肌注马波沙星在猪组织中残留消除规律

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ｍａｒｂｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｉｎ ｐｉｇｓ，ｐｒｅ－ ｐａｒｉｎｇ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｉｍｅ．Ｍａｒｂｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｔｏ ３０ｈｅａｌｔｈｙ ｐｉｇｓ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｌｙ ａｔ ａ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ２ ｍｇ·ｋｇ－１ ｆｏｒ ３ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｄａｙｓ．Ａｎｉｍａｌｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｔ ０．５，１，３，５，８ｄａｆｔｅｒ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｄｏｍｌｙ．Ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ，ｄｒｉｅｄ ｕｎｄｅｒ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｔ ４５ ℃ ａｎｄ ｃｌｅａｎｅｄ ｕｐ ｗｉｔｈ ｈｅｘａｎｅ．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｅｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＵＶ ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｆｔｅｒ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｂｙ Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｋｉｄｎｅｙ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ４．９３μｇ·ｇ－１ ａｔ １２ｈ，ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｒｂｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｉｎ ａｌｌ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｔ ５ｄ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｒｅｓｉｄｕｅ Ｌｉｍｉｔ（ＭＲＬ）．Ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔｉ－ ｍａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｍｕｓ－ ｃｌｅ＞ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｓｉｔｅ＞ｋｉｄｎｅｙ＞ｌｉｖｅｒ＞ｓｋｉｎ／ｆａｔ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ ｏｆ １７．８６，１７．９２，１８．２０， １８．９０，２１．２０ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ，ｔｈｅ ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅ ｃｕｒｖｅ （ＡＵＣ）ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｓｔ ｗｉｔｈ ２００．１６μｇ·ｈ·ｇ－１．Ｋｉｄｎｅｙ ｗａｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｏｒ－ ｇａｎ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＭＲＬ ｓｅｔ ｂｙ ＥＭＥＡ，ｔｈｅ ｌｏｎｇｅｓｔ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｗｉｔｈ ５．４６ｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｒｂｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｉｎ Ｐｉｇｓ ａｆｔｅｒ Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕ－ ｌａｒ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｑｕｉｃｋｌｙ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｗｉｄｅ ａｎｄ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｌｏｗｌｙ．Ｉｔ ｉｓ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｉｍｅ ｗａｓ ６ｄａｙｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｍａｒｂｏｆｌｏｘａｃｉｎ；ｒｅｓｉｄｕｅ；ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｉｍｅ
（华南农业大学国家兽药残留基准实验室，广州 ５１０６４２）
