生物制品无菌检验 操作及其注意事项
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程文件编号：版本：编制/日期：审核/日期：批准/日期：受控状态:批准实施1 目的为了规范产品无菌检查操作，编制本规程。
2 适用范围本规程适用于产品无菌检查。
3 职责3.1 检验室负责对产品无菌检查的取样和化验，并填写报告；3.2 品管部经理负责签发检查报告。
4 工作程序（见《中国药典》2015年版）4.1 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.2 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
4.3 培养基及其制备方法硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.3.1 硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）酪胨（胰酶水解） 15.0g 氯化钠 2.5g葡萄糖 5.0g 新配制的0.1％刃天青溶液 1.0mlL-胱氨酸 0.5g 硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.3ml） 0.5g琼脂 0.75g 酵母浸出粉 5.0g水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
微生物检测要求
一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5~0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%~3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法。
1.灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
药品GMP检查指南(生物制品)
一．机构与人员［检查要点］药品生产和质量管理的组织机构对做好药品生产全过程监控至关重要;适当的组织机构及人员配备是保证药品质量的关键因素；人员的职责必需以文件形式明确规定；培训是实施药品GMP工作中的重要环节。
0402 生物制品生产企业生产和质量管理负责人是否具有相应得专业知识（细菌学、病毒学、生物学、分子生物学、生物化学、免疫学、医学、药学等），并具有丰富的实践经验以确保在其生产、质量管理中履行其职责。
1．主管生物制品生产企业的生产和质量管理的企业负责人应具备医药及生物学等方面的专业知识和实践经验才能确保其在生产、质量管理中履行职责。
生物制品是药品的一大类别.生物制品是应用普通的或以基因工程（Genetic Engineering)、细胞工程（Cell Engineering）、蛋白质工程（Protein Engineering)、发酵工程（Fermentation Engineering）等生物技术获得的微生物（细菌、噬菌体、立克次体、病毒、寄生虫等）、细胞及各种动物和人源的组织和体液等生物材料制备，其制备过程是生物学过程和无菌操作过程，并用于预防、治疗、诊断疾病的药品。
我国目前生产和使用的生物制品有200多种，各生物制品生产企业所生产的品种各不相同，基于生物制品起始原辅材料、生产制备过程及质量控制等的固有特性，细菌类或病毒类疫苗（包括毒素、类菌素、抗毒素及抗血清等）生产企业的生产和质量管理负责人应具备细菌学或病毒学、生物化学、分子生物学、免疫学、流行病学等方面的专业知识;细胞因子及其他活性生物制剂生产企业,应具备生物化学、免疫学、分子生物等方面的专业知识;DNA产品生产企业，应具备现代生物技术、分子生物学、遗传学、免疫学等方面的专业知识;体内及体外诊断试剂生产企业应具备生物学、免疫学、生物化学等方面的专业知识；血液制品生产企业，应具备生物化学、分析生物学、病毒学等方面的专业知识。
2．本项规定应具备的相应专业知识,也不可机械地局限到一个人所学的具体专业学科。
无菌检验操作规程.
