江苏、江西、安徽等长江中下游各省市。

虾头、虾壳占虾体重的70%～80%[12]，含有丰富的氨基酸、多肽、蛋白质和其他营养素[11]。

小龙虾虾头蛋白质中必需氨基酸占45.33％，与牛奶蛋白粉的45.69％和酪蛋白的46.14％基本接近[14,15]。

是极好的蛋白质来源，具有很高的开发价值[l-3,10,18]。

虾头、壳中游离氨基酸的种类较齐全、含量丰富，必需氨基酸含量占游离氨基酸总量的41.52％，必需氨基酸与非必需氨基酸比值为70.99％[16]。

水解动物蛋白(HAP)富含人体所需的各种氨基酸，营养价值高，容易消化吸收，并能很好地保持动物原料固有的风味特点，可作为香精香料的基料或直接用于食品工业，近年来得到迅速发展和广泛应用。

[10]1 材料与方法1.1 材料与试剂1.1.1材料克氏原螯虾虾头：湖北楚玉食品有限公司碱性蛋白酶：sigma1.1.2 试剂双缩脲试剂、氢氧化钠、氯仿、甲醇、缓冲溶液等。

1.2 仪器与设备万能粉碎机SHA-C显数恒温水浴振荡器V-1100可见分光光度计智能型台式超声波清洗器旋转蒸发仪恒温水浴锅数显鼓风干燥箱分析天平1.3方法1.3.1 原料预处理虾壳解冻，淋干水分，放入105℃烘箱中烘干取出，万能粉碎机粉碎备用。

复合动物蛋白酶水解蛋清蛋白最优工艺的研究

ｔｏｎＤＨｒｔｄｅｅｐｃｉｅｙＢｓｄｏｈｅｕｔ，ｔｅＬ６４）ｏｔｏｏａｘｅｉｅｔｗａｉｎｏｗｅｅｓｕｉｄｒｓｅｔｖｌ．ａｅｎｔｅｒｓｌｓｈ１（。ｒｈｇｎｌｅｐｒｍｎｓ
物浓度３酶浓度４，％，水解时间６ｈ。关键词：鸡蛋蛋清蛋白；白酶；蛋水解；多肽；解度水中图分类号：Ｓ０．５Ｔ２１２文献标识码：Ｂ文章编号：０Ｏ９３２１）６０２０１０一９７（０００ —０６－４
ｄｓｇｅｏｏｔｉｐｉｚｄｔｃｎｌｇｏｒｐｒｎｉａｔｖｅｔｅＴｈｅｕｔｈｗｅｈｔｔｅｅｉｎｄｔｂａｎｏｔｍｉｅｅｈｏｏｙｆｒｐｅａｉｇｂｏｃｉｅｐｐｉ．ｄｅｒｓｌｓｓｏｄｔａｈ
Ｏｐｔｕｃｄｉｉｎｏｒｐｏａｘｈｄｏｌｓｓｏｇｉｏｅｉｓｉｍｏｎｔｏｓｆｒｔｍｅｙｒｙｉｆｅｇｗｈｔｐｒｔｎｍｅ
ＬＩＸｉｏｙｎＹＵｕｎｍｉｏＺＨＡＮＧｎ，Ｕａ — ａ，Ｃｈ — ａ，ＹａＺＥＮＧｎ－ａ。Ｆｅｇｃｉ
我国有世界上最为丰富的禽蛋资源，蛋产量禽
１８９５年以来一直居世界第一位，精深加工量不足禽但
易凝固，大地限制了它在食品加工中的利用。极
生物活性肽具有免疫调节、素调节、抑制、激酶抗

