血清尿素尿素氮(UreaBUN)测定标准操作程序SOP文件

合集下载

血清尿素的测定标准操作规程

血清尿素的测定标准操作规程【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。

【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。

它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。

肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。

是研究药物肾毒性的重要指标之一。

【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。

48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。

【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。

附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。

因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。

通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。

二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。

根据颜色深浅确定尿素含量的多少。

【试剂】(1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。

冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。

溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。

(2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。

(3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。

(4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.【操作】按表T4-1进行混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。

比色读取标准管及测定管的吸光度。

血、尿液尿素氮(BUN)测定作业指导书

血、尿液尿素氮（BUN）测定作业指导书1.实验原理Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。

半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。

经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。

测定方式：比色法波长：670nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：尿素酶非蛋白质成份＋水—————→氨+ 二氧化碳氨＋氨指示剂—————→呈色剂2. 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。

定时收集的，稀释后的尿样。

2.3 标本采集与处理：2.3.1 血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。

测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。

将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。

冷藏的样品不能立即测试。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。

尿液样品在测试前要冷藏。

4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。

6. 试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。

xx厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。

尿素被脲酶水解产氨。

在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。

NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。

本法是连续监测法。

脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。

无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。

用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。

3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。

尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）6.1.1 试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8 120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP 0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L试剂2：NADH 0.25mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。

不要入口，吞下有害。

保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

血清尿素氮的测定[方案]

血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。

2.复习尿素的生成机理及其意义。

【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。

其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。

【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。

分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。

计算及结果分析尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。

本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。

3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。

4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。

5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。

由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。

如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。

【思考题】。

血清尿素氮测定(

血清尿素氮测定（脲酶-波氏比色法）
【实验目的】 1．掌握脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮的
基本原理。 2．熟悉脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮的
操作过程。 3．了解脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮的
影响因素。
【实验原理】
尿素经脲酶催化水解生成氨和二氧化碳。氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸钠反应，生成蓝色的吲哚酚，此过程需要用亚硝酸铁氰化钠催化反应。在630nm波长下进行比色，蓝色吲哚酚的吸光度与尿素含量成正比。
测定管吸光度标准管吸光度
×
7.14mmol/L标准液浓度
=尿素mmol/L
【实验用品】
（一）器材试管，恒温水浴箱，分光光度计。
（二）试剂试剂 1：脲酶试剂 :6000u/L,稳定剂适量试剂 2：磷酸盐溶液：PH8.0，0.1mol/L磷酸盐. 试剂 3：显色剂|：亚硝基铁氰化钠、苯酚10ml/L 试剂 4：显色剂‖：次氯酸钠40ml/L
【实验操作】
脲酶-波氏比色法测定血液尿素氮操作步骤
加入物(ul)
血清尿素标准液
蒸馏水尿素测定液
显色剂| 显色剂‖
空白管
－－
10 1000 1000 1000
标准管
－
10
－
1000 1000 1000
测定管
10
－－
1000 1000 1000
按顺序操作各管混匀，37℃水浴箱中15分钟，以空白管调零，在550nm波长下读取各管吸光度。
【计算】

06化验室SOP文件1

TLSHZHYY／SHBUN－A1－2005 SOP文件A1血清尿素氮（BVN）测定A1.1 第一面页首内容血清尿素氮（BUN）测定（两点法）通辽市中医院操作规程文件号CG第二版共4 页2005年8月1 日起实施本规程每2年复审一次复审日期年月日复审复审人：（签名）规程编写者：周彬哲审批者：批准日期：年月日医务科保管者：李玉检验科主任：王彦夫生化室：A1.2测定原理：尿酸＋H2O脲酶2NH4＋＋CO32NH4＋＋α－酮戊＝酸＋NADH GLDH谷氨酸＋NAD＋H2OA1.3 标本的采集与处理A1.3.1受检查者的准备：采血前半小时内不作剧烈活动。

