细菌的药物敏感性试验
细菌药物敏感试验执行标准和典型报告解读
细菌药物敏感试验执行标准和典型报告解读1. 引言细菌药物敏感试验，也称细菌药物敏感性试验或细菌敏感度试验，是临床微生物学中的一项重要内容。
它通过对细菌感染的病人样本进行试验，评估不同抗生素对细菌的敏感性，以确定最佳的抗生素治疗方案。
本文将全面评估细菌药物敏感试验的执行标准和典型报告解读，帮助大家更深入地了解这一重要的临床实验。
2. 细菌药物敏感试验执行标准在进行细菌药物敏感试验时，有一系列执行标准的要求需要满足。
必须采集来自病人临床样本的细菌，并在无菌条件下进行培养。
培养后，需要对细菌进行纯化和鉴定，以确保获得的细菌纯种。
接下来，根据临床样本中的细菌培养液，制备不同抗生素的浓度梯度，利用扩散法或微量培养法进行敏感性试验。
试验中必须包括阳性和阴性对照，确保实验结果的准确性。
3. 典型报告解读细菌药物敏感试验的典型报告通常包括细菌菌株的鉴定信息、不同抗生素的敏感性结果以及解释说明。
在报告中，每种抗生素都会根据细菌对其的敏感性被划分为敏感、中介和耐药三个等级。
解释说明部分将说明每种抗生素的敏感性结果，并结合临床数据，提供建议的治疗方案。
通过典型报告的解读，临床医生可以更好地选择最有效的抗生素治疗方案，提高治疗效果。
4. 个人观点和理解细菌药物敏感试验是临床微生物学中至关重要的一环，对于临床治疗具有重要的指导意义。
在执行标准要求和报告解读中，需要严格遵守规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
在个人看来，细菌药物敏感试验不仅需要有严格的技术操作，还需要理解临床背景和病人情况，结合临床实际制定治疗方案，才能更好地发挥其作用。
5. 总结和回顾细菌药物敏感试验的执行标准和典型报告解读对于临床治疗非常重要。
在执行标准中，关键是保证细菌培养的纯化和鉴定准确无误，以及抗生素敏感性试验的准确进行。
而在典型报告解读中，医生需要结合临床情况，选择最佳的抗生素治疗方案。
细菌药物敏感试验是临床微生物学中的一项重要内容，其准确性和可靠性直接关系到病人的治疗效果，因此需要高度重视。
四抗菌药物敏感性试验
四、抗菌药物敏感性试验（一）药敏试验的目的测定病原微生物对化学治疗药物敏感性的试验称为化疗药物敏感性试验（Drug sensitivity test），简称药敏试验。
药敏试验的主要目的是：①用于测定新的抗菌药物或制剂的抗菌谱；②对病灶分离菌进行流行病学调查，主要应用于测定细菌经过多年后敏感性的变化情况和地区特异性；③在临床治疗感染性疾病时，针对病原菌选择合适的首选药物品种。
（二）药敏试验的原理及种类药敏试验是通过培养基培养的细菌确定细菌对药物的敏感性方法。
将被检菌接种在适当的培养基上，然后加上不同种类或不同浓度的抗菌药物（或制剂），观察细菌生长发育的速度和程度。
用药后，细菌在培养基上停止生长并且死亡，抑菌圈清晰，说明细菌对药物敏感，药物表现有较强的杀菌作用；用药后，细菌停止生长，但液体培养基经过一定时间后还可能出现浑浊或固体培养基上的抑菌圈不清晰，说明细菌对药物比较敏感，预示药物对被检细菌只是起抑菌作用。
通常判定一种药物对细菌的杀菌或抑菌作用的强度指标是固体培养基中抑菌圈的大小，但这也不是绝对的，因为抑菌圈的大小与药物对培养基的渗透性是密切相关的。
药敏试验方法较多，但在原理上不外乎是稀释法和扩散法两大类。
而扩散法（包括纸片法、管碟法）通常适用于临床治疗选择药物。
（三）常用培养基制作法1．普通肉汤培养基牛肉浸膏 3.0克蛋白胨 10.0克氯化钠 5.0克蒸馏水 1000毫升放在三角烧瓶中，微温溶解后，调节pH值至7.4~7.6，煮沸10分钟，冷却后的pH值为7.2±0.2。
15磅压力下灭菌15分钟（115℃灭菌30分钟）即得。
本培养基可用作为固体、鉴别、选择等培养基制造的基础原料，大部分细菌都能在其中生长。
1．普通肉汤琼脂培养基照上述普通肉汤培养基的配方及制法，加入15~20克琼脂，加热溶解后，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
3．0.5%葡萄糖肉汤培养基蛋白胨 10克氯化钠 5克葡萄糖 5克牛肉浸膏 3克蒸馏水 1000毫升微温溶解后，调节pH值至弱碱性，煮沸后，加葡萄糖溶解，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
第4章抗菌药物敏感试验
第4章抗菌药物敏感试验一、需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验1.扩散法（K-B法）（1）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有待检菌的琼脂平板上，该点称为抗菌药源。
药物向周围扩散，形成了随着药源距离增加，琼脂中药物浓度递减的浓度梯度。
