流式细胞仪中文手册
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Partec CyFlow® Space 是什么？
CyFlow® Space 有哪些用途？
本手册涉及内容？ 其他要用到的说明书？
Partec CyFlow® Space 是一台配臵全面的桌面式/ 便携式流式细胞仪（FCM）。它的特色即设计理 念是可以配备 3 个激光光源，和 1 至 9 个光学通 道（参数），通过简单地更换光学滤片或镜片可 以满足任何实验的需求。 CyFlow® Space 在台式电脑或笔记本电脑下运 行，数据采集、仪器控制和数据分析均由 FloMax®软件控制并执行。
附录…………………………………………………………………………………………………………21 安装要求……………………………………………………………………………………………………21 仪器安装--概要……………………………………………………………………………………………22 仪器安装--顺序……………………………………………………………………………………………23 流动室精细校准……………………………………………………………………………………………24 流动室………………………………………………………………………………………………………25 维护和服务…………………………………………………………………………………………………26 运输和储存…………………………………………………………………………………………………26 污染物处理…………………………………………………………………………………………………26 安全使用激光器的说明……………………………………………………………………………………27 CyFlow Space 技术规格表…………………………………………………………………………………28
3. 实时数据处理和结果 每一参数的光强度，以及伴随的目标颗粒数可在 1～216 或 65536 个通道中被收集，当细胞经过流 动室时，其信息将被软件实时收集。单参数直方 图将显示光通道内的细胞数。双参数点图将显示 两种细胞特性间的关联程度。
3. 荧光信号显示在直方图和散点图中，并在每 个图中进行分析。
现在 CyFlow® Space 已完成标本运行的准备。
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CyFlow® Space 仪器操作手册
危险 警告：生物安全性 废液是携带污染的，对人体是有害的，请每次排空废液后在废液桶内注入 25ml Partec 原厂清洁液 （Hypochlorite Solution），如果废液桶内液体溅到您的皮肤上，请立即用肥皂或其它人体清洗液清洗。
仪器操作手册
本手册根据标准配置的 CyFlow® Space 编写而成，具体内容根据实际配置 可能有所偏差，手册内容应以实际配置为准。
CyFlow Space 仪器操作手册
内容
CyFlow Space 介绍…………………………………………………………………………………………4 典型分析步骤………………………………………………………………………………………………5 基本操作……………………………………………………………………………………………………6 启动 CyFlow Space………………………………………………………………………………………6 多激光测量………………………………………………………………………………………………7 开始检测……………………………………………………………………………………………………8 关闭 CyFlow…………………………………………………………………………………………………9 液量绝对计数（定量）----概述…………………………………………………………………………10 如何执行液量绝对计数……………………………………………………………………………………12 光路几何示意图……………………………………………………………………………………………13 光路图标准设置----参数…………………………………………………………………………………14 仪器设置……………………………………………………………………………………………………15 参数设置对话框：脉冲信号高度、面积和宽度…………………………………………………………16 触发…………………………………………………………………………………………………………17 光电倍增管（PMT）电压，增益和对数放大………………………………………………………………18 样本进样速度………………………………………………………………………………………………19 阈值：L-L（低值）和 U-L（高值）………………………………………………………………………20
怎样在 Windows®下工作，请 参考手册《微软 Windows 介 绍》或相关书籍。