A1.3.2坐位、静脉取血，使用止血带时间不超过1minA1.3.3采用血清检测A1.3.4标本处理，血标本应尽快送实验室。

室温下放置30min离血清，置清洁试管待检。

4℃冰箱内保存可稳定3天。

A1.4试剂A1.4.1酶试剂：本科使用北京柏定试剂盒，临用前用R1与R2复溶即可使用。

A1.4.2试剂与标准液的稳定性，未开瓶的试剂于4℃保存，可稳定至有效期。

复溶后的试剂在4℃可稳定14天。

A1.5仪器A1.5.1美国厂家生产RT1904C半自动生化分析仪A1.5.2标准程序：严格按照仪器使用操作规程中的校准程序进行校准。

A1.6操作：A1.6.1试剂准备：取RⅡ10ml复溶1瓶RⅠ，溶解10分钟混匀后即为工作液，工作液预先保温至测试温度。

A1.6.2操作步骤：取预先保温至测试温度的工作液1ml，加入血清10ml，30秒后开始上机检测。

A1.7计算：由生化分析仪自行计算A1.8控制品：中生北控21项中值质控血清，每日质控一次，并严格按质控规则对超过允许线的值，查找原因重新测定直至在控为止，并记录其详细过程。

A1.9参考范围：2.14－7.85mmol/LA1.10操作性能A1.10.1准确度：以标准定值血清为校准品，测定结果与其基本一致。

A1.10.2可报告范围：线性范围：0－100mg/dl(35.7mmol/L)A1.11对超出可报告范围的结果处理：如果样品中BUN浓度超出线性范围，则用生理盐水稀释样品重测，结果乘以稀释倍数。

尿素检测标准操作规程SOP

试剂2
还原型辅酶I（NADH)
0.3mol/l
α-酮戊二酸
13.0mol/l
不同批次的试剂不推荐混合使用
7.4储存条件有效期
试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
7.5参数设置
主波长
340nm
辅助波长
405nm
反应方法
速率法
反应温度
37℃
反应方向
向下
试剂1
200ulቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
样本
2.5ul
4.1生理性：高蛋白饮食可引起血尿素浓度和尿液排出量显著增高。成人血清尿素浓度男性比女性平均高出0.3-0.8mmol/l，并随着年龄增加有增高倾向。妊娠妇女由于血容量增加，尿素浓度比非孕妇低。
4.2病理性：分为肾前性、肾性、肾后性。①肾前性:主要是严重失水引起的血液浓缩，肾血流量減少及肾小球滤过率降低，从而使尿素潴留，可见于剧烈呕吐、肠梗阻和长期腹泻;②肾性:为最常见的因素，可见于急性肾小球肾炎、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等，在肾功能不全的代偿期可见尿素轻度升高(＞8.0mmol/L)，肾功能衰竭失代偿期，尿素可中度升高(17.9～21.4mmol/L)，肌酐也中度升高(442.0umol/L);尿毒症时尿素＞21.4mmol/L，肌酐也可达1800umol/L，为尿毒症的诊断标准之一;③肾后性:如前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤等都可能使尿路阻塞引起血尿素升高。血液尿素减少较为少见，除了妊娠、蛋白质营养不良等情況外。常表示有严重的肝病、肝坏死。
12.2尿素氮测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史及其他的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
13.性能指标
13.1线性范围：在（0.3-35.7）mmol/L范围内：a)线性相关系数（r）应>0.995;b)（0.3-10.0）mmol/L范围内，线性偏差应≦2.0mmol/L;（10.0-35.7）mmol/L范围内，线性偏差应该≦10.0%。

