高效液相溶剂效应
液相色谱对溶剂的要求
液相色谱对溶剂的要求液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的色谱分离技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
在液相色谱分析中，溶剂的选择对分离效果和峰形有着重要的影响。
以下是液相色谱对溶剂的要求：1. 纯度：溶剂在使用前应进行高效液相色谱Puritytest.html）或其它适当的检测，以确保其纯度高于分析所需的要求。
溶剂应尽量避免含有杂质、杂质会对分析产生干扰，影响分离效果，或者导致峰形不对称，增加定量和定性分析的误差。
2.溶解性：溶剂必须能够溶解待测物质，以确保准确的分离和定量。
不同的化合物在不同的溶剂中具有不同的溶解度，因此，根据分析的需要选择合适的溶剂。
3.挥发性：溶剂在溶液流动过程中需要快速蒸发，以保证流速和信噪比。
较低的挥发性溶剂可能会导致温度升高，产生废液，或使流速变慢，影响分析速度。
4.无气泡：溶剂应尽量避免存在气泡。
气泡会引起流速不稳定，影响峰形和峰面积的准确测量。
应该使用已除气且没有残留空气的溶剂。
5.无色：溶剂应该是无色的，以免影响光学检测器对峰的检测和分离。
6.稳定性：溶剂的稳定性非常重要，不能与色谱柱、检测器或样品发生反应。
溶剂应该是化学稳定的，不会在分离过程中产生副产物或降解。
7.极性：溶剂与样品分子之间的极性的匹配度也非常重要。
溶剂的极性能够影响分子在色谱柱上的保留和分离。
不同的样品可能需要不同极性的溶剂，针对不同的实验目的选择适当的溶剂。
总之，液相色谱对溶剂的要求包括纯度、溶解性、挥发性、无气泡、无色、稳定性和极性。
正确选择和使用溶剂可以提高分析效果、减少误差，并获得准确的分析结果。
因此，在进行液相色谱分析之前，需要仔细考虑和评估所使用溶剂的特性和性能。
高效液相色谱出峰拖尾的原因
柱外死体积（如进样环、连接管等）中的流体扩散和混合可能导致峰形拖尾。优化柱外系统可减少此类效应。
化学或二次保留效应
如硅胶中的硅羟基与目标化合物发生二级作用，可能导致峰形拖尾。在流动相中加入适当的添加剂（如酸、碱或缓冲盐）可减少此类作用。
重金属污染
色谱柱中的重金属离子可能与样品中的某些化合物形成螯合物，导致峰形拖尾。选择低金属含量的色谱柱可减少此类问题。
流动相粘度过高
流动相粘度过高可能增加流动阻力，导致峰形拖尾。降低流动相粘度可改善峰形。
温度波动
色谱柱温度的变化可能影响化合物的保留时间和峰形。调整并稳定色载，出现峰形拖尾。减少进样量或稀释样品可改善峰形。
样品溶剂不合适
样品溶剂的极性大于流动相极性时，可能导致峰形拖尾。更换与流动相极性相近的溶剂溶解样品可解决问题。
高效液相色谱出峰拖尾的原因
原因
简要说明
柱筛板堵塞
可能由于流动相污染、样品溶液不干净或手动阀门操作不当导致。可通过反冲色谱柱或更换筛板解决。
流动相或样品污染
流动相或样品中的杂质可能导致峰拖尾。更换干净的流动相或样品可解决问题。
流动相pH值不合适
pH值过高或过低可能影响化合物的电离状态，导致峰形拖尾。调整流动相的pH值至合适范围可改善峰形。
样品中干扰物质
样品中的杂质或干扰物质可能与目标化合物竞争色谱柱上的吸附位点，导致峰拖尾。通过样品预处理去除干扰物质可解决问题。
色谱柱污染或塌陷
色谱柱长时间使用或维护不当可能导致污染或塌陷，影响峰形。清洗或更换色谱柱可恢复性能。
柱子失效
色谱柱的填料可能因老化、磨损等原因失效，导致峰拖尾。更换新的色谱柱可解决问题。
中国药典版--高效液相色谱法
现象3：基线漂移
判断————————————------------------排除方法 （1）溶剂贮槽污染---------------（1） 清洗贮槽装入新的流动相冲洗柱子 （2）前次分离样品中的强吸附组分 从柱上洗脱-------（2）在分离之前用强 流动相从柱中洗脱所有的组分：使用溶 剂梯度清洗柱子 （3）由微粒造成柱入口、进样阀、 柱入口的部分堵塞--（3）清洗进样系统 和柱入口过滤片
色谱条件与系统适用性试验
按各品种项下的要求对仪器进行适用 性试验，即用规定的对照品对仪器进 行试验和调整，应达到规定的要求； 或规定分析状态下色谱柱的最小理论 板数、分离度、重复性和拖尾因子。
（1） 色谱柱的理论板数