在药源周围可抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈即抑菌圈，其大小可以反映待检菌对测定药物的敏感性，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
（2）实验材料①培养基：采用水解酪蛋白（M-H）琼脂，pH为7.2，琼脂厚度4mm。
对生长条件要求高的细菌，如链球菌属细菌需加入5%脱纤维羊血，嗜血杆菌属细菌需加入1%血红蛋白（含Ⅴ因子）和1%Ⅹ因子复合物。
②抗菌药物纸片：选用直径为6.35mm，吸水量20μl的专用药敏纸片。
制备时取灭菌药敏纸片，经加样或浸泡药物溶液后冷冻干燥，置4℃保存备用，在有效期内使用。
③接种菌液挑取平板上形态相同的菌落4～5个，接种于3～5ml M-H肉汤中，于35℃中培养2～8h。
嗜血杆菌属和链球菌属细菌需用加血肉汤培养过夜。
用生理盐水或肉汤校正菌液至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×109/ml的含菌量）后在15min内接种。
（3）试验方法以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液（其浊度为0.5麦氏比浊标准），在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次平板旋转60°，最后沿平板内缘涂抹１周。
平板置室温干燥3～5min，后用无菌镊子或专用纸片分配器将含药纸片贴于琼脂表面。
纸片应贴得均匀，各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm。
直径为90mm的平板可贴6张纸片。
纸片贴牢后应避免再移动。
平板室温放置15min后倒置于35℃培养箱中培养16～18h后读取结果。
（4）结果解释平板置黑色背景上，从背面量取包括纸片直径在内的抑菌圈直径，单位为mm。
培养基中如果加有血液须打开皿盖从正面测量抑圈菌。
医院抗菌药物敏感性试验的技术要求(2022年版)
(2022年版)1范围 (2)2 术语和定义 (2)3 常规药敏试验的药物选择和报告 (4)4 药敏试验方法 (7)5 各种属细菌药敏试验 (12)6 质量控制(Quality control, QC) (17)7 商品化药敏试验检测系统的性能验证 (19)附录 A (资料性附录) 临床各种属细菌的药敏试验方法和试验条件 (23)附录 B (资料性附录) 不常见苛养菌和非苛养菌药敏试验折点 (27)1 范围本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求，包括常规药敏试验的药物选择和报告、药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。
本标准合用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。
2 术语和定义下列术语和定义合用于本文件。
2.1抗微生物药物敏感性试验 Antimicrobial susceptibility testing指检测微生物(本行业标准特指细菌)对抗微生物药物(本行业标准特指抗菌药物)的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。
2.2最低抑菌浓度 Minimal inhibitory concentration；MIC指在琼脂或者肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。
2.3折点 Breakpoint能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度(MIC)或者抑菌圈直径(mm)的数值。
2.3.1敏感 Susceptible；S当抗菌药物对分离株的MIC值或者抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。
2.3.2中介 Intermediate； I当菌株的MIC值或者抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。
该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或者在药物生理浓集的部位，临床治疗可能有效。
抗菌药物敏感性试验执行标准
抗菌药物敏感性试验执行标准抗菌药物敏感性试验是临床微生物学中非常重要的一项实验，它可以帮助医生选择最有效的抗菌药物来治疗感染性疾病。
执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。
下面将介绍抗菌药物敏感性试验执行标准的相关内容。
首先，进行抗菌药物敏感性试验前，需要准备好所需的培养基、试验材料和各种试剂。
同时，要做好实验室的消毒和无菌操作，以确保试验的准确性和可靠性。
在进行试验时，需要按照严格的操作规程进行。
