分子生物学检验技术基本知识点
临床分子生物学检验技术
04
优势：快速、准确、灵敏度高
05
局限性：成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测：通过基因测序技术， 检测遗传病相关基因突变
产前诊断：通过基因检测，评估 胎儿遗传病风险，指导优生优育
遗传咨询：根据基因检测结果， 提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗：根据基因检测结果， 制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作：与其他领域的技 术相结合，如人工智能、大 数据等，为分子生物学检验 技术带来更多的市场机遇。
汇报人：xxx
液体活检技术的发展： 通过血液样本检测肿瘤 细胞，提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用： 用于基因表达分析、 基因分型等，提高了 检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展： 实现了对单个细胞的基 因表达分析，提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展： CRISPR/Cas9等基因 编辑技术的出现，为基 因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求：随着人们对健康 重视程度的提高，分子生物 学检验技术在医疗领域的应 用将越来越广泛。
02 技术进步：随着分子生物学 技术的不断发展，检验技术 将更加精准、高效，为市场 带来更多机遇。
03 政策支持：政府对医疗领域 的投入加大，为分子生物学 检验技术的发展提供了有利 的政策环境。
生物学与工程学的融合：分子 生物学检验技术需要利用工程 学原理和方法，如微流控芯片、 纳米材料等，进行生物大分子 的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度：分子生物学检验技术涉及 多个学科，技术难度较大
成本问题：分子生物学检验技术成本 较高，难以普及
检测准确性：分子生物学检验技术检 测准确性有待提高
《分子生物学检验技术》基本知识点
分子生物学基本知识点一、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。
2、基因病分为单基因病和多基因病.3、分子杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。
4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个工作区域①试剂贮存和准备区；②标本制备区;③扩增反应区；④产物分析区.5、肿瘤发生分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。
6、生物芯片技术是根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA—DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可以发生的复性与特异性结合，设计其中的一方为探针.7、核酸分子杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和非同位素杂交。
8、PCR反应中，模板包括基因组DNA、RNA、质粒DNA和线粒体DNA.9、DNA芯片技术可应用于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。
10、质粒提取方法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它方法。
11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。
12、在试管中进行的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退火（杂交)和延伸.DNA 双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中.13、基因重组中用来识别和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的酶是限制性内切酶，若产生的缺口错开突出，称为粘末端.若产生的缺口不错开，称为平末端。
14、国家级的蛋白质数据库有蛋白质序列数据库、蛋白质结构数据库、蛋白质直系同源簇数据库和DIP数据库。
15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引人新的基因。
16、根据杂交核酸分子的种类，可以将核酸分子杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA 杂交和RNA与RNA杂交。
17、常用的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和人工染色体。
18、基因工程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和人工接头法三种方法.19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数.20、在生物芯片技术中，依据芯片上固定的探针类型分为DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等。
分子生物学实验基础知识
分子生物学实验基础知识分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。
其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也是分子水平研究疾病发生机制、基因诊断和基因治疗的方法。
转化（trans formation）、转染、转导、转位等是自然界基因重组存在的方式，也是人工基因重组常采用的手段。
基因重组的目的之一是基因克隆（gene clone），基因克隆可理解为以一分子基因为模板扩增得到的与模板分子结构完全相同的基因。
使需要分析研究的微量、混杂的目的基因易于纯化，得以增量，便于分析。
外来基因引起细胞生物性状改变的过程叫转化（transformation），以噬菌体把外源基因导入细菌的过程叫转染（transfection）。
利用载体（噬菌体或病毒）把遗传物质从一种宿主传给另一种宿主的过程叫转导（transduction）。
一个或一组基因从一处转移到基因组另一处的过程叫转位（transposition），这些游动的基因叫转位子。
一、基因工程的常用工具（一）载体载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。
载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。
载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。
质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。
质粒有严紧型和松弛型之分。
严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。
而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一个细胞可复制30-50个质粒，如果用氯霉素可阻止蛋白质合成，使质粒有效利用原料，复制更多的质粒。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术:是以核酸或蛋白质为分析材料，通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。
（1）感染性微生物的检测。
如：用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。
（2)基因突变的检测。
如：用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP）技术检测地中海贫血基因突变。
（3）法医学检测。