1. 检查鞘液和废液瓶 确认鞘液瓶已充满不超过 1600ml 清洁鞘液。该 鞘液已过滤，并且与鞘液瓶相连的管路内无气泡 存在。最后将鞘液瓶密封。 确认废液瓶已经排空。 2. 开机 CyFlow® Space 可在 100～240V 交流电下操作。 打开仪器左侧的主电源开关，并随后打开 488nm 激光器开关，488nm 激光器开关在主电源开关旁 边。 其它激光器开关均由软件控制（细节请参考下一 页）。
在标准的配臵中，所有颗粒将首先通过 488nm 激光器－引导激光束，然后依次通过第二和第三 激光光束（如果存在）。
因此，所有参数的获取除第一激光外均需要延迟 时间，详细内容请参照参数设臵对话框（图 5， 第 16 页）。
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CyFlow® Space 仪器操作手册 开始测量
注意： 如何更改仪器设臵请查看 FloMax® 获取和仪器控制手 册。
CyFlow® Space 仪器操作说明书包括 CyFlow ®Space 仪器的基本操作和维护。但不包含与软 件相关的细节，不同仪器的配套软件的使用方法 也不同。
FlowMax® –数据获取和仪器控制，涉及仪器控 制和多参数数据获取。
FlowMax® –数据分析，涉及在线和离线数据分 析的各个方面。
CyFlow® Space 免费配套软件，提供常规的自动 化操作，并能灵活应用在任何流式细胞术的各种 研究过程中。 这些用途包括： 免疫分型的常规和科研应用 血细胞分析、HIV 监测 白细胞计数、比例分析 微生物分析 发酵控制 浓度分析＋绝对计数定量分析 细胞大小和荧光分布分析
用途注解、指导和维修手册–用于学习起步，包 括如何达到最佳结果的提示。
操作 CyFlow® Space 前应该具备哪些知识？
阅读本手册将使您掌握了流式细胞仪的基本知 识。但最好有熟练的流式细胞仪操作人员在旁随 时辅助您。另外，从流式细胞仪的基本书籍中也 可获得帮助。（例如：Howard M. Shapiro, Practical Flow Cytometry. Wiley 2002）
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CyFlow® Space 仪器操作手册
Partec 分析过程的典型步骤
1. 细胞在悬浮液中通过不同的荧光标记染色而 被分离。
1. 制备和染色 对于流式细胞仪分析，细胞必须在悬浮液中彼此 离散。一般，如果他们自身不能产生足够的光信 号，则需要一种或更多荧光染色剂对其标记，荧 光分子被目标细胞物质吸收，如 CD4-,CD45-抗 体与白细胞表面抗原结合。荧光染料结合率与细 胞表面抗原的多少成正比。充分准备适合的试剂 是准确分析的必要条件。通过检查荧光显微镜的 染色情况可以解决准备过程中出现的问题。
4. 细胞绝对计数 由于 CyFlow® Space 可以分析到细胞悬液中的 所有细胞，并能同时精确监控样本流体积，它能 完成分析过程中的体积计数，即测定任意细胞亚 群浓度，并定义细胞亚群，其浓度可在后期从文 件夹载入数据后再进行分析（即进行离线分析）。
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CyFlow® Space 仪器操作手册
当样本管从样本槽中被取下 后，仪器的生物安全系统自动 启动，目的:1.为了避免液体从 样品管中滴出。2.为了避免样 本间的交叉污染。
1. 确认流式细胞仪已完成分析准备，操作软件 已完成标本运行准备。
2. 依照应用注解或操作规程准备标本，为了开 展绝对计数，请在样本管中加入最少 830ul、最 多 2.8ml 样本，如果样本少于 830ul，请用 PBS 或鞘液进行稀释，并记下稀释倍数。
3. 调整 488nm 激光器的输出功率（仅限于 200mw 激光器）。 200mw 激光器的功率调节范围在 50～200mw 之 间，如需调整功率，请双击如左侧显示的图标 （488－200） 改变功率请输入：
P=功率数值，然后按确认键 查询当前功率值请输入：
？P，然后按确认键
4. 打开附属装臵 打开打印机。 5. 打开计算机 最后打开计算机电源开关。大约几十秒钟后，出 现 Windows®桌面。 6. 启动仪器操作软件 移动鼠标按钮至 FloMax®, 或其他仪器控制图 标。鼠标左键双击图标。几秒钟后，显示―Flomax® Welcome Window (FloMax®欢迎窗口)‖。此时， CyFlow® Space 开始进行初始化，并自动读取上 次使用的仪器设臵。 点确定，显示空直方图。 7. 清洗 将运行速度调到 4。运行 1.6ml partec 原厂绿色 清洗液（Cleaning Slolution），再运行 1.6ml 蒸 馏水，最后依次点击 4 次―清洗（Clean）‖按钮。
2. 激光器发出来的光照到细胞表面，细胞被照 射后散射出荧光和散射光。