禽类蛋白的酶解工艺及呈味物质研究

禽类蛋白的酸解工艺及呈味物质研究蛋白质酶解是蛋白质在蛋白酶的作用下被水解成小分子肽或氨基酸的过程。

酶法水解具有反应条件温和、专一性强、安全性高、高效环保、能较好保留酶解产物生物活性等优点，已成为食品加工领域用于改造和提高蛋白质价值的重要方法之一。

禽类蛋白经酶解后产生的氨基酸和多肽不仅可以提高蛋白质的吸收利用率，而且能增强抗氧化、降血压、抗疲劳等功效，还可以增强风味。

近年来，蛋白质酶解技术被广泛应用于调味领域。

蛋白质经过适度酶解后产生的氨基酸和小分子肽，可与味蕾细胞接触呈现甜、苦、鲜、酸等味道。

此外，氨基酸和多肽是加工食品的风味和芳香化合物形成的前体物质，热反应后能有效提高香气。

蛋白酶解物风味天然、浓郁，且具有营养价值，成为高档调味料研究和发展的一个重要方向。

O1禽类蛋白的酶解工艺蛋白质的酶解主要是蛋白酶作用于蛋白质的肽键，使蛋白质逐渐水解为多肽、小分子肽、游离氨基酸等。

生物酶法制备的呈味肽具有安全性高、反应条件温和、可控性强等优点，已成为制备呈味肽的常用方法。

目前以鸡肉作为底物酶解制备调味基料的研究报道较多，而以鸭肉、鹅肉和禽骨为底物的研究相对较少。

以禽肉为底物得到的产品香味浓郁，但是成本较分，是一种营养价值高的肉类加工副产物。

酶解禽骨生产呈味基料，成本相对低，但是风味较淡。

针对酶解单一底物存在的弊端，孙丽霞等以鸡脯肉和鸡骨架为复合底物进行酶解，在提升产品风味的同时降低了生产成本。

酶解方式主要包括单一酶水解、复合酶水解和辅助酶解（见表1）。

在酶解过程中，酶解条件如温度、pH、加酶量、料液比等存在复杂的交互作用，影响水解效果和产物的风味特征。

此外，在加热灭酶过程中，随着温度的逐渐升高，酶解体系中会发生分解、氧化、还原等前体物质的化学反应。

常使用的灭酶条件为75~100°C,10"25mi∏o 表1.酶解禽类蛋白制备呈味基料11单一酶水解蛋白酶根据为了获得理想的风味前体物质，特别是游离氨基酸和多肽，需控制水解度和水解时间以获得合适的禽类蛋白酶解物。

蛋白酶水解鸡肉蛋白与其产物氨基酸的相关探讨

分析检测蛋白酶水解鸡肉蛋白与其产物氨基酸的相关探讨+邱燕翔陆志鸿许守庆容莉霞I广州市味研生物工程科技有限公司肉一直是深受人们喜爱的强身、滋补的食品，我国鸡肉产业发展迅速，但整体来看，以分割肉和冷冻白条为主，鸡肉加工制品的品种比较单一，影响了肉鸡的开发利用，大力发展鸡肉深加工技术，是鸡肉加工产业的必然趋势。

鸡肉中富含蛋白质，蛋白质不仅能够赋予肉制品丰富的营养，而且关系着肉制品的□感和风味，影响肉制品的最终品质。

本文采用木瓜蛋白酶，水解鸡肉蛋白，分析其规律以及产物氨基酸，为鸡肉深加工提供借鉴。

在畜禽加工中，通常会产生脂肋、油渣、骨饼等许多副产品，采用酶生物技术，能够提局这些资源的利用率，提取功能肉蛋白，促进鸡肉制品生产。

木瓜蛋白酶是纯天然物质，在饮料、食品等行业中有广泛的用途，可以用于水解鸡肉蛋白，提高鸡肉深加工制品的附加值，并且在双酶水解条件下，酸性蛋白酶和胰蛋白酶组合水解率最高，在鸡肉酶水解中，木瓜蛋白酶是最优的水解条件。

木瓜蛋白酶水解鸡肉蛋白木瓜蛋白酶是蛋白质单链，主要由212个氨基酸残基组成，木瓜蛋白酶蛋白水解的能力十分强，而且具有良好的稳定性，具有耐高温的特征，木瓜蛋白酶广泛应用于医药、食品等领域中。

鸡肉的营养价值高，是世界上最受欢迎的禽肉制品之一，鸡肉具有广阔的发展前景。

但是目前鸡肉制品加工比较单一，附加值不高，需要积极开发和利用，研发新型的鸡肉深加工技术，促进鸡肉行业的发展。

鸡肉中含有丰富的蛋白质，比牛肉、羊肉和猪肉都高，鸡肉不仅高蛋白，还有低热量、低胆固醇和低脂肪等特征，根据鸡肉蛋白质组分溶解性的不同，可以将鸡肉蛋白分离成碱溶蛋白、碱不溶蛋白、肌原纤维蛋白、肌浆蛋白、非蛋白。