色谱柱的理论板数(n) 在选定的条件下，注入 供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液， 记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰 的保留时间tR（以分钟或长度计，下同,但应 取相同单位）和半高峰宽(Wh/2)，按 n=5.54(tR／Wh/2)<2>计算色谱柱的理论板数， 如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小 理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长， 载体性能，色谱柱充填的优劣等），使理论板 数达到要求。
6最低检测限的意义 最低检测限虽然是个绝对值，但其真正 意义确是相对值，即相对于供試品溶液 的中样品浓度的多少而言，，设定杂质 总量不得过1.0％。最低检出限通常许达 到对照溶液浓度的十分之一到五十分之 一。 7使用对照品外标一点法测定时的关键是 什么 使用对照品外标一点法测定时的关键是 尽量保持样品溶液和对照品溶液的浓度 一致。
（4）泵中有气泡，泵压不稳-----------（4） 赶除聚集于泵头内的气泡 （5）溶剂纯度不高，背景吸收强，透 光差------ -------- -------- （5）提纯溶剂或 选纯度比较高、透光性好的溶剂作为流动 相 （6）检测池污染-------------（6）清洗检 测池 （7）示差折光检测器液槽漏 --------（7）检修或更换液槽
高效液相原理
高效液相原理
高效液相原理是一种用于从液体样品中分离和测定分子组成的
分析原理和方法。
它是一种多维分离技术，可以对多种化合物进行分离和分析。
液相色谱（LC）法是该原理的主要应用，是目前最常用的分离技术之一。
液相色谱的优势在于可以以较高的灵敏度、较宽的选择性和较低的分析时间，实现液体样品中复杂有机物质的快速分离和准确测定。
高效液相原理可以根据它们与溶剂的相互作用来分离组分，其原理是在液体相中，某种物质可以在溶剂中的溶度范围内，决定它的分子的分离方式。
其原理主要有两种：非离子化强度（NIP）和表面活性剂效应（SAE）。
非离子化强度法是根据不同物质的分子大小、形状、电荷、电性和非离子特性等因素，确定它们与溶剂间的作用力，从而对它们进行分离。
表面活性剂效应法是基于分子表面存在特定水溶性和不溶性组分，改变物质与溶剂间的作用力，使它们在定向力作用下，有选择性地移动分离。
高效液相原理是一种微量检测技术，它能够检测极少量的物质或反应。
它的优势在于可以检测微量物质，可以实现快速的检测，还可以同时检测多种物质，并且结果准确可靠。
高效液相原理在分析实验中的应用也十分普遍。
它已广泛应用于化工、制药、食品、环境等多个领域，其中最常用的应用领域是环境污染物、药物、食品添加剂等检测工作。
综上所述，高效液相原理是一种重要的分析技术，其原理和应用
领域十分广泛。
未来，将会面临更多挑战，必要时还要追求更高的精度和准确度，从而更好地满足社会的各种需求。
高效液相色谱分析法概述
高效液相色谱分析技术及其新的发展与应用余建军(陕西科技大学生命科学与工程学院，西安710021)1 高效液相色谱法概述高效液相色谱法（high performanc，liquid chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法基础上发展起来的一种新型分离、分析技术。
经典液相色谱法由于使用粗颗粒的固定相，填充不均匀，依靠重力使流动相流动，因此分析速度慢，分离效率低。
新型高效的固定相、高压输液泵、梯度洗脱技术以及各种高灵敏度的检测器相继发明，高效液相色谱法迅速发展起来[1]。
高效液相色谱法与经典液相色谱法比较，具有下列主要特点：（1）高效由于使用了细颗粒、高效率的固定相和均匀填充技术，高效液相色谱法分离效率极高，柱效一般可达每米104理论塔板。
近几年来出现的微型填充柱（内径lmm）和毛细管液相色谱柱（内径0.05umm），理论塔板数超过每米105，能实现高效的分离。
（2）高速由于使用高压泵输送流动相，采用梯度洗脱装置，用检测器在柱后直接检测洗脱组分等，HPLC完成一次分离分析一般只需几分钟到几十分钟，比经典液相色谱快得多。
（3）高灵敏度紫外、荧光、电化学、质谱等高灵敏度检测器的使用，使HPLC 的最小检测量可达10-9～10-11g（4）高度自动化计算机的应用，使HPLC 不仅能自动处理数据、绘图和打印分析结果，而且还可以自动控制色谱条件，使色谱系统自始至终都在最佳状态下工作，成为全自动化的仪器。
（5）应用范围广（与气相色谱法相比）HPLC 可用于高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机化合物及各种离子的分离分析。
如氨基酸、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、维生素、抗生素等。