如：用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。
（4）基因异常表达的检测.如：用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。
（5）基因定位。
如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。
3、基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
4、基因：是基因组中一个功能单位,是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
5、原核生物：是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。
6、操纵子结构：是原核生物基因组的功能单位。
7、质粒:是指细菌细胞染色体外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。
8、转座因子：又称为转座元件，是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。
9、原核生物基因组的结构特征:(1）原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成，基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。
（2）具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA.编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组.在基因组中存在多功能的识别区域,如复制起始区、转录启动区和终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。
(3)结构基因通常为单拷贝基因，编码顺序一般不重叠。
（4）具有编码同工酶的基因.（5)含有可移动的DNA序列。
10、病毒基因组的结构特点：(1)与细菌和真核生物基因组相比，病毒基因组结构简单，基因数少,所含信息量也少。
分子生物学检验完整版
1病原生物基因组在医学上有何应用?详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因,原癌基因有什么特性,原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些?原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。
特性:进化上高度保守,负责调控正常细胞生命活动,可以转化为癌基因。
功能分类:生长因子,生长因子受体,信号转导蛋白,核调节蛋白,细胞周期调节蛋白,抑制凋亡蛋白激活机制:插入激活,基因重排,基因点突变,基因扩增,基因转录改变3试述Down综合征(21三体综合征)的主要临床特征及核型。
临床特征:生长发育障碍,智力低。
呆滞面容,又称伸舌样痴呆。
40%患者有先天性心脏畸形。
肌张力低,50%患者有贯通手,男患者无生育能力,女患者少数有生育能力,遗传风险高。
核型:92.5%患者游离型:核型为47,XX(XY),+212.5%患者为嵌合型:46,XX(XY)/47,XX(XY),+215%患者为易位型:46,XX(XY),-14,+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点,对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检:敏感度和特异性差,不能用于确诊。
2分离培养法:诊断NG感染的金标准,但是其对标本和培养及营养要求高,培养周期长,出报告慢,难以满足临床要求。
3免疫学法:分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制,推广受限。
分子生物学的优点:敏感,特异,可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌,适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中,点突变检测常用方法有哪些?1异源双链分析法(HA)2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸(DNA RNA)的检测、基因分型和耐药基因分析等。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术:就是以核酸或蛋白质为分析材料,通过分析基因得结构、表达得变化与由此而导致得基因功能得改变,为疾病得研究与诊断提供更准确、更科学得信息与依据得一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中得应用。
(1)感染性微生物得检测。
如:用PCR技术进行甲型肝炎病毒得检测、乙型肝炎病毒得检测与解脲脲原体得检测等。
(2)基因突变得检测。
如:用PCR一限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。
(3)法医学检测。
如:用PCR微卫星检测技术进行亲子关系得鉴定与个体识别。
(4)基因异常表达得检测。
如:用cDNA表达得芯片技术进行基因异常表达得检测。
(5)基因定位。
如:用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达得定位。
3、基因组:就是一个细胞或一种生物体得整套遗传物质。
4、基因:就是基因组中一个功能单位,就是贮存有功能得蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需得全部核苷酸序列。
5、原核生物:就是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌与蓝绿藻等原始生物得总称,就是最简单得细胞生物体。
6、操纵子结构:就是原核生物基因组得功能单位。
7、质粒:就是指细菌细胞染色体外,能独立复制并稳定遗传得共价闭合环状分子。
8、转座因子:又称为转座元件,就是一类在细菌染色体、质粒与噬菌体之间自行移动并具有转位特性得独立得DNA序列。
9、原核生物基因组得结构特征:(1)原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成,基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。
(2)具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA。
编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组。
在基因组中存在多功能得识别区域,如复制起始区、转录启动区与终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。
(3)结构基因通常为单拷贝基因,编码顺序一般不重叠。
(4)具有编码同工酶得基因。
(5)含有可移动得DNA序列。
10、病毒基因组得结构特点:(1)与细菌与真核生物基因组相比,病毒基因组结构简单,基因数少,所含信息量也少。
(完整word)临床分子生物学检验 总
四个阶段：一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心二、以PCR技术为核心三、以生物芯片为核心四、以DNA测序技术为核心广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA)为主基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标病原生物基因1。
菌种鉴定：PCR—测序和PCR—DNA探针杂交;缩短检测时间2。
确定病毒感染和病毒载量:明确感染源,判断病情,监测疗效3.病毒分析:基因型变异产生不同临床症状4。
细菌耐药监测和分子流行病学调查 :随机扩增多态性DNA；指导选择治疗方案，控制病原菌的感染传播基因变异1。
致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3。
肿瘤相关基因单基因病1。