摘 要：旨在 分 析 马 波 沙 星 在 猪 体 内 的 残 留 消 除 规 律 并 为 制 定 休 药 期 提 供 依 据 。３０ 头 健 康 猪 按 体 重 以 ２ ｍｇ·ｋｇ－１肌注给药，每天１次，连续给药３ｄ，最后一次给药后第０．５、１、３、５、８ 天 随 机 宰 杀 ５ 头 猪 取 样。 试 样 用 三 氯甲烷提取，４５ ℃下氮气吹干和正己烷净化后，经高效液相色谱 Ｃ１８色 谱 柱 分 离 后 用 紫 外 检 测 器 检 测 。 结 果 显 示： 给药后１２ｈ肾组织中的药物浓度最高，为４．９３μｇ·ｇ－１，第５天所有组织 的 药 物 浓 度 均 低 于 最 高 残 留 限 量 。 采 用 Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎ软件计算各组织的消除动力学参数，消除快慢依次为肌肉、注射位点、肾、肝和皮 脂，其 消 除 半 衰 期 （ｔ１／２β） 分别为１７．８６、１７．９２、１８．２０、１８．９０、２１．２０ｈ。肾的药时曲 线 下 面 积 （ＡＵＣ）最 高，为 ２００．１６μｇ·ｈ·ｇ－１，说 明 肾 是 马 波沙星在猪体内作用的靶器官。参照 ＥＭＥＡ 对马波沙星制定的 ＭＲＬ，计算得肾的休药期最长，为５．４６ｄ。马波 沙 星 注 射 液 在 猪 体 内 吸 收 迅 速 ，分 布 广 泛 ，消 除 缓 慢 ，建 议 休 药 期 为 ６ｄ。 关 键 词 ：高 效 液 相 色 谱 ；马 波 沙 星 ；残 留 ；休 药 期 中图分类号：Ｓ８５９．８４ 文献标志码：Ａ 文章编号：０３６６－６９６４（２０１４）０５－０８２７－０６
马波 沙 星 标 准 储 备 液：准 确 称 取 马 波 沙 星 对 照 品５．０５ｍｇ于 １０ ｍＬ 棕色容量瓶中，用适量 １％ 乙 酸 溶 解，用 纯 水 定 容 至 刻 度，摇 匀，即 成 ５００ μｇ·ｍＬ－１马波沙星标准液，４ ℃ 冰 箱 保 存。马 波 沙 星 系 列 标 准 工 作 液 ：精 密 吸 取 ０、０．０４、０．１、０．２、２、１０、 ２０ｍＬ马波 沙 星 标 准 液（５００μｇ·ｍＬ－１）分 别 置 １００
ｍＬ棕色容量 瓶 中，用 流 动 相 稀 释 并 定 容 至 刻 度，摇 匀，即得浓度为０、０．２、０．５、１、１０、５０、１００μｇ·ｍＬ－１的 马波沙 星 系 列 标 准 工 作 液。流 动 相 溶 液：准 确 量 取 ２％甲酸溶液３８０ｍＬ，加入１％ 三乙胺溶液 ３８０ ｍＬ， 用７５％乙腈水溶液稀释定容至１ ０００ｍＬ。 １．４ 试 验 动 物
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畜 牧 兽 医 学 报
４５ 卷
马 波 沙 星 （Ｍａｒｂｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ＭＢＦ）又 名 麻 保 沙 星 ，是 一 种 动 物 专 用 的 新 型 氟 喹 诺 酮 类 抗 菌 药 ，由 瑞 士罗氏公司研制，并于１９９５年首次在英 国 上 市 。 ［１－３］ 目前，欧洲药品评价 局 兽 药 委 员 会 已 经 批 准 马 波 沙 星用于狗、猫、兔、牛和猪 。 ［４－８］ 马波沙星具有 抗 菌 谱 广、杀菌活性强、体 内 分 布 广 泛、与 其 他 抗 菌 药 物 无 交叉耐药性等特点 。 ［９－１０］ 作 用 机 理 是 通 过 抑 制 细 菌 的 ＤＮＡ 转录酶 从 而 抑 制 细 菌 的 生 长，对 革 兰 阴 性 菌、革兰阳 性 菌 和 支 原 体 均 有 抗 菌 作 用 。 ［１１－１２］ 临 床 上推荐口服、肌肉注 射 给 药 用 于 治 疗 狗 的 深 部 及 浅 表脓肿病及 尿 路 感 染，猫 的 皮 肤 及 软 组 织 感 染，牛 （包括奶牛）、猪的 呼 吸 系 统 疾 病 以 及 用 于 治 疗 母 猪 的乳腺炎、子 宫 炎、无 乳 综 合 征 。 ［１３－１５］ 目 前，国 内 还 未见有关马波沙星在健康猪体内残留消除规律的研 究报道。本研究以华南农业大学自主研制的马波沙 星 注 射 液 为 研 究 对 象 ，探 讨 其 在 猪 肝 、肾 、肌 肉 、皮 脂 及注射部位中的残 留 消 除 规 律，为 新 兽 药 在 临 床 上 的合理应用和休药期制定提供理论依据。
色 谱 柱：Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８ （２５０ ｍｍ ×４．０ ｍｍ，５ μｍ），美国 Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ公司；流动相：乙腈－２％甲酸－ １％三乙胺－水（１８＋３８＋３８＋６），等 度 洗 脱，流 速 为 １ｍＬ· ｍｉｎ－１；紫 外 检 测 波 长 为 ２９５ｎｍ；柱 温 ３０ ℃ ；进 样 量 ２０μＬ。 １．７ 样 品 处 理
收 稿 日 期 ：２０１３－１２－０６ 基 金 项 目 ：公 益 性 行 业 （农 业 ）科 研 专 项 （２０１３０３０３８－５） 作 者 简 介 ：李 帅 鹏 （１９８８－），男 ，河 南 鲁 山 人 ，硕 士 研 究 生 ，主 要 从 事 兽 医 药 理 学 研 究 ，Ｅ－ｍａｉｌ：１６３２７６２９５４＠ｑｑ．ｃｏｍ ＊ 通 信 作 者 ：黄 显 会 ，高 级 兽 医 师 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｈｈｕａｎｇ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
马波沙星 注 射 液：含 量 １０％ （１００ ｍＬ∶１０ｇ）， 华南农业大学研制；马波 沙 星 对 照 品：含 量 ９９．０％， 批号 Ｃ１４７５５０００，德 国 Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ ＧｍｂＨ 公 司。甲醇、乙腈为色谱纯，甲酸、三乙胺、正己烷 、三 氯甲烷均为分析纯，水为符合 ＧＢ／Ｔ ６６８２规定的二 级水。 １．３ 溶 液 配 制
将 ３０ 头 猪 随 机 分 为 ６ 组 进 行 残 留 消 除 试 验 ，每 组５头，试验猪按体重２ｍｇ·ｋｇ－１颈部肌 肉 注 射 给 药，每 天 １ 次，连 续 给 药 ３ｄ，在 最 后 一 次 给 药 后 第 ０．５、１、３、５、８ 天 随 机 宰 杀 ５ 头 猪。 采 集 以 下 组 织： 肌 肉 （背 部 左 侧 的 背 最 长 肌 ）５００ｇ、肝 （最 大 叶 部 位 ） ５００ｇ、肾（双肾 纵 切，各 取 一 半 ）、注 射 位 点 肌 肉 ［皮 肤去毛后，以注射 位 点 为 中 心，划 １０ｃｍ×１０ｃｍ 方 形 ，采 １０ｃｍ×１０ｃｍ×６ｃｍ（深 ）的 肌 肉 样 本 ］；皮 脂 （腹部脂肪）２００ｇ。各样品采集后立即做好标 记、包 装，保存于－２０ ℃冰箱，待测。 １．６ 色 谱 条 件
１ 材 料 与 方 法
１．１ 仪 器 高效液 相 色 谱 仪：ＡＬＬＩＡＮＣＥ Ｗａｔｅｒｓ ｅ２６９５，
配 备 四 联 泵 、脱 气 泵 、色 谱 工 作 站 、紫 外 检 测 器 、自 动 进样器，美 国 ＷＡＴＥＲＳ 公 司 产 品。 美 国 Ｔｈｅｒｍｏ 公司 Ｍａｃｈ１．６Ｒ 冷冻型离心机，上海青浦沪西仪器 厂 ＸＷ－８０Ａ 旋 涡 混 合 仪， 德 国 ＩＫＡ 公 司 ＫＳ５０１ｄｉｇｉｔａｌ轨 道 式 摇 床，美 国 Ｚｙｍａｒｋ 公 司 Ｔｕｒ－ ｂｏＶａｐ ＬＶ 型 氮 气 吹 干 浓 缩 仪，日 本 ＳＨＩＭＡＤＺＵ （岛 津 ）公 司 电 子 分 析 天 平 等 。 １．２ 药 品 与 试 剂