实验三 透析实验 蛋白质的透析
蛋白质的沉淀与透析
（4）检查透析效果 每次更换洗脱液时，同时检查洗出液中是否有Cl¯。 Cl¯检查方法: 取试管一支，加入洗出液约2ml，加10％HNO3溶液1-2滴 至酸，然后加1％AgNO3 2-3滴，观察是否有白色沉淀。
五、要点提示
1.蛋白质–盐溶液的渗透压与溶液的pH有关。当蛋白质–盐溶 液透析时，带电荷的蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中 对立的离子可透过半透膜使膜两边的离子产生不均等的分布， 引起pH的变化（Donnan效应）。故盐溶蛋白经透析后可能会 出现沉淀或变性。 2.本实验是用于蛋白质脱盐，若用于浓缩，可将透析袋包埋 于吸水性极强的聚乙二醇或甘油中进行脱水。作透析洗脱液 用的水必须不含Cl¯和NH4+。
取一段透析袋，将其一端用透析袋夹夹住（或打一死结），由 开口端加入含清蛋白沉淀的溶液（不可装的太满，留出一半空 隙，并适当排出空气，以防透析袋胀破），用透析袋夹夹住袋 口（或打一死结）。
（3）透析 如右图，取一个大烧杯， 加入10倍以上样品液体 积的去离子水或缓冲溶 液，将装好样品的透析 袋悬于大烧杯中部，底 部放一个磁子，用磁力 搅拌器缓慢搅拌以促进 溶液交换，透析过程中 需更换洗脱溶液数次 （约30min一次），至达 到透析平衡为止（洗出 液中无Cl¯和NH4+），约 需2h。
四、操作步骤
1、蛋白质的检测 利用双缩脲反应进行蛋白质的检查。取待渗析的蛋白质-NaCl溶液2ml 和10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加1%CuSO4溶液1~2滴，边加边摇，观察 是否有紫红色出现。CuSO4不可过量，否则生成的蓝色Cu(OH)2会掩盖 浅紫红色。
2、蛋白质的可逆沉淀 （1）取卵清蛋白-NaCl溶液2ml，倾斜试管，沿管壁慢慢加入饱和（NH4）2SO4溶液2ml。轻 轻混匀，静置5min，观察球蛋白沉淀。 （2）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察清 蛋白沉淀。 （3）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察 清蛋白沉淀。
蛋白质透析除盐实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析除盐的原理和方法；2. 掌握蛋白质透析除盐的实验操作步骤；3. 熟悉透析袋的使用方法；4. 分析实验结果，探讨影响蛋白质透析除盐效果的因素。
二、实验原理蛋白质透析除盐是一种常用的蛋白质纯化方法，其原理是利用半透膜的特性，使蛋白质分子和盐类分子在透析袋内外进行扩散和平衡。
由于蛋白质分子较大，无法透过半透膜，而盐类分子较小，可以透过半透膜，从而达到去除盐分的目的。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）蛋白质样品：猪肝匀浆蛋白溶液；（2）盐溶液：0.5mol/L NaCl溶液；（3）透析袋：截留分子量约为10000的透析袋；（4）蒸馏水；（5）50mL离心管；（6）磁力搅拌器；（7）分析天平；（8）电热恒温水浴锅；（9）超滤膜。
2. 实验仪器：（1）实验材料同上；（2）50mL离心管；（3）磁力搅拌器；（4）分析天平；（5）电热恒温水浴锅；（6）超滤膜。
四、实验步骤1. 配制蛋白质样品：取猪肝匀浆蛋白溶液适量，用0.5mol/L NaCl溶液稀释至10mg/mL。
2. 配制盐溶液：取0.5mol/L NaCl溶液适量，用蒸馏水稀释至1mol/L。
3. 将蛋白质样品转移至透析袋中，并将透析袋放入50mL离心管中。
4. 将透析袋与盐溶液连接，确保透析袋内外液体充分接触。
5. 将离心管放入电热恒温水浴锅中，维持水温在37℃，透析时间为12小时。
6. 透析结束后，将透析袋中的蛋白质样品转移至新的离心管中，用分析天平称量蛋白质样品的质量。
7. 对透析前后的蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质的纯度。
五、实验结果与分析1. 蛋白质样品质量变化：透析前蛋白质样品质量为2.0g，透析后蛋白质样品质量为1.5g。
2. SDS-PAGE电泳分析：透析前蛋白质样品在SDS-PAGE电泳图谱上显示一条明显的蛋白质条带，透析后蛋白质条带仍然清晰，说明蛋白质在透析过程中未发生变性。
盐析透析实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质盐析与透析的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质盐析与透析的实验操作步骤。
3. 分析实验结果，验证实验原理。
二、实验原理1. 盐析：蛋白质在低盐浓度下溶解度增加，称为盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质溶解度下降并先后析出，称为盐析。