（6）流动相可选择范围广它可用多种溶剂作流动相，通过改变流动相组成来改善分离效果，因此对于性质和结构类似的物质分离的可能性比气相色谱法更大。
（7）馏分容易收集更有利于制备2 色谱法分类高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等[2]。
解决液相溶剂效应的方法
解决液相溶剂效应的方法【摘要】液相溶剂效应是化学实验中常见的问题，影响实验结果的准确性和可重复性。
解决这一问题的方法有多种途径。
选择合适的溶剂非常重要，要根据实验需求选择相容性好、稳定性高的溶剂。
改变溶剂的性质，如调整极性或添加辅助剂，可以减少液相溶剂效应的影响。
优化溶剂的浓度、改变温度和压力也可以有效地解决这一问题。
采用其他技术手段如超声波辅助溶解或选择合适的容器材料也是解决液相溶剂效应的有效方法。
总结而言，解决液相溶剂效应的关键在于综合运用各种方法，并在实验中加以实践。
展望未来，可以进一步研究新型溶剂或技术，提高实验的精确性和可靠性。
【关键词】解决液相溶剂效应的方法、溶剂选择、溶剂性质、溶剂浓度、温度、压力、技术手段、未来研究方向1. 引言1.1 液相溶剂效应的概念液相溶剂效应是一种在化学反应中常见的现象，指的是溶剂对反应物质的影响导致反应速率或产物选择性发生变化的情况。
液相溶剂在参与反应的过程中可以通过溶解反应物质、形成溶剂化物质以及影响反应中间体的稳定性等方式影响反应的进行。
液相溶剂效应可能对反应结果产生积极的影响，使得反应更加高效或选择性更好，也可能对反应产生负面影响，导致产率降低或意外的产物生成。
了解并控制液相溶剂效应对于合成化学领域具有重要意义。
在实际研究和应用中，科学家们需要通过调节溶剂种类、浓度、性质以及反应条件等因素来解决液相溶剂效应带来的问题，以实现对目标产物的精确控制和高效合成。
通过对液相溶剂效应的深入了解和研究，可以为化学反应的设计和优化提供有益的指导和方法论。
1.2 问题背景液相溶剂效应是指在化学反应或分析过程中，溶剂的物理化学性质对反应速率、产物选择性和产率等方面的影响。
溶剂是许多化学反应和分析中不可或缺的组成部分，但有时候溶剂的选择和性质可能会对实验结果产生负面影响，这就是液相溶剂效应所造成的问题。
液相溶剂效应可能导致实验结果的不确定性、反应速率的变化、产物选择性的改变甚至催化剂活性的降低。
高效液相色谱实验技术问题解答
高效液相色谱实验技术问题解答高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。
1、高效液相色谱是如何实现高效、快速、灵敏的? 解：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏渡得到启发，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速;设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱曲缺点，从而达到高效、快速、灵敏。
2、与气相色谱法相比高效液相色谱有哪些优点和不足? 解：气相色谱的分析对象是在校温下具有一定的挥发性、对热稳定购物质。
因此它只限于分析气体和沸点低的化合物或挥发性的衍生物。
而高效液相色谱由于以液体作为流动相，只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的按解度，便可以分析，所以适用性广，不受样品挥发性和热稳定性的限制，特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物，例如，生化物质和药物、离子型化合物、热稳定性差的天然产物等。
在目前已知的有机化台物中，只有20%样品可不经化学处理而能满意地用气相色谱分离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。
气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高分离的选择性，另外可作流动相的化合物多，选择余地广。
与气相色谱相比，高效液相色谱的另一个优点是样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。
回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
高效液相色谱不足的是，日前检测器的灵敏度不及气相色谱。
必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影响。