致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。
2。
致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。
基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2。
疾病诊断和遗传咨询3。
多基因病的研究4。
器官移植配型和个体识别循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。
分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。
重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI） 3。
日本国立遗传研究所(DDBJ）一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPRO T等。
蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等.蛋白质数据库常用的有SWISS—PROT、 PIR、 PDB数据库。
分子生物学 笔记 医学检验
1基因（gene）:编码有功能的蛋白质或RNA所必须的全部核酸序列。
2结构基因：编码蛋白质或RNA所含有的全部DNA。
3启动子：DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域，在许多情况下，还包括促进这一过程的调节蛋白的结合位点。
4顺式作用元件：DNA、RNA或者蛋白质中的一些特殊的核酸或氨基酸残基序列，只作用于与其连接在一起的靶，而不作用于不与其相连的靶。
5质粒：细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子，能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代，一般不整合到宿主染色体上。
现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的，常含抗生素抗性基因，是重组DNA技术中重要的工具。
6基因表达：使基因所携带的遗传信息表现为表型的过程。
包括基因转录成互补的RNA序列。
对于结构基因，信使核糖核酸(mRNA)继而翻译成多肽链，并装配加工成最终的蛋白质产物。
7操纵子：转录的功能单位。
很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列。
8增强子：增强基因启动子工作效率的顺式作用序列，能够在相对于启动子的任何方向和任何位置(上游或下游)上都发挥作用。
9反式作用因子：通过直接结合或间接作用于DNA、RNA等核酸分子，对基因表达发挥不同调节作用(激活或抑制)的各类蛋白质因子。
10基因组学：研究基因组的结构、功能及表达产物的学科。
基因组的产物不仅是蛋白质，还有许多复杂功能的RNA。
包括三个不同的亚领域，即结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学。
11功能基因组学：研究基因组中各基因的功能，包括基因的表达及其调控模式的学科。
12.HGP：人类基因组计划，于20世纪80年代提出的，由国际合作组织包括有美、英、日、中、德、法等国参加进行了人体基因作图，测定人体23对染色体由3×109核苷酸组成的全部DNA序列，于2000年完成了人类基因组“工作框架图”。
分子生物学基本技术
分子生物学基本技术包括核酸的纯化，体外合成、分子杂交、基因克隆、基因表达研究技术等第一节DNA的体外合成一、DNA的化学合成（无要求）一亚磷酸三酯法DNA的化学合成广泛用于合成寡核苷酸探针和引物，有时也用于人工合成基因和反义寡核苷酸。
目前寡核苷酸均是用DNA合成仪合成的，大多数DNA合成仪是以固相亚磷酸三酯法为基础设计制造的合成的原理：核酸固相合成的基本原理是将所要合成的核酸链的末端核苷酸先固定在一种不溶性高分子固相载体上，然后再从此末端开始将其他核苷酸按顺序逐一接长。
每接长一个核苷酸残基则经历一轮相同的操作，由于接长的核酸链始终被固定在固相载体上，所以过量的未反应物或反应副产物可通过过滤或洗涤的方法除去。
合成至所需长度后的核酸链可从固相载体上切割下来并脱去各种保护基，再经纯化即可得到最终产物。
（末端核苷酸的3’-OH与固相载体成共价键，5’-OH被二甲氧基三苯甲基（DMT）保护，下一个核苷酸的5’-OH亦被DMT保护3’-OH上的磷酸基上氨基亚磷酸化合物活化碱基上的氨基用苯甲酸保护。
每延伸一个核苷酸需四步化学反应（1）脱DMT游离出5’-OH。
⑵缩合（偶联反应）：新生成的5’-OH与下一个核苷活化的3’单体缩合成亚磷酸三酯使链增长（3）盖帽（封端反应）：有少量（小于0.5%）未缩合的5’-OH要在甲基咪唑或二甲氨基吡啶催化下用乙酸苷乙酰化封闭，以防进一步缩合造成错误延伸。
（4）氧化：新增核苷酸链中的磷为三价亚磷，需用碘氧化成五价磷（磷酸三酯）。
上述步骤循环一次，核苷酸链向5’方向延伸一个核苷酸二、聚合酶链式反应技术聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）是一种体外特定核酸序列扩增技术。
一）PCR的基本原理双链DNA热变性成两条单链，降温使反应体系中的两个引物分别与两条DNA单链两侧的序列特异性复性，在合适的条件下，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应体系中的4种dNTP合成其互补链（延伸），在适宜的条件下,这种变性一复性一延伸的循环重复1次DNA的量可以增加1倍，30次循环后，DNA的量增加230倍。
临床分子生物学检验
第 1～6 章1、现代分子生物学的开端：1953 年，Watson 和 Crick 提出了 DNA 双螺旋构造，标志着现代分子生物学的兴起，为揭开人类生命现象的本质奠定了根底。
2、临床分子生物学检验：是分子生物学技术在临床检验诊断应用中进展起来的，以疾病为中心、以生物分子标志物为靶标的一代临床检验诊断技术，是临床分子生物学的重要组成局部。
3、应用到临床的分子标志物包括基因组 DNA、各种 RNA、蛋白质和各种代谢物。
4、分子标志物：是指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质〔多肽〕、代谢产物等生物分子，是生物标志物的一种类型。
5、核酸分子标志物包括：基因突变，DNA 多态性，基因组 DNA 片段，RNA 和循环核酸等多种形式。
6、DNA 一级构造〔直径，两个碱基之间的距离，一个螺距，一个螺旋有多少个核苷酸〕：DNA 一级构造就是指各核苷酸单体沿多核苷酸链排列的挨次。
7、DNA 二级构造〔右手螺旋—B 型最常见，左手螺旋—Z 型〕：DNA 的二级构造是双螺旋构造，主要特征是①主干链反向平行：DNA 分子是一个由两条平行的脱氧多核苷酸链围绕同一个中心轴盘曲形成的右手螺旋构造，两条链行走方向相反，一条链为5’→3’走向，另一条链为3’→5’走向。
磷酸基和脱氧核糖基构成链的骨架，位于双螺旋的外侧；碱基位于双螺旋的内侧。
碱基平面与中轴垂直。
②侧链碱基互补配对：两条脱氧多核苷酸链通过碱基之间的氢键连接在一起。
DNA 双螺旋的直径为 2nm，一圈螺旋含 10 个碱基对〔一个螺旋有 20 个核苷酸〕，每一碱基平面的轴向距离为 0.34nm，故每一螺距为 3.4nm，每个碱基的旋转角度为36°。
8、DNA 三级构造〔真核生物 DNA 三级构造是染色质或染色体〕：DNA 双螺旋进一步盘曲形成更加简单的构造，称为三级构造。
超螺旋是 DNA 三级构造的最常见的形式。
9、真核生物的 DNA 形成染色质的包装过程〔4 步〕：①形成核小体：构成染色质的根本单位是核小体。
(完整word)临床分子生物学检验
绪论1.20世纪50年代，Waston和Crick提出了DNA双螺旋结构,标志着现代分子生物学的兴起。
2.从广义上来讲，应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物,目前，临床分子生物学检验的靶标主要以核酸(DNA或RNA）为主.第一章:核酸与分子标志物1.分子标志物：可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型。
核酸分子标志物是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变、DNA多态性、基因组DNA片段、RNA和循环核酸等多种形式。