盐析是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀的因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。
2. 透析：透析是一种分离技术，利用半透膜的选择透过性，将溶液中的小分子物质与蛋白质等大分子物质分开。
在透析过程中，蛋白质分子由于不能透过半透膜，而小分子物质可以透过，从而实现分离。
三、实验材料1. 实验试剂：10%鸡蛋清溶液、饱和硫酸铵溶液、0.9%NaCl溶液、蒸馏水。
2. 实验器材：烧杯、量筒、磁力搅拌器、透析袋、滤纸、剪刀。
四、实验步骤1. 准备实验试剂：按比例配制10%鸡蛋清溶液、饱和硫酸铵溶液和0.9%NaCl溶液。
2. 盐析实验：a. 取适量10%鸡蛋清溶液放入烧杯中。
b. 将饱和硫酸铵溶液缓慢加入鸡蛋清溶液中，边加边搅拌。
c. 观察蛋白质盐析现象，记录实验结果。
3. 透析实验：a. 将盐析后的蛋白质溶液倒入透析袋中。
b. 将透析袋放入烧杯中，加入0.9%NaCl溶液。
c. 将烧杯放入磁力搅拌器中，搅拌一段时间。
d. 取出透析袋，观察蛋白质透析现象，记录实验结果。
4. 分析实验结果：a. 观察盐析实验中蛋白质的沉淀现象，分析盐析原理。
b. 观察透析实验中蛋白质的沉淀现象，分析透析原理。
五、实验结果与分析1. 盐析实验结果：随着饱和硫酸铵溶液的加入，鸡蛋清溶液中的蛋白质逐渐沉淀，溶液变浑浊。
2. 透析实验结果：将蛋白质溶液进行透析后，透析袋内出现白色沉淀，表明蛋白质分子较大，无法透过半透膜。
3. 实验结果分析：a. 盐析实验验证了蛋白质盐析原理，即蛋白质在低盐浓度下溶解度增加，在较高盐浓度下溶解度下降，最终沉淀析出。
b. 透析实验验证了透析原理，即蛋白质分子较大，无法透过半透膜，而小分子物质可以透过，实现分离。
蛋白质生化技术实验报告
蛋白质生化实验报告生殖免疫研究所薛樱子学号：1133111003实验一溶液中蛋白质浓度的测定一光吸收法（测量范围：0.1—2mg）1实验原理：由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值OD280nm与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据。
纯蛋白的A280/A260为 1.8，纯核酸的A280/A260为2步骤：2.1）打开仪器的电源开关（接220V交流电），打开比色槽暗箱盖，选择光源，选档，选波长，用调零旋钮调暗电流至0 。
2.2）将空白对照样品和待测溶液装入石英比色杯2.3）将仪器的比色槽暗箱合上，比色槽处于蒸馏水（或校正缓冲液）校正位置，旋转光量调节器使电表指针正确处于0 。
2.4）拉出比色槽手柄拉杆使比色槽处于样品位置读数。
2. 5）在260nm和280nm分别读数（分别用缓冲液调0），根据上表查处相应蛋白浓度，根据喜事倍数计算原溶液蛋白浓度，根据体积计算总蛋白量。
3结果与分析：A280=0.571 A260=0.340根据公式：蛋白浓度=1.5 ×A280 —0.75 ×A260=1.5×0.571—0.75×0.340=0.6015也可以根据蛋白质和核算含量折算图表画出一条直线估算蛋白质的浓度。
结果说明我的蛋白样品浓度是0.6015mg/ml。
二Folin—酚法（测量范围：10-300ug/ml）1实验原理：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。
在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
2试剂：2.1）甲液：１，4%碳酸钠；2，0.2n氢氧化钠；3，1%硫酸铜；4,2%酒石酸钾钠。
1和2，4溶于500ml水中，然后和4以50：1混合。
实验四五、蛋白质的盐析作用和透析
可逆沉淀反应—蛋白质虽已沉淀析出， 可逆沉淀反应 蛋白质虽已沉淀析出，但 蛋白质虽已沉淀析出 它的分子内部结构并未发生显著变化， 它的分子内部结构并未发生显著变化，如 果把引起沉淀的因素去除后， 果把引起沉淀的因素去除后，沉淀的蛋白 质能重新溶于原来的溶剂中， 质能重新溶于原来的溶剂中，并保持其原 有的天然结构和性质。 有的天然结构和性质。利用蛋白质的盐析 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 丙酮短时间对蛋白质的作用等所产生的蛋 白质沉淀都属于这类沉淀反应。 白质沉淀都属于这类沉淀反应。
不可逆沉淀反应—蛋白质发生沉淀时， 不可逆沉淀反应 蛋白质发生沉淀时，其 蛋白质发生沉淀时 内部结构空间构象遭到破坏， 内部结构空间构象遭到破坏，蛋白质分子 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 使原有的天然性质丧失， 使原有的天然性质丧失，这时蛋白质已发 生变性。 生变性。这种变性蛋白已不能再溶解于原 来溶剂中。 来溶剂中。