2. 流式细胞仪分析 细胞逐一经过流动室时，单独接受激光的照射。 由于激发效应，荧光分子发出有独特波长的荧光 （发射波长谱）。通过滤光片，该荧光束分解成 不同波长范围范围。针对细胞个体分析其波长范 围的强度。
除荧光外，还同时测量每个细胞的物理光强度。 散 射 光 在 光 源前 向 角 （ FSC ） 和 侧向 角 测量 （SSC）。散射光强度代表细胞的大小和形态。 散射光用于荧光分析前确认细胞，但细胞也可于 散射光特性分析前由荧光确认。
基本操作——启动 CyFlow® Space
注意： 关于鞘液，您可以使用 Patec 生产的原装鞘液，也可以使用 自己制备的鞘液。 制备鞘液，将蒸馏水注入玻璃 瓶或三角瓶，同时用小孔径 （＜0.2μm）滤网过滤，然后 用真空泵（如水泵）抽去水中 气体。将瓶中液体摇匀约 15 分钟。 记住：您分析的颗粒越小，越 要求严格清洁鞘液。 注意：要至少每周或每次使用 前更换一次鞘液。
Partec 推荐使用体外诊断试剂 IVD Partec CyFlow Space 型流式细胞仪符合欧洲 98/97/EC 标准，已经取得欧 洲 CE 认证。
○C 2007 Partec GmbH Otto-Hahn-Str.32 D-48161 Germany
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CyFlow® Space 仪器操作手册 CyFlow® Space 介绍
488nm 激光光源由仪器左侧的开关单独控制，其 它激光光源由软件控制：
在软件上列的菜单中选择“获取”，根据需要点 击“第二激光器开关”或“第三激光器开关”， “√”表示激光器被打开，第二激光器开关控制 红色激光器（如果存在），第三激光器开关控制 UV 或紫色或其它激光器（如果存在）。
激光器的开关状态将被自动保存在仪器设定值 文件中（请参考 FloMax®－获取和仪器控制手 册）。
多激光测量
注意 激光器的调整必须由 partec 工程师或您所 在地经销商完成。
源自文库
CyFlow® Space 根据用户的需求可以最多安装 3 个激光光源。因此，您目前使用的设备可能与其 它同型号设备的配臵不同。如需了解详细情况请 与 partec 或您所在地的经销商联系。
为了将不同光源间的补偿减少到最小程度，从不 同激光发出的光束与流动室相交与不同的位臵。 CyFlow® Space 支持任意两个激光光束间的补偿 （当使用 FloMax® 2.4 或 2.5 版本时）或 3 激光 之间的补偿（当使用 FloMax® 3.0 版本时）。 488nm 是补偿的主激光光源，总是被默认为第 1 点。附加的其它激光光源被定位于第 2 点和第 3 点。
CyFlow® Space 有哪些用途？
本手册涉及内容？ 其他要用到的说明书？
Partec CyFlow® Space 是一台配臵全面的桌面式/ 便携式流式细胞仪（FCM）。它的特色即设计理 念是可以配备 3 个激光光源，和 1 至 9 个光学通 道（参数），通过简单地更换光学滤片或镜片可 以满足任何实验的需求。 CyFlow® Space 在台式电脑或笔记本电脑下运 行，数据采集、仪器控制和数据分析均由 FloMax®软件控制并执行。
附录…………………………………………………………………………………………………………21 安装要求……………………………………………………………………………………………………21 仪器安装--概要……………………………………………………………………………………………22 仪器安装--顺序……………………………………………………………………………………………23 流动室精细校准……………………………………………………………………………………………24 流动室………………………………………………………………………………………………………25 维护和服务…………………………………………………………………………………………………26 运输和储存…………………………………………………………………………………………………26 污染物处理…………………………………………………………………………………………………26 安全使用激光器的说明……………………………………………………………………………………27 CyFlow Space 技术规格表…………………………………………………………………………………28
3. 实时数据处理和结果 每一参数的光强度，以及伴随的目标颗粒数可在 1～216 或 65536 个通道中被收集，当细胞经过流 动室时，其信息将被软件实时收集。单参数直方 图将显示光通道内的细胞数。双参数点图将显示 两种细胞特性间的关联程度。
3. 荧光信号显示在直方图和散点图中，并在每 个图中进行分析。
现在 CyFlow® Space 已完成标本运行的准备。
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CyFlow® Space 仪器操作手册