2.DNA的组成：是一种高分子化合物，其基本单位是脱氧核苷酸,每个核苷酸由磷酸、脱氧核糖和含氮碱基3部分组成。
3。
DNA与RNA的区别：2位脱氢。
4。
DNA的结构：①DNA一级结构：各种核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序，表明该DNA分子的化学构成。
②DNA二级结构：双螺旋结构，DNA双螺旋的直径为2nm,一圈螺旋含10个碱基对,每一圈螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36度.维持DNA结构稳定的力量主要是碱基对之间的堆积力，碱基对之间的氢键也起着重要的作用.③DNA三级结构：DNA双螺旋进一步盘曲形成的更加复杂的结构。
5.核小体的形成(真核生物染色体包装过程)：在核小体中,DNA盘绕组蛋白八聚体核心,使DNA缩短为原来的1/7；6个核小体形成螺丝管，缩短为1/6；核小体彼此相连成串珠状染色质细丝，螺旋化形成染色质纤维，进一步折叠成染色单体.6.DNA双螺旋结构的变异：右手螺旋A—DNA、C-DNA、D-DNA、E—DNA、H—DNA、L—DNA、P-DNA，左手螺旋Z —DNA7.RNA主要分为三类：tRNA、rRNA、mRNA 还有一些小型RNA：反义RNA、微小RNA（microRNA，miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA。
)8.真核mRNA与原核mRNA的区别(简答题)原核mRNA结构简单，为多顺反子,编码序列之间有间隔序列，原核生物mRNA中没有修饰碱基。
分子生物学知识点归纳
分子生物学知识点归纳1.DNA的结构和功能：DNA是生物体内贮存遗传信息的分子，由磷酸、五碱基、脱氧核糖组成。
DNA以双螺旋结构存在，通过序列编码生物体的遗传信息，并在细胞分裂中复制和传递。
2.RNA的结构和功能：RNA是将DNA信息翻译为蛋白质的中间分子，有多种类型，包括信使RNA（mRNA）、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA （rRNA）。
RNA具有与DNA类似的结构，但是鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T）被腺嘌呤（A）和尿嘧啶（U）所取代。
3.基因表达：基因表达是指将DNA中的遗传信息转录成RNA，然后翻译成蛋白质的过程。
这个过程包括转录、剪接、RNA修饰、起始和终止等多个步骤。
基因表达过程中的调控对于维持生物体的正常功能至关重要。
4.蛋白质合成：蛋白质合成是指RNA翻译成蛋白质的过程。
这个过程包括译码、蛋白质折叠和修饰。
蛋白质的结构和功能由其氨基酸序列决定，但结构和功能的形成还受到其他因素的调控。
5.基因组学：基因组学是研究生物体基因组的学科，包括基因组的结构、功能和演化。
随着高通量测序技术的发展，基因组学成为了分子生物学的前沿领域。
6.分子遗传学：分子遗传学是研究遗传信息传递和表达的分子机制的学科。
它研究遗传物质的结构、复制、易位、突变和修复等，以及遗传信息的传递和表达的分子级机制。
7.基因调控：基因调控是指细胞内基因表达的调节过程。
这个过程包括转录因子与DNA结合、组蛋白修饰、DNA甲基化等多个调控机制。
基因调控决定了细胞的发育、分化和对环境刺激的响应。
9.蛋白质相互作用和信号传导：蛋白质相互作用是指蛋白质之间的物理或化学交互作用。
这些相互作用对于细胞信号传导、代谢调控和细胞活动的协调起着重要作用。
10.DNA修复和细胞凋亡：DNA修复是细胞内修复DNA损伤的过程，以维持遗传稳定性。
细胞凋亡是指细胞主动性死亡的过程，常常发生在DNA 严重损伤和细胞失控增殖时。
以上只是分子生物学的一些知识点，这个领域还有很多其他的重要概念和研究方向，如非编码RNA、表观遗传学和细胞信号转导等。
临床分子生物学检验学技术
临床分子生物学检验学技术【名词解释】基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA。
单核苷酸多态性(SNP)：主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。
动态突变(dynamic mutation)：某些单基因遗传病，是由于DNA分子中某些短串联重复序列，尤其是基因编码序列或侧翼序列的三核苷酸重复次数增加所引起，因这种三核苷酸的重复次数可随着世代交替的传递而呈现逐代递增的累加突变效应，所以被称为动态突变。
限制性片段长度多态性(RFLP):是根据不同个体基因组的限制性内切酶的酶切位点的碱基发生突变，或酶切位点之间发生了碱基的插入、缺失，导致酶切片段大小发生了变化，这种变化可以通过特定探针杂交进行检测，从而可比较不同个体DNA水平的差异，即多态性。
变性(denaturation)：待扩增的靶DNA片段在高于其熔点温度Tm的条件下，DNA 双螺旋结构中的氢键断裂而解螺旋，形成两条单链分子，这两条单链分子即为扩增反应的模板。
内含子(intron)：断裂基因中不编码的间隔序列称为内含子，内含子是在mRNA 被转录后的剪接加工中去除的区域。
外显子(exon)：断裂基因中编码的序列称为外显子，即基因中对应于mRNA序列的区域。
核酸探针：在核酸分子杂交实验中，杂交体必须和单链核酸分子区分开，为此需要对参与杂交反应的核酸分子进行标记，这一段被标记的核酸分子就是探针。
核酸分子杂交：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。
DNA芯片：通过微阵列技术，将大量已知序列的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有序的、高密度的排列固定于支持物上，然后与荧光标记的待测生物样品中的靶核酸分子，根据碱基配对的原则进行杂交，通过检测分析杂交信号的强度及分布，对基因序列及功能进行大规模、高通量的研究。
蛋白质芯片：又称蛋白质微阵列，是将蛋白质或多肽固定在固相载体表面形成微阵列，以获得蛋白质的表达、结构、功能和相互作用的信息。
分子生物学检验
第二章临床分子生物学检验标志物1.分子生物标志物：指可以反映机体生理,病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型;2.中心法则：指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录和翻译的过程;也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程;这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则;在某些病毒中的RNA自我复制如烟草花叶病毒等和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程某些致癌病毒是对中心法则的补充;3.基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质,包括基因和非编码DNA;4.原核生物基因组特征：1原核生物基因组较小：大小一般在106—107碱基对之间；2原核生物的类核结构：原核生物基因组DNA位于细胞中央的核区,没有核膜将其与细胞质隔开在蛋白质的协助下,以一定的形式盘曲,折叠包装起来,形成类核；3原核生物的操纵子结构：原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上;结构基因同其上游的调控区以及下游的转录终止信号,共同组成了一个基因表达单位,即操纵子结构；4原核生物的结构基因：原核生物的结构基因中无内含子成分,多数是单拷贝基因,基因与基因之间有重复序列存在；5具有编码同工酶的基因：这类基因表达产物的功能相同,但基因结构不完全相同；6含有可移动DNA序列：可移动的DNA序列通过不同的转移方式发生基因重组,改变生物体的遗传性状,使生物体更适应环境的变化；5.质粒：指细菌细胞染色体以外,能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子；6.人类基因组包括细胞核内的核基因组3X109bp和细胞质内的线粒体基因组16569bp,人类基因组中存在大量的非编码序列和重复序列；7.小卫星DNA：由10—100bp组成的重复单位重复几十到几百甚至几千次,形成的1—5bp的短DNA,又称可变数目串联重复；8.