医疗器械产品无菌检验操作规程1目的通过无菌检验,确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
2适用范围适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。
3检验依据《中国药典》 (2005年版GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准4仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪(器、电子天平、 PH 计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等。
5无菌检验室的环境要求5.1无菌检验应在环境洁净度 10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa 。
无菌检验室的室温应保持 18~26℃,相对湿度:45~65%。
5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。
每年至少检测一次。
5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数:每次操作时在层流空气所及台面的左中右置 3个营养琼脂平板,暴露 30min ,于 30~35℃培养 48小时,菌落数平均应不超过 1CFU/平板。
6无菌检验前的准备6.1器具灭菌、消毒6.1.1灭菌:试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。
可经电热干燥箱 160℃以上干烤 2小时,或置压力蒸汽灭菌器内 121℃蒸汽灭菌 30分钟后使用(根据灭菌效果验证决定灭菌参数。
所有的灭菌物品不应超过 2周即用毕, 否则应重新灭菌。
6.1.2消毒:凡检验中使用的器材无法灭菌处理的,使用前必须经消毒处理。
如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。
兽用生物制品无菌检验操作规程
一、目的：规范无菌检验操作。
二、适用范围：适用于无菌检验操作。
三、职责：进行该项检验的检验员应严格按规程进行操作。
四、内容：1 抽样应随机取样并注意代表性。
1.1 制造疫苗用的各种原毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验，应每瓶（罐）分别进行，抽样量为2~10ml。
1.2 成品的无菌检验应按每批或每个亚批进行，每批按瓶数的百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，每瓶分别进行检验。
2 检验用培养基2.1 无菌检验2.1.1 硫乙醇酸盐流体培养基（TG）用于厌氧性及需氧性细菌的检验。
2.1.2 胰酪大豆胨液体培养基（TSB）用于真菌及需氧菌检验。
3 检验方法及结果判定3.1 病毒原毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验取样品接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.2 灭活病毒液的无菌检验病毒液灭活后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.3 类毒素的无菌检验毒素脱毒过滤后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.6 成品的无菌检验样品（原）装量大于1.0ml的，取处理好的样品1.0ml，样品（原）装量小于1.0ml 的，取其处理好的样品的全部内容物，接种50ml TG培养基，置35~37℃培养，3日后吸取培养物，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
如果允许制品中含有一定数量的非病原菌，应进一步做杂菌计数和病原性鉴定。
微生物实验操作注意事项
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
3.接种食品样品时，4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W3.无菌间使用前后应将门关紧，紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1．灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
无菌检验操作规程.
医疗器械产品无菌检验操作规程1目的通过无菌检验,确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
2适用范围适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。
3检验依据《中国药典》 (2005年版GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准4仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪(器、电子天平、 PH 计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等。
5无菌检验室的环境要求5.1无菌检验应在环境洁净度 10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa 。
无菌检验室的室温应保持 18~26℃,相对湿度:45~65%。
5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。
每年至少检测一次。
5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数:每次操作时在层流空气所及台面的左中右置 3个营养琼脂平板,暴露 30min ,于 30~35℃培养 48小时,菌落数平均应不超过 1CFU/平板。
6无菌检验前的准备6.1器具灭菌、消毒6.1.1灭菌:试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。
可经电热干燥箱 160℃以上干烤 2小时,或置压力蒸汽灭菌器内 121℃蒸汽灭菌 30分钟后使用(根据灭菌效果验证决定灭菌参数。
所有的灭菌物品不应超过 2周即用毕, 否则应重新灭菌。
6.1.2消毒:凡检验中使用的器材无法灭菌处理的,使用前必须经消毒处理。
如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。
无菌、微生物限度检查及方法验证
01
02
03
直接接种法