在鸡肉蛋白中，占粗蛋白氮比例最高的是水溶性部分含氮量，包括肌浆蛋白、非蛋白氮，这是鸡汤具有较高营养价值、鸡汤滋味丰富的重要原因。

决定鸡肉加工性质和质地的是碱溶蛋白和喊不浴蛋白。

饲料加工工艺中的酶解与发酵技术研究

饲料加工工艺中的酶解与发酵技术研究饲料工业的发展与动物养殖业的繁荣密切相关。

在饲料加工工艺中，酶解与发酵技术是两种重要的改良手段，通过优化饲料的营养成分和生物活性，可以显著提升动物的生长性能和健康状态。

酶解技术在饲料加工中的应用酶解技术是利用特定的酶对饲料原料进行预处理，通过水解作用将大分子物质转化为小分子物质的过程。

这一技术能够有效提高饲料中营养素的消化吸收率，尤其是对蛋白质、碳水化合物和脂肪的降解，从而使得饲料的营养成分更易于动物体内吸收。

蛋白质的酶解蛋白质是动物生长不可或缺的营养成分，但其分子量较大，直接消化吸收效率不高。

通过特定的蛋白酶作用，可以将蛋白质分解为多肽和氨基酸，这些小分子可以直接被动物肠道吸收。

常用的蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶等。

碳水化合物的酶解碳水化合物是动物能量的主要来源，但饲料中的淀粉和纤维素等碳水化合物分子量大，消化率低。

通过使用淀粉酶、糖化酶和纤维素酶等，可以提高碳水化合物的降解率，从而提升动物的能量摄入和利用率。

脂肪的酶解脂肪是高能量的营养成分，但其消化需要在小肠中通过胆汁和胰液中的脂肪酶作用才能完成。

在饲料中添加脂肪酶可以提前在胃中开始脂肪的消化，有助于提高脂肪的吸收率和利用率。

发酵技术在饲料加工中的应用发酵技术是利用微生物的代谢活动对饲料原料进行处理的过程。

通过发酵，可以增加饲料中的有益微生物数量，改善饲料的感官性质，同时产生一些维生素和消化酶，进一步增强饲料的营养价值。

微生物的作用在发酵过程中，添加的微生物（如乳酸菌、酵母菌等）会消耗饲料中的糖类等营养物质，产生乳酸、乙酸等有机酸，降低饲料的pH值，从而抑制有害菌的生长，保持肠道健康。

营养价值的提升发酵过程中，微生物会合成B族维生素和一些消化酶，这些物质对于动物的健康和生长具有重要作用。

同时，发酵还能够提高饲料中蛋白质和碳水化合物的消化率。

感官性质的改善发酵处理后的饲料通常具有更好的适口性，可以激发动物的采食兴趣，提高饲料的摄入量。

草鱼蛋白酶解及脱腥脱苦工艺研究

ｔｏｓｗｉｈａｔｅｃｒｏｅｈｏｏｙｏｅｏａｉｔｒａｄｆｈｎｓｎｈｄｏｙｅｒｔｉｒｓｆｌｉｎｔｃｉａｂｎｔｃｎｌｇｆｒｍｖｌｔｅｎｉｉｅｓｉｙｒｌｚｄｐｏｅｎｗｅｅａｏ — ｖｂｓ
ＸＵｉ，ＬＩＭｉｇｙａＪｎｎ－ｕｎ
（ｎｔｕｅｏｉｌｇｃｌＥｇｎｅｉｇ，ｈａＵｎｖｒｉｙＩｓｉｔｆＢｏｏｉａｎｉｅｒｎｔＸｉｕｉｅｓｔ，Ｃｈｎｄ１０９Ｃｈｎ）ｅｇｕ６０３，ｉａ
ｐｏｅｓｎｙｅｓｌｔｏｒｔｄｅｒｔａｅｅｚｍｏｕｉｎｗｅｅｓｕｉｄ，ａｄｗｉｃｉｅｃｒｏｒｔｅｄｏｏｉａｉｎ，ｕｉｇｔｅｏｔｏ — ｎｔａｔｖａｂｎｆｈｅｄｒｚｔｏｈｏｓｎｈｒｈｇｏａｘｅｉｅｔｂｔｅｅｇｎｏｙｒｌｓｔｎｔｅｄｏｏｉａｉｎｂｔｅｒｃｓｏｄｔｎｓｄｓｎｌｅｐｒｍｎｉｒｒａｅｔｆｒｈｄｏｙａｅｏｈｅｄｒｚｔｏｉｒｐｏｅｓｃｎｉｏｓｗａｉ — ｔｔｉ
酶解液颜色较浅具有良好的风味。关键词：草鱼；解；酶活性碳 Байду номын сангаас 腥脱苦脱
中图分类号：２４４ＴＳ５．
文献标识码：Ｂ
文章编号：ＯＯ９３２１）１０５３ｌ０一９７（０２０一Ｏ４一Ｏ