3、试比较气相色谱与液相色谱的H-u曲线，分析产生不同的原因。
解：从图可看出，气相色谱和液相色谱得到的H-u曲线，形状迥然不同，流动相的流速对柱效的影响也不一样，在气相色谱的H-u曲线上，塔板高度H随u变化呈双曲线.曲线有一最低点，这时柱效最高，板高最小，流速最佳。
高效液相色谱法习题答案
第二十章 高效液相色谱法思考题和习题1． 简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。
相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测不同点：2．何谓化学键合相？常用的化学键合相有哪几种类型？分别用于哪些液相色谱法中？采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上，所形成的填料称为化学键合相。
优点是使用过程不流失，化学性能稳定，热稳定性好，适于作梯度淋洗。
目前常用的Si-O-Si-C 型键合相，按极性分为非极性，中等极性与极性三类。
①非极性键合相：常见如ODS 键合相，既有分配又有吸附作用，用途非常广泛，用于分析非极性或弱极性化合物；②中等圾性键合相：常见的有醚基键合相，这种键合相可作正相或反相色谱的固定相，视流动相的极性而定：③极性键合相：常用氨基、氰基键合相，用作正相色谱的固定相，氨基键合相还是分离糖类最常用的固定相。
3．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。
用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。
反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。
用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。
4．简述反相键合相色谱法的分离机制。
典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。
固定相，常用十八烷基（ODS 或C18）键合相；流动相常用甲醇-水或乙腈-水。
非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。
反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。
硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。
对于反相色谱的分离机制两种观点，一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。
分配色谱的作用机制是假设混合溶剂（水十有机溶剂）中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面，组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。
液相色谱分离的溶剂效应
液相色谱分离的溶剂效应“溶剂效应”会致使哪些峰形异样？如何幸免溶剂效应？在HPLC分析中样品溶剂的选择和流动相是如何的联系？为何建议利用流动相溶解样品？。
一系列的问题都和样品溶剂的选择紧密相关，如何解决真正的溶剂效应问题，又如何分辨哪些是非溶剂效应问题，不同的问题有不同的解决方式，有哪些先辈留下的实战体会可供分享呢？一路来看看吧！什么是溶剂效应?样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。
即色谱图上较早洗脱的峰前沿或开叉，与此同时较晚洗脱的峰那么较为正常的现象。
例如样品溶液的溶剂是100%乙腈（100%的强溶剂），而流动相的组成那么较弱，18%的乙腈与72%的水。
第一个峰是开叉的，而且与第二个峰相较，明显地变宽了。
当样品溶液的溶剂变成流动相时，所有的峰形都改善了，且变得尖锐。
可能发生溶剂效应的情形：●出峰时刻早；●保留弱；●进样量大。
用流动相溶解样品能够取得专门好的峰形当溶解样品的溶剂不同于流动相时，样品溶剂与流动相发生混合，样品溶剂被冲稀。
若是进样溶剂之强度高于流动相，样品在刹时会表现为在较强溶剂中，并以较快速度通过色谱柱。
表此刻色谱图上确实是∶色谱峰的保留时刻缩短。
`当进样溶剂与流动相混合时，一部份分子会先与流动相混合，致使这些分子通过色谱柱的速度发生转变，使峰形扭曲，发生变形。
洗脱较早的色谱峰峰变形要比洗脱晚的色谱峰严峻。
解决进样溶剂问题的关键是使进样体积足够小，如此稀释进程会超级快；或利用比流动相弱的溶剂溶解样品。