微卫星DNA：核心序列为1—6bp,可以重复上百次,又称短串联重复；9.多基因家族：指由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因,在多基因家族中,某些成员并不产生有功能的基因产物,这些基因称为假基因；10.多态性：当某种变异相对常见,在群体中的频率高于1%时,则称为多态性,频率低于1%的变异称为突变；错义突变,无义突变,RNA加工突变；11.多态性类型：限制性片段长度多态性；小卫星和微卫星多态性；单核苷酸多态性主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性；拷贝数多态性指基因组中较大的片段200bp—2Mb发生了拷贝数的变化；12.DNA甲基化：1定义：指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S—腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程；2作用位点：腺嘌呤的N—6,胞嘌呤的N—4,鸟嘌呤的N—7,胞嘧啶的C—5；3作用机理：13.微小RNA：是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸,在细胞内主要发挥基因转录后水平调控作用；14.长链非编码RNA：长度大于200bp的非编码RNA；第四章：核酸杂交技术1.融解温度Tm：DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生,这一温度范围的中点被称为融解温度；Tm值的大小取决于核酸分子的G-C含量;G-C碱基含量越高,Tm值越高；2.变性：在一定条件下,双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA分子成为单链,形成无规则线团的过程；3.复性：变性DNA只要消除变性条件,具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链的过程；4.Southern印迹杂交：过程：1将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物硝酸纤维素膜或尼龙膜上,即印迹；2固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程；原理：利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量；特点：特异性和灵敏度高；5.Northern杂交靶核酸是RNA,Southern杂交靶核酸是DNA；第五章：核酸扩增技术1.聚合酶链反应技术PCR：由美国Cetus公司K.Mullis博士于1983年建立,它是一个能在试管内模仿细胞内核酸复制过程,也就是能在体外特异地扩增一段特定核酸序列的技术；2.PCR的基本原理：根据DNA半保留复制的机理和体外DNA分子于不同温度下可变性,复性的性质,通过人为控制体外合成系统的温度,通过变性、退火、延伸三个步骤扩增目的DNA 片段；3.PCR的基本过程：1变性：将被复制的DNA片段在高于其熔点温度Tm的条件下94~95℃加热,使DNA双螺旋结构的氢键断裂而解螺旋,形成两条单链分子作为扩增反应的模板,以便与引物结合；2退火：将反应体系的温度降低至引物的熔点温度以下<Tm5℃,以便使引物能与模板DNA序列互补结合,形成杂交链；3延伸：将反应体系的温度升至72℃,此时反应体希按照模板链的序列以碱基互补配对的原则依次把dNTP加至引物的3’端,在TaqDNA聚合酶的存在下,杂交链不断延伸,直至形成新的DNA双链；4.当温度升至其熔点温度Tm时荧光量急剧下降而形成熔点曲线,其波峰所在温度即代表被检DNA分子的Tm值;Tm值的大小取决于DNA分子的长度和其序列中G/C碱基含量；第六章：核酸实时定量检测技术1.实时荧光定量PCR技术：指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应过程,最后通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术；2.扩增曲线：指在实时荧光PCR扩增过程中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,检测到的荧光信号的变化可以绘制成一条以循环数为横坐标,以PCR反应过程中实时荧光强度为纵坐标所做的曲线；3.荧光阈值：指在实时荧光定量PCR扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在指数扩增阶段的任意位置上；4.循环数：PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值所经过的循环次数；5.扩增效率：指PCR反应一个循环后的产物增加量与这个循环的模板量的比值,其值在0~1之间；6.7.第七章：核酸序列分析1.双脱氧链终止法测序原理：ddNTP比普通的dNTP在3’位置缺少一个羟基,可以通过其5’三磷酸基因掺入到正在增长的DNA链中,但由于缺少3’-OH,不能同后续的dNTP形成3’,5’-磷酸二酯键;因此,正在增长的DNA链不在延伸,使这条链的延伸终止于这个异常的核苷酸处；2.人类基因组测序的步骤：第八章：蛋白质组学技术1.蛋白质组：包括一个细胞或一个组织或一个机体的基因所表达的全部蛋白质；2.蛋白质组学：以蛋白质为研究对象,从整体水平揭示细胞内动态变化的蛋白质组成、结构、表达水平和修饰状态,研究蛋白质间,蛋白质与生物大分子之间的相互作用,揭示蛋白质的功能与生命活动的规律；3.双向凝胶电泳：第一向电泳是依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质在PH梯度介质中外加电场作用形成分离的蛋白质区带;第一向等电聚焦完成后,将凝胶包埋在SDS—PAGE凝胶板上端,依据蛋白质分子量的不同,在垂直或水平方向进行SDS—PAGE,即第二次分离；4.双向凝胶电泳用于确定差异,质谱法用于鉴别结构；第十三章：单基因遗传病的分子生物学检验1.单基因遗传病分类：常染色体遗传,X连锁遗传,Y连锁遗传；2.在分析基因结构的变化时,通常用DNA作为检测材料；在检测转录水平异常时在,将RNA作为检测材料；当基因较大时,突变区不甚明了时,也可直接从cDNA水平开始进行筛检；3.镰刀细胞贫血的分子机制：患者由于β珠蛋白基因中第6位密码子存在单个碱基的突变,由原来的GAG变为GTG,结果使β珠蛋白链的第6位氨基酸残基由原来的谷氨酸变为缬氨酸,红细胞发生镰状；4.β珠蛋白生成障碍性贫血的分子机制：第十五章：线粒体病的分子生物学检验：1．母系遗传：在一个家系中,有缺陷的遗传性状通过母系成员从亲代连续稳定传递到子代的现象,即母亲可以将有缺陷的遗传性状传递给子代,男性子代个体不再继续传递,而女性子代个体可继续将此有缺陷的遗传性状往下一代传递；2．遗传早发：指越是严重的线粒体功能异常,其个体发病的年龄也将越早；3．遗传瓶颈：线粒体在卵母细胞成熟时数目会出现锐减的现象；4．线粒体基因表达系统及特点：第十六章：肿瘤的分子生物学检验1.原癌基因：指人类或其他动物细胞固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称；2.原癌基因激活机制：1插入激活,2基因重排/染色体易位；3基因点突变/移码突变；4基因扩增；5基因转录改变；3.抑癌基因：是一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的基因,正常情况下负责控制细胞的生长和增殖；4.肿瘤基因表现遗传学异常的分子机制：1基因组印记丢失；2DNA甲基化；3组蛋白修饰与染色质重塑；。
分子生物学检验技术第1章
贰
二、基因变异与单基因病
多基因病的发病机制十分复杂，遗传因素和环境因素共同起作用。
01
这些病的发病有一定遗传基础，常表现出家族倾向，但却又不符合一般的遗传方式。
02
三、基因变异与多基因病
02
多基因病的发生涉及诸多因素，某一因素的变异不足以解释多基因病的发病机制。
01
参与多基因病发生的基因被称为疾病相关基因。
01
生物芯片必将在基因功能研究、基因诊断、药物筛选和个体化药物治疗等方面扮演重要角色，具有重大的应用潜力。
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二、生物芯片