首先，要准备好待测菌株的悬浮液，然后按照一定比例将其接种到含有不同浓度抗菌药物的琼脂平板上。
接种后，要在恒温培养箱中进行培养，培养时间一般为16-18小时。
培养结束后，需要观察菌落的生长情况，并进行相关的数据记录和分析。
根据菌落的生长情况和抗菌药物的浓度，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性。
在记录和分析数据时，要注意细致入微，确保数据的准确性和可靠性。
在执行标准中，对试验结果的解释和判定也非常重要。
根据试验结果，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性、耐药性或者中间敏感性。
这些判定对于临床治疗具有指导意义，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。
此外，在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除。
比如，培养条件、试剂质量、操作技术等都可能对试验结果产生影响，需要在试验过程中进行严格的控制和调节。
总的来说，抗菌药物敏感性试验执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。
在实验过程中，需要严格按照操作规程进行，确保试验过程的准确性和可靠性。
同时，对试验结果的解释和判定也非常重要，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。
在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除，以确保试验结果的准确性和可靠性。
细菌药敏试验
细菌药敏试验实训细菌的药物敏感性试验教学⽬标使学⽣掌握细菌药物敏感性试验的操作⽅法，能够利⽤本试验⽅法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。
材料准备1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、⽆菌试管及吸管、镊⼦、接种环、酒精灯等。
2．试剂：蒸馏⽔。
3．培养基：普通琼脂平板。
4．菌种：⾦黄⾊葡萄球菌及⼤肠杆菌的固体培养物。
5．药品：链霉素、⾦霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。
6．硫酸钡标准管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，⽤前充分振荡。
⽅法步骤将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的⽣长，从⽽出现抑菌环。
由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的⼤⼩，判定细菌对药物的敏感度。
（⼀）含药纸⽚的制备1．滤纸⽚最好选⽤新华1号定性滤纸，⽤打孔机打成直径6mm的滤纸⽚，放在⼩瓶中或平⽫中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃⼲燥箱内烘⼲备⽤。
2．药液的配制⽤⽆菌蒸馏⽔将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、⾦霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000µg/ml。
3．含药纸⽚的制备将灭菌的滤纸⽚⽤⽆菌的镊⼦摊布于灭菌平⽫中，按每张滤纸⽚饱和吸⽔量为0.01ml计算，50张滤纸⽚加⼊药液0.5ml。
要不时翻动，使纸⽚充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘⼲备⽤。
对青霉素、⾦霉素纸⽚的⼲燥宜采⽤低温真空⼲燥法，⼲燥后⽴即放⼊瓶中加塞，放⼲燥器内或置-20℃冰箱中保存。
纸⽚的有效期⼀般为4~6个⽉。
（⼆）测验⽅法1．钩取⾦黄⾊葡萄球菌和⼤肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于⾁汤培养基中，37℃培养4~6h。
2．⽤灭菌⽣理盐⽔稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。
装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应⽤前需充分振动。
3．⽤⽆菌棉拭⼦蘸取上述⾁汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表⾯均匀涂抹。
nccls细菌药物敏感试验判定标准
nccls细菌药物敏感试验判定标准
NCCLS（National Committee for Clinical Laboratory Standards）细菌药物敏感试验判定标准是NCCLS提出的一套细菌药物敏