较弱的溶剂会使样品在色谱柱上发生浓缩，在某些情形下，色谱峰会比利用较强溶剂时窄一些。
因此，在通常情形下，若是溶解样品的溶剂比流动相强，进样体积应不高于25mL。
进样体积大小与进样溶剂与流动相之间的不同大小有关。
这一不同很容易凭体会取得∶慢慢加大进样体积，直至发生峰变形现象。
采纳比发生峰变形时小一些的进样体积即可。
问题中发生的峰变形确实是因为溶解样品的溶剂甲醇强度远远高于流动相，因此取得了变形的、展宽的峰。
反相离子对高效液相色谱法
反相离子对高效液相色谱法高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）是一种常用的分析技术，可用来定量和定性分析物质中的药物和其他有机物质。
反相离子对高效液相色谱法是其常用技术，可有效检测和去除肽类抗原，尤其是细胞色素b。
反相离子对高效液相色谱法属于一种非常活性的技术，它主要用于分析物质中的有机成分，例如药物，环状化合物，肽类抗原等，通常使用氨基苯磺酸（AAS）和电离水作为非常有效的反相离子。
反相技术主要是利用溶剂的分散性和反相离子的溶解性来溶解物质，由于这种机制，物质可以被彻底清洗和去除，而反相技术有效地去除了有机抗原。
反相技术有很多优点，如用来分析肽类抗原等有机物质，具有很高的灵敏度，速度快，响应时间短，信号增益高等。
在肽类抗原的分析中，具有较多的样品，可以让抗原得以迅速准确地与固定的反相离子结合。
此外，反相技术的使用对延迟效应仍然有效，因此可以有效消除反应物和产物的残余。
在实际使用中，反相离子对高效液相色谱法还可以用于测定细胞色素b，目前用于这方面的研究正在取得重要进展。
研究表明，反相技术具有高灵敏度，可以用来精准检测细胞色素b，其灵敏度可达100ppt，可以有效消除反应物和产物的残余，有助于准确检测低浓度的细胞色素b。
此外，反相离子对高效液相色谱法还可以应用于精确分析复杂的有机溶液，因为溶解性可以较快地溶解复杂的有机物质，从而得到更精确的检测结果。
因此，反相离子对高效液相色谱法对于定量和定性分析物质中的药物和其他有机物质有着重要的作用，其主要特点是高灵敏度，快速，可以有效消除反应物和产物的残余，可以有效检测和去除肽类抗原，尤其是细胞色素b，也可用来分析复杂的有机溶液，可获得更精确的检测结果。
因此，反相离子对高效液相色谱法的应用将推动分析技术的发展和改进，从而为物质分析提供更有效的方法。
综上所述，反相离子对高效液相色谱法是一项先进而又高效的技术，它有助于准确定性和定量分析物质中的药物和其他有机物质，并有效立竿见影地去除有机抗原，例如细胞色素b，也可以用于分析复杂的有机溶液，可以获得更精确的检测结果，为进一步发展和改进分析技术提供了可能性，以实现更高的精确度。
高效液相色谱检测
高效液相色谱检测高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用高效液相色谱法有“四高一广”的特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。
可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。
高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。
在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。
高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
高效液相色谱的原理
所以LC只能用高压输液泵作为流动相的动力。
5.LC的样品回收比较容易，且可规模制备；GC的样品大部分会被破坏。 6.决定GC分离好坏的主要操作条件是固定相、流动相流速和柱温； 决定LC分离好坏的主要 操作条件是固定相、流动相流速和流动 相的组成。 7.在对付复杂样品方面，GC可采用柱温程序升温办法进行组份的分离；LC则采用梯度洗脱 的办法。
液相色谱仪的结构
高效液相色谱法与气相色谱法的比较
仪器的组成方面
液相色谱：
溶质在液相中的扩散系数（10－5cm2/s）很小，因此在色谱柱以外的死空间应尽量小，以 减少柱外效应对分离效果的影响。
气相色谱：
溶质在气相中的扩散系数（10－1cm2/s）大，在使用填充色谱柱时，柱外效应的影响较小， 但是对于毛细管色谱柱也要尽量减少柱外效应对分离效果的影响。
气相色谱
（1）气体流动相为惰性气体，不与被分析的样品发生相互作用，它仅起运载样品的作用， 一般对分离结果好坏没有影响。 （2）气体流动相动力粘度为10-5Pa· s，输送流动相压力仅为0.1～0.5MPa
