去内毒素质粒小提试剂盒说明书

合集下载

(完整word版)质粒提取试剂盒说明书(word文档良心出品)

(完整word版)质粒提取试剂盒说明书(word文档良心出品)

E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意:1.使用之前,把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2.加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备:可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程:(提取过程在室温下进行):1.在10-20ml试管中,将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB(含氨苄青霉素50μg/ml),37cº振荡培养12-16h。

需特别指出的是:endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取,如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min,去上清3. 加250µl溶液Ⅰ(含RNase A),涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。

(用移液枪吹打进行重悬浮)4.加入250µl溶液Ⅱ,温和颠倒离心管4~6次,获得澄清的裂解液。

最好室温孵育2min,剧烈混合会使剪切染色体DNA,降低质粒纯度。

(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ,温和颠倒数次混合,至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min,紧凑的白色沉淀就会形成,迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清,移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。

要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。

室温10000×g离心1min,至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液,加500µl Buffer HB,10000×g离心1min,清洗吸收柱,除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。

如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高,如酶消化法等其它筛选方法,此步可省略9.弃滤过液,再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱,10000×g离心1min,弃过滤液。

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档。

1欢迎下载 E.Z.N.A.™ 质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文)(适用于No. D6942, D6943 & D6944)1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培养基进行培养。

37℃强力摇动(~300rpm )孵育12-16h 。

使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。

强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。

此类菌株包括DH5α和JM109。

2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。

轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。

3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。

充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA 非常重要。

4. 加入250μl 溶液II ,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。

可能需要孵育2min 。

不要用力混合,以免使染色体DNA 断裂,减低质粒的纯度。

该步反应不要超过5min 。

溶液II 不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。

5. 加入350μl 溶液III ,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。

为避免形成局部沉淀,加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。

6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。

白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。

7. 小心翼翼....的吸取上清液,加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。

确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。

室温下10,000 x g 离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。

8. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入500μl HB 缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完成通过柱子。

该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。

9. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。

内毒素去除试剂盒说明书

内毒素去除试剂盒说明书

内毒素去除试剂盒说明书I. DESCRIPTION细菌内毒素(脂多糖,LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。

人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中,发现细菌内毒素在其中起着关键的作用,内毒素使机体免疫功能严重受损,进一步的发展可能引发脓毒性休克,弥散性血管内凝血,急性呼吸窘迫综合症,全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。

因此,内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的,尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。

本试剂盒使用的是一类高效内毒素去除树脂,它以修饰过的多粘菌素B(PMB)为配体,进行特异性的内毒素去除。

经此亲和树脂纯化,样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。

亲和树脂的主要特性如下表:规格 1.5 ml预装柱结合能力高达2,000,000 EU/ml 树脂配基修饰的多粘菌素B (PMB)pH 范围pH 5-10基质4% 交联的琼脂糖凝胶颗粒大小90 µm保存温度2°C-8°C使用寿命18个月平衡缓冲液磷酸盐缓冲液,pH 8.0适合纯化对象蛋白,多肽,抗体,多糖等离子条件0.1-0.5 M NaCl可耐受试剂20% DMSO, 20% 乙醇, 20% 甘油;1 M 尿素, 300 mM 咪唑; 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等II. KEY FEATURES·高稳定性,高去除效率·高结合力:> 2, 000, 000 EU / ml (CV)·无需恒流泵即可调节流速·重复使用5次不会改变柱子效果·使用方便,试剂盒中提供无热源缓冲液,无热源收集管,无热源枪头等III. CONTENTS试剂盒内容 3 – 5个测试亲和树脂 1.5 ml 预装柱再生缓冲液125 ml平衡缓冲液125 ml流速控制器1个无热源接收管 1 包(3个/包)无热源枪头(1 ml) 2包(6个/包) 说明书1份IV. MATERIALS AND EQUIPMENT NEEDED BUT NOT PROVIDED1. 铁架台2. 0.1 M的氢氧化钠和0.1M盐酸, 用于调节样品pH值V. ENDOTOXIN REMOVAL PROTOCOL样品处理:样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。