感试验判定标准，用于评估细菌对抗菌药物的敏感性。
该标准主要涉及细菌的敏感性等级、细菌的敏感性报告和药物敏感性测定方法等。
NCCLS细菌药物敏感试验判定标准的敏感性等级包括：非常
敏感（S）、敏感（I）、耐药（R）和非常耐药（V）。
其中，非常敏感（S）表示细菌在抗菌药物的抑制浓度低于最小抑制
浓度（MIC）的4倍以下时，可以被抑制；敏感（I）表示细
菌在抗菌药物的抑制浓度低于最小抑制浓度（MIC）的2倍以
下时，可以被抑制；耐药（R）表示细菌在抗菌药物的抑制浓
度低于最小抑制浓度（MIC）的2倍以上时，可以被抑制；非
常耐药（V）表示细菌在抗菌药物的抑制浓度低于最小抑制浓
度（MIC）的4倍以上时，可以被抑制。
NCCLS细菌药物敏感试验判定标准的细菌敏感性报告主要由
药物敏感性测定方法（如药物抑制浓度法、可溶性药物抑制浓度法等）得出的最小抑制浓度（MIC）和敏感性等级（S、I、
R和V）组成。
细菌对药物的敏感试验
细菌对药物的敏感试验●考点临床常用抗菌药物◇ 需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验◇ 厌氧菌体外药敏试验方法◇ 结核分枝杆菌体外药敏试验方法◇ 真菌体外药敏试验方法◇ 耐药菌株的监测临床常用抗菌药物简介一、抗菌药物的种类及作用机制1.青霉素类青霉素与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制细菌细胞壁合成（1）天然青霉素种类：青霉素G、青霉素V作用于不产青霉素酶G+球菌、G-球菌、厌氧菌（2）耐青霉素酶青霉素种类：甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林作用于产青霉素酶的葡萄球菌（3）广谱青霉素1）氨基组青霉素：氨苄西林、阿莫西林作用于青霉素敏感的细菌、大部分大肠埃希菌、奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等G-杆菌2）羧基组青霉素：羧苄西林、替卡西林作用于产β-内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌3）脲基组青霉素：美洛西林、阿洛西林、哌拉西林作用于产β-内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌2.头孢菌素类头孢菌素与青霉素结合蛋白结合，发挥抑菌和杀菌效果G+球菌：一代＞二代＞三代G-杆菌：三代＞二代＞一代第四代头孢菌素作用几乎相同，具有抗假单胞菌的作用（1）第一代头孢菌素：有头孢噻啶、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢唑林、头孢拉定、头孢吡硫、头孢羟氨苄。
（2）第二代头孢菌素：有头孢孟多、头孢呋辛、头孢尼西、头孢雷特、头孢克洛、头孢丙烯、氯碳头孢。
（3）第三代头孢菌素：有头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑肟、头孢哌酮、头孢克肟、头孢布烯、头孢地尼、头孢泊肟酯。
（4）第四代头孢菌素：有头孢匹罗、头孢噻利、头孢吡肟和头孢吡普。
3.其他β-内酰胺类单环类氨曲南和卡芦莫南对G-作用强，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌对G+和厌氧菌无作用拉氧头孢类抗菌谱广，杀菌作用强，对产β-内酰胺的G-有很强的抗菌作用，对产酶的金黄色葡萄球菌也具有一定的抗菌活性。
头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑。
对G+有较好的抗菌活性，对厌氧菌有高度抗菌活性，但对非发酵菌无效。
抗菌药物敏感性试验(药敏试验)PPT课件
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
细菌对抗菌药物的敏感试验
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细菌对抗菌药物的敏感试验
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 2、抑制蛋白质的转录或合成
l 由于真核生物和原核生物核糖体的差异， 真核生物的核糖体主要是80 S，由60 S和 40 S两个亚基组成，而原核生物的核糖体 是70 S，主要由30 S和50 S两个亚基组成。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 2 、靶位的改变