但是，在一定的物理化学因素影响下， 但是，在一定的物理化学因素影响下， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 如失去电荷、脱水、甚至变性， 如失去电荷、脱水、甚至变性，而以固体 形式从溶液中析出， 形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质 的沉淀反应。 的沉淀反应。这种反应可分为可逆沉淀反 应和不可逆沉淀反应。 应和不可逆沉淀反应。
3、实验器材 、 试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、 试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、玻璃棒 、漏斗
• 四、操作方法 （1）取一个烧杯，加入 ）取一个烧杯，加入10ml蛋白质氯化钠溶 蛋白质氯化钠溶 液和10ml饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约 饱和硫酸铵溶液， 液和 饱和硫酸铵溶液 混匀， 10min，则球蛋白沉淀析出； ，则球蛋白沉淀析出； （2）过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加 ）过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末， 边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解， 边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，达到 饱和为止，此时析出的沉淀为清蛋白； 饱和为止，此时析出的沉淀为清蛋白；
透析技术在蛋白分离纯化中的应用
透析技术在蛋白分离纯化中的应用蛋白质是生物体中重要的基本组成部分，对各种生命过程起着关键作用。
在许多生物学和生化学实验中，需要从复杂的混合物中分离纯化目标蛋白质。
透析技术是一种常用的蛋白分离纯化方法，它通过膜的选择性渗透性，将目标蛋白质从其他成分中分离出来。
本文将介绍透析技术的基本原理、常见的透析方法以及其在蛋白分离纯化中的应用。
一、透析技术的基本原理透析技术基于溶液中物质的扩散原理，利用半透膜（如膜过滤器、膜离子交换柱等）对不同分子大小和电荷的物质进行分离。
透析过程中，混合物被装入透析袋或柱中，然后将其浸入透析液中。
透析液的组成和条件（如pH、温度等）被控制在一定范围内，以实现目标蛋白质的有效分离。
二、透析技术的常见方法1. 凝胶透析法：通过选择性凝胶过滤，将分子量较小的物质透过凝胶，而较大的蛋白质则被阻滞在凝胶中，达到分离纯化的目的。
凝胶透析法常用于大量样品的蛋白质分离纯化，例如从细胞裂解液中分离纯化目标蛋白。
2. 膜透析法：利用膜的特定孔径和表面性质，选择性地分离目标蛋白质。
膜透析法可以更快速地进行透析过程，适用于小规模实验和快速筛选。
常见的膜透析方法包括膜过滤、膜离子交换和膜吸附等。
3. 柱透析法：透析柱通常包括离子交换柱、分子筛柱和透析柱等。
不同类型的柱根据目标蛋白质的特性进行选择。
透析柱适用于分离纯化高浓度的目标蛋白，可以减少样品消耗和处理时间。
三、透析技术在蛋白分离纯化中的应用透析技术在蛋白质分离纯化领域得到广泛应用，具有一系列的优势：1. 选择性：透析膜或柱可以根据目标蛋白质的分子大小、电荷和亲和性进行选择，实现对目标蛋白的高效分离。
2. 高纯度：透析技术能够有效地去除杂质，提供高纯度的蛋白样品。
3. 保护性：透析过程中，目标蛋白质可以在温和条件下进行，减少对其结构和功能的破坏。
4. 节约成本：透析技术相对于其他方法来说，不需要大量特殊设备，适用于小样品量的分离纯化，降低了实验成本。
蛋白质的透析原理
蛋白质的透析原理
蛋白质的透析原理是一种常用的分离和纯化方法，基于溶质在半透膜上的不同渗透性差异进行分离。
透析主要利用半透膜，通过分子的尺寸、电荷和亲水性等特性来筛选目标蛋白质。
透析过程中，溶液含有待分离的蛋白质和其他小分子物质。
选取透析膜时，要使膜孔径小于目标蛋白质的分子尺寸，以防止蛋白质的损失。
待测试的溶液被置于透析袋或管内，然后将透析袋或管浸入大量缓冲液中。
蛋白质和小分子物质能通过透析膜，在溶液和缓冲液之间发生渗透作用。
而蛋白质由于其较大的分子尺寸不能通过膜孔，只能在透析袋或管内滞留。
较小的小分子物质则能通过透析膜的膜孔，与缓冲液中的小分子物质交换，实现清除。
在透析过程中，缓冲液不断流动，保持其浓度的稳定。
通过扩散和对流作用，小分子物质会向缓冲液中渗透，从而被清除出透析袋或管，而蛋白质则在透析袋或管内净化。
透析的时间需根据待分离蛋白质的性质和目的来确定。
总的来说，蛋白质透析通过利用半透膜筛选待分离蛋白质和小分子物质的差异渗透性，实现对蛋白质的纯化和浓缩。
这一方法在生物化学和分子生物学领域应用广泛，有助于研究和分析蛋白质的结构、功能和相互作用等。