液相色谱仪的结构
高效液相色谱法与气相色谱法的比较
固定相方面：
液相色谱
（1）分离机理：可依据吸附、分配、筛析、离子交换、亲和等多种原理进行样品的分离， 可供选用的固定相种类繁多。 （2）色谱柱：固定相粒度小为5～10um；填充柱内径3～6mm；柱效为103 ～ 104 ，柱温为 常温。
内径20～50mm，柱长50cm ～ 100cm。
检测部:通常使用紫外检测器
紫外检测器的结构与分析型一样，但流过池采用短光程的
馏分部:馏分收集器
有手动和自动之分
制备HPLC概述—制备泵的耐压
制备HPLC系统因制备柱的填料很细，
高效液相的使用原理
原理高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达 4.9´107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
特点1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。
一般可达150～350×105Pa。
2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。
3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。
4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外，用样量小，一般几个微升。
5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。
高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。
用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。
其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。
高效液相色谱法介绍(一)
使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用 一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的 作用，常用的溶剂组合 洗脱剂：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为： 石油迷<己烷<苯<乙醚<THF（次氢呋喃）<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统 极性较大的用甲醇：氯仿系统 极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
七、常见故障的排除
故 泵启动不良
障
故 障 原 因 （1）溶剂水平面太低 （2）溶剂中有气泡析出 （1）色谱柱超负荷 （2）非缓冲流动相使酸性 或碱性样品的色谱峰 发生拖尾 （1）柱子超负荷 （2）样品组分在柱子上积 聚，柱子沾污柱效变 坏 （3）柱填料与流动相未完 全达到平衡 （1）柱子被玷污，柱效下 降 （2）固定相流失 （3）梯度系统对色谱柱 （固定相）不合适. （4）柱温过高 （5）流动相强度太高
峰形不好，出现平头峰或拖 尾峰
分离度下降
保留时间减少
故
障
故 障 原 因 （1）温度不稳 （2）泵启动不良 （3）溶剂中有气泡 （1）长时间的基线漂移可 能由于室温波动引起 （2）池座垫圈漏液 （3）流通池污染 （4）UV灯不亮 （1）样品阀，进样垫或注 射器被污染 （2）溶解样品溶剂的洗脱 峰 （3）样品溶液中有气泡 （4）梯度洗脱溶剂不纯 （特别是水） （1）电源线内部折断 （2）灯启动器有毛病 （3）UV灯泡有毛病 （4）保险丝断开
a.光源（氘灯）发出的光经聚光透镜聚焦，由可旋转组合滤光片滤 除杂散光，再通过入口狭缝至下面反射镜，经反射到达光栅，光 栅将光衍射色散成不同波长的单色光，当某一波（190nm~600nm） 的单色光经平面镜反射，反射至分束器时，透过光分束器的光通 过样品的流通池，最终到达检测样品的光电二极管测量；被光分 束器反射的光到达检测基线波动的参比光电二级管；当获得测量 和参比光电二极管的信号差，即为样品的检测信息。 b.可变波长紫外吸收检测器的某一时刻只能采集某一特定波长的 吸收信号。 光栅的偏转可由预先编制的采集信号程序加以控制，以便于采 集某一特定波长的吸收信号，并可使色谱分离过程洗脱出的每 个组分峰都获得最灵敏的检测。
高效液相色谱测蛋白纯度的原理