三、蛋白质组学
当今的研究重点已经开始从揭示生命的遗传信息过渡到对生命活动的直接执行者——蛋白质进行整体水平的研究，蛋白质组学正成为目前揭示生命规律的新的重大热点领域。
三、基因变异与多基因病
线粒体DNA突变使线粒体功能发生障碍，直接影响人体组织和细胞的各种生物学功能，导致线粒体 遗传病。
01
它具有母系遗传、基因突变具阈值效应以及多系统受累等遗传学特征。
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四、线粒体基因变异与线粒体遗传病
肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果。
癌基因包括病毒癌基因和细胞癌基因,它们具有潜在诱导细胞恶性转化的特征。
编者（以姓氏笔画为序）
卫生部“十一五”规划教材 全国高等医药教材建设研究会规划教材
唐冬生（佛山科学技术学院） 钱 晖（江苏大学） 倪培华（上海交通大学） 黄迪南（广东医学院） 彭 颖（温州医学院） 樊绮诗（上海交通大学）
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编者（以姓氏笔画为序）
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卫生部“十一五”规划教材 全国高等医药教材建设研究会规划教材
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分子生物学检测
生态系统的监测与评估
检测方法：DNA条形码技术、 宏基因组学等
应用领域：生物多样性评估、 生态系统健康评估等
监测内容：物种多样性、生态 系统功能、生态系统稳定性等
评估指标：物种丰富度、物种 均匀度、生态系统生产力等
生物多样性的研究
生物多样性的定 义：生物种类的 多样性、基因的 多样性和生态系 统的多样性
控制措施：制定生物入侵防控策略，如生物防治、化学防治等 案例分析：介绍一些成功的生物入侵检测与控制案例，如澳大利亚的兔子 入侵等
06
分子生物学检测的未来 发展
高通量测序技术的进一步发展
技术进步：高通量测序技术的不断发展，提高了检测速度和准确性
应用领域：高通量测序技术在医学、农业、环境等领域的应用越来越广泛
遗传性疾病的检测
遗传性疾病：由基 因突变引起的疾病
检测方法：基因测 序、基因芯片、 PCR等
应用领域：癌症、 遗传病、罕见病等
检测意义：早期发 现、早期治疗、预 防遗传性疾病
肿瘤的检测与诊断
基因突变检测：通过检测肿瘤细胞中的基因突变，判断肿瘤类型和分期
生物标志物检测：通过检测肿瘤细胞中的生物标志物，判断肿瘤的恶性 程度和预后
分子生物学检测的原理
利用DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的特性进行检测 通过PCR、基因测序、蛋白质分析等技术进行检测 检测结果可用于疾病诊断、遗传病筛查、药物研发等领域 检测过程需要严格的实验操作和精确的数据分析
分子生物学检测的应用
基因诊断：检测基因突变、基因表达异常等，用于疾病诊 断和预后评估
注意事项：探 针设计、杂交 条件、荧光显
微镜操作等
基因芯片法
原理：利用基因芯片技术，将大量基因片段固定在芯片上，通过检测基因片段的表达情况， 实现对基因的检测。
临床分子生物学检验技术课程
临床分子生物学检验技术课程一、引言临床分子生物学检验技术是现代医学中一项重要的检验技术，它利用分子生物学的原理和方法对人体进行检测，从而为临床诊断和治疗提供重要的依据。
本文将介绍临床分子生物学检验技术的基本原理、常见的检测方法以及在临床中的应用。
二、基本原理临床分子生物学检验技术以DNA、RNA和蛋白质为研究对象，通过提取和分析这些分子的结构、功能和相互作用，来了解疾病的发生机制和变化规律。
其基本原理包括：1. DNA提取：通过不同的方法（如酚-氯仿法、硅胶柱法等）从样品中提取出目标DNA，以备后续实验使用。
2. PCR扩增：利用聚合酶链式反应（PCR）技术，复制目标DNA 片段，从而扩增出足够数量的DNA，以便进行下一步的分析。
3. 基因测序：采用不同的测序方法（如Sanger测序、高通量测序等），对目标DNA进行测序，获取其具体的碱基序列信息。
4. 基因表达分析：通过转录和翻译过程，研究基因在转录水平和蛋白质水平上的表达情况，了解其功能和调控机制。
5. 基因突变检测：通过分析基因序列的变异，寻找与疾病相关的突变位点，为疾病的诊断和治疗提供依据。
三、常见的检测方法临床分子生物学检验技术包括多种方法和技术，常见的检测方法包括：1. PCR：通过扩增目标DNA片段，可以定量检测基因的拷贝数、检测基因突变、进行基因表达分析等。
2. 基因测序：通过测序方法，可以获取DNA的具体序列信息，从而揭示基因的结构和功能。
3. 蛋白质分析：通过蛋白质电泳、质谱等技术，可以研究蛋白质的结构、功能和相互作用。
4. 基因芯片：通过将数千个基因探针固定在芯片上，同时检测大量基因的表达水平，快速筛查与疾病相关的基因。
5. 实时荧光定量PCR：通过测量PCR反应过程中的荧光信号变化，可以快速、准确地定量检测基因的表达水平。
四、应用领域临床分子生物学检验技术在临床中有广泛的应用，包括以下几个方面：1. 疾病诊断：通过检测特定基因的突变、基因表达水平等，可以辅助医生进行疾病的早期诊断和鉴别诊断。
分子生物学与分子生物学实验技术大纲
分⼦⽣物学与分⼦⽣物学实验技术⼤纲⼀、绪论1、分⼦⽣物学研究对象：⽣物⼤分⼦的结构（主要是遗传⼤分⼦和功能⼤分⼦）、⽣物⼤分⼦在遗传信息和细胞信息传递中的作⽤2、分⼦⽣物学检验技术的分析对象：病原⽣物基因、基因变异、基因多态性第⼀节真核基因与基因组⼀、真核基因的基本结构1、真核基因结构不连续，为断裂基因2、外显⼦：在基因序列中，出现在成熟mRNA分⼦上的序列3、内含⼦：外显⼦之间，与mRNA剪接过程中被删除部分相对应的间隔序列。
⼆、基因编码区编码多肽链和特定的RNA分⼦1、DNA碱基序列决定特定的成熟RNA分⼦的序列三、调控序列参与真核基因表达调控1、基因的调控区（顺式作⽤元件）：位于基因转录区前后，对基因表达其调控作⽤的区域，因其是紧邻的DNA序列，⼜称旁侧序列。
第⼆节真核基因组的结构与功能基因组：细胞或⽣物体的⼀套完整单倍体遗传物质的总和。
⼀、真核基因组具有独特的结构⼆、真核基因组中存在⼤量重复序列⾼度重复序列、中度重复序列、低重复序列或单拷贝序列三、真核基因组中存在⼤量的多基因家族与假基因1、多基因家族：指由某⼀祖先基因经过重复和变异所产⽣的⼀组在结构上相似、功能相关的基因2、超家族基因：DNA序列相似，但功能不⼀定相关的若⼲个单拷贝基因或若⼲组基因家族总称3、假基因：基因组中存在⼀段与正常基因⾮常相似但不能表达的DNA序列，以来表⽰四、线粒体DNA结构有别于染⾊体DNA五、⼈类基因组有两万多个基因1、基因组⼤⼩⽤C值表⽰，C值⼤⼩基本上反映⽣物进化程度的差异。
2、C值佯谬：⽣物体的进化程度与基因组⼤⼩之间不完全成⽐例的现象六、⼈的基因在染⾊体上的分布特征⾮均匀分布，存在物基因的沙漠区⼆、DNA复制复制：遗传信息从亲代DNA传递到⼦代DNA上复制的三⼤特征：DNA复制从固定的起始位点开始、绝⼤多数DNA复制的双向的、半保留半不连续复制第⼀节复制的基本规律⼀、半保留复制是DNA复制的基本特征1、半保留复制：⼦代DNA双链中的⼀条链来⾃母链，另⼀条链重新合成2、半保留复制意义：遗传稳定性的分⼦机制⼆、DNA复制从起始点向两个⽅向延伸形成双向复制1、原核⽣物复制时，DNA从起始点向两个⽅向解链，形成两个延伸⽅向相反的复制叉，称双向复制2、真核⽣物染⾊体上有多个起始点，是多复制⼦的复制复制⼦：习惯把两个相邻起始点之间的距离定为⼀个复制⼦，是独⽴完成复制的功能单位三、DNA⼀⼦链复制的⽅向与解链⽅向相反，导致半不连续复制1、领头链：顺着解链⽅向⽣成的⼦链，复制是连续进⾏的2、随从链：复制⽅向与解链⽅向相反，不能顺着解链⽅向连续延长，复制是不连续的3、冈崎⽚段：随从链复制中的不连续⽚段4、半不连续性：领头链连续复制⽽随从链不连续复制第⼆节复制的酶学与拓扑学变化⼀、核⽢酸与核苷酸之间⽣成磷酸⼆酯键是复制的基本化学反应⼆、DNA聚合酶催化核苷酸之间的聚合1、DNA聚合酶活性：5'→ 3'的聚合活性、核酸外切酶活性（5'→ 3'外切酶活性：切除引物，切除突变⽚段；3′→5′外切酶活性：能辨认错配的碱基对，并将其⽔解）2、DNA聚合酶：原核⽣物：DNApolⅠ、Ⅱ、Ⅲ；真核⽣物：DNA-pol