血清尿素尿素氮(UreaBUN)测定标准操作程序SOP文件

POINT(2) [ 25 ]
CALIBRATION METHOD [ LINEAR ]
POINT(3) [ 0 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]
POINT(4) [ 0 ]
SPAN POINT [ 2 ]
WAVELENGTH(PRIMARY) [ 340 ]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 6 ]
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ -22 ]
R.VOLUME(R1) [ 180 ]
SE(R2) [ 0 ]
S1 ABS(HIGH) [ 20000 ]
R.VOLUME(R3) [ 110 ]
来源：Precinorm (罗氏正常值质控)
Precipath (罗氏病理值质控)
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-19
血清尿素/尿素氮（Urea/BUN）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共4页
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
9.2在测定过程中，各种器材和蒸馏水应无氨离子污染，否则结果偏高。GLDH的测定会在反应杯中残留氨，会干扰到UREA/BUN的检测。因此不能将此两个项目安装在一起。
9.3血氨升高可使尿素结果升高。尿液中，内生得氨也会干扰UREA/BUN的检测。在酸性条件下，检测结果也会偏高。
9.4仅应用于体外诊断。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-19
血清尿素/尿素氮（Urea/BUN）测定

尿素(UREA)检测的标准操作程序

尿素（UREA）检测的标准操作程序一、目的规范在罗氏cobas c311生化分析仪上定量检测人血清、血浆中的尿素，确保检测结果的准确性及重复性。

二、范围检验科生化室检验人员。

三、该SOP变动程序本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准:专业组长，科室主任。

四、授权操作人检验科经过培训并被授权发报告的人员均可操作。

五、实验原理酶动力学法尿素 + H2O 尿酶 2NH+4+ CO22NH+4 + α-酮戊二酸 + NADH + H+ 谷氨酸脱氢酶 L-谷氨酸 + 2NAD+ + H2ONADH浓度降低的速率与样本中的BUN的浓度成正比，在340nm下进行检测。

六、标本1、标本类型：血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。

血浆：肝素、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。

2、样本稳定性：标本在2－8 度可稳定2 天，15－25度可稳定8小时，-20 度可稳定6 个月。

只能冻融一次。

七、仪器与试剂1、仪器：罗氏cobas c311生化分析仪2、试剂：罗氏原装配套尿素试剂，试剂无需任何处理，可直接使用3、试剂稳定性：未开封试剂盒按要求保存可稳定至有效期末，已开封试剂盒在仪器上可稳定8周八、校准1、校准物：S1:0.9%NaCl，S2:C.f.a.s(罗氏通用校准品，复溶后使用)。

2、校准方法：两点校准。

3、校准频率：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。

另外，以下情况需要再次校准：校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。

九、操作程序1.每日开机准备：1.1仪器处于关机状态1.1.1检查供水、排水系统是否正常1.1.2接通仪器左侧电源开关, 以及电脑控制电脑的开关1.1.3登陆：输入用户名mjt及密码123，仪器初始化后进入待机状态1.2仪器处于休眠状态：1.2.1仪器在进入睡眠时指定的时间自动唤醒，或单击[[唤醒]]唤醒仪器；1.2.2系统退出睡眠状态至登录界面，输入用户名及密码，仪器初始化后进入待机状态。