高效液相色谱测蛋白纯度的原理高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种在化学、生物学和医学等领域广泛应用的分离和分析技术。
它基于不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡常数不同，实现物质的分离。
在蛋白质纯化及纯度检测方面，高效液相色谱技术发挥着至关重要的作用。
本文将详细阐述高效液相色谱测定蛋白质纯度的原理。
一、高效液相色谱的基本原理高效液相色谱法是一种在高压下将液体样品通过色谱柱进行分离的技术。
色谱柱内填充有固定相，而流动相则是携带样品通过色谱柱的溶剂。
当样品溶液通过色谱柱时，各组分在固定相和流动相之间发生分配平衡。
由于不同组分与固定相和流动相的相互作用力不同，导致它们在色谱柱中的迁移速度不同，从而实现分离。
二、蛋白质在高效液相色谱中的行为特性蛋白质是一类具有复杂结构和性质的生物大分子。
在高效液相色谱中，蛋白质的分离主要依赖于它们与固定相和流动相之间的相互作用，如疏水作用、离子交换、亲和作用等。
蛋白质的表面带有多种功能基团，如氨基、羧基、羟基等，这些基团可以与固定相表面的官能团发生相互作用，影响蛋白质在色谱柱中的保留行为。
三、高效液相色谱测定蛋白质纯度的方法1. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法（Gel Filtration Chromatography，GFC）是一种基于分子筛效应的分离技术。
它利用多孔凝胶作为固定相，根据蛋白质分子量的不同进行分离。
分子量较大的蛋白质在凝胶颗粒间的空隙中通过，而分子量较小的蛋白质则进入凝胶颗粒内部，从而实现分离。
通过凝胶过滤色谱法，可以对蛋白质样品进行初步的纯度检测。
2. 反向色谱法反向色谱法（Reversed-Phase Chromatography，RPC）是一种常用的蛋白质分离和纯度检测方法。
它采用非极性固定相和极性流动相，利用蛋白质分子中的疏水基团与固定相表面的非极性官能团之间的相互作用进行分离。
溶剂效应资料
溶剂效应
溶剂效应是化学中一个重要的概念，指的是在不同溶剂中溶质的溶解度和化学
性质会发生改变的现象。
溶剂可以对溶质的结构和性质产生影响，从而影响化学反应的进行和速率。
溶剂对溶质溶解度的影响
不同溶剂对溶质的溶解度会有很大的差异。
溶剂的极性、溶解能力、分子大小
等性质会影响溶质在其中的溶解度。
通常具有相似极性的物质会更容易溶解在一起。
溶剂分子与溶质分子之间的相互作用可以通过键合、吸附、复合物等方式发生，从而影响溶质溶解度的大小。
溶剂对化学反应的影响
在化学反应中，溶剂可以作为反应的介质或溶剂。
不同的溶剂对反应的进行和
速率都会有影响。
一些反应只能在特定溶剂条件下进行，溶剂可以改变反应物质之间的相互作用和反应速率。
有些溶剂还可以通过稀释、溶解、促进离子活化等方式催化反应过程。
溶剂效应的应用
溶剂效应在化学合成、催化反应、溶液制备等方面有广泛的应用。
通过选择合
适的溶剂可以提高化学反应的产率和选择性，减少副产物的生成，促进反应的进行。
在生物化学、有机合成、实验室研究等领域都有溶剂效应的应用。
总结
溶剂效应是化学中一个重要的概念，通过控制溶剂的选择和使用可以影响化学
反应的进行和结果。
了解溶剂对溶质的影响，可以更好地设计实验方案，优化化学反应的条件，提高反应的效率和产率。
对溶剂效应的深入研究有助于我们更好地理解化学现象，推动化学领域的发展和应用。
高效液相色谱法(HPLC)简介
高效液相色谱法分离过程
主要在于固定相的性质、形状及粒度，其次 差别： 是检测手段和输液设备。
经典液相色谱 固定相： 粒度：60~600μｍ（多孔） 柱长：10~200cm（d=10~50mm） n 约为 2~50/m
流动相：靠重力输送
经典液相色谱无在线检测器
缺点：
①粒度范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻 力大。 ②无检测设备，分析速度慢、效率低。 只能作为分离手段
（3）不能完全替代气相色谱
（4）不适于分析受压分解、变性的具有生物活性的
Hale Waihona Puke 生化样品。高效液相色谱法与其他分析方法一样，
不是尽善尽美的。
第二节 高效液相色谱法的基本理论
一、高效液相色谱参数 1.定性参数 tR 、 t 0 、 t’ R t’R= tR- t0 2.柱效参数 σ、 W1/2 、W W=4 σ 或 w=1.699W1/2 n=（ tR / σ）2 H=L/n
四、高效液相色谱法的应用范围和局限性