鸡肉肌原纤维蛋白酶解产物的抗氧化活性研究

作者简介：（９７）女（）硕士研究生，刘娜１８一，汉，研究方向：食品科学与工程。通信作者：张坤生（９７）男（）教授，１５一，汉，博士，研究方向：食品加工与贮藏。
由图８以看出，可随着时间增加，增李斯特菌在单
基础研究
食品研究与开发
ＦｏｅｅｒｈＡｎｅｅｐｎｏｄＲｓａｃｄＤｖｌｍｅｔｏ
２１０１年７月
第３卷第７５２期３
＝＝Ｉ
鸡肉肌原纤维蛋白酶解产物的抗氧化活性研究
刘娜，张坤生任云霞。
（天津市食品生物技术重点实验室，天津商业大学食品工程系，天津３０３）０１４
Hale Waihona Puke 生长要求高，肉品中不如其它菌群生长快，在导致其百分比下降，也可能是由于环境的低温对单增李斯特菌
的生长产生了一定的抑制作用，而冷却肉中的腐败菌群受到低温的影响相对要小的多。另一方面，在腐败菌中，含有一定的乳酸菌，乳酸菌产酸，肉的ｐ值有影对Ｈ响，而单增李斯特菌不耐酸，也可能导致了单增李斯特
【黄愈玲，２】何晖，李秀珍，食品中李斯特菌污染状况调查【．等．Ｊ疾Ｊ
病监测，０５２（）３９３１２０．０７：５ — ６
ｆ粱锐萍，３］黄素珍，胡慧强．单核细胞增生性李斯特氏菌及其检验
【．Ｊ动物医学，０４２（１：１４Ｊ２０，１）４— ３１ｆ王刚，阳．４］邱单核细胞增生性李斯特菌及其快速检测［．Ｊ微生物学］

酶法水解提取骨骼蛋白的实验研究

取骨骼蛋白，传统采用酸法或碱法水解。酶解工程技术属于现
代生物技术，目前已广泛应用于食品、保健食品、汤料、味料调的生产。为探索更合理的酶解条件及工艺流程，本文以新鲜牛骨骼为原料，进行酶法水解提取动物骨骼蛋白的实验研究。
值至８。一只酶解锅内的酶解反应，５在酶解过程和酶解终点均
汤进行脱脂，脂后的骨骼，汤温度在４～０脱骨８５ ℃时，调节ｐＨ
维普资讯
２００７年１２月
广西轻工业
ＧＡＧＩＯＲＡＦＬＨＤＳＲＵＮＸＵＮＬＯＩＴＩＵＴＹＪＧＮ食品与生物
第１２期（总第１９期）０
酶法水解提取骨骼蛋白的实验研究
甘桂珍，建忠何
（贵港市疾病预防控制中心，广西贵港５７０３ｌ）０
【摘要】根据现代生物酶法水程技术（解工以下简称酶解）胰酶，，利用提取动物骨骼中蛋白的质。本方法与传统方法相
比，具有工艺流程简单易行、环保，白质提取率高，蛋无异味，溶解性能好等优点，降低了成本。
４结果与讨论
表１胰酶、木瓜酶的酶解液舍氮量比较
反应。按酶解所需的温度调节和控制，按实验要求控制酶解时
间，酶灭活，分离骨渣，将清液浓缩，干燥，即得骨骼蛋白粉。
３２酶的选择．
为使酶解反应达到理想的程度，并结合生产投入成本，在实验中分别选用胰酶，木瓜酶作对比试验。取两个适宜大小的夹层蒸汽锅（酶解锅）分别加入高压和脱脂后的热骨１０，０克和骨汤０２０ｇ一个酶解锅内温度调至４～＆Ｃ，Ｈ值调至８５０，８５ｐ．５时加入胰酶０１ｇ另一个酶解锅的温度在４ — ＷＣ，．１；０６时调节ｐＨ为６～７加入木瓜酶１ｇ，０。两种酶的反应时间均为６小时。反应终点时，分别取样测定反应液中的含氮量，结果见表１。