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。

尿素被脲酶水解产氨。

在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。

NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。

本法是连续监测法。

脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。

无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。

用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。

3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。

尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。

不要入口，吞下有害。

保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

尿素氮测定SOP_BUN临床意义_检验科生化项目SOP

血液尿素氮浓度降低：较为少见，常表示严重的肝病，如肝炎合并广泛肝坏死。
10参考文献
[1]西门子医学诊断产品（上海）有限公司尿素氮（BUN）测定试剂说明书。
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006：463~464。
编写：审核：批准：
7性能参数
本法线性范围为0~53.5mmol/L,对于超过测定线性范围的结果，用净化水对标本进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。
8生物参考区间
血清：2.5~6.4mmol/L
尿液：249~714mmol/24小时。
9临床意义
血清尿素氮增高:见于①肾前性氮质血症,由于肾血流量灌注减少或者尿素生成过多引起。后者见于高蛋白饮食、饥饿、发热、脓毒血症所致的蛋白质分解代谢增加以及胃肠道出血后血液蛋白吸收等。脱水、休克、心衰引起的肾供血不足，亦可使血液尿素氮升高。肾前性氮质血症，肌酐浓度往往不伴随升高。②肾性氮质血症，由于急性与慢性肾功能衰竭、肾小肾炎、肾盂肾炎和肾病等引起。肾结核、肾积水的血液尿素氮增高，与肾组织破坏程度相关。③肾后性氮质血症，经输尿管、膀胱、尿道的尿流受阻而引起的血液尿素氮升高。例如膀胱结石、泌尿生殖肿瘤、前列腺肥大、阻塞造成的肾小管内压烽升高，使管内尿素倒扩散入血液。
试剂2~8℃保存，有效期内稳定。
3.2质控品
美国BIORAD液体多项质控品。
3.3校准品
西门子校准品。
3.4仪器
尿素氮测定
文件编号：
版本号：
页码：第页共页
SIEMENS DIMENSIONXpand Plus/RxL Max全自动生化分析系统。
4操作程序
4.1检测过程流程
签收样品 → 离心 → 上机检测 → 审核报告 → 签发报告 → 标本保存。

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法-检验科生化室作业书

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。

尿素被脲酶水解产氨。

在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH 同时被氧化成NAD＋。

NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。

本法是连续监测法。

脲酶尿素+2H2O2NH4＋+2HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADHL-谷氨酸+NAD＋+H2O2标本：2.1病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。

无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。

用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。

3.标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。

尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。

4.标本运输：常温条件下保存运输。

5.标本拒收标准：细菌污染的标本。

6.实验材料6.1试剂：申能尿素测定试剂盒（14231071701试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）6.1.1试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L试剂2：NADH0.25mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。

不要入口，吞下有害。

保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

应采取必要的预防措施使用试剂。

实验五血清尿素氮的测定

血清尿素氮的测定一.实验原理血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色。

即可求得血清中尿素的含量。

由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。

在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定．加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。

二.实验操作取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。

三.计算血清尿素氮（mmol / L ）=——————— X 17.85 测定管吸光度标准管吸光度正常值参考范围3．57～14．28mmol ／L四.临床意义血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、胆红素及氨等。

其中尿素含量约占l ／3～1／2。

尿素是蛋白质代谢的产物．通过肾脏排出，故测血清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行关系。

五.试剂1.尿素氮试剂：蒸馏水lOOml ，浓硫酸44ml ，85％磷酸66ml ，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg ，硫酸镉(3CdSO ４·8H 2O)2g ，溶解后稀释至1000ml 。

2.20g ／L 二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g ，加入蒸馏水约900ml ，溶解后稀释至1000ml.３.尿素氮标准贮存液(357mmol ／L)：称取尿素1.072g 溶解于蒸馏水中定容至1000ml 。

４.尿素氮标准应用液(17.85mmol ／L)；取贮存液5ml ，加蒸馏水至100ml 。

尿素(UREA)检测标准操作规程

深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司尿素测定方法
2、适用范围
适用于尿素的测定
3、试剂仪器
3.1试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒
3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃—8℃有效期一年。

试剂不可以冰冻。

4、操作程序
4.1方法原理
脲酶
尿素+ 2H2O————→2N H4+ + CO32-
谷氨酸脱氢酶
a-酮戊二酸+ NH4+ +NADH————→L-谷氨酸+ NAD+ + H2O
4.2样本要求
新鲜血清或肝素血浆，样本收集后应尽快测定，必须避光保存，避免使用溶血样本。

4.3上机操作
4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-220全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”
4.3.2校准“
4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱取出，复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2校准程序：每30天需要定标一次。

当有以下情况时需重新定标：
1）换试剂批号或出现质控漂移时；
2）当仪器做完保养后；
3）仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行定标，定标通过后进行检测。