将样品接种在培养基上， 观察是否有微生物生长。
薄膜过滤法
将样品通过薄膜过滤，收 集滤膜上的微生物，再进 行培养。
离心沉淀法
将样品离心，收集沉淀物 中的微生物，再进行培养 。
无菌检查的注意事项
确保环境洁净
无菌检查需要在洁净的环境中进行，以避免 外界微生物的污染。
避免样品中防腐剂的影响
方法验证
方法验证的定义与目的
定义
方法验证是对检测方法的可靠性、准确性和可重复性的评估过程，以确保该方 法能够满足预期的检测要求。
目的
方法验证的目的是确保所采用的无菌、微生物限度检查方法具有足够的灵敏度 、特异性、重现性和可操作性，以保证检测结果的准确性和可靠性。
方法验证的流程
准备验证计划
制定详细的验证计划，包括验 证实验的设计、实验步骤、数 据收集和分析等内容。
进出口检验
进出口药品需要进行严格的微生物限度检查，以确保药品符合进口 国或地区的质量标准，保障公众健康。
方法验证在药品质量控制中的应用
验证无菌、微生物限度检查方法的可靠性
通过方法验证可以确保无菌、微生物限度检查方法的准确性和可靠性，提高药品质量控制 水平。
评估检测方法的性能指标
方法验证过程中需要对检测方法的性能指标进行评估，如灵敏度、特异性、重现性等，以 确保检测结果的准确性和可靠性。
如果样品中含有防腐剂，可能会抑制微生物 的生长，因此需要进行相应的处理。
正确选择培养基
根据待测样品的特性，选择适合的培养基， 以确保微生物能够正常生长。
定期进行方法验证
无菌检查方法需要定期进行验证，以确保其 可靠性。
0义与目的
微生物检验工作的基本要求
微生物检验工作的基本要求试验室技术操作要求一、无菌操作要求食品微生物试验室工作人员，必需有严格的无菌观念，很多试验要求在无菌条件下进行，主要缘由：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员平安，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。
1.接种细菌时必需穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必需穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦洁净。
4.进行接种所用的吸管，平皿及培育基等必需经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.接种样品、转种细菌必需在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随便打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与试验无关的物品。
3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采纳室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照耀时间不少于30min，使用紫外灯，应留意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以削减紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随便出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
无菌操作的具体流程
无菌操作的具体流程清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
仪器：超净台，干燥箱，高压锅，过滤器，过滤泵。
四、实验步骤(一)清洗1．新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗，再浸泡5％稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。
2．使用过的玻璃器皿的清洗(1)使用过的培养用品应立即浸入清水，避免干涸难洗。
(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿，自来水清洗数遍，倒置自然干燥。
(3)浸酸性洗液过夜。
(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10．15次去除残余酸液，蒸馏水涮洗3次，倒置烘干。
(5)包装(牛皮纸或一般纸)。
(6)高压(15磅20 min)或干热(170℃2 h)灭菌。
(7)贮存备用。
3．胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0．2％NaOH煮沸lO-20 min。
生物制品无菌检验规程
生物制品无菌试验规程生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。
在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。
各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。
1抽样1.1原液及半成品原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。
1.1.2原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。
1.2成品每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。
1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～100支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。
6～20ml抽检量加倍。
5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。
2无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）2.1检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。
2.2检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。
检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。
检查霉菌和腐生菌应采用改良xx培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。
检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。