质粒提取试剂盒说明书

质粒提取试剂盒说明书

质粒抽提:质粒抽提方法即去除RNA,将质粒与细菌基因组DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。

实验原理:提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

详细内容请参考《分子克隆实验指南》。

另外,复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章,提供了质粒提取机理的详细解说。

碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli(大肠杆菌)中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。

将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。

尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。

只要OH-处理的强度和时间不要太过,当pH值恢复到中性时,DNA双链就会再次形成。

在裂解过程中,细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物,后者被十二烷基硫酸盐包盖。

当用K+取代Na+时,复合物会从溶液中有效地沉淀下来,离心除去变性剂后,就可以从上清中回收复性的质粒DNA。

在SDS存在的条件下,碱水解是一项非常灵活的技术,它对E. coli的所有菌株都适用,并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。

煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中,然后加热到100℃使其裂解。

加热除了破坏细菌外壁,还有助于解开DNA链的碱基配对,并使蛋白质和染色体DNA 变性。

但是。

闭环质粒DNA链彼此不会分离,这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。

当温度下降后,闭环DNA的碱基又各就各位,形成超螺旋分子,离心除去变性的染色体DNA和蛋白质,就可从上清中回收质粒DNA。

GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)

GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.3 v.A GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、 沉淀、亲和树脂过滤、萃取来达到脱盐、去内毒素、去蛋白、去杂质小分子的纯化无内毒素质粒DNA的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备,OD260/280在1.8-2.0之间。

产物可用于各种后续分子生物学操作。

产品即到即用,性能稳定,操作方便迅速,提取效率和纯化程度高。

技术背景内毒素(Endotoxin)是一种脂多糖(Lipopolysaccharides;LPS),革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。

在质粒纯化过程中,细菌裂解释放出内毒素,伴随着质粒,严重干扰后续真核细胞的转染,尤其对于敏感的细胞株。

GENMED无内毒素小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、煮沸等优势元素,融入了特异亲和树脂充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活,并清除内毒素(低达<0.1 EU/微克)以及非DNA 分子,其效率和纯度都出乎其上。

产品内容GENMED混匀液(Reagent A)毫升GENMED裂解液(Reagent B)毫升GENMED平衡液(Reagent C)毫升GENMED去毒液(Reagent D)毫升GENMED去干扰剂(Reagent E)微升GENMED沉淀液(Reagent F)毫升GENMED清理液(Reagent G)毫升GENMED保存液(Reagent H)毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液(Reagent A)和GENMED去干扰剂(Reagent E)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备1.5和2毫升离心管:用于样品操作的容器微型台式离心机:用于沉淀核酸涡旋震荡仪:用于混匀反应物37℃恒温水槽:用于孵育反应物1.加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管(注意:确保细菌量OD600= ;如果细菌量不足,影响质粒提取)2.放进微型台式离心机离心秒,速度为g(例如eppendorf 5415D,RPM)3.小心抽去上清液4.加入微升GENMED混匀液(Reagent A),涡旋震荡少许,使细菌颗粒混匀5.加入微升GENMED裂解液(Reagent B),轻轻混匀6.加入微升GENMED平衡液(Reagent C),强力涡旋震荡秒7.放进微型台式离心机离心分钟,速度为g(例如eppendorf 5415D,RPM)8.小心移取微升上清液到新的毫升离心管,避免絮状物9.同时移取微升GENMED去毒液(Reagent D)到另一个新的毫升离心管(注意:参见注意事项3和4)10.放进微型台式离心机离心分钟,速度为g(例如eppendorf 5415D,RPM)11.小心抽去上清液12.加入微升实验步骤的上清液13.涡旋震荡秒14.平放在平式摇荡仪上孵育分钟,速度为RPM15.放进微型台式离心机离心分钟,速度为g(例如eppendorf 5415D,RPM)16.小心移取微升上清液到新的毫升离心管,避免黑色小粒17.加入微升GENMED去干扰剂(Reagent E),混匀18.放进℃恒温水槽孵育分钟19.加入微升GENMED沉淀液(Reagent F)20.涡旋震荡秒21.放进微型台式离心机离心分钟,速度为g(例如eppendorf 5415D,RPM)22.小心抽去上清液23.加入微升GENMED清理液(Reagent G)24.放进微型台式离心机离心分钟,速度为0g(例如eppendorf 5415D,RPM)25.小心抽去上清液26.空气中晾干27.加入0微升GENMED保存液(Reagent H)28.放进℃冰箱里备用注意事项1.本产品为20次操作2.本产品采用特殊树脂法3.使用GENMED去毒液(Reagent D)前,充分混匀4.使用1毫升枪头,将枪头尖端部分剪去,用于移取GENMED去毒液(Reagent D)5.细菌量是个重要因素:通常1毫升细菌可获得1-5微克无内毒素质粒6.如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒,可订购中量和大量规格7.本公司提供GENMED RNA清除试剂盒(GMS20059)和GENMED去内毒素试剂盒(GMS20067)8.本公司提供系列质粒提取试剂产品1.本产品经鉴定性能稳定2.本产品经鉴定去内毒素和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。