蛋白质透析的实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析的原理和方法。
2. 掌握透析袋的使用和操作技巧。
3. 学习如何通过透析分离蛋白质混合物。
二、实验原理蛋白质透析是一种利用半透膜的选择透过性来分离和纯化蛋白质的方法。
半透膜允许小分子物质（如盐、小分子有机物）自由通过，而大分子物质（如蛋白质）则被阻挡在膜的一侧。
通过改变透析袋内外的离子浓度，可以调节蛋白质的溶解度，从而实现蛋白质的分离。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：透析袋、磁力搅拌器、剪刀、移液枪、试管、烧杯、蒸馏水、氯化钠、鸡蛋清等。
2. 实验试剂：0.1M氯化钠溶液、0.01M氯化钠溶液、蒸馏水、10%硫酸铵溶液等。
四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，用蒸馏水冲洗干净，晾干备用。
2. 配制蛋白质溶液：将鸡蛋清用移液枪吸取一定量，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。
3. 透析袋预处理：将透析袋浸入0.1M氯化钠溶液中，浸泡30分钟，以去除透析袋中的杂质。
4. 透析操作：将预处理好的透析袋放入烧杯中，加入10%硫酸铵溶液，搅拌均匀。
将配制好的蛋白质溶液用移液枪加入透析袋中，确保蛋白质溶液充满透析袋。
5. 透析过程：将透析袋放入烧杯中，加入适量蒸馏水，使透析袋悬浮在水中。
用磁力搅拌器缓慢搅拌，保持透析袋内外液体充分接触。
6. 透析时间：根据实验需求，选择适当的透析时间。
一般透析时间为4-8小时。
7. 检测透析效果：在透析过程中，定时取样，用比色法检测透析袋内外的蛋白质浓度，以评估透析效果。
8. 透析结束：透析结束后，将透析袋内的蛋白质溶液倒入试管中，用比色法检测蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 透析过程中，透析袋内外的蛋白质浓度逐渐降低，说明蛋白质通过透析膜逐渐进入蒸馏水中。
2. 透析结束后，透析袋内的蛋白质浓度与透析前的蛋白质浓度相比，有显著降低，说明透析过程有效分离了蛋白质。
3. 比色法检测结果显示，透析后的蛋白质溶液中蛋白质浓度较低，说明透析过程实现了蛋白质的分离。
实验三、蛋白质的盐析透析
实验三、蛋白质的盐析透析一、蛋白质盐析（一）目的要求了解蛋白质的沉淀作用，加深对影响蛋白质胶体分子稳定性因素的认识。
（二）实验原理水溶液中蛋白质分子由于表面生成水化层及蛋白质分子上某些基团离子化而使蛋白质分子表面带有电荷，增加了水化层的厚度而成为稳定的亲水胶体颗粒，水膜和电荷一旦被除去，蛋白质颗粒将由于失去电荷和脱水而发生沉淀。
向蛋白质溶液中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸镁、氯化钠等）后，蛋白质便从溶液中沉淀析出，这种沉淀作用称为蛋白质盐析。
其过程是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。
用不同浓度的盐可将不同种类蛋白质从混合溶液中分别沉淀的过程，称为蛋白质的分级盐析。
例如蛋清溶液中的球蛋白可被半饱和的硫酸铵溶液沉淀提取，饱和的硫酸铵溶液可使清蛋白沉淀析出。
因此，盐析法常被用于分离和提取各种蛋白质及酶制剂。
（三）试剂及材料1、10%蛋清溶液选新鲜鸡蛋，轻轻在蛋壳上击破一小孔，取出蛋清，按新鲜鸡蛋清1份，九份0.9%NaCl 溶液的比例稀释配制蛋清液，混匀，用四层纱布过滤后备用。
2、饱和硫酸铵溶液称取76.6g硫酸铵溶于100mL 25℃蒸馏水中。
3、固体硫酸铵。
（四）操作方法1、取两支试管，分别加入10%蛋清溶液5 mL，饱和硫酸铵5 mL，静置5min，观察有否沉淀物产生，沉淀物为何物？2、取其一试管，用点滴管弃去上清夜，加水至沉淀物，观察沉淀是否会再溶解，说明沉淀反应是否可逆。
3、用滤纸把另一试管的沉淀混合物过滤，向滤液中添加固体硫酸铵至溶液饱和，注意观察溶液有否蛋白质沉淀产生，此沉淀又为何物？注意：把溶液中硫酸铵固体沉淀与蛋白质沉淀区别开来。
二、蛋白质的透析（一）目的要求学习透析的基本原理和方法（二）实验原理透析是利用小分子能通过，而大分子不能透过半透膜的原理，把不同性质的物质彼此分开的一种手段。
透析过程中因蛋白质分子体积很大，不能透过半透膜，而溶液中的无机盐小分子则能透过半透膜进入水中，不断更换透析用水即可将蛋白质与小分子物质完全分开。
透析实验优实验报告
一、实验目的1. 了解透析的基本原理及其在蛋白质分离纯化中的应用。
2. 掌握透析操作的步骤和方法。
3. 分析透析过程中蛋白质的迁移和分离效果。
二、实验原理透析是一种利用半透膜的选择透过性，将小分子物质从大分子物质中分离的方法。
半透膜允许小分子物质（如离子、小分子有机物等）自由通过，而大分子物质（如蛋白质、核酸等）则不能通过。
因此，通过透析可以去除蛋白质溶液中的小分子杂质，实现蛋白质的纯化。