2.3检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。
2.4生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。
2.5无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。
微生物实验操作注意事项
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时.必须穿专用的工作服、帽及拖鞋.应放在无菌室缓冲间.工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时.应在进无菌室前用肥皂洗手.然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管.平皿及培养基等必须经消毒灭菌.打开包装未使用完的器皿.不能放置后再使用.金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时.吸管尖部不能触及外露部位.使用吸管接种于试管或平皿时.吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作.接种细菌或样品时.吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝.必要时还要烧到环和针与杆的连接处.接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min.再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时.应用相应的橡皮头吸取.不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃.并要密封.不得随意打开.并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门.另设有0.5-0.7m2的小窗.以备进入无菌间后传递物品。
2. 无菌间内应保持清洁.工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒.擦拭工作台面.不得存放与实验无关的物品。
3. 无菌间使用前后应将门关紧.打开紫外灯.如采用室内悬吊紫外灯消毒时.需30W紫外灯.距离在1.0m处.照射时间不少于30min.使用紫外灯.应注意不得直接在紫外线下操作.以免引起损伤.灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭.除去上面灰尘和油垢.以减少紫外线穿透的影响。
4. 处理和接种食品标本时.进入无菌间操作.不得随意出入.如需要传递物品.可通过小窗传递。
5. 在无菌间内如需要安装空调时.则应有过滤装置三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等.必须经灭菌后方能使用。
产品无菌检验操作规程
文件编号：产品无菌检验操作规程编制日期审核日期批准日期版号生效日期公司通过无菌检验,确保灭菌后产品能够达到无菌的要求;2 适用范围适用于灭菌后医疗器械产品列举的无菌检验;3 检验依据本厂产品注册标准编号EN1174-1996 医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估中国药典2005年版医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准4 仪器、设备百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪器、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等;5 无菌检验室的环境要求无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行;缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压;无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa;无菌检验室的室温应保持18～26℃,相对湿度：45～65%;无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测;每年至少检测一次;无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板,暴露30min,于30～35℃培养48小时,菌落数平均应不超过1CFU/平板;6 无菌检验前的准备器具灭菌、消毒6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌;可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时,或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用根据灭菌效果验证决定灭菌参数;所有的灭菌物品不应超过2周即用毕,否则应重新灭菌;6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的,使用前必须经消毒处理;如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等;可采用消毒剂浸泡或擦拭;消毒剂应每月更换,以防止产生耐药菌株;6.1.3 标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识,标明灭菌、消毒时间和使用有效期; 人员、物料进入无菌检验室6.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理,消毒时间不得少于30min;6.2.2 物料进入无菌检验室流程6.2.2.1 脱包：进入无菌检验室的物品若有双重包装的,需将外包装在传递窗/缓冲间拆除后,传入试验室;6.2.2.2 消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理,以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室;6.2.2.3 传递：查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识,是否在有效期内;符合要求的经传递窗传入无菌检验室;6.2.3 人员进入无菌检验室流程6.2.3.1 更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋,穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服;6.2.3.2 洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫,再用流水连续冲洗20秒,洗净泡沫;6.2.3.3 更衣：在二更区按照从上到下的顺序穿戴无菌工作服包括衣、帽、口罩等,要求裤子掖在上衣里,口罩掩住口鼻,帽子包裹所有头发;6.2.3.4 手消毒：用消毒液浸泡双手5秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手;消毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等;6.2.3.5 人员进入：经缓冲间进入无菌检验室;6.2.4 人员进入无菌检验室后,进一步用消毒液擦拭工作台面,戴无菌手套;7 无菌检验操作要求全过程必须严格执行无菌操作,防止微生物污染;使用玻璃器皿应轻取轻放,避免破损,以防培养物扩散;所有操作均应在近火焰区进行,且不得有大幅度或快速动作,以免搅动空气中的尘埃微粒;使用金属接种器具时,用前、用后均需灼烧灭菌;在接种培养物时,动作应轻、准,防止培养物溅出,产生汽溶胶,造成污染;操作过程中所有的带菌物品,用后均应作消毒、灭菌处理;可在检验过程中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内,或在检验完成后经传递窗传至一般区,立即用压力蒸汽灭菌锅121℃灭菌30分钟;8 培养基制备需气菌、厌气菌培养基硫乙醇酸盐流体培养基的制备8.1.1 所用试剂酪胨胰酶水解15.0g 葡萄糖5.0gL-胱氨酸0.5g硫乙醇酸钠0.5g或硫乙醇酸酵母浸出粉5.0g氯化钠2.5g新配制的%刃天青溶液琼脂0.75g水1000ml8.1.2 制备除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节pH为±;8.1.3 硫乙醇酸盐流体培养剂氧化层的颜色要求在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5,否刚需经100℃水浴加热到粉红色消失不超过20分钟迅速冷却,只限加热一次,并应防止被污染;霉菌培养基改良马丁培养基的制备8.2.1 所用试剂胨5.0g酵母浸出粉2.0g 葡萄糖20.0g 磷酸二氢钾1.0g 硫酸镁0.5g水1000 ml8.2.2 制备除葡萄糖外,取上述成分混和,微温溶解,调节pH值约为,煮沸,加葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调节pH为±;还可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基,按照使用说明书配制;培养基配制后应尽快灭菌,避免微生物繁殖;一般采用高压蒸汽121℃灭菌30分钟; 制备好的培养基应在2～25℃保存,在3周内使用;培养基的无菌性检查每批配制的培养基均应进行无菌性检查可与产品无菌检验同步进行;检查时,每批培养基随机取不少于5支瓶培养14天,应无菌生长;9 稀释液、冲洗液的制备%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g,加水1000ml,微温溶解,滤清,分装后置入压力蒸汽灭菌器内,121℃灭菌30分钟后,于4℃保存备用;氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钾7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g,加水1000ml;微温溶解,滤清,分装后置入压力蒸汽灭菌器内,121℃灭菌30分钟后,于4℃保存备用; 浸提介质：9g/L无菌氯化钠溶液,可直接从有证单位采购大输液;10 对照菌液制备无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代;取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物,接种一白金耳至营养琼脂培养基内,在30～35℃培养18～24h后备用,同时制备%氯化钠溶液加入在6支小试管内,每支试管内加的%氯化钠溶液,在压力锅内经121℃灭菌30min备用;将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取加入第一支小试管内,稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管内1.0m l菌液加入第二支小试管内,稀释成浓度1:100的菌液,同法稀释成浓度1:106每ml含菌量≤100CFU即可;采用平皿计数法测定活菌数;11 无菌检验培养温度硫乙醇酸盐流体培养基,置30～35℃培养;改良马丁培养基,置23～28℃培养;12 无菌检验如产品注册标准中明确“产品应经过一个确认过的灭菌过程”,则执行项下各项; 12.1.1 放样每个灭菌批次按已验证的灭菌工艺,在灭菌柜内相应的位置放置适量菌片,灭菌后对菌片进行无菌检验;12.1.2 菌片贮存灭菌前、后菌片应按菌片说明书规定条件保存;REVEN公司菌贮存温度为15～27℃12.1.3 接种开启超净工作台单向层流,在此环境下,分别将灭菌后的菌片成对放入已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基中;同时以金黄色葡萄球菌作阳性对照,以未接种的硫乙醇酸盐流体培养基和未接种的改良马丁培养基作为阴性对照;12.1.4 培养阳性对照管于30～35℃细菌培养箱培养48～72小时;其余硫乙醇酸盐流体培养基于30～35℃培养7天;改良马丁培养基于23～28℃培养7天;12.1.5 结果判定培养后,阳性对照应有菌生长,阴性对照和被检样品未见需气菌、厌气菌和霉菌生长的为合格;如产品注册标准中明确产品应进行无菌检验,则执行12.2.1～;12.2.1 抽样根据各自的产品注册标准和相应产品出厂检验规程的规定,对成品库内的产品进行抽样;一般同一个灭菌批产品检验3～11个单位供试品;12.2.2 供试液准备优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养的方法,如供试品不适宜直接投放,可按下列方法制备供试液,应使浸提介质充分洗提供试品的浸提表面,供试液制备应按无菌操作法进行,在制备后2小时内使用;根据供试品具体特性选择下列方法：a 管类器具：按管内表面积每10cm2流过管内腔1ml浸提介质,流量约为10ml/min,收集到无菌的容器内;b 容器类器具：按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml的比例,振摇数次;c 