质粒小提试剂盒使用说明书

质粒小提试剂盒使用说明书

质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号:HS0101)产品包装(注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存)保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。

若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。

加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。

产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。

菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。

通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到纯度较高的质粒DNA 。

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ,在30 min 之内完成提取任务。

所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。

2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液不需要另加乙醇,即开即用。

3. 高质:OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。

4. 稳定:正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。

操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。

(注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次)2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。

(注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低)3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。

质粒小量提取试剂盒说明书

质粒小量提取试剂盒说明书

质粒小量提取试剂盒说明书货号:D1100规格:50T/100T保存:常温保存,复检期一年。

(注:RNase A以附件形式发货,收到未使用前请-20℃保存)试剂盒内容:试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明:本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。

溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA (将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2-8℃保存。

如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意:混匀一定要温和,以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5min,以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。

12000rpm离心10min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。

无内毒素质粒小量快速提取试剂盒

无内毒素质粒小量快速提取试剂盒

1.
产品特点: 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附 量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.
独有的去蛋白液配方, 可以高效去除核酸酶。 即使是核酸酶含量丰富的菌株如 JM 系列、HB101 也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3. 4.
3.
加 250μl 的溶液 P2,温和地上下翻转 4 -7 次使菌体充分裂解,室温放置 4 分钟。 温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组 DNA 剪切断裂!所用时间不应超过 5 分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘 稠后就可以做下一步,不是一定要准确的 5 分钟。
4.
4.
得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA 。电泳可能为单一条带,也可能为 2条或者多条 DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培 养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺 旋可以超过 90%。
20 次
50 次
150µ l 15 ml 15 ml 20 ml 22 ml 25 ml 15ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
5 ml 10 ml 20 个 20 个 5 ml 10ml 50 个 50 个
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
-1-
储存事项: 1. 第一次使用时, 将试剂盒所带的全部 RNase A 加入溶液 P1 后 (终浓度 100ug/ml) 置于 4℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活,提取的质粒可能会有微量 RNA 残 留,在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。 2. 环境温度低时溶液 P2 中 SDS 可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热 几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。