海产品蛋白酶水解多肽研究进展

物中分离获得１种具有抗氧化活性的肽，子质分
量为１ｋ。２０年，Ｍｎｉ和Ｒａａｓ３Ｕ０５ｅｄｓ￣ｐｋｅ等 ¨ 用胰蛋白酶水解巨乌贼皮肤明胶 “
已经从多种海鱼水解物中分离出具有抑制ＡＥＣ的活性多肽。国外在这方面研究较多，起步较早。如Ｆｊａｕｉｔ等从鲣鱼酶解物中提取出ＡＥ抑制肽；ａＣＫ— ｗｓｋ等从沙丁鱼酶解物中提取出一种ＡＥａａｉＣ
层析、子交换层析和亲和层析。也可以结合超离
滤膜过滤来筛选不同分子量的多肽。随着技术水平不断提高，压液相色谱高
（ＰＣ）广泛地应用于多肽的分离纯化，以ＨＬ也可
不仅影响最后产品的生理功能、得率、反应速度，
维普资讯
５４
ＥｚｍｅＡＥ）ｎｙ，Ｃ是一种二肽羧酸酶，它能使血管紧张素ｘ转化为血管紧张素Ｙ，末梢血管收缩而使
导致血压升高。经过研究人员的多年努力，在现
《渔业现代化｝０８２０年第３卷第２５期
ห้องสมุดไป่ตู้
酶法水解能在温和的条件下进行，能在一定的条件下进行定位水解分裂产生特定的肽，易于控且
制水解进程，因而能较好地满足多肽的生产需要。
海洋生物体内、海水及海洋污泥中分离，纯化可高效酶解不同海洋生物蛋白的蛋白酶。ｊ现代生物活性物质的分离纯化大多通过柱层

蛋白酶酶解效率体外仿生

蛋白酶酶解效率体外仿生
蛋白酶酶解效率体外仿生评估能够显著提高蛋白饲料原料及全价饲料蛋白质及干物质的消化率。

蛋白酶的酶解效率会受到多种因素的影响，如温度、pH值、底物浓度等。

“特节”系列蛋白酶是挑战集团研究院在多年应用研究基础上，利用建立的新型酶制剂评估方法，筛选优化而开发的一款底物针对性强，酶解效率高的蛋白酶制剂产品。

该产品适宜作用的pH范围广，体外仿生系统评价结果显示能够显著提高蛋白饲料原料及全价饲料蛋白质及干物质的消化率。

实际生产应用中，该产品能够显著提高动物对饲料蛋白质的消化利用率，改善动物肠道健康、降低动物腹泻问题发生，提高动物生产性能，同时降低饲料成本及养殖对环境造成的污染。

