Countstar+细胞计数仪操作手册

Countstar细胞计数仪操作手册

计数仪的标准操作程序和细胞计数和活率检测标准操作程序

一、启动Cedex XS 系统

1. 打开计数仪:按下计数仪上的ON/OFF按钮,按钮亮起蓝色光表示仪器已打开;

2. 打开Cedex XS 控制软件:

①打开配套电脑,进入Windows操作系统;

②双击桌面上的Cedex XS 图标,进入Cedex XS 控制中心;

3. 调节白平衡:首次安装Cedex XS系统或移动系统后必须调节白平衡。

①把样品板支架拉出;

②点击Cedex XS 控制中心中的HWM键,打开硬件管理对话框;

③点击WHITE BALANCE键进行调节,结果将自动保存;

④调节完毕后关闭对话框。

二、细胞计数与活性测定

1. 样品制备

①用培养基或PBS将样品稀释至细胞数不高于5×106/ml;

②使用0.2%台盼蓝染色(一般为10μl、1:1):台盼蓝对血清蛋白亲和力更强,若大量血清蛋白导致图像背景过暗,可以将样品离心,用无蛋白培养基或生理盐水悬浮细胞进行计数;

③将细胞悬液充分混匀;

④用移液枪取细胞悬液加入样品板,每槽10μl;可以一次测定八槽,也可测定单槽。

2. 进样:样品板有八个槽,一次可测定四个样品槽。

①拉出样品板支架;

②加有样品方向朝里,将样品板放上支架;

③将支架推入计数仪,有少许卡扣感表示已就位:样品槽位置指示灯表示样品测定进程。

三、软件设置:

1. 打开测定界面:在Cedex XS 控制中心点击MEASURE键,进入测定界面;

2. 设置样品参数:

①在样品参数栏输入样品名(Reactor ID),可在下拉栏选择或手动输入,最多可输入21个字符;

②输入样品编号(Sample ID),最多21个字符;若样品名已存在,软件将自动延续样品编号,也可手动重新输入编号;

③软件将自动记录日期和时间,表明样品测定的实际时间;

④点击MI×键,出现进样体积对话框;

⑤输入参数:样品量(Sample V olume)、台盼蓝用量(Dye Volume)、稀释剂用量(Diluent V olume);

⑥系统将自动计算稀释比例等,可以手动输入注释(Comments)。

3. 设置测定与分析参数:

①在分析参数栏选择需要的精度水平(Precision):精度水平表示单次测定样品数,最多8个;

②选择细胞类型,默认的细胞类型有:标准大小细胞直径约12-14μm;可识别对象;小细胞直径约8μm;

③系统自动添加系统名和测定时间。

四、开始测定

①点击START MEASUREMENT键;

②测定多个样品时,在弹出对话框后将样品板支架推进一格,点击确定自动开始测定程序;

③重复上一步骤测定其他样品;

④若测定样品多于四个,可将支架抽出后样品板调转方向重新插入进行上述测定程序;

⑤全部测定结束后关闭对话框。

五、计数结果

1. 在测定界面获得结果

测定程序完成后,结果在测定界面的数据栏(Result Data)显示,数据栏有两个表格:第一个表格显示总细胞数,第二个表格显示单次测定中每个样品室的测定结果。

两个表中分别列出以下参数:

●Viable Cell Conc.: 活细胞浓度[×105/mL]

●Total Cell Conc.: 总细胞浓度[×105/mL]

●Viability (%): 细胞总数中活细胞的百分比

●Total Cell Count: 测定总细胞数

●Avg Compactness:活细胞与理想状态细胞形状的平均变异程度(1表示细胞形状均一)●Avg Diameter: 测定活细胞平均直径[μm]

●Aggregate Rate (%):成团细胞占总细胞数的比值

●Dead Cell Conc.: 死细胞浓度[×105/mL]

●Viable Cell Count: 测定活细胞数

●Dead Cell Count: 测定死细胞数

●Total Object Count: 全部测定数

●Total Object Conc.: 总浓度[×105/mL]

●Av g Object Diameter: 测定总群体平均直径[μm]

●Avg Object Compactness: 所有测定群体与理想状态细胞形状的平均变异

程度。

在单个样品结果表中,会有三项列在表头:

●Image No.: 图像编号

●Valid: 表示图像质量是否能够达到分析要求

●Excluded: 复选框以排除或包括该样品在总结果表中的显示

2. 在柱形图中看结果:此结果不包括已经由上述复选框选择排除的计数结果

①在测定界面点击HISTOGRAMS键,打开柱形图对话框;

②可选择以下项目:

●成团细胞柱形图

●细胞直径柱形图

●细胞形状均一度柱形图

●总群直径柱形图

六、查看图像

单副图像:在测定界面的右侧显示的是选定的单个样品测定结果所对应的图像;

多幅图像:在图像显示区点击VIEW IMAGES键出现图像列表,可显示单次测定

的多个样品。

1. 在图像框查看图像

图像框提供放大图像,系统自动分析活细胞与死细胞,并用绿色圈和红色圈分别标出,还可以使用下列功能:

●双击图像可打开大图,调节对比、亮度和焦距;

●显示或隐藏细胞的圈标记;

●浏览前后样品的图像;

●按住左键圈定可将选定图像放大或自定义尺寸,右键点击图像进行保存或复制。

七、系统优化:调节白平衡

若图像亮度不均衡,则需调节白平衡,影响图像亮度的调节。

①把载物支架拉出;

②点击Cedex XS 控制中心中的HWM键,打开硬件管理对话框;

③点击WHITE BALANCE键进行调节,结果将自动保存;

④调节完毕后关闭对话框。

八、结果列表

1. 点击Cedex XS 控制中心中的LIST键,或在Measurements菜单中选择Measurement List,可选择以下功能:

●查找结果

●浏览总体的测定数据