危险 警告：生物安全性 废液是携带污染的，对人体是有害的，请每次排空废液后在废液桶内注入 25ml Partec 原厂清洁液 （Hypochlorite Solution），如果废液桶内液体溅到您的皮肤上，请立即用肥皂或其它人体清洗液清洗。
仪器操作手册
本手册根据标准配置的 CyFlow® Space 编写而成，具体内容根据实际配置 可能有所偏差，手册内容应以实际配置为准。
CyFlow Space 仪器操作手册
内容
CyFlow Space 介绍…………………………………………………………………………………………4 典型分析步骤………………………………………………………………………………………………5 基本操作……………………………………………………………………………………………………6 启动 CyFlow Space………………………………………………………………………………………6 多激光测量………………………………………………………………………………………………7 开始检测……………………………………………………………………………………………………8 关闭 CyFlow…………………………………………………………………………………………………9 液量绝对计数（定量）----概述…………………………………………………………………………10 如何执行液量绝对计数……………………………………………………………………………………12 光路几何示意图……………………………………………………………………………………………13 光路图标准设置----参数…………………………………………………………………………………14 仪器设置……………………………………………………………………………………………………15 参数设置对话框：脉冲信号高度、面积和宽度…………………………………………………………16 触发…………………………………………………………………………………………………………17 光电倍增管（PMT）电压，增益和对数放大………………………………………………………………18 样本进样速度………………………………………………………………………………………………19 阈值：L-L（低值）和 U-L（高值）………………………………………………………………………20
怎样在 Windows®下工作，请 参考手册《微软 Windows 介 绍》或相关书籍。
1. 检查鞘液和废液瓶 确认鞘液瓶已充满不超过 1600ml 清洁鞘液。该 鞘液已过滤，并且与鞘液瓶相连的管路内无气泡 存在。最后将鞘液瓶密封。 确认废液瓶已经排空。 2. 开机 CyFlow® Space 可在 100～240V 交流电下操作。 打开仪器左侧的主电源开关，并随后打开 488nm 激光器开关，488nm 激光器开关在主电源开关旁 边。 其它激光器开关均由软件控制（细节请参考下一 页）。
在标准的配臵中，所有颗粒将首先通过 488nm 激光器－引导激光束，然后依次通过第二和第三 激光光束（如果存在）。
因此，所有参数的获取除第一激光外均需要延迟 时间，详细内容请参照参数设臵对话框（图 5， 第 16 页）。
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CyFlow® Space 仪器操作手册 开始测量
注意： 如何更改仪器设臵请查看 FloMax® 获取和仪器控制手 册。
CyFlow® Space 仪器操作说明书包括 CyFlow ®Space 仪器的基本操作和维护。但不包含与软 件相关的细节，不同仪器的配套软件的使用方法 也不同。
FlowMax® –数据获取和仪器控制，涉及仪器控 制和多参数数据获取。
FlowMax® –数据分析，涉及在线和离线数据分 析的各个方面。
CyFlow® Space 免费配套软件，提供常规的自动 化操作，并能灵活应用在任何流式细胞术的各种 研究过程中。 这些用途包括： 免疫分型的常规和科研应用 血细胞分析、HIV 监测 白细胞计数、比例分析 微生物分析 发酵控制 浓度分析＋绝对计数定量分析 细胞大小和荧光分布分析
用途注解、指导和维修手册–用于学习起步，包 括如何达到最佳结果的提示。
操作 CyFlow® Space 前应该具备哪些知识？
阅读本手册将使您掌握了流式细胞仪的基本知 识。但最好有熟练的流式细胞仪操作人员在旁随 时辅助您。另外，从流式细胞仪的基本书籍中也 可获得帮助。（例如：Howard M. Shapiro, Practical Flow Cytometry. Wiley 2002）
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CyFlow® Space 仪器操作手册
Partec 分析过程的典型步骤
1. 细胞在悬浮液中通过不同的荧光标记染色而 被分离。
1. 制备和染色 对于流式细胞仪分析，细胞必须在悬浮液中彼此 离散。一般，如果他们自身不能产生足够的光信 号，则需要一种或更多荧光染色剂对其标记，荧 光分子被目标细胞物质吸收，如 CD4-,CD45-抗 体与白细胞表面抗原结合。荧光染料结合率与细 胞表面抗原的多少成正比。充分准备适合的试剂 是准确分析的必要条件。通过检查荧光显微镜的 染色情况可以解决准备过程中出现的问题。