三、实验材料与仪器实验材料：- 鸡蛋清蛋白溶液- 氯化钠溶液（饱和）- 透析袋- 滤纸- 移液管- 电子天平- 磁力搅拌器- 恒温水浴锅实验仪器：- 透析装置- 离心机- 超净工作台四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，并用滤纸将袋口密封。
2. 配制蛋白质溶液：称取一定量的鸡蛋清蛋白，加入适量的氯化钠溶液，充分溶解。
3. 将蛋白质溶液转移至透析袋中，密封袋口。
4. 将透析袋放入透析装置中，加入适量的蒸馏水，使透析袋完全浸没。
5. 将透析装置放入恒温水浴锅中，维持一定温度（如25℃）。
6. 定期更换透析水，观察蛋白质的迁移情况。
7. 透析结束后，收集透析液，检测蛋白质的纯度和浓度。
五、实验结果与分析1. 在透析过程中，蛋白质逐渐从透析袋中迁移到透析水中，导致透析袋内蛋白质浓度逐渐降低。
2. 透析结束后，收集透析液，检测蛋白质的纯度和浓度，发现蛋白质的纯度得到显著提高，而浓度有所降低。
3. 通过SDS-PAGE电泳分析，发现透析后的蛋白质条带更加清晰，表明蛋白质的纯度提高。
六、实验讨论1. 透析过程中，蛋白质的迁移速度受多种因素影响，如温度、透析时间、透析膜的性质等。
2. 透析过程中，蛋白质的浓度降低，可能是因为部分蛋白质通过透析膜迁移到透析水中。
3. 通过优化实验条件，可以提高蛋白质的透析效果。
七、结论本实验成功实现了蛋白质的透析分离，证明了透析是一种有效的蛋白质纯化方法。
通过优化实验条件，可以进一步提高蛋白质的纯度和浓度。
蛋白质的透析
而实现物质分离。
蛋白质透析的应用
生物制品分离纯化
在生物制品的分离纯化过程中， 蛋白质透析常用于去除盐、糖等 小分子杂质，提高产品的纯度。
实验室研究
在实验室研究中，蛋白质透析可 用于制备高纯度的蛋白质样品， 供后续实验使用。
临床应用
在某些临床应用中，如血浆置换 疗法，蛋白质透析可用于去除血 浆中的毒素或过量的药物。
透析效率问题
透析效率问题
透析效率低下可能导致体内毒素和多余水分不能被充分清除 。
解决方案
采用高效透析器，提高血流速度，缩短透析时间，增加透析 液流量等措施，以提高透析效率。同时，根据个体情况调整 透析方案，以达到最佳的透析效果。
蛋白质变性问题
蛋白质变性问题
在透析过程中，蛋白质可能会发生构象变化，导致其功能受损。
浓缩蛋白质溶液
通过去除部分溶剂，使蛋白质溶液得 到浓缩。
蛋白质透析的原理
半透膜原理
01
透析利用半透膜原理，允许小分子物质透过膜而大分子物质被截留，从而实现物质分离。分子量大小差异02
蛋白质分子量较大，无法透过半透膜，而小分子物质如盐、糖
等可以自由透过半透膜。
浓度差驱动
03
透析过程中，小分子物质从高浓度一侧扩散至低浓度一侧，从
疾病机制研究
蛋白质的透析可以帮助研究疾病的发病机制 和治疗机制，为疾病的预防和治疗提供新的 思路和方法。未来随着人类对疾病认识的深 入和技术的进步，蛋白质的透析在疾病机制 研究中的应用将更加广泛和深入。
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临床应用展望
个性化透析
随着基因组学和蛋白质组学的发展，未来蛋白质的透析将更加个性化，根据患者的具体情况制定个性化的透析方案， 提高治疗效果和患者的生存质量。
蛋白质的盐析与透析
蛋白质的盐析与透析一、实验目的1.了解蛋白质的分离纯化方法2.掌握蛋白质的盐析及透析方法二、实验原理在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。
盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。
蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。
蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。
透析常需较长时间，宜在低温下进行。
三、实验材料和试剂10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液。
四、实验步骤（一）蛋白质盐析取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出；取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。
（二）蛋白质的透析注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。
经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。
再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。
每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。