l 由于抗菌药作用的靶位(如核糖体和核蛋 白)发生突变或被细菌产生的某种酶修饰 而使抗菌药物无法发挥作用，以及抗菌药 的作用靶位(如青霉素结合蛋白和DNA回 旋酶)结构发生改变而使之与抗生素的亲 和力下降，这种耐药机制在细菌耐药中普 遍存在。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 结果观察：含最小药物量仍呈明显不混 浊的一管所含的药物浓度即为该抗菌药 物 对 试 验 菌 株 的 最 小 抑 菌 浓 度 （ MIC ） 。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
2、血药浓度（血清中抗菌药 物的浓度）
l 在使用各类抗菌药物时，常常会遇到 的一个重要问题，就是血药浓度。例如： 口服抗菌药物总是经肠道逐渐吸收入血 的。因此，血液中的药物浓度是从无到 有随时间的延长逐渐增高的。即使静脉 注射抗菌药物，因存在着首过效应（第 一关卡效应）和肾脏的排泄作用，血药 浓度也是随着注射的次数而逐渐增高的。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 三、细菌耐药性产生的机理
l 细菌的耐药性机理主要有生化机理和基因 机理两个方面：
l (一）、生化机理：
l 1、细菌产生破坏药物结构的酶
抗菌药物敏感性试验
面向外。 5)孵育，置平板于35℃孵育16-24h。
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6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交处的刻度即 为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。
椭圆形细菌生 长抑制区
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抑菌浓度指数（FICI）
FICI ＝
A药联合时的MIC A药单测的MIC
＋
B药联合时的MIC B药单测的Hale Waihona Puke ICFICI ﹤1为协同作用；
FICI =1为累加作用；
FICI﹥1 为拮抗或无关作用，无关时药物组合的MIC 等于浓度高的药物的MIC。
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2、抗菌药物的杀菌活性 （1）最低杀菌浓度（MBC）
11
（5）孵育：放于35℃孵箱中，通常于16-18h后，测量抑菌环直径。
12
（6）测量抑菌环直径
13
（7）与解释标准核对得出结论 敏感(susceptible, S)：所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感 染部位可达到的药物浓度所抑制。 耐药 (resistant, R)：所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药 物浓度所抑制。
时的抗菌效果，其结果可以表现为协同、拮抗、累加和无关。
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2）部分抑菌浓度指数（FICI）测定： 测定A、B两种药的MIC值，根据MIC值将两药配成不同浓度的
含药肉汤，将各浓度的A药和B药肉汤两两等量混合，组成棋盘模式 不同药物组合的含药肉汤。观察孵育后各行列中不长菌的最低药物 浓度管，即为药物组合的MIC值。
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（2）时间杀菌试验（time-kill assay）
1）概念：是指能够使试验菌减少99.9%以上的最低药物浓度。 2）操作方法：分别取高于MIC值的各管中的菌药混合肉汤划线接种于
细菌对抗菌药物敏感性的检验
细菌对抗菌药物敏感性的检验1、扩散法：琼脂加上细菌所需要的各种养料，将培养基融化后，倒入无菌培养皿中，冷却，凝成一个平面或叫平板(平皿)。
这时将含有少数细菌的菌液涂到平板上，培养后细菌就会分别在平皿上繁殖，如果在平皿的培养基内事先加入抗生素纸片，由于药物在培养基中扩散，起了抑(杀)菌作用，形成了不长菌落的抑制圈。
抑制圈的大小，反映某一抗生素对该菌抑菌的程度。
K-B法：最常用的药敏试验是WHO推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法(K-B法)。
该法将药敏试验抑菌环大小分为四个等级，即：敏感、中度敏感、中介度、耐药。
由于中介度介于敏感和耐药之间，所以不予报告，故化验单上只报告敏感、中度敏感或耐药。
【临床意义】1．敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外。
2．中度敏感：表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在药物被生理性浓集的部位被抑制，如β-内酰胺类药物。
3．中介度：这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误。