质粒小量提取质粒小量提取试剂盒

质粒小量提取质粒小量提取试剂盒

质粒小质粒小量提取量提取量提取试剂盒试剂盒(Plasmid Miniprep Kit )目录号目录号::ZP101 版本版本::2014-10-15 试剂盒内容: 试剂盒组成ZP101-1 (50次) ZP101-2 (100次) ZP101-3 (200次) RNaseA (10 mg/ml) 150 μl 300 μl 600 μl 溶液1 15 ml 30 ml 60ml 溶液2 15 ml 30 ml 60 ml 溶液3 20 ml 40 ml 80 ml去蛋白液W1 30 ml 60 ml 120 ml 漂洗液W2 15 ml 2X15 ml 2X30 ml 洗脱缓冲液TE 15 ml 15 ml 30ml 吸附柱 50个 100个 200个 收集管(2 ml) 50个 100个 200个 说明书 1份 1份 1份 储存条件: 本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2-8℃。

若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。

加入RNase A 后的溶液1应置于2–8℃保存,可稳定保存半年。

产品简介: 本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA。

本说明书操作步骤适用于从1-5 ml过夜培养的大肠杆菌LB(Luria-Bertani) 培养液中,快速提取多至40 μg纯净的高拷贝质粒DNA。

使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等。

注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. 按1:100的比例向溶液1中加入RNaseA,混匀,置于2–8℃保存。

2. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液W2中加入无水乙醇。

去内毒素质粒小提试剂盒说明书

去内毒素质粒小提试剂盒说明书

去内毒素质粒小提试剂盒说明书试剂盒组成50次100次RNase A 100ul 200ul内毒素清除剂20ml 40ml溶液P1 10ml 20ml溶液P2 10ml 20ml溶液P3 10ml 20ml结合液30ml 60ml漂洗液15ml 15ml×2洗脱液10ml 20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注:该试剂盒置于室温(15℃-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2℃-8℃。

产品简介:本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,同时加入Solarbio公司特制的内毒素清除剂,可最大限度地去除内毒素。

从1-5ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA,提取率达85-90%。

使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高,可直接用于细胞转染等要求较高的试验,以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂,操作安全。

操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

溶液P1在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2-8℃保存。

如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入200ul溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

无内毒素质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书

无内毒素质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Midi Kit无内毒素质粒小提中量快速提取试剂盒目录号:PL10试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次(PL1001)平衡液室温5mlRNaseA(10mg/ml)-20℃250µl溶液P1 4℃25 ml溶液P2 室温25 ml溶液N3 室温25 ml内毒素清除剂-20℃10 ml漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15ml吸附柱AC 室温50个收集管(2ml)室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

内毒素清除剂常温运输,4度可以保存一个月,长期保存放-20℃。

储存事项:1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml)置于2-8℃保存。

如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍:本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素,然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点:1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.独特工艺配方清除内毒素,内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),细胞转染效果极佳。

也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。

内毒素去除试剂盒说明书(1)[1]

内毒素去除试剂盒说明书(1)[1]

内毒素去除试剂盒说明书内毒素去除试剂盒说明书I. DESCRIPTION细菌内毒素(脂多糖,LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。

人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中,发现细菌内毒素在其中起着关键的作用,内毒素使机体免疫功能严重受损,进一步的发展可能引发脓毒性休克,弥散性血管内凝血,急性呼吸窘迫综合症,全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。

因此,内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的,尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。