继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。
实验报告记录透析完毕所需的时间。
附：胶棉半透膜的制备市售5%的胶棉液，加入干燥的150mL锥形瓶中，将锥形瓶横斜不断转动，使瓶的内壁和瓶口都均匀沾有胶棉液。
蛋白质纯化实验步骤
蛋白质纯化实验步骤引言:蛋白质是生物体内重要的基本组成部分，对于深入了解蛋白质的结构和功能具有重要意义。
蛋白质纯化是一个关键步骤，可以从复杂的混合物中分离出目标蛋白质，并去除杂质。
下面将介绍一种常用的蛋白质纯化实验步骤。
一、样品制备在开始蛋白质纯化实验之前，首先需要准备样品。
样品可以是细胞提取物、培养基中的蛋白质等。
样品制备的关键是要保证样品的完整性和纯度，避免蛋白质的降解和杂质的污染。
二、离心将样品进行离心，以去除细胞碎片和细胞核等大颗粒物质。
离心过程中，可以根据颗粒物质的大小和密度来选择合适的离心条件，如转速、离心时间等。
三、初步分离将离心后的上清液取出，进行初步分离。
可以采用一些常用的分离技术，如离子交换色谱、凝胶过滤等。
这些技术可以根据蛋白质的电荷、大小等特性进行分离，从而使目标蛋白质得到部分纯化。
四、亲和层析亲和层析是一种常用的蛋白质纯化技术，通过利用目标蛋白质与某种亲和剂之间的特异性相互作用来实现纯化。
亲和剂可以是金属离子、抗体、配体等，可以根据目标蛋白质的性质和特点来选择合适的亲和剂。
五、凝胶电泳凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术，通过电场作用使蛋白质在凝胶中迁移，根据蛋白质的大小和电荷来实现分离。
凝胶电泳可以用于检测和鉴定目标蛋白质，同时也可以用于纯化蛋白质。
六、柱层析柱层析是一种常用的蛋白质纯化技术，通过将样品溶液通过填充在柱子中的吸附剂层析，实现蛋白质的分离和纯化。
柱层析可以根据蛋白质的性质和特点来选择合适的吸附剂，如离子交换柱、凝胶过滤柱等。
七、透析透析是一种常用的蛋白质纯化技术，通过溶液之间的渗透压差来实现目标蛋白质的分离和杂质的去除。
透析可以用于去除一些小分子杂质，如盐类、小分子药物等。
八、浓缩浓缩是一种常用的蛋白质纯化技术，通过去除大量的水分来提高目标蛋白质的浓度。
常用的浓缩技术有深度过滤、超滤等，可以根据蛋白质的分子量和颗粒大小来选择合适的浓缩方法。
九、纯化验证在蛋白质纯化实验结束之后，需要对纯化后的目标蛋白质进行验证。
实验三 蛋白质脱盐(透析和凝胶过滤)
实验材料
1、Sephadex G-25
2、鸡蛋清溶液: 将新鲜鸡蛋的蛋清与水按 1:20 混匀,然后用六层纱布过滤。
操作步骤
1、 凝胶溶胀：取 5g Sephadex G-25，加 200ml 蒸馏水充分溶胀（在室温下约需 6h 或在沸水
浴中溶胀 2h）。待溶胀平衡后，用虹吸法除去细小颗粒，再加入与凝胶等体积的蒸馏水，
分子的大小和工作目的，选择适合的凝胶型号。交联度高的小号胶如 Sephadex G-25 适于脱
盐。
当在凝胶柱顶加上分子大小不同的混合物并用洗脱液洗脱时，自由通透的小分子可以进
入胶粒内部，而受排阻的大分子不能进入胶粒内部。二者在洗脱过程中走过的路程差别较大，
大分子只能粘着胶粒之间的间隙向下流动，所经路程短，最先流出。而渗入胶粒内部的小分
柱可反复使用，所以广泛使用于蛋白质等大分子的分离纯化，分子质量测定、脱盐等用途。
本实验利用凝胶过滤的特点将（NH4）2SO4 同蛋白质分子分离开。 实验仪器
1、层析柱（2cm×15cm）
2、真空泵
3、真空干燥器
4、恒流泵
5、核酸蛋白检测仪
6、部分收集器
7、记录仪
实验试剂
1、1%氯化钡溶液
2、硫酸铵粉末
Ⅱ.凝胶过滤
实验目的 学习凝胶过滤的基本操作技术，了解凝胶过滤脱盐的原理和应用。
实验原理
凝胶过滤的主要装置是填充有凝胶颗粒的层析柱。目前使用较多的凝胶是交联葡聚糖凝
胶（sephadex）。这种高分子材料具有一定孔径的网络结构。高度亲水，在水溶液里吸水显
著膨胀。用每克干胶吸水量（ml）的 10 倍（G 值）表示凝胶的交联度，可根据被分离物质
在真空干燥器中减压除气，准备装柱。
透析纯化蛋白_实验报告
一、实验目的1. 理解透析法在蛋白质纯化中的应用原理。
2. 掌握透析纯化蛋白质的操作步骤。
3. 评估透析纯化蛋白质的效果。
二、实验原理透析法是一种利用半透膜将蛋白质与分子量较小的杂质（如无机盐、小分子有机物等）分离的方法。
半透膜具有选择性透过性，允许小分子物质通过，而大分子蛋白质则被截留在膜内。
通过不断更换透析液，可以逐步去除蛋白质中的杂质，从而实现蛋白质的纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质溶液（如鸡蛋清、牛血清白蛋白等）- 透析袋（孔径约为10kD）- 缓冲液（pH 7.4，0.1M Tris-HCl）- 离心机- 烧杯- 移液器- 恒温水浴锅- 紫外-可见分光光度计2. 实验仪器：- 透析袋- 移液器- 烧杯- 离心机- 恒温水浴锅- 紫外-可见分光光度计四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋放入烧杯中，用蒸馏水冲洗干净，然后用缓冲液浸泡，以去除透析袋内的杂质。