1.应用范围 高效液相色谱法适于分析高沸点、受热不稳定易 分解、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性 物质和多种天然产物；合成和天然高分子化合物。 涉及石油化工产品、食品、药品、生物化工产品 及环境污染物。约占全部有机物的80%。 2.方法的局限性
（1）使用多种溶剂为流动相，成本高，污染环境 （2）缺少通用检测器
美国药典委员会（USPC）成立于1820年，至今近200 年。出版发行了25版药典。 75年（19版）将HPLC载入药典 20版-62项；21版-363项；22版-871项；23版-1188项； 24版-含量测定法：1386项 鉴别：519项 杂质检查：206项
如今：在评价世界各国药典水平时，HPLC法成为 反映各国药典先进性的重要指标之一。
高效液相色谱中溶剂效应理论
高效液相色谱中溶剂效应理论高效液相色谱是有机分析，特别是药物分析的重要手段。
而色谱峰峰形影响着化合物的定量和定性。
在影响色谱峰峰形的诸多因素中，“溶剂效应”经常被忽视。
本文是对高效液相色谱中“溶剂效应”的漫谈，水平有限，欢迎批评指正。
高效液相色谱已经广泛应用于有机分析，特别是药物分析工作中。
分析工作者通常将更多精力集中在流动相和仪器方法的选择上，忽视了溶解样品所用溶剂的重要性。
高效液相色谱进样之前，必须选择一种合适的溶剂溶解样品。
如果溶剂选择不当则会产生“溶剂效应”，使分析工作者在定性和定量分析中产生误判，影响分析结果。
因此，了解“溶剂效应”产生的原因及掌握避免“溶剂效应”的基本方法对分析工作者是十分必要的。
溶剂效应的概念溶剂效应亦称“溶剂化作用”。
指液相反应中，溶剂的物理和化学性质影响反应平衡和反应速度的效应。
可能造成色谱峰展宽、分叉、保留时间漂移、峰面积变化，双峰等现象。
与此同时，较早洗脱的峰出现前沿或分叉，较晚洗脱的峰峰形正常【1】。
溶剂效应产生的原因样品进入高效液相色谱中，当溶剂与流动相存在差异时，一部分样品溶解进入了流动相，一部分还留在溶剂里,造成色谱保留的差异。
造成这种差异的原因主要有以下几个方面：（1）溶剂强度在反相色谱系统中溶剂强度的顺序为水（最弱）＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜四氢呋喃＜丙醇＜二氯甲烷（最强）。
溶解样品的溶剂强度大于该样品出峰时流动相强度，样品溶剂可以看成流动相的一部分，一部分样品溶解于溶剂中会被迅速洗脱出色谱柱，而一部分样品溶解于流动相，被流动相洗脱出，这样会造成色谱峰的展宽或者分叉【2】。
图1是溶剂强度对色谱峰形的影响。
图1 溶剂强度对色谱峰影响[2]图2是笔者采用AgilentZORBAX TC-C18色谱柱以乙腈-水（30:70）为流动相，采用不同的溶剂对目标分析物进行处理制备同一浓度的溶液，考察目标分析物的峰面积及峰高。
图2 不同溶剂溶剂效应对比（2）进样体积进样体积造成的溶剂效应是一般与溶剂种类有关的。
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高效液相溶剂效应
高效液相溶剂效应（solvent effect in high-performance liquid chromatography，简称HPLC溶剂效应）是指在高效液相色谱（HPLC）中，流动相（溶剂）对于样品分离和保留的影响。
HPLC是一种广泛应用于分析化学领域的技术，用于分离、检测和定量复杂混合物中的化合物。
在HPLC中，样品溶解在流动相中，经过固定相（色谱柱填料）的分离，不同化合物因其相互作用力的不同而在柱中以不同速率运移。
溶剂效应在HPLC中具有以下几个方面的影响：
1. 保留时间：不同溶剂的性质和极性不同，会影响样品化合物与固定相之间的相互作用，从而影响样品的保留时间。
溶剂效应的变化可能导致不同化合物的保留时间发生变化，进而影响分离效果。
2. 分离效果：溶剂对于分离效果具有重要影响。
不同的溶剂性质和极性会导致不同化合物之间的相互作用力发生变化，影响其在色谱柱中的分离效果。
因此，选择合适的溶剂体系对于获得良好的分离效果非常重要。
3. 色谱峰形状：溶剂的选择也会影响色谱峰的形状。
适当的溶剂选择可以得到对称、尖峰的色谱峰，有助于准确的峰面积和峰高的测定。
为了在HPLC中得到准确、可靠的结果，研究人员通常会进行溶剂的优选和优化。
选择适合的流动相体系，合理调整溶剂的比例和流速，以达到理想的分离效果。
此外，也需要注意不同的化合物可能对溶剂更加敏感，因此在实验设计和分析时需要对样品和溶剂进行充分考虑。
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