本试剂盒使用的是一类高效内毒素去除树脂,它以修饰过的多粘菌素B(PMB)为配体,进行特异性的内毒素去除。

经此亲和树脂纯化,样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。

亲和树脂的主要特性如下表:规格 1.5 ml预装柱结合能力高达2,000,000 EU/ml 树脂配基修饰的多粘菌素B (PMB)pH 范围pH 5-10基质4% 交联的琼脂糖凝胶颗粒大小90 µm保存温度2°C-8°C使用寿命18个月平衡缓冲液磷酸盐缓冲液,pH 8.0适合纯化对象蛋白,多肽,抗体,多糖等离子条件0.1-0.5 M NaCl可耐受试剂20% DMSO, 20% 乙醇, 20% 甘油;1 M 尿素, 300 mM 咪唑; 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等II. KEY FEATURES·高稳定性,高去除效率·高结合力:> 2, 000, 000 EU / ml (CV)·无需恒流泵即可调节流速·重复使用5次不会改变柱子效果·使用方便,试剂盒中提供无热源缓冲液,无热源收集管,无热源枪头等III. CONTENTS试剂盒内容 3 – 5个测试亲和树脂 1.5 ml 预装柱再生缓冲液125 ml平衡缓冲液125 ml流速控制器1个无热源接收管 1 包(3个/包)无热源枪头(1 ml) 2包(6个/包) 说明书1份IV . MATERIALS AND EQUIPMENT NEEDED BUT NOT PROVIDED 1. 铁架台2. 0.1 M 的氢氧化钠和0.1M 盐酸, 用于调节样品pH 值V . ENDOTOXIN REMOVAL PROTOCOL样品处理:样品的pH 值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。

质粒小提试剂盒使用说明书

质粒小提试剂盒使用说明书

质粒小提试剂盒I 简明步骤(PD1211)(详细内容请参考英文说明书)I.实验前准备 II. 注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A 瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A 置于4o C 保存。

质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C 甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。

切勿直接取冻存的菌种进行培养。

DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL (PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer 。

Buffer B1: 在低于室温时会沉淀,请于50o C 左右水浴加热至沉淀完全溶解,溶液澄清,使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。

在室温下(22-25o C )进行所有离心操作。

III. 操作步骤1. 接种新鲜的单个菌落到1-5 mL 的LB 培养基(含适量抗生素),37o C 震荡培养14-16小时。

室温下10,000 x g 离心1分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。

注:残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分,第5步离心后沉淀较松,不能有效吸取上清。

注:本说明书中的操作程序适用于标准LB (Luria Bertani )培养基培养12-16 小时后,OD 600(细菌密度)在2.0-3.0之间的菌液。

若采用的是富集培养基,例如TB 或2×YT,请注意保证OD 600不超过3.0。

2. 加入250 µL Buffer A1(确保已加入RNase A ),用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。

质粒提取试剂盒说明书

质粒提取试剂盒说明书

1使用前,在试剂盒中加入一小管核糖核酸酶到溶液一中。

保存在4°C2向dnawas缓冲液浓缩液中添加60 ml 100%乙醇,并在室温下储存除此之外,还需要一台容量为13000×G的离心机无核酸酶离心管无菌去离子水或te缓冲液纯乙醇操作步骤:(萃取过程在室温下进行)1在10-20ml试管中,将携带所需质粒的大肠杆菌接种于5mllb培养基lb(含50μg/ml 氨苄西林)中,37℃≤0.2培养12-16h,需要注意的是,常规的质粒提取使用的是Enda 阴性的大肠杆菌,如DH5α和JM109。

2取1.5~5ml常温菌液10000×g,离心1分钟,除去上清液。

三。

加入250.0.8l溶液I(含RNase A),用旋涡振荡器摇匀,直至细胞完全悬浮。

(用移液管再消耗)4加入250.0.8l溶液II,轻轻转动离心管4-6次,得到澄清的热解溶液。

最好在室温下孵育2分钟。

剧烈的混合会切断染色体DNA,降低质粒的纯度。

(储存溶液II时应拧紧盖子)5加入350.0.8l溶液III,轻轻倒置并混合几次,直到出现白色絮状沉淀6在室温下以13000×g离心10分钟后,会形成白色沉淀并迅速进入下一步7小心处理上清液,并用2ml离心管转移到干净的吸收柱中。

确保没有沉淀物和细胞碎片被吸入。

在10000×g室温下离心1分钟,直至裂解液完全通过吸收柱8取纯化后的蛋白质,在离心条件下,取剩余蛋白1.500×1.0,进行离心分离。

如果下一步不需要高纯度质粒,如酶消化等筛选方法,这一步可以省略9滤液弃去,用100%乙醇稀释的750.0.8l洗涤缓冲液冲洗吸收柱,在10000×g离心1分钟,滤液丢弃。