2. 配制蛋白质溶液：取适量蛋白质溶液，用缓冲液稀释至一定浓度。
3. 透析：将配制好的蛋白质溶液转移至透析袋中，然后将透析袋放入另一装有缓冲液的烧杯中，确保透析袋完全浸没在缓冲液中。
4. 更换透析液：每隔一段时间，更换烧杯中的缓冲液，直至透析袋内溶液的颜色基本不变。
5. 收集透析后的蛋白质溶液：将透析袋内的蛋白质溶液收集至离心管中，离心去除透析袋。
6. 蛋白质浓度测定：取一定量的透析后的蛋白质溶液，用紫外-可见分光光度计测定其浓度。
7. 结果分析：对比透析前后的蛋白质浓度，评估透析纯化蛋白质的效果。
五、实验结果与分析1. 透析前蛋白质浓度为1.0mg/mL，透析后蛋白质浓度为0.8mg/mL。
2. 透析过程中，蛋白质溶液颜色逐渐变浅，说明杂质被去除。
3. 透析后的蛋白质溶液经过离心后，无明显沉淀，说明蛋白质未发生变性。
六、实验结论通过本实验，我们成功地将蛋白质溶液中的杂质去除，实现了蛋白质的纯化。
透析法是一种简单、有效的蛋白质纯化方法，适用于分离和纯化分子量较大的蛋白质。
实验三血清球蛋白的分离纯化及鉴定七制
一、盐析法粗分γ-球蛋白
二、凝胶过滤方法脱盐
三、离子交换层析方法纯化γ-球蛋白 四、醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定γ-球蛋白的纯度
第一页，共三十八页。
【基本原理】
蛋白质的分离、纯化及鉴定是研究蛋白质化学性质及生物 学功能的重要手段之一。
不同蛋白质的分子量、溶解度及在一定条件下，带电的
情况等都有所不同。利用这些性质的差别，可分离纯化 各种蛋白质。
γ－球蛋白
倾弃上清液（主要含α 、β球蛋白）
加入0.0175mol/L磷酸缓冲液（ pH=6.3)1ml溶解
γ－球蛋白
粗提液
第八页，共三十八页。
二、葡聚糖凝胶柱层析脱盐
欲去除盐析法分离得到的球蛋白粗提液中大量盐 ，通常有两种方法：
凝胶层析法、透析
本试验采用葡聚糖凝胶——Sephadex G 25层析方法除去球
每ml纯化γ－球蛋白溶液加Sephadex G-25 0.25 g，摇动2 ～3分钟，离心3000r/min，5分钟，上清即为浓缩γ-球蛋白（
或用冷冻干燥仪使其浓缩）。
第二十七页，共三十八页。
五、γ－球蛋白鉴定
用醋酸纤维素薄膜电泳的方法，以血清
电泳图谱为对照，鉴定所分离的蛋白质种类和 纯度（参见血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳） 。
白色比色板,洗净备用。 一块在各孔滴加奈氏试剂（检测NH4+）,另一块
滴加20%璜基水杨酸（检测蛋白质）。 不用滴管,避免污染,直接倒… 用“-”表示无现象，用“+”, “++”,
“+++”等表示颜色深浅
⑥ 回收凝胶
第二十页，共三十八页。
注意事项：
1 . 凝胶柱的制备质量决定分离效果的好坏 。 2. 加样分离时，滴速越慢，分离效果越好。
蛋白透析的实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析的基本原理和操作方法。
2. 掌握利用透析法去除蛋白质溶液中低分子量杂质的方法。
3. 观察蛋白质透析过程中溶液的变化，验证实验效果。
二、实验原理蛋白质透析是一种利用半透膜分离溶液中高分子量和低分子量物质的方法。
半透膜允许水和小分子物质通过，而阻止高分子量物质（如蛋白质）通过。
通过透析，可以去除蛋白质溶液中的低分子量杂质，提高蛋白质的纯度。
三、实验材料1. 实验试剂：鸡蛋清溶液、氯化钠溶液、透析袋、蒸馏水、硫酸铵溶液。
2. 实验仪器：烧杯、磁力搅拌器、移液管、电子天平、温度计。
四、实验步骤1. 准备实验试剂：取一定量的鸡蛋清溶液，加入适量的氯化钠溶液，搅拌均匀。
2. 准备透析袋：将透析袋放入烧杯中，加入适量的蒸馏水，用磁力搅拌器搅拌均匀。
3. 加入蛋白质溶液：将步骤1制备的蛋白质溶液小心倒入透析袋中，避免气泡产生。
4. 调节透析袋：将透析袋悬挂于烧杯中，确保透析袋下端浸入水中。
5. 透析过程：在室温下进行透析，观察溶液的变化，记录时间。
6. 检测蛋白质纯度：在透析过程中，取一定量的透析液，加入硫酸铵溶液，观察沉淀现象。
五、实验结果与分析1. 透析过程中，透析袋内溶液颜色逐渐变浅，说明低分子量杂质逐渐被去除。
2. 透析过程中，观察到的沉淀现象表明蛋白质纯度有所提高。
3. 透析结束后，对透析液进行SDS-PAGE电泳分析，结果表明蛋白质纯度达到90%以上。
六、实验讨论1. 透析过程中，蛋白质分子量较大，不易透过半透膜，而低分子量杂质则可以透过半透膜，从而实现蛋白质与杂质的分离。
2. 透析袋的选择对实验结果有较大影响，应选用合适的半透膜材料，确保实验的准确性。
3. 透析过程中，溶液温度、透析时间等因素也会对实验结果产生影响，需要严格控制实验条件。
七、实验结论通过本次实验，我们成功掌握了蛋白质透析的基本原理和操作方法，并验证了实验效果。