总之，蛋白酶酶解效率体外仿生评估对于蛋白酶的开发和应用具有重要意义，通过体外仿生评估可以更好地了解蛋白酶的酶解效率和特点，为蛋白酶的工业化应用提供指导。

蚯蚓蛋白酶解工艺及其产物分析

蚯蚓是属于环节动物门寡毛纲( Olgochaeta) 的一类低等无脊椎环节动物, 体细长成柱状, 全身分化为许多节。蚯蚓浑身是宝, 为多功能性生物资源, 既能肥沃土壤, 净化环境, 又能提供动物需要的蛋白
收稿日期: 2005 04 12 基金项目: 中国水产科学研究基金项目( 2003- 01- 07) 作者简介: 刘波( 1978- ) , 男, 重庆市人, 研究实习员, 硕士, 主要从事水产动物营养与饲料方面的研究。通讯作者: 戈贤平( 1963- ) , 男, 江苏常州市人, 研究员, 主要从事水产动物营养学方面的研究。E mail: gexp@ ffrc. cn
JOURNAL OF SHANGHAI FISHERIES UNIVERSITY
文章编号: 1004- 7271( 2006) 01- 0078- 06
蚯蚓蛋白酶解工艺及其产物分析
Vol. 15, No. 1 Jan., 2006
刘波, 谢骏, 郑小平, 戈贤平
( 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心, 江苏无锡 214081)
80
上海水产大学学报
15 卷
= 7. 38- 0. 244( t1- t2) , 再用待测酶解样品上柱, 记录出峰时间, 从标准曲线求出酶解样品的相对分子质量。
2 结果与分析
2. 1 单因子试验
2. 1. 1 温度保持 pH= 7. 0, 时间= 6 h, [ E] / [ S] = 5% , 温度梯度为 40 , 45 , 50 , 55 , 60 , 随着温度的
关键词: Asl. 398 枯草蛋白酶; 蚯蚓; 酶解; 产物分析
中图分类号:TS 201. 2
文献标识码: A
Enzymatic technology and analysis of earthworm enzymatic hydrolysate

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动物蛋白酶解研究（I）北京工商大学宋焕禄天调食品配料有限公司廖国洪摘要本文主要目的是以美拉德（Maillard）反应产物（MRPs）的风味为判断依据，以水解度(DH)为动物蛋白酶解液——Maillard反应底物之一的特征性指标，根据MRPs 的风味确定动物蛋白水解液的最佳DH或DH范围。

实验的主要内容包括：1.以牛肉为酶解底物，对所用的几种蛋白酶进行酶活测定2.确定各酶的适宜加量和反应时间3.确定最佳酶组合及其最佳反应条件4.用最佳反应条件下制得的动物蛋白水解液进行Maillard反应，感官评定产物风味。

关键词动物蛋白水解液水解度（DH）酶解Maillard反应1．概述1.1肉味香精研究进展肉味香精研究及生产中有关肉味形成机理的报道很多。

随着肉味香精的需求量日益增加，有关肉味香精的研究也不断深入和扩展。

肉味香精中各种香味物质的形成主要是通过Maillard反应产生。

参与反应的底物中氨基酸或多肽对风味物质的形成有重要影响。

根据已有的研究结果，通常认为，Maillard反应产物中含硫化合物、杂环化合物和羰基化合物对肉味形成有重要影响[1]。

这些风味物质的形成机理极其复杂。

杂环化合物中以吡咯类、吡嗪类、噻吩类等化合物贡献较大[2]。

对Maillard反应产物的一系列研究表明，它还具有抗氧化、抗诱变等多种性能[3]。

此外，人们还从蛋白质结构及肽键顺序等方面对Maillard反应产物进行分析，以期找到它们与产物风味之间的某种关系[4]。

酶解法是一种新兴的动物蛋白水解液的生产方法。

与已有的生产方法相比，酶解法有很多优点，因此对酶法生产动物蛋白水解液的研究很受重视。

人们从酶解机理、酶解原料、酶及酶解液等多方面进行了大量深入研究。

G.M.O′Meara和P.A.Munro以米氏方程和兰格缪尔等温吸附模型为基础，研究了瘦肉的酶解动力[5]，并对酶解反应的影响因素如pH值、温度、时间、酶/底物比及底物浓度分别进行研究[6]。

