实验四五、蛋白质的盐析作用和透析

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五、思考题 鸡蛋清为什么可用作铅中毒或汞中毒的 解毒剂？ 解毒剂？
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• 四、操作方法 支试管， 蛋白质溶液， （1）取1支试管，加入约 ） 支试管 加入约1ml蛋白质溶液，加 蛋白质溶液 硫酸铜溶液3-4滴 观察沉淀的生成。 入1%硫酸铜溶液 滴，观察沉淀的生成。 硫酸铜溶液 （2）在蛋白质可逆沉淀反应中，将用硫酸铵 ）在蛋白质可逆沉淀反应中， 盐析所得的清蛋白沉淀倒入透析袋内， 盐析所得的清蛋白沉淀倒入透析袋内，用线 绳或透析袋夹江透析袋口扎紧， 绳或透析袋夹江透析袋口扎紧，把透析袋浸 入盛有蒸馏水的烧杯中进行透析， 入盛有蒸馏水的烧杯中进行透析，并经常用 玻璃棒搅拌，每隔15分钟换水一次 分钟换水一次， 玻璃棒搅拌，每隔 分钟换水一次，仔细观 察透析袋中的蛋白质沉淀变化情况。 察透析袋中的蛋白质沉淀变化情况。
但是，在一定的物理化学因素影响下， 但是，在一定的物理化学因素影响下， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 如失去电荷、脱水、甚至变性， 如失去电荷、脱水、甚至变性，而以固体 形式从溶液中析出， 形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质 的沉淀反应。 的沉淀反应。这种反应可分为可逆沉淀反 应和不可逆沉淀反应。 应和不可逆沉淀反应。
同时所带电荷被中和， 同时所带电荷被中和，结果蛋白质的胶体 稳定性遭到破坏而沉淀析出。 稳定性遭到破坏而沉淀析出。析出的蛋白 质仍保持其天然性质，当降低盐的浓度时， 质仍保持其天然性质，当降低盐的浓度时， 还能溶解。因此， 还能溶解。因此，蛋白质的盐析作用是可 逆过程。 逆过程。
• 三、 材料与试剂 1、实验材料：鸡蛋 、实验材料： 2、实验试剂 、 蛋白质氯化钠溶液： 蛋清， 蛋白质氯化钠溶液：取20ml蛋清，加蒸馏水 蛋清 200ml和饱和氯化钠溶液 和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后， 和饱和氯化钠溶液 ，充分搅匀后， 以纱布滤去不溶物（ 以纱布滤去不溶物（加氯化钠的目的是溶解 球蛋白）。 球蛋白）。 其他试剂： 其他试剂：①硫酸铵粉末 ②饱和硫酸铵溶液
• 三、试剂和器材 • 1、实验材料：鸡蛋 、实验材料： • 2、实验试剂 、 蛋白质溶液： 鸡蛋清， 蛋白质溶液：取5ml鸡蛋清，用蒸馏水稀释 鸡蛋清 层纱布过滤， 至100ml，搅拌均与后用 层纱布过滤，新 ，搅拌均与后用4-8层纱布过滤 鲜配制。 鲜配制。 蛋白质盐析溶液 其他试剂： 其他试剂：0.1%硫酸铜溶液 硫酸铜溶液 • 3、实验器材 、 试管及试管架、透析袋、玻璃棒、线绳、 试管及试管架、透析袋、玻璃棒、线绳、烧杯
3、实验器材 、 试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、 试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、玻璃棒 、漏斗
• 四、操作方法 （1）取一个烧杯，加入 ）取一个烧杯，加入10ml蛋白质氯化钠溶 蛋白质氯化钠溶 液和10ml饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约 饱和硫酸铵溶液， 液和 饱和硫酸铵溶液 混匀， 10min，则球蛋白沉淀析出； ，则球蛋白沉淀析出； （2）过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加 ）过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末， 边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解， 边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，达到 饱和为止，此时析出的沉淀为清蛋白； 饱和为止，此时析出的沉淀为清蛋白；
实验三 蛋白质的盐析作用
• 一、目的要求 了解蛋白质的的沉淀反应 学习盐析操作技术 • 二、实验原理 用大量中性盐使蛋白质从溶液中沉淀析出 的过程称为蛋白质的盐析作用。 的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲 水胶体， 水胶体，蛋白质溶液在高浓度中性盐的影响 蛋白质分子被中性盐脱去水化层， 下，蛋白质分子被中性盐脱去水化层，
不可逆沉淀反应—蛋白质发生沉淀时， 不可逆沉淀反应 蛋白质发生沉淀时，其 蛋白质发生沉淀时 内部结构空间构象遭到破坏， 内部结构空间构象遭到破坏，蛋白质分子 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 使原有的天然性质丧失， 使原有的天然性质丧失，这时蛋白质已发 生变性。 生变性。这种变性蛋白已不能再溶解于原 来溶剂中。 来溶剂中。
（3）静置，倒去上清液，取部分清蛋白沉淀， ）静置，倒去上清液，取部分清蛋白沉淀， 加水稀释，观察它是否溶解， 加水稀释，观察它是否溶解，留取部分作 透析用。 透析用。
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五、思考题
高浓度的硫酸铵对蛋白质溶液溶解度有何影 为什么？ 响，为什么？
实验四 蛋白质可逆沉淀和不可逆沉 淀的比较
• 一、目的要求 了解蛋白质的沉淀反应、 了解蛋白质的沉淀反应、变性作用 。 学习透析操作技术。 学习透析操作技术。 • 二、实验原理 蛋白质分子在水溶液中， 蛋白质分子在水溶液中，由于其表面形成了 水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒， 水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所 以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相似。 以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相似。
可逆沉淀反应—蛋白质虽已沉淀析出， 可逆沉淀反应 蛋白质虽已沉淀析出，但 蛋白质虽已沉淀析出 它的分子内部结构并未发生显著变化， 它的分子内部结构并未发生显著变化，如 果把引起沉淀的因素去除后， 果把引起沉淀的因素去除后，沉淀的蛋白 质能重新溶于原来的溶剂中， 质能重新溶于原来的溶剂中，并保持其原 有的天然结构和性质。 有的天然结构和性质。利用蛋白质的盐析 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 丙酮短时间对蛋白质的作用等所产生的蛋 白质沉淀都属于这类沉淀反应。 白质沉淀都属于这类沉淀反应。