实体类器具：实体类器具按表面及每10cm2加入浸提介质1ml,振摇数次;收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中;12.2.3 接种12.2.3.1 薄膜过滤法：优先采用封闭式薄膜过滤器集菌器,也可使用开放式薄膜过滤器;滤膜孔经不大于μｍ;滤器和滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌,或直接采用无菌集菌器;a、如采用封闭式薄膜过滤器,取一副三联式集菌器,将供试液通过集菌仪过滤,使通过每只培养管的量基本均匀;然后通过集菌仪一只加120ml改良马丁培养基,另两只分别加入120ml硫乙醇酸盐培养基其中一只做阳性对照,内加金黄色葡萄球菌液1ml;另取一副二联集菌器,用同批的冲洗液或浸提介质120ml通过集菌仪过滤每只约50ml,同法一只加硫乙醇酸盐培养基120ml,另一只加改良马丁培养基120ml分别作阴性对照;b、如用一般薄膜过滤器,将供试液过滤后取出滤膜,将其剪成3等份,分别置于含50ml 硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中,其中两份作检验,一份作阳性对照;12.2.3.2 直接接种法：适用于一次性使用注射针、一次性使用静脉输液针包括输液器、输血器、注射器配套使用注射针;a、敷料供试品：取规定数量,每个包装以无菌操作拆开,于不同部位剪取约120mg或1cm ×3cm的供试品,接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中;b、无菌针头：直接投入含15ml以上硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中;c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎断,接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中; 供试品按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中,其中一份作阳性对照;每个容器中培养基的用量应符合：接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%,或培养基的装量足以浸没供试品;每管培养基的最低用量——硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml,改良马丁培养基每管装量不少于10 ml.12.2.4 培养、观察上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中,除阳性对照管培养48～72小时外,其余管培养14天;培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长;如在加入供试品后、或在培养过程中,培养基出现浑浊,培养14天后,不能从外观上判断有无微生物生产,可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上,细菌培养2天,真菌培养3天,观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长；或取培养液涂片,染色,镜检,判断是否有菌;12.2.5 结果判断培养结束后,阳性对照管应有菌生长,阴性对管应澄清;否则,就判结果无效;所有供试品管均澄清,或虽显浑浊但经确证无菌生长,判供试品符合规定;若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长判供试品不符合规定;以一次检出为准,不得复试;当符合下列至少一个条件时,可判试验结果无效；1无菌检验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检验法的要求；2回顾无菌实验过程,发现有可能引起微生物污染的因素；3阴性对照管有菌生长；4供试品管中生长的微生物经鉴定后,确证是因无菌检验中所使用的物品和或无菌操作技术不当引起的；13 质量记录无菌检验原始记录菌种外购、转种记录培养基制备记录实验中废弃的带菌物品灭菌处理记录实验用稀释液、冲洗液、缓冲液制备记录浓菌液制备使用记录洁净区域净化系统运行记录。
(完整版)微生物实验注意事项
微生物实验注意事项1.实验过程中要及时详细标清除产物和日期，实验做完以后要对以前的过度产品做个清理，以免东西积累过多。
2.实验后的DNA和RNA要及时放回冰箱，以免时间长降解，特别是用水溶解的时候。
3.要及时甘油保存你鉴定出的细菌，每个细菌保存两份，存放在-80度冰箱里。
4.实验用的酶类虽然在室温下放一段时间也没什么问题，但还是要及时放回冰箱，以免活性降低。
5.要及时清理实验台面，保持干净，整洁，有序。
6.无菌操作台用后及时清理干净，操作真菌和细菌等最好不要交叉使用。
7.培养基使用的时候要注意无菌操作，移液器不要插入培养基中，之准许无菌枪头进入瓶子腔体，如培养基较少，可以倾斜瓶子，移液器取液体最好不要用到最大量程，以免吸液过猛导致与移液器接触。
8.灭好的培养基标签一定要写好，包括名称，日期，是否加抗生素，是否加抗生素非常重要，特别是在共用培养基的实验室。
9.实验用过的试剂盖子一定要盖好，以免挥发。
特别是有毒的物品，如氯仿，苯酚等，用完后的瓶子及时拿出实验室。
10.带手套接触有毒物品后，要及时处理掉手套。
不管是否接触过有毒物品，，不要戴着手套乱接触其他东西，如开窗等。
11.做实验过程中不要接电话，说话，考虑其他事情。
特别是3CR和配溶液的时候。
做PCR和配溶液的时候要把所用的试剂找全，一字排开，加完一种东西就把这种东西放到一边，可防止自己少加错东西。
12.同时作几个实验的时候一定要有定时器，防止自己忘记，特别是在煮东西，加热溶化溶液等危险操作的时候，切忌。
13.饭前，有活动前不要做实验，这时候匆匆忙忙非常容易出错，特别是作有危险的实验更要注意。
14.作好试验记录，不管有没有结果，一定要坚持。
还有点用图片，测序结果等，如果不清楚记录东西多了，就乱了，混了。
这个一定要认真做好。
15.要随时写下自己的想法，因为有些想法稍纵即逝。
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
生物制品无菌检验 操作及其注意事项
猪瘟冻干苗等，如若不污染苗在24-48h 观察时，管底有乳白絮状小量沉淀，上 透明。如若污染上部混浊，混浊度与污 染苗多少、种类而异。 （3）纯粹检验瓶管判定较难，更须仔细 观察，由于菌苗种类不同表现也有所不 同。 A . 炭疽Ⅱ苗：在普通琼脂上生长很 快，检验时可以从正面和背面进行观察 一般24h可全面生长，灰白色半透明的， 较干燥的菌苔，表面平坦，上部边缘较 薄，3-5天在菌苔表面形成，密集的
五．鉴定：