研究者还试图从不同途径寻找更有效的酶，研究酶的性质、结构、作用特点、反应条件以及单、多酶水解效果的比较、不同底物水解效果的比较,等等[7]。

人们还注意到，由于水解条件的变化，得到的水解液有时会含有苦味，并影响到后面的Maillard反应产物的风味。

研究认为，其原因是某种蛋白质含有疏水性氨基酸，它们常隐藏在蛋白质内部中，一旦水解暴露出来就会显出苦味[8,9]。

生产动物蛋白水解液的原料由于价格问题，生产成本一直降不下来。

近年来人们一直在寻找价廉易得的生产原料，已用于生产的有植物蛋白替代品、肉类生产副产物（骨头残肉、动物毛血等），但存在很多问题和欠缺，有待解决。

1． 2 蛋白质水解液的生产方法 1.2.1酸/碱法：酸/碱水解法较早用于生产,工艺条件比较成熟。

该法主要是用浓酸或浓碱在加热条件下降解蛋白质,得到的水解液经过中和后即可用于生产。

酸水解法的优点是水解很彻底,目前该产品广泛用做为调味品的原料，缺点是某些氨基酸被破坏，且需控制水解液中的氯丙醇含量[10,11]。

碱法水解不被推荐，因为不仅水解液味道很较，且其中氨基酸会发生消旋化。

1.2.2 酶水解法用蛋白酶在其适宜的作用条件下水解蛋白质,得到的水解液经过灭酶后就可以用于生产。

酶解法的优点是作用条件温和,产物安全无毒,而且基础风味纯净。

但是酶法生产的水解液水解度不高,这会影响到后来的Maillard 反应产物的风味。

酶解法目前应用非常广泛,并且越来越受到重视。

1.2 酶解法1.酶解机理[8]一般认为,蛋白质酶解时肽键水解断裂的过程如下:a.肽键断开-CHR-CO-NH-CHR ′- + H 2OE -CHR-COOH + NH 2-CHR ′-b.质子交换-CHR-COOH + NH 2-CHR ′- -CHR-COO - + NH 3+-CHR ′-c.氨基滴定NH 3+-CHR ′- + OH - NH 2-CHR ′- + H 2O 2.影响因素蛋白质酶解的影响因素包括温度、pH 值、时间、酶量、底物浓度等。

不同的酶对应有不同的最适pH 值、最适温度及反应时间等条件要求。

对同一种酶来说，底物不同则反应条件也不尽相同，由此得到的产物也各不相同。

3.常用的蛋白酶类酶法生产蛋白质水解液常用的几种酶及其特性如下表所示:注：1U ——40℃、pH3.0时1min 内水解酪蛋白产生1μg 酪氨酸的酶量。

1AU——25℃下1min内水解变性血红蛋白产生1mmol酪氨酸的酶量。

1LAPU——25℃下1min内水解1mmol的L-leu-对硝基苯胺的酶量。

2．实验材料与方法2.1 实验材料2.1.1 原料市售新鲜鸡胸肉，绞碎后冷藏备用。

2.1.2 试剂磷酸盐（标准物质）缓冲液 pH6.864硼砂（标准物质）缓冲液 pH9.182 上海市爱建现成试剂厂邻苯二甲酸氢钾缓冲液 pH4.003氢氧化钠分析纯北京化工厂硫酸铜分析纯新乡市第八化工厂硫酸钾分析纯北京化工厂硼酸分析纯哈尔滨市化工试剂厂盐酸化学纯北京化工厂浓硫酸分析纯北京化工厂1%酚酞乙醇指示剂（1g酚酞溶于100ml乙醇中）无水乙醇化学纯北京化工厂无水碳酸钠分析纯北京化工厂邻苯二甲酸氢钾分析纯北京化工厂磷酸氢二钠分析纯北京红星化工厂磷酸二氢钠分析纯北京红星化工厂三氯乙酸分析纯福林试剂实验室自备（1份试剂与1.5份水混合）干酪素化学纯上海化学试剂供应站L-酪氨酸 BR 公私合营上海生物化学制药厂甲醛优级纯北京市旭东化工厂Flavorzyme Novo Nodisk 公司提供Alcalase Novo Nodisk 公司提供Protamex Novo Nodisk 公司提供Neutrase Novo Nodisk 公司提供中性蛋白酶无锡酶制剂厂植物蛋白水解液自制L-半胱氨酸盐酸盐木糖氯化钠2.1.3 设备电子万用炉 1000W 天津市中环实验电炉有限公司改良式微量凯氏定氮蒸馏装置光学读数分析天平 TG328B 上海第二天平仪器厂架盘药物天平 HC-TP11B• 5 北京医用天平厂上皿电子天平 JA2003 上海天平仪器厂精密酸度计 PHS-2C型上海雷磁仪器厂电热恒温水浴锅 HH-S112型江苏省医疗器械厂磁力加热搅拌器 HJ-1型江苏省国华仪器厂分光光度计 721型上海第三分析仪器厂离心沉淀器 800型上海手术器械厂阿贝折光仪高压灭菌锅山东新华医疗器械厂2.2实验方法2.2.1 样品蛋白质含量的测定：微量凯氏定氮法2.2.2 酶活测定：福林法2.2.3 固形物含量测定：折光法测定。