血尿液尿素BUN测定

血、尿液尿素氮（BUN）测定1.实验原理Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。

半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。

经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。

要留取24小时尿样。

2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。

定时收集的，稀释后的尿样。

2.3 标本采集与处理：2.3.1 血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。

测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。

将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。

冷藏的样品不能立即测试。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。

尿液样品在测试前要冷藏。

4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。

6. 试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。

强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

检验科生化尿素氮测定的标准规程

尿素氮测定的标准规程【目的】体外检测血清中尿素氮（BUN）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用由Talke和Schubert首先提出的酶学方法，为缩短和简化分析，计算基于Tiffany等的发现，即尿素浓度与固定时间间隔内的吸光度变化成正比。

其反应如下：尿素 + H2O−−→−尿素酶2NH3 + CO2NH3 + α-氧代戊二酸 + NADH−−→−GLDH谷氨酸 + NAD+注：GLDH为谷氨酸脱氢酶在上述反应中，酶反应速率与样本中尿素（尿素氮）的含量成正比。

在340 nm 处测定固定时间间隔内NADH吸光度下降的速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。

二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）α-氧代戊二酸7.5 mmol/L谷氨酸脱氢酶＞800 U/LNADH 0.35 mmol/L二磷酸腺苷 1.5 mmol/LTris缓冲液115 mmol/L试剂2（R2）Tris缓冲液115 mmol/L尿素酶＞40000 U/Lα-氧代戊二酸7.5 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。

批内重复实验：血清尿素(BU)的测定

四、计算
AU 1 AU 2 AU 3 AU 4 AU 4
注：尿素校准液s 平均值、标准差、变异系数、离群值。
五、参考值
血清/血浆：2.86 ~ 8.20 mmol/L
六、临床意义
1、增高 ⑴生理性增高：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3~0.5 mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63 mmol/L ⑵肾脏疾病：如急性肾衰、慢性肾炎、肾动脉硬化、慢性肾盂肾炎、肾结核、肾肿瘤晚期等；肾功能轻度受损时，BUN可无变化。当60%~70%有效肾单位受损时，BUN才增高。因此BUN测定不能作为早期肾功能受损的指标，但对肾功能衰竭，尤其是尿毒症诊断有特殊价值，并可判断病情，估计预后。根据BUN测定结果可判断肾功能衰竭的程度。
⑷体内蛋白质分解过多，如大面积烧伤、大手术以后，上消化道出血、甲状腺功能亢进及急性传染病等。此时BUN增高，其它肾功能试验结果大致正常。
2、降低 ⑴生理性多见于婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者。 ⑵临床较少见。主要系肝实质受损，生成减少。如肝功能衰竭、急性黄色肝萎缩、肝硬化、中毒性肝炎，严重性贫血等。
血清尿素（BU）的测定
Reagent for Urea Test —— 批内重复试验
吴民泸 2013.12.01
血清尿素（BU）的测定
—— 批内重复试验 Reagent for Urea Test
一、实验原理二、实验操作三、计算四、参考值五、临床意义六、方法学评价七、注意事项
一、实验原理
校准液（ml） — 蒸馏水（ml） — 试剂R1 （ml） 0.05 试剂R3 （ml） 1.0

SOP标准操作程序-BUN

SOP标准操作程序BUN尿素氮（货号：OSR6134，OSR6234）实验原理：尿素氮测量用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。

尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。

它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。

通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。

血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。

水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。

任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。

肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酐却不会。

因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。

方法奥林巴斯AU640尿素氮的测定是基于Talk和Schubert的改良酶法2，在这种方法中，在尿素酶催化下尿素被水解成氨和二氧化碳。

在L-谷氨酸脱氢酶（GLDH）的催化下，氨和α-酮戊二酸转化为谷氨酸。

同时，相当于一个摩尔的还原的NADH被氧化3，4，5。

一分子尿素在酶催化下，使两分子的NADH被氧化。

由于NADH的减少，在340/380nm吸光度变化率与标本中BUN浓度成正比。

脲素酶尿素+H2O -------------﹥2NH4++CO32-GLDHNH4++α-酮戊二酸+NADH-------------﹥L-谷氨酸+NAD++H2O标本：病人准备：对于血清，无特殊要求。

