实验三 透析实验 蛋白质的透析

附：
➢ 透析袋的处理方法 用2%NaHCO3和10mM的EDTA煮沸 10min后，用蒸馏水清洗透析袋内外，重新 置于1mM的EDTA溶液中煮沸10min，保存 于4℃冰箱中。
思考：
➢ 透析是去除小分子物质，那还有哪些去除小 分子物质的方法？
➢ 影响透析的因素有哪些？
实验三 透析实验（一） ——蛋白质的透析
实验目的
➢ 掌握透析的基本原理和操作； ➢ 了解透析袋的使用方法。
实验原理
➢ 透析是利用小分子能通过而大分子不能通过 半透膜的原理把它们分开的一种重要手段， 是生物化学分离提纯过程经常使用的基本操 作技术之一。
➢ 蛋白质作为生物分子物质，不能透过Leabharlann Baidu析膜 而小分子物质（比如离子等）可以自由通过。
器具与试剂
➢ 烧杯；玻棒；试管；试管架；透析袋（宽 26cm，长8-10cm），线。
➢ 0.5mol/L EDTA；2%NaHCO3 ；1％ AgNO3溶液；10%HNO3，10%NaOH； 1%CuSO4；鸡蛋清-NaCl溶液
实验步骤
➢ 透析袋的前处理。 ➢ 将蛋白质溶液做双缩脲反应。 ➢ 取出透析袋，用三级水清洗透析袋内外，并检查透析袋是否有损坏。
用线将透析袋靠近末端的地方绑紧。 ➢ 取8ml蛋白质溶液放入透析袋中，并将开口端同样用线绑住并放入盛
有蒸馏水的烧杯中。随时用玻棒搅拌液体。 ➢ 每30min从烧杯中取水1ml，用10%HNO3酸化溶液，再加入
1%AgNO3 1-2d,检查氯离子的存在。另外取出1-2ml做双缩脲反应， 检查烧杯中是否有蛋白质存在。 ➢ 每0.5h更换一次烧杯中的三级水以加速透析过程。直到数小时后，烧 杯中的水不能检出氯离子的存在时，停止透析。并观察和检测透析袋 内容物是否有蛋白质或者氯离子存在。