注意:浓缩前必须用纯乙醇稀释洗涤液。

参见标签中的方法如果结冰,使用前必须恢复到室温10此步骤可选:加入750.0.8l洗涤缓冲液清洗吸收柱1113000×g吸收柱必须离心2分钟,以确保去除乙醇。

promega 小提质粒提取说明书

promega 小提质粒提取说明书

Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System protocol所用试剂盒为Promega公司的Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System,能够去除对细胞有害的细菌内毒素。

具体操作步骤如下:(1)将5ml 培养过夜的阳性菌在室温(24℃)下10000×g离心10 min。

弃上清,将离心管倒置至吸水纸上去除剩余水分。

(2)加入250µl 重悬液,振荡至完全重悬。

(3)加入250µl细胞溶解液,颠倒离心管6~8次,彻底混匀。

室温孵育5min。

(4)加入350µl中和液,立即颠倒离心管6~8次,彻底混匀。

(5)室温下10000×g离心细菌溶解产物20min,上清移至新的1.5 ml 离心管,再次离心20 min,将上清移至新离心管。

(6)彻底摇匀除内毒素树脂,加50µl到离心管中,室温孵育10 min,在孵育过程中每隔3 min剧烈振荡5 sec。

(7)将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清,颠倒磁珠分离架和离心管,去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。

放置至液体澄清后30 sec,吸取上清至新离心管,弃去沉淀。

(8)加入200 µl GTC(5M/L),与上步分离的上清剧烈振荡混和。

如果GTC产生沉淀,37℃加温10min,冷却到25℃使用。

(9)彻底重悬磁珠,加150 µl至溶液中,剧烈振荡混和,室温孵育2~3 min。

(10)将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清,颠倒磁珠分离架和离心管,去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。

放置至液体澄清后30 sec,弃上清,离心管继续放置2~3min,去除剩余液体。

(11)将离心管从磁架上取出,加入200 µl 4/40洗脱液。

剧烈振荡15sec 重悬磁珠微粒。

4/40洗脱液可以去除无关蛋白,如核酸酶。

质粒小量提取试剂盒磁珠法说明书

质粒小量提取试剂盒磁珠法说明书

质粒小量提取试剂盒(磁珠法)说明书货号:DM1100规格:50T/100T保存:磁珠可以在室温下(15-25℃)运输,但请在4℃冰箱中保存。

RNase A 需-20℃保存,以保证其活性。

其余试剂可以室温保存,更长时间的保存可置于2-8℃。

试剂盒内容:产品说明:本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统在高盐状态下特异性地结合溶液中的质粒DNA。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

使用前请先在漂洗液中配置70%乙醇。

若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min溶解沉淀,摇匀后使用。

操作步骤:1. 裂解取1~5 mL菌液至EP管中,12000 rpm离心2分钟,尽量吸净上清。

在菌体沉淀中加入250 μl裂解液R1和2.5μl RNase A,吸打或振荡至彻底悬浮菌体;加入250 μl裂解液R2,立即温和颠倒离心管5-10次混匀,室温静置2-4 min;加入350 μl裂解液R3,立即温和颠倒离心管5-10次充分混匀(此时底部可能会出现大量白色絮状沉淀属于正常现象)。

置于离心机12000rpm,4℃离心5-10 min。

2. 结合尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中,加入等量异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠,颠倒混匀1 min,静置3 min。

将EP管置于磁铁上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。

3. 洗涤加入600 μL 漂洗液(使用前请预先配置70%乙醇),轻柔混匀1-2 min,然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;重复本步骤一次。