蛋白质透析是一种简单、有效的蛋白质纯化方法，在生物化学、医药等领域具有广泛的应用前景。
蛋白质透析原理
蛋白质透析原理蛋白质透析是一种常用的分离纯化蛋白质的方法。
它基于蛋白质和小分子溶质(如无机盐、小分子抗生素等)在溶液中的不同扩散速度和筛选效应，通过半透膜的选择性阻隔，达到将蛋白质与杂质分离的目的。
蛋白质透析的原理基于扩散的分子运动。
当两个溶液的溶质浓度不同，并且它们之间有一层半透膜(如膜孔或凝胶状物质)隔开时，溶质分子就会通过扩散作用从高浓度溶液向低浓度溶液扩散。
在蛋白质透析中，蛋白质通常溶解在高浓度的缓冲液中，而待测分子或杂质则通过溶剂中浓度较低的一侧传递。
透析膜通常具有筛选性，可以选择性地阻隔大分子如蛋白质，而允许低分子量的物质通过。
这种选择性是通过膜的孔径大小、电荷性质和孔壁的化学组成来实现的。
因此，在进行蛋白质透析时，透析膜的选择非常重要，要根据目标蛋白质的分子量和所需透析溶质的分子量范围来选择合适的膜。
在实际操作中，蛋白质透析通常采用透析袋或透析膜管进行。
透析袋是一种由半透膜制成的袋状容器，将待测溶液放入袋内，然后将透析袋浸入含有低浓度溶液的缓冲液中。
蛋白质分子无法通过透析袋的孔隙，而杂质分子则可以扩散到缓冲液中被溶解掉。
透析膜管与透析袋类似，但其形状为管状，一端封尾，另一端插入缓冲液中进行透析。
蛋白质透析的时间会根据待透析物质的分子量和目标纯化程度而有所不同。
通常情况下，透析需要在足够长的时间内进行，以确保溶质达到平衡状态。
透析温度和环境pH也会影响透析效果，在实验中需要控制这些变量。
总之，蛋白质透析是一种利用分子扩散和半透膜的选择性来分离纯化蛋白质的方法。
通过合适的透析膜和透析条件，可以有效地分离目标蛋白质与杂质，为后续蛋白质研究和应用提供纯净的样品。
蛋白质透析的原理
蛋白质透析的原理
正确写法是蛋白质的透析，其原理是通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。
蛋白质的透析实验如下：【蛋白质的透析】
一、目的
学习透析的基本原理和操作。
二、原理
蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。
在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。
三、器材
1、透析管或玻璃纸
2、烧杯
3、玻璃棒
4、电磁搅拌器
5、试管及试管架
四、试剂
1、蛋白质的氯化钠溶液3 个除去卵黄的鸡卵蛋清与700mL 水及300mL 饱和氯化钠溶液混合后，用数层干纱布过滤。
2、10%硝酸溶液
3、1%硝酸银溶液
4、10%氢氧化钠溶液
5、1%硫酸铜溶液
五、操作
1、用蛋白质溶液作双缩脲反应。
2、向火棉胶制成的透析管中装人10~15mL 蛋白质溶液并放在盛有蒸馏水的烧杯中(或用玻璃纸装入蛋白质溶液后扎成袋形,系于一横放在烧杯的玻璃棒上)。
3、约1 小时后，自烧杯中取水1~2mL，加10%硝酸溶液数滴使成酸性，再加入1%硝酸银溶液1~2 滴，检查氯离子的存在。
4、从烧杯中另取1~2mL 水，做双缩脲反应，检查是否有蛋白质存在。
5、不断更换烧杯中的蒸馏水（并用电磁搅拌器不断搅动蒸馏水）以加速透析过程。
数小时后从烧杯中的水中不能再检出氯离子。
此时停止透析并检查透析袋内容物是否有蛋白质或氯离子存在（此时应观察到透析袋中球蛋白沉淀的出现，这是因为球蛋白不溶于纯水的缘故）。
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思考：
➢ 透析是去除小分子物质，那还有哪些去除小 分子物质的方法？
➢ 影响透析的因素有哪些？
实验三 透析实验（一） ——蛋白质的透析
实验目的
➢ 掌握透析的基本原理和操作； ➢ 了解透析袋的使用方法。
实验原理
➢ 透析是利用小分子能通过而大分子不能通过 半透膜的原理把它们分开的一种重要手段， 是生物化学分离提纯过程经常使用的基本操 作技术之一。
➢ 蛋白质作为生物分子物质，不能透过透析膜 而小分子物质（比如离子等）可以自由通过。
用线将透析袋靠近末端的地方绑紧。 ➢ 取8ml蛋白质溶液放入透析袋中，并将开口端同样用线绑住并放入盛
有蒸馏水的烧杯中。随时用玻棒搅拌液体。 ➢ 每30min从烧杯中取水1ml，用10%HNO3酸化溶液，再加入
1%AgNO3 1-2d,检查氯离子的存在。另外取出1-2ml做双缩脲反应， 检查烧杯中是否有蛋白质存在。 ➢ 每0.5h更换一次烧杯中的三级水以加速透析过程。直到数小时后，烧 杯中的水不能检出氯离子的存在时，停止透析。并观察和检测透析袋 内容物是否有蛋白质或者氯离子存在。
器具与试剂
➢ 烧杯；玻棒；试管；试管架；透析袋（宽 26cm，长8-10cm），线。
➢ 0.5mol/L EDTA；2%NaHCO3 ；1％ AgNO3溶液；10%HNO3，10%NaOH； 1%CuSO4；鸡蛋清-NaCl溶液
实验步骤
➢ 透析袋的前处理。 ➢ 将蛋白质溶液做双缩脲反应。 ➢ 取出透析袋，用三级水清洗透析袋内外，并检查透析袋是否有损坏。