建议留取24小时尿样。

类型：无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA 和肝素钠。

建议留取24小时尿样，在分析前用去离子水1:10进行稀释。

标本稳定性：如果分析被推迟，标本应冷冻。

在室温（15～25℃）下可稳定24个小时，2～8℃下可稳定几天，冰冻起来可稳定23个月1。

尿样在分析前应保存在4～8℃下。

尿样可保存在pH值小于4的条件下6。

尿素氮测定的标准操作规程

尿素氮测定（速率法）1：概述尿素是人体内蛋白氮代谢的终产物，它构成了血液中绝大部分的非蛋白氮.尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋白质的摄入量，蛋白质分解代谢和肾功能。

2：标本的手收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血.血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天.采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝固后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30—60分钟凝血析出血清.3000r/min离心5-10分钟,分离出血清备用.不建议采用血浆标本。

3方法原理样品中的尿素在试剂中脲酶的催化下与水反应生成氨和二氧化碳，生成的氨与试剂中的酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的催化下产生谷氨酸，同时NADH被氧化为NAD+，从而使340nm处的光吸收值下降.通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可计算出样品中尿素的浓度。

4剂来源，配置及储存试剂来源：试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使用。

启用后在2—8度可稳定30天.若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS—600B全自动生化分析仪6计算方法ALT（U/L)=（A/min*Tv*1000）(6.3*Sv＊P）式中Tv=总反应体积Sv=样本体积6.3=NADH在340nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径(cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0—---35mmol/L8 参考范围:2。

82—-—8。

2 mmol/L9 失控控理1：立即重测同一质控品,如重测后结果仍不再允许范围,请进行下一步。

2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常,那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。

3：进行仪器维护，重测失控项目。

检查仪器状态,查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护.另外还要检查试剂，此时可更换试剂已查明原因。

尿素测定标准操作规程

尿素测定标准操作规程1.检验原理：（酶偶联检测法）尿素经脲酶催化水解生成氨与二氧化碳，在谷氨酸脱氢酶催化下，氨与α-酮戊二酸、还原型辅酶Ⅰ（NADH ）作用生成谷氨酸与氧化型辅酶Ⅰ（+NAD ），还原型辅酶Ⅰ在340nm 波长处有吸收峰，而氧化型辅酶Ⅰ几乎无吸收峰，还原型辅酶Ⅰ在340nm 吸光度的下降速率与样品中尿素含量成正比。

尿素+2O H 2−−→−脲酶2+4NH +-23CO Α-酮戊二酸++4NH +NADH++H −−−−→−谷氨酸脱氢酶L-谷氨酸++NAD +O H 2 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。

在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！样本中抗坏血酸含量≤0.3g/L 、胆红素含量≤0.4g/L 、血红蛋白含量≤5.0g/L 、脂血含量≤5.0g/L 对检测结果基本无影响。

4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释不超过10倍。

6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×6.027.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊，或以水空白在340nm处吸光度小于1.000时不能使用。

7.3检验结果仅供参考，不作为临床诊断的唯一依据。

8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明液体，无悬浮物及沉淀。

8.2装量：不低于标识值。

8.3试剂空白8.3.1试剂空白吸光度：在340nm处，光径1cm时，空白吸光度A≥1.0008.3.2试剂空白吸光度变化率：在340nm处，光径1cm时，△A/min≤0.004.8.4线性区间：试剂的线性区间为[0.9-35.7]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[0.9-4.0]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±0.4mmol/L；[4.0-35.7]umol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。