4. 洗脱室温晾干5~10 min至乙醇挥发完全,加入50~100 μL洗脱液,缓慢抽吸混匀,56℃水浴10 min。

每隔2~3 min轻摇EP管几下混匀。

然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下步实验。

质粒小量提取纯化试剂盒 说明书

质粒小量提取纯化试剂盒 说明书

质粒小量提取纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展,它有效结合了细胞裂解,杂质去除,及质粒纯化等功能。

无需过柱,不用酚氯仿抽提,直接获得高质量的质粒DNA。

我们独特的试剂系统能确保所提质粒DNA高产量,高质量。

本试剂纯度高,采用人性化设计,可按用户需求灵活制定容量大小。

产品特色●简单:添加GBpure Plasmid使细胞裂解,释放DNA,及杂质去除有效结合起来。

●方便:无需过柱,无需过滤,无需高效液相色谱法,无需超速离心机,无需特殊设备。

●无毒性:无酚、氯仿,无饱和正丁醇,无溴化乙锭,无氯化铯,无盐酸胍。

●快速:一分钟完成菌体沉淀,五分钟完成颗粒细菌碎片,10分钟完成沉淀质粒DNA,从培养细菌到提取质粒DNA只需30分钟。

●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂,可应用于所有分子生物学的操作。

●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行:miniprep, midiprep,或maxiprep;无需购买额外的试剂盒。

●高产量: 您可以从1 (mini), 10 (midi), 100 (maxi) ml的过夜培养基中获得大约5μg, 50 μg, 500 μg的DNA质粒。

●实惠:一盒GBpure Plasmid 售价 RMB 500/ 50 minipreps,即 RMB10/miniprep ,质优价廉。

产品内容与储存条件室温保存。

有效期12个月。

操作方法1.取1 ml过夜培养菌液,装入1.5 ml离心管中,室温12,000 × g离心1 min沉淀菌体,完全弃除上清。

2.加入300 μl Buffer P1,充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec,使其完全分散开,至无絮块存在。

3.加入300 μl Buffer P2,轻轻颠倒离心管3-5次,室温放置1 min,使细菌完全裂解,此时溶液应呈透明。

质粒小提

质粒小提

去内毒素质粒小提试剂盒使用说明书
1、过夜培养10-15ml菌液(抗生素抗性筛选)。

2、将菌液5000g离心10min,弃掉上清液,加入500ul Solution I(已添加RNase A),将沉
淀充分悬浮起来并转入新的2ml EP管。

3、加入500ul Solution II,轻轻颠倒7-10次,室温放置2min;加入250 ul 冰浴处理的Buffer
N3,轻轻颠倒数次。

12000g 离心10min。

4、将上清液转入新的1.5ml EP管,加入0.1倍体积的ETR Buffer,轻轻颠倒混匀后放入冰浴
中10min,在此期间需颠倒混合液数次。

此步后EP管中的液体会变澄清。

5、将冰浴后的液体放入42℃水浴锅中,维持5min;12000g 离心3min。

6、吸取上清液转入新的2ml EP管中,加入0.5倍的无水乙醇。

颠倒混匀后室温放置1-2min。

7、吸取700ul 乙醇混合液转入吸附柱中,10000g 离心1min。

此步需分三次将混合液转入
吸附柱中。

8、加500ul Buffer HB,10000g 离心1min。

9、加700ul DNA Wash Buffer ,10000g 离心1min。

重复此步骤一次。

10、将吸附柱放入收集管中,13000g 离心3min。

11、将吸附柱放入新的1.5ml EP管中,室温放置5min;加入80-100ul 去离子水,室温
放置2min,13000g 离心1min。

吸附柱平衡:向吸附柱加入200ul 的GPS Buffer,室温放置2min,12000g 离心2min。

质粒小抽试剂盒

质粒小抽试剂盒

质粒小抽试剂盒产品简介:本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料,能高效、专一吸附DNA。

以下操作步骤适用于从1-5 ml过夜培养的大肠杆菌LB(Luria-Bertani) 培养液中,快速提取多至20μg纯净的高拷贝质粒DNA。

使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选等。

注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1.溶液B1使用完毕后,请置于2 - 8℃保存。

(溶液B1 在使用前先加入RNaseA)2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液W中加入3倍体积的无水乙醇。