发现可疑菌落时，可按下列原则鉴定。 （1） 镜检：将可疑菌落或可疑管，在 无菌的条件下涂片，一般用革兰氏染色 后镜检。 （2） 移植：将可疑菌落或瓶管，移植 于同种或适于生长的培养基内进行观察。 （3）分离：将可疑菌落或瓶管，根据生 长情况，用马丁琼脂平板，普通琼脂平 板，或血平板进行划线分离培养。
(1) 在检验前两天，将所用的培养基按 规程规定的种类、数量准备妥当，而且 须经48h以上的培养鉴定。 (2) 培养基如发现混浊，污染或其它异常 现象时均不得使用。 (3) 工作服、鞋帽必须经高压灭菌或甲醛 熏蒸灭菌。 (4) 检验用的器具必须高压两次，这些 工作均须在前一天准备妥当。
(3) 全部接种完后，熄灭酒精灯，将 肉汤，厌气大管，用原纸帽盖好，除霉 菌培养置25℃恒温培养箱培养外，其它 所有培养物送入37℃温室培养3-5天。 (4) 根据规程规定的天数进行移植，要 领同上，并通过无菌火焰后，吸取培养 物约1ml，而后接种逐管。
三．清场处理
① 将用过的注射器煮沸消毒，一般煮沸 开锅后30分钟。 ② 无菌室内所有用具整理好，放回原位， 而后全面整理如初，无菌室用的工作服， 鞋帽等脱掉放回原处。 ③ 将把消毒好的注射器等用具清洗干净 包好送高压灭菌备用。
无菌检查法检技术与方法
无菌检查法检技术与方法
无菌检查法是一种常用的微生物检测方法，用于确定物体或环境是否存在可生长的微生物。
以下是无菌检查法的一般技术与方法：
1. 准备工作：在进行无菌检查之前，需要准备无菌培养基、培养器具（如平皿、试管等）以及所需的无菌工具（如火焰灭菌器、无菌棉签等）。
2. 灭菌操作：使用火焰灭菌器将培养器具和工具进行灭菌处理，以确保无菌状态。
3. 取样：将待检物体或环境样品采集到无菌容器中，避免外界微生物的污染。
4. 培养基接种：将采集到的样品通过无菌棉签或无菌工具划取，均匀涂布于无菌培养基的表面。
5. 培养：将涂布好的培养基平皿或试管密封好，放入恒温培养箱中，以适当的温度和时间进行培养。
6. 观察和计数：在培养一定时间后，观察培养基表面是否有生长的微生物，如菌落的形成。
可以使用显微镜观察细菌的形态。
7. 结果分析：根据观察到的菌落形态、颜色、大小等特征，结合相关标准和文献，确定是否存在可生长的微生物。
需要注意的是，无菌检查法的具体步骤和条件可能因检测对象的不同而有所变化。
同时，为了确保检测结果的准确性，无菌
操作、培养条件和培养基的选择都至关重要。
在进行无菌检查时，应严格遵守相关的操作规范和实验室安全要求。
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范无菌检查和微生物限度检查操作规范（中国药品生物制品检定所）一、无菌室的要求：无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。
建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。
无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。
操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。
无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。
无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。
操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。
无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。
用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。
无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。
用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。
二、培养基的准备1、培养基的制备：配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。
再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。
2、培养基灵敏度试验：培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试验的重要组成部分。
微生物限度检查法操作规程
微生物限度检查法操作规程1．范围本规程适用于微生物限度的检查。
2．设备、仪器及用具、试液、培养基2.1 无菌室：温度18～26℃，相对湿度45～60%，洁净度不应低于10000级。
2.2 其他设备：净化工作台（洁净度为100级）、生化培养箱（23～28℃）、恒温培养箱（30～35℃）、电热恒温水浴锅、高压蒸汽消毒器、电热恒温干燥箱（最高工作温度300℃）、冰箱。
2.3 托盘天平、显微镜。
2.4 玻璃器皿2.4.1 锥形瓶、吸管、试管、培养皿90mm、量筒、烧杯、研钵、载玻片、盖玻片。
2.4.2 洗涤：吸管、锥形瓶、培养皿、烧杯等用清洁液浸泡，用清水冲洗干净再用蒸馏水冲洗2～3遍，晾干。
使用过后如与细菌接触，应121℃湿热灭菌20分钟，倒出内容物，然后清洗、晾干。
2.5 酒精灯、灭菌剪刀、接种环、灭菌镊子、大小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并定期用70～75%乙醇溶液浸泡）、记号笔。
2.6 无菌衣、帽、口罩（用牛皮纸包严）灭菌，备用。
2.7 试液2.7.1消毒液：0.1%新洁尔灭或络合碘、75%乙醇溶液、5%来苏溶液。
2.7.2 稀释剂： PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装于锥形瓶或试管内，每瓶100ml或每管9ml，加塞，121℃灭菌20分钟备用。
2.7.3 靛基质试液（柯凡克试剂或欧-波氏试剂）、结晶紫染液、碘液、95%乙醇、溴麝香草酚蓝指示剂、酸性品红指示剂、沙黄染液、甲基红指示液、α-萘酚乙醇试液、40%氢氧化钾。
2.8 培养基2.8.1 选择：营养琼脂培养基（细菌计数用）；玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌及酵母菌计数用）；胆盐乳糖培养基；MUG培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）、麦康凯琼脂培养基、乳糖培养基、枸橼酸盐培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基、蛋白胨水培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基、胆盐硫乳琼脂（DHL）。