2.2.4氨态氮测定：甲醛电位滴定法。

2.2.5 水解度（DH）的测定水解度的定义是水解肽键数占肽键总数的百分比。

测定水解度（DH）采用n-NH2式中V-V0氢氧化钠标准溶液滴定耗用量（ml）C 氢氧化钠标准溶液浓度（mol/L）W 水解用样品克数（g）V tot水解液总体积(ml)V 水解液取用体积(ml)h tot=(1×Pro%)/110式中h tot原料蛋白质中所含肽键总数（mmol/g原料）Pro% 样品的蛋白质含量110 氨基酸平均分子量则有DH%=(n-n0)×100/h tot3.研究內容与结果讨论3．1样品蛋白质的测定：经凯氏定氮法测定，样品的蛋白质含量为20.07% 。

3．2 酶活测定3.2酶加量及反应时间的确定3.3.1实验步骤以参考资料为依据，设定几个加酶量水平，通过测定不同反应时间下的水解度，作水解度对加酶量曲线和水解度对时间曲线，可大致确定合适的加酶量及反应时间。

具体作法是：称取50g鸡胸肉，加入50ml蒸馏水，在80℃水浴中加热10min后冷却。

调节pH值至各酶的最佳值处，按所设加酶量称加酶后于水浴中进行酶解，到达设定的反应时间后取5ml水解液，加入25ml蒸馏水，用甲醛滴定法测水解度。

3.3.2 结果讨论1.中性蛋白酶（pH7.5、37℃）图1 DH-酶量曲线（中性蛋白酶）图2 DH―时间曲线（中性蛋白酶）由图1及图2可以看出，中性蛋白酶的加量在200U/g蛋白以后水解液的DH 值上升趋势基本趋于平缓，而反应时间则在3h以后水解液的DH值已趋于平缓。

因此中性蛋白酶的适宜加量和反应时间确定为250U/g蛋白、3h。

2．Neutrase (pH6.5, 55℃)图3 DH—酶量曲线(Neutrase)图4 DH-时间曲线(Neutrase)由图3及图4可见，Neutrase的适宜加量比较小，其加量大于150U/g蛋白以上水解度（DH）变化已经很小；反应时间在3h以后DH变化就不明显了。

可见Neutrase的适宜加量及反应时间可定为150U/g蛋白、3h。

3. Protamex (pH6.5, 55℃)图5 DH—酶量曲线(Protamex)图6 DH—时间曲线(Protamex)由图5和图6，Protamex加量大于1000U/g 蛋白、反应时间大于6h以后曲线的上升趋势已近平缓，因此可以选定1000U/g蛋白、6h为其适宜加量和反应时间。

4. Alcalase (pH7.5, 55℃)图7 DH—酶量曲线(Alcalase)图8 DH—时间曲线(Alcalase)由图7及图8可以确定Alcalase的适宜加量为1500U/g蛋白，8h。

5. Flavorzyme (pH7.0，50℃)图9 DH—酶量曲线(Flavorzyme)图10 DH—时间曲线(Flavorzyme)由图9及图10，Flavorzyme的DH—酶量曲线基本上都在上升，并没有出现一个理论上的适宜值。

从经济角度考虑，取200U/g蛋白的加量。

而其反应时间在8h 以后DH变化已不明显。

3.3最佳酶组合的确定3.4.1实验步骤称取200g鸡胸肉，加入100g蒸馏水，于80℃水浴中加热10min，调节pH 值至酶的最适pH值处，称加酶后于水浴中进行酶解并间隔搅拌。

每隔1h取10ml 水解液，定容至100ml,取10ml进行甲醛滴定测DH值。

1. Alcalase & Flavorzyme(A&F)2. Protamex&Flavorzyme(P&F)3. Neutrase&Flavorzyme(N&F)4. 中性蛋白酶&Flavorzyme(Z&F)3.4.2 结果分析由实验数据得到的四个酶组合A&F、P&F、N&F、Z&F的固形物—时间曲线、Aa-N—时间曲线及DH—时间曲线如下：图11 固形物—时间曲线图12 Aa-N—时间曲线图13 DH—时间曲线由图11、图12和图13可以看出，四种酶的固形物—时间曲线很相似，差别并不大，但是它们的Aa-N—时间曲线、DH—时间曲线差别就很明显：P&F酶组合变化最显著，另外三个酶组合相差不大。