(例如向15 mL的漂洗液中加入45 mL的无水乙醇)。

3.使用前请先检查溶液B2是否有是否出现浑浊的白色结晶。

若有白色沉淀物,请置于37℃水浴锅中至完全澄清。

4.溶液B2和B3用完之后需及时盖紧瓶盖,室温保存。

5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

质粒抽提常见问题解答实验步骤1.取1-5 ml 过夜培养的菌液,12,000rpm离心1min收集2-4ml菌液于离心管中,尽量吸除上清。

(菌液较多时,可以多次离心收集菌体于一个离心管中。

)2.向留有菌体沉淀的离心管中加入200ul溶液B1,使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。

未彻底悬浮的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。

3.向离心管中加入250ul溶液B2,立即轻柔颠倒Array离心管5~7次,混匀溶液至溶液透明粘稠。

◆动作须温和,不可剧烈,每一管裂解时间不宜超过3min。

4.向离心管中加入350ul溶液B3,立即温和颠倒离心管数次至出现大量白色絮状沉淀后,12,000rpm离心15分钟。

◆B3 加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。

上清中有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5.小心将上清倒入或用移液器转移至吸附柱中(尽量不要吸入沉淀杂质),室温放置1 - 2分钟,10,000rpm离心1min。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

去内毒素质粒小提试剂盒说明书
试剂盒组成50次100次
RNase A 100ul 200ul
内毒素清除剂20ml 40ml
溶液P1 10ml 20ml
溶液P2 10ml 20ml
溶液P3 10ml 20ml
结合液30ml 60ml
漂洗液15ml 15ml×2
洗脱液10ml 20ml
吸附柱50个100个
收集管50个100个
说明书1份1份
注:该试剂盒置于室温(15℃-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2℃-8℃。

产品简介:
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,同时加入Solarbio公司特制的内毒素清除剂,可最大限度地去除内毒素。

从1-5ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA,提取率达85-90%。

使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高,可直接用于细胞转染等要求较高的试验,以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂,操作安全。

操作步骤:
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

溶液P1在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2-8℃保存。

如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离
心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液
器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入200ul溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意:混匀一定
要温和,以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏。

但也不要低于2min,以免裂解不充分。

4、向离心管中加入200ul溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色
絮状沉淀。

12000rpm离心10 min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。

注意:溶液P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。

如果上清中
还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5、加入上清1/5体积冰预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊,冰浴2min至溶液变
清亮。

6、37℃水浴5min,不时振荡,溶液又变浑浊。

12000rpm室温离心5min,溶液应分为两相,
上层水相含质粒DNA,下层油状相含内毒素。

7、将含质粒DNA的上层水相转移至新管,弃下层油状相,注意不要吸入油状相。

重复抽提
三次,即重复步骤5-7三次。

8、加入600ul结合液,充分混匀后加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心1min,倒
掉收集管中的废液。

如果一次加不完可分两次加。

9、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分
钟,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

10、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

11、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱
中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

12、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的
无内毒素洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。

13、为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置5min,
12000rpm离心1min。

注意事项:
1、使用前请先检查溶液P
2、溶液P3和结合液是否出现混浊,如有混浊现象,可在37℃水浴
中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。

2、洗脱缓冲液体积不应少于50ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有
影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

3、质粒DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。

由于质粒DNA本身的性质,清除程序
可导致部分质粒DNA丢失,所幸的是与清除内毒素的艰难相比质粒DNA更容易提取制备。

4、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘
烤,非挥发性水溶液可高压处理。

5、DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的
剪切力等因素有关。

回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。

OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

相关文档
最新文档