4. 细胞绝对计数 由于 CyFlow® Space 可以分析到细胞悬液中的 所有细胞，并能同时精确监控样本流体积，它能 完成分析过程中的体积计数，即测定任意细胞亚 群浓度，并定义细胞亚群，其浓度可在后期从文 件夹载入数据后再进行分析（即进行离线分析）。
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CyFlow® Space 仪器操作手册
当样本管从样本槽中被取下 后，仪器的生物安全系统自动 启动，目的:1.为了避免液体从 样品管中滴出。2.为了避免样 本间的交叉污染。
1. 确认流式细胞仪已完成分析准备，操作软件 已完成标本运行准备。
2. 依照应用注解或操作规程准备标本，为了开 展绝对计数，请在样本管中加入最少 830ul、最 多 2.8ml 样本，如果样本少于 830ul，请用 PBS 或鞘液进行稀释，并记下稀释倍数。
3. 调整 488nm 激光器的输出功率（仅限于 200mw 激光器）。 200mw 激光器的功率调节范围在 50～200mw 之 间，如需调整功率，请双击如左侧显示的图标 （488－200） 改变功率请输入：
P=功率数值，然后按确认键 查询当前功率值请输入：
？P，然后按确认键
4. 打开附属装臵 打开打印机。 5. 打开计算机 最后打开计算机电源开关。大约几十秒钟后，出 现 Windows®桌面。 6. 启动仪器操作软件 移动鼠标按钮至 FloMax®, 或其他仪器控制图 标。鼠标左键双击图标。几秒钟后，显示―Flomax® Welcome Window (FloMax®欢迎窗口)‖。此时， CyFlow® Space 开始进行初始化，并自动读取上 次使用的仪器设臵。 点确定，显示空直方图。 7. 清洗 将运行速度调到 4。运行 1.6ml partec 原厂绿色 清洗液（Cleaning Slolution），再运行 1.6ml 蒸 馏水，最后依次点击 4 次―清洗（Clean）‖按钮。
2. 激光器发出来的光照到细胞表面，细胞被照 射后散射出荧光和散射光。
2. 流式细胞仪分析 细胞逐一经过流动室时，单独接受激光的照射。 由于激发效应，荧光分子发出有独特波长的荧光 （发射波长谱）。通过滤光片，该荧光束分解成 不同波长范围范围。针对细胞个体分析其波长范 围的强度。
除荧光外，还同时测量每个细胞的物理光强度。 散 射 光 在 光 源前 向 角 （ FSC ） 和 侧向 角 测量 （SSC）。散射光强度代表细胞的大小和形态。 散射光用于荧光分析前确认细胞，但细胞也可于 散射光特性分析前由荧光确认。
基本操作——启动 CyFlow® Space
注意： 关于鞘液，您可以使用 Patec 生产的原装鞘液，也可以使用 自己制备的鞘液。 制备鞘液，将蒸馏水注入玻璃 瓶或三角瓶，同时用小孔径 （＜0.2μm）滤网过滤，然后 用真空泵（如水泵）抽去水中 气体。将瓶中液体摇匀约 15 分钟。 记住：您分析的颗粒越小，越 要求严格清洁鞘液。 注意：要至少每周或每次使用 前更换一次鞘液。
Partec 推荐使用体外诊断试剂 IVD Partec CyFlow Space 型流式细胞仪符合欧洲 98/97/EC 标准，已经取得欧 洲 CE 认证。
○C 2007 Partec GmbH Otto-Hahn-Str.32 D-48161 Germany
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CyFlow® Space 仪器操作手册 CyFlow® Space 介绍
488nm 激光光源由仪器左侧的开关单独控制，其 它激光光源由软件控制：
在软件上列的菜单中选择“获取”，根据需要点 击“第二激光器开关”或“第三激光器开关”， “√”表示激光器被打开，第二激光器开关控制 红色激光器（如果存在），第三激光器开关控制 UV 或紫色或其它激光器（如果存在）。
激光器的开关状态将被自动保存在仪器设定值 文件中（请参考 FloMax®－获取和仪器控制手 册）。
多激光测量
注意 激光器的调整必须由 partec 工程师或您所 在地经销商完成。
源自文库
CyFlow® Space 根据用户的需求可以最多安装 3 个激光光源。因此，您目前使用的设备可能与其 它同型号设备的配臵不同。如需了解详细情况请 与 partec 或您所在地的经销商联系。
为了将不同光源间的补偿减少到最小程度，从不 同激光发出的光束与流动室相交与不同的位臵。 CyFlow® Space 支持任意两个激光光束间的补偿 （当使用 FloMax® 2.4 或 2.5 版本时）或 3 激光 之间的补偿（当使用 FloMax® 3.0 版本时）。 488nm 是补偿的主激光光源，总是被默认为第 1 点。附加的其它激光光源被定位于第 2 点和第 3 点。