微生物的分离纯化

1.平板划线接种法：

目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成 单个菌落，以获得纯菌。 方法 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本

菌落
当单个或少数细菌在固 体培养基上大量繁殖时， 便会形成一个肉眼可见 的、具有一定形态结构 的子细胞群体，叫做菌 落。
分区划线生长现象
将菌液均匀涂布分散
37℃倒置培养
按浓度捆成一摞
恒温37℃培养
平板菌落计数
讨论
讨论
提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸 管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒 精灯火焰周围；等等。
实验原理
稀释平板分离法：
将待分离样品做系列稀释，使样品中的微生物细 胞充分分散。取合适稀释度的样品与培养基混合，培 养出现菌落。如稀释度适合在培养基平板上即可出现 的单个菌落。
平板划线分离法：
用无菌接种环挑取待分离材料，在平板培养基表 面划线稀释而获得单菌落的方法。
细菌的接种工具
接种针
接种环
涂布器
2.稀释涂布法
（1）系列稀释操作：
依次1mL，注意更换移液管
充分混匀
（2）涂布平板操作
稀释涂布平板法
得10-1 10-2, 10-3的菌悬液
系列稀释
1ml
25g或25mL 样品 1个225mL无菌水 2个9ml无菌水
2.稀释涂布法

倒平板，待平板冷却凝固后再加样
2.稀释涂布法

取菌悬液

讨论
2. 以免接种环温度太高，杀死菌种。
讨论
2. 以免接种环温度太高，杀死菌种。
3. 划线后，线条末端细菌的数目比线条起 始处要少，每次从上一次划线的末端开始， 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐 步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来 的菌落。
2.稀释涂布法
2.稀释涂布法
（1）系列稀释操作：
实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
（二）接种纯化大肠杆菌
实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
（二）接种纯化大肠杆菌 接种方法有：
实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
（二）接种纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法
模块2 微生物的纯培养技术 任务2 微生物的分离纯化
概念
在自然界中，微生物呈混合状态存在，要想获 得所需菌种，则必须把它们从中分离出来并加 以纯化培养。 分离：将特定的微生物个体从群体中或从混杂 的微生物群体中分离出来的技术叫作分离。 纯化：在特定环境中只让 1种来自同一祖先的 微生物群体生存的技术叫作纯化。

概念


分离技术主要是稀释和选择培养。 稀释：是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群 体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使 此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为平板划线 法和稀释涂布法。 选择培养：如果所要分离的微生物在混杂的微生物群 体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时，需要 结合使用选择培养法，即选用仅适合于所要分离的微 生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体，改变 群体中各类微生物的比例，以达到分离的目的。
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连续划线生长现象
1.平板划线法
讨论
每次使用接种环之前都要进行灼烧， 为什么？
讨论
1.操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上 可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧 接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残 留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直 接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的 增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便 得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死 接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染 操作者。