α、β、γ、δ、ε…3、DNA-polⅠ：对复制中的错误进⾏校读，对复制和修复中出现的空隙进⾏填补4、DNA-polⅡ：发⽣突变，依然能存活，参与DNA损伤的应急状态修复5、DNA-polⅢ：是原核⽣物复制延长中真正起催化作⽤的酶三、核酸外切酶的校读活性和碱基选择功能是复制保真性的酶学依据四、复制中的分⼦解链伴有DNA分⼦拓扑学变化1、解螺旋酶：断裂互补碱基间的氢键，使DNA成单链2、拓扑异构酶：既能⽔解⼜能连接磷酸⼆酯键；TopoⅠ：不需ATP，切割双链DNA中的⼀链，使DNA松弛后, 连接切⼝TopoⅡ：切割DNA双链，此时不需ATP；尔后由ATP供能，使DNA分⼦成负超螺旋再连接切⼝3、单链DNA结合蛋⽩：防⽌单链DNA重新形成双链，防⽌单链DNA被核酸酶⽔解4、引物酶：催化RNA引物合成的酶5、引发体：包括解螺旋酶、DnaC、引物酶及DNA复制的起始区域五、 DNA连接酶连接DNA双链中的单链缺⼝1、DNA连接酶：催化DNA双链的3’羟基和相邻的5’磷酸基团形成磷酸⼆酯键，从⽽把两段相邻的DNA链连成完整的链第三节原核⽣物的DNA⽣物合成⼀、复制起始：DNA解链形成引发体1、DNA解链成单链由特定蛋⽩质识别复制起始位点，在解螺旋酶、TOPO酶及单链DNA结合蛋⽩的共同作⽤下，DNA解链，解旋，形成复制叉2、引发体的⽣成解螺旋酶解开双链后引物酶进⼊形成引发体3. RNA引物的合成⼆、复制延长：领头链连续复制，随从链不连续复制引物合成后，由DNA polⅢ（在真核细胞为DNA聚合酶δ和α)催化，按碱基配对原则，将dNTP 逐⼀添加到引物3'末端，形成磷酸⼆酯键，使新合成的链不断延长三、复制终⽌：切除引物、填补空缺、连接切⼝1. 原核⽣物DNA为环状，双向复制的汇合点就是复制终⽌点。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术：是以核酸或蛋白质为分析材料，通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。
（1）感染性微生物的检测。
如：用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。
（2）基因突变的检测。
如：用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。
（3）法医学检测。
如：用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。
（4）基因异常表达的检测。
如：用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。
（5）基因定位。
如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。
3、基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
4、基因：是基因组中一个功能单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
5、原核生物：是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。
6、操纵子结构：是原核生物基因组的功能单位。
7、质粒：是指细菌细胞染色体外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。
8、转座因子：又称为转座元件，是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。
9、原核生物基因组的结构特征：（1）原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成，基因组中只有一个复制起点，具有类核结构。
（2）具有操纵子结构，模板mRNA为多顺反子mRNA。
编码区远远大于真核生物基因组，但又远远小于病毒基因组。
在基因组中存在多功能的识别区域，如复制起始区、转录启动区和终止区等，这些区域常常含有反向重复序列。
（3）结构基因通常为单拷贝基因，编码顺序一般不重叠。
（4）具有编码同工酶的基因。
（5)含有可移动的DNA序列。
10、病毒基因组的结构特点：（1）与细菌和真核生物基因组相比，病毒基因组结构简单，基因数少，所含信息量也少。
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一、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。
2、基因病分为单基因病和多基因病。
3、分子杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。
4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个工作区域①试剂贮存和准备区；②标本制备区；③扩增反应区；④产物分析区。
5、肿瘤发生分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。
6、生物芯片技术是根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA-DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可以发生的复性与特异性结合，设计其中的一方为探针。
7、核酸分子杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和非同位素杂交。
8、PCR反应中，模板包括基因组DNA、RNA、质粒DNA和线粒体DNA。
9、DNA芯片技术可应用于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。
10、质粒提取方法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它方法。
11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。
12、在试管中进行的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退火（杂交）和延伸。
DNA双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中。
13、基因重组中用来识别和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的酶是限制性内切酶，若产生的缺口错开突出，称为粘末端。
若产生的缺口不错开，称为平末端。
14、国家级的蛋白质数据库有蛋白质序列数据库、蛋白质结构数据库、蛋白质直系同源簇数据库和DIP数据库。
15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引人新的基因。
16、根据杂交核酸分子的种类，可以将核酸分子杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA杂交和RNA与RNA杂交。
17、常用的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和人工染色体。
18、基因工程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和人工接头法三种方法。
19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数。
20、在生物芯片技术中，依据芯片上固定的探针类型分为DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等。
探针。
寡核苷酸探针、RNA探针和21、核酸探针的种类有DNA22、核酸探针标记方法主要有同位素标记和非同位素标记。
23、在真核生物结构基因中，编码序列与非编码序列呈间隔排列。
前者称为外显子，后者称为内含子。
24、PCR实验系统中的污染主要有扩增片段的污染（产物污染）、试剂污染和标本间的交叉污染。
25、基因表达包括转录和翻译两个过程。
26、DNA重组技术中常用的DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Taq DNA聚合酶、逆转录酶和T4末端转移酶。
27、以RNA为模板的PCR反应被称为逆转录PCR。
28、细胞调亡又称为细胞程序性死亡，具有特殊的生物学意义。