抑菌环落入中介度范围，意义不明确，如果没有其他可替代的药物，应重复做药敏试验，或以稀释法测定MIC。
4．耐药：被测菌不能被常用剂量所达到组织内或血液中的抗生素所抑制。
5．最低抑菌浓度：抑制被测菌的最低药物浓度。
6．最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需的最低浓度。
联合药敏试验：【临床意义】常用于严重感染时对两种或两种以上抗生素的选择。
常用K-B法和方阵棋盘稀释法。
结果以部分抑菌浓度FIC的指数报告。
1．FIC指数＜0．5，为协同作用。
即两种抗菌药物联合后的药效大于同样浓度的两种药物抗菌作用的总和。
2.FIC指数0．5～1，为相加作用，即两种药物联合后其活性等于两种药物抗菌作用的总和。
3．FIC指数1～2，为无关作用，即联合药物的活性与单独的抗菌作用相同。
4．FIC指数＞2，为拮抗作用，即两种药物联合后的抗菌活性小于单独一种药物的抗菌作用。
细菌的药物敏感试验
（二）琼脂稀释法
原 理 琼脂选择法是将药物混匀于琼脂培养基中， 配制含不同浓度药物平板，使用多头接种器接种 细菌，经孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌 生长的琼脂平板所含药物浓度测得 MIC。 结果判断 将平板置于暗色、无反光表面上判断试 验终点，以抑制细菌生长的药物稀释度为终点浓 度（磺胺可见少许散在细菌生长）。
结果报告 可用 MIC（μg/ml）或用敏感S）、 （中介（I）和耐药（R）报告。
第22页，共65页。
纸片琼脂扩散法
（一）试验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接
种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药 物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围 扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑 菌浓度范围内细菌的生长被抑制，从而形 成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。
• 所有β－内酰胺类抗生素都能抑制细胞壁粘肽合成酶，即 青霉素结合蛋白（penicillin binding proteins ，PBPs），从 而阻碍细胞壁粘肽合成，使细菌胞壁缺损
第4页，共65页。
四、氨基糖苷类抗生素
可干扰细菌蛋白质合成,主用于对革兰氏阴性菌、绿脓 杆菌等感染 的治疗 按其来源分为： ①由链霉菌属发酵滤液提取获得，有链霉素、卡那
使用的抗生素，可在下列情况下使用：①对A组 同类抗生素耐药；②标本来源不同时，如三代头
孢菌素使用于脑脊液中的肠杆菌，磺胺甲恶唑使
用于尿道分离的细菌；③多种微生物感染；④多
部位感染；⑤感染流行的控制；⑤对A组抗生素
过敏、耐受或无反应。
第12页，共65页。
C组 药物用于对A组药物耐药的流行菌株或 对A组药物过敏的病人和某些不常见的 细菌（如肠外分离的沙门菌属或耐万 古霉素肠球菌）。
常用的有：红霉素、柱晶白霉素、麦迪霉素、 乙酰螺旋霉素。
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细菌的药物敏感性试验
目的要求掌握圆纸片扩散法测定细菌对抗生素等药物的敏感试验的操作方法和结果判定，明确药敏试验在实际生产中的应用。
仪器及材料接种环、酒精灯、试管架、眼科镊子、温箱、普通琼脂平板、抗菌药物纸片、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的培养物。
方法与步骤
1．制备固体培养基磺胺类药物用无蛋白胨的培养基。
2．涂菌或涂病料无菌操作取细菌培养物或病料，在
培养基平板上均匀密集划线。
3．放置药物纸片用灭菌小镊子夹取抗菌药物圆纸片
（每次取一片），轻轻贴在已接种细菌的琼脂培养基表面，
一次放好，不能移动，放好后轻压纸片以固定。
纸片间的距离：约为2-4cm。
纸片距平皿边缘的距离：约为1.5cm。
4.培养、观察平皿倒置，37℃温箱中培养18～24h，观察结果。
根据纸片周围有无抑菌圈及其直径大小，按下列标准确定细菌对抗生素等药物的敏感度及药物间的相互关系。
细菌对不同抗菌药物敏感度标准
药物名称抑菌圈直径（mm）敏感度
青霉素（50μg/ml）无抑菌圈
＜10
11～26
＞26
不敏感
低度敏感
中度敏感
高度敏感
链霉素（500μg/ml）无抑菌圈
＜10
11～15
＞15
不敏感
低度敏感
中度敏感
高度敏感
新霉素（300μg/ml）无抑菌圈
＜10
11～25
＞25
不敏感
低度敏感
中度敏感
高度敏感
附：干燥抗菌纸片的制备
取直径6mm的无菌滤纸片，浸于一定浓度的抗菌药液中，一般每毫升抗菌药液中，装滤纸片100片，浸泡1～2h后，37℃干燥或真空干燥，密封冷藏备用，药剂可维持1～2月有效。