29、转位因子包括插入序列、转座子、可转座的噬菌体。
二、选择题1、没有功能的基因是（）。
（A）假基因（B）重复序列（C）多基因家族（D）重叠基因2、PCR反应中，变性温度一般定在（）。
（A）95-97℃（B）40-70℃（C）72℃（D）36℃3、凋亡小体出现在（）。
（A）细胞坏死中（B）程序性死亡中（C）细胞变性中（D）超敏反应中4、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳可应用在（）。
（A）蛋白质分析（B）DNA分析（C）RNA基因分析（D）糖分析5、异硫氰酸钾—酚氯仿一步法是提取（）的方法。
（A）DNA （B）RNA（C）蛋白质（D）cDNA6、DNA重组中使用的质粒大多为（）。
（A）严紧型质粒（B）松驰型质粒（C）抗药性质粒（D）F质粒7、细胞调亡是一种（）现象。
（A）细胞坏死（B）细胞程序性死亡（C）炎性反应（D）超敏反应8、人的体细胞具有46条染色体，属于（）。
（A）单倍体（B）二倍体（C）三倍体（D）二价体9、PCR反应的引物需要（）。
（A）1条（B）2条（C）3条（D）4条10、原位杂交在（）进行。
（A）滤膜的DNA上（B）凝胶的DNA上（C）试管中的DNA上（D）细胞的核酸上11、研究蛋白质组学是属于（）。
（A）生命计划（B）人类基因组计划（C）后基因组计划（D）基因工程计划12、真核细胞基因组的结构基因是断裂基因，它含有（）。
（A）内含子（B）操纵子（C）复制子（D）重组子13、第一个建立的人工染色体是（）。
（A）细菌人工染色体（B）噬菌体人工染色体（C）酵母人工染色体（D）哺乳动物人工染色体14、核酸分子杂交依据杂交介质的不同，可以分为液相杂交，固相杂交和（）。
（A）原位杂交（B）菌落杂交（C）点与狭缝杂交（D）同位素杂交15、变性梯度凝胶电泳可应用在（）。
（A）蛋白质分析（B）DNA分析（C）RNA分析（D）糖类分析16、下列几种实验方法中，哪种方法不是DNA序列测定方法（）。
（A）双脱氧链终止法（B）化学降解法（C）杂交法（D）平端连接法）杂交方法。
分析应使用（RNA、17．（A）Southern印迹（B）Northern印迹（C）Western印迹（D）Eastern印迹18、以下哪种现象不是属于细胞程序性死亡（）。
（A）皮肤分为真皮与表皮（B）血细胞的死去与再生（C）指（趾）甲的形成（D）细胞坏死19、法医学中亲子鉴定应用（）。
（A）HLA单倍体分析（B）STR单倍型分析（C）单核苷酸多态性分析（D）免疫印迹分析20、以下哪种方法又称为免疫印迹（）。
（A）Southern 印迹（B）Northern 印迹（C）Western印迹（D）Eastern印迹21、以下哪种疾病和细胞凋亡无主要关系（）。
（A）血友病（B）肿瘤（C）系统性红斑狼疮（D）老年性痴呆22、理想的质粒载体应具有（）抗菌素抗性标志。
（A）1种（B）2种（C）3种（D）4种23、DNA测序中，酶法指的是（）。
（A）双脱氧链终止法（B）化学降解法（C）酶切法（D）酶解法24、基因工程中，将不同来源的DNA分子进行特异地切割使用的是（）。
（A）DNA聚合酶（B）逆转录酶（C）连接酶（D）限制性内切酶25、双脱氧核苷酸末端终止法指的是（）。
（A）酶法（B）酶切法（C）酶解法（D）化学降解法26、构建cDNA时使用的酶是（）。
（A）限制性内切酶（B）DNA聚合酶（C）逆转录酶（D）连接酶27、真核生物基因组与原核生物基因组的区别是前者基因中一般具有（）。
（A）操纵子（B）复制子（C）内含子（D）重组子28、原核生物基因组与真核生物基因组的区别是前者基因组中具有（）。
（A）操纵子（B）复制子（C）内含子（D）重组子30、PCR反应中，链的延伸温度一般定在（）。
（A）95-97℃（B）40-70℃（C）72℃（D）36℃31、隐性癌基因一般指的是（）。
（A）细胞癌基因（B）病毒癌基因（C）原癌基因（D）抑癌基因三、简答题1、以PCR为基础的相关技术有哪些逆转录PCR、定量PCR、多重PCR、免疫PCR、差异显示PCR、PCR诱导定点突变、原位PCR。
2、核酸分子杂交的类型有哪些根据杂交核酸分子分为DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA杂交；根据探针标记分为同位素与非同位素杂交；根据杂交介质分为液相杂交、固相杂交、原位杂交。
3、简述PCR实验系统中的主要污染。
、试剂污染和标本间的交叉污实验系统中的污染主要有扩增片段的污染（产物污染）PCR．染，其中污染的最主要来源是扩增产物的污染。
4、DNA重组的工具酶主要有哪些限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、T4多核苷酸海激酶、碱性磷酸酶。
5、核酸探针主要有哪些种类DNA探针、RNA探针、寡核苷酸探针。
6、基因组DNA分离纯化的方法有几类酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法、其它方法，如异丙醇沉淀法。
7、什么是蛋白质芯片技术通过机械点涂的方法，将多肽或蛋白质高密度点阵并固定在载体表面，与标记的配体进行杂交，根据杂交信号的有无、多少进行定性与定量分析方法称为蛋白质芯片技术。
8、PCR反应体系的主要成分包括哪些参与PCR反应的成份主要是模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和缓冲液等。
9、杂交反应的主要步骤有哪些包括预杂交、杂交、洗脱三个步骤10、限制性内切酶的主要用途是什么（1）改造和组建质粒；（2）组建基因组DNA物理图谱；（3）基因组DNA同源性研究；（4）DNA 重组克隆及亚克隆；（5）DNA杂交与序列分析。
11、蛋白质分离纯化的一般程序是什么蛋白质的种类、性质、所处体系以及蛋白质分离纯化的目的不同，因此不可能有一个固定的程序适用于各种蛋白质的分离工作。
蛋白质的分离纯化程序一般包括前处理、粗分离、细分离三个步骤。
12、理想的质粒载体一般具备的特点①具有松弛型复制子；②在复制子外存在几个单一的酶切位点，以便目的DNA片段插入；③具有插入失活的筛选标记，理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志；④分子量相对较小但有较高的拷贝数。
13、简述DNA重组的主要内容目的DNA片段与载体被限制性内切酶切割并相互连接成DNA重组体，重组体转入宿主细胞复制及表达，重组子的筛选与鉴定。
14、目前常用的DNA重组载体主要有几类质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体、人工染色体15、简述防止RNase对RNA水解的原则。
一要避免细胞外RNase的污染并抑制其活性，二要尽快地抑制细胞内RNase的活性并极力地去除RNase。
16、PCR反应的引物设计必须遵循哪些原则（1）用于PCR反应的引物需要二条，分别设在被扩增目标片段的二端，并分别与模板正负链序列互补。
（2）引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜。
（3）二条引物之间（尤其在3ˊ端）的序列不可有互补，以免形成引物二聚体。
（4）引物的碱基组成应平衡，避免出值而决定的，二Tm 扩增中的退火温度是要根据引物的PCR）5（现嘌呤、嘧啶碱基堆积。
．条引物的Tm值不能差别太大。
（6）根据需要，合成引物时在其5ˊ端可以加修饰成分。
17、PCR产物的检测技术主要有哪些（1）PCR-限制性片段长度多态性（2）等位基因特异性寡核苷酸（3）单链构象多态性（4）变性梯度凝胶电泳（5）融点曲线分析（6）PCR产物的序列分析18、肿瘤发生学说主要内容是什么肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果。
当正常细胞受到物理因素(如紫外线、电离辐射等)、化学因素(如黄曲霉毒素)以及生物因素(DNA或RNA致癌病毒)等致癌因子作用后，经多次打击多阶段变化便形成了肿瘤。
19、蛋白质分析中盐析法的主要原理是什么原理是蛋白质在低盐浓度下的溶解度随着盐浓度升高而增加，此时称为盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。
四、概念题1、癌基因包括病毒癌基因(v-onc)和细胞癌基因(c-onc)两种，具有潜在诱导细胞恶性转化的特征。
2、DNA重组不同来源的DNA分子，通过磷酸二酯键链接而重新